理化因素对微生物的影响细菌的生长现象与生化反应
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紫外线杀菌力虽强，但穿透力弱，故只能用 于实验室、病房或手术室内空气及物体表面的消毒 灭菌。另外，杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛 等有损伤作用，应注意防护。
【材料】 大肠埃希菌培养物、琼脂平板、接种环、酒精灯、 紫外线灯。 【方法】 ①以灭菌接种环挑取大肠埃希菌培养物，于琼脂 平板上作来回密集划线接种。 ②半启皿盖(将皿盖遮住涂面的1／2)，置于紫外 线灯下lm以内接受照射30分钟。 ③盖上皿盖，于37℃培养24小时后观察结果。
【结果观察】（填空）
平板上用黑纸遮盖部分
菌生长，未
遮盖部分 菌生长。这说明Fra Baidu bibliotek外线具有
作用，但
力弱。
（三）化学消毒法
1、皮肤消毒试验 【原理】
乙醇可使菌体蛋白脱水凝固或与菌体蛋
白、酶蛋白等结合而使之变性失活。70％～75 ％乙醇在15～30秒即将细菌杀死。但95％的乙 醇消毒效果反不如70％～75％为好，因高浓度 乙醇使菌体蛋白表面迅速凝固，影响乙醇继续 进入菌体内发挥作用。2.5％的碘酒可使菌体酶 蛋白中的硫氢基(-SH)改变，使酶失去活性，导 致机能障碍而死亡。
• 【材料】
• 琼脂平板两块、肉汤管两支、大肠埃希菌和枯 草芽胞杆菌肉汤培养物。
• 【方法】
• ①取琼脂平板两块，用记号笔分别在二平板 底部玻面上，注明大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌， 并分别将二块平板底玻璃面划分三等份，于每块 平板的三等份上分别注明对照、加热100℃ 10min 及加热121℃ 20min。
皮肤消毒试验结果
37℃ 24h培养细菌生长情况
结果解释
消毒前手指皮肤
消毒后手指皮肤
对照(不接种)
•
2、 化学消毒剂对细菌的影响
•
【原理】
•
有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称为化学
消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂。由于化
学消毒剂对人体细胞往往具有毒性作用，故只能外用。不 同细菌对不同的化学消毒剂具有不同的敏感性。
（一）煮沸与高压灭菌法 【原理】 高温对细菌有明显的致死作用，主要机 制是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA 单螺旋断裂、细菌细胞膜功能受损及菌体内 电解质浓缩有关。 湿热灭菌法所需温度比干热法为低，时
间较短。尤其是高压蒸气灭菌，因增加压力 而提高沸点，灭菌效果最佳。有芽胞的细菌 由于对热的抵抗力比无芽胞细菌强，所以只 有采用高压蒸气灭菌法才能将芽胞彻底杀灭。
微孔滤膜过滤除菌
• 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的 方法。根据不同的需要选用不同的滤器和滤板材料 。微孔滤膜过滤器是由上下二个分别具有出口和入 口连接装置的塑料盖盒组成，出口处可连接针头， 人口处可连接针筒，使用时将滤膜装入两塑料盖盒 之间，旋紧盖盒，当溶液从针筒注入滤器时，此滤 器将各种微生物阻留在微孔滤膜上面，从而达到除 菌的目的。根据待除菌溶液量的多少，可选用不同 大小的滤器。此法除菌的最大优点是可以不破坏溶 液中各种物质的化学成分，但由于滤量有限，所以 一般只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌。
【材料】 血液琼脂平板培养基、灭菌棉拭、接 种环、酒精灯。紫外线灯、 2.5％碘酒、 75％乙醇、1％龙胆紫、2％红汞、1:1000 新洁尔灭、无菌滤纸片、葡萄球菌培养液 、大肠埃希菌培养液、琼脂平板、无齿小 镊子。 抗生素纸片(青、链、氯、庆大霉 素、磺胺等)。
教学基本内容： 一、观看录像：消毒灭菌 二、 讲解紫外线杀菌的原理， 抗生素敏感实验的原理与操作
• 【材料】
➢ 放射线辐照灭菌 ➢ 紫外线灭菌
❖ 化学药品灭菌
干热灭菌
❖ 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质 凝固变性而达到灭菌的目的。
❖ 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关 ，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大 ，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝 固缓慢。
❖ 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要 高（160～170℃），时间要长（1～2h），但 干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿 的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
• ③将二块琼脂平板接种物置37℃培养24小时，比 较培养基上二种细菌的生长情况。
• 【结果观察】（填表） • 表: 煮沸和高压灭菌实验结果 细菌名称 100℃ 10分钟 121℃ 20分钟 枯草芽胞杆菌 大肠埃希菌
未加热(对照)
（二）紫外线杀菌法 【原理】 波长265～266nm的紫外线因与DNA吸收光谱致而有明显的杀菌作用。其机制是使细菌DNA相邻 的胸腺嘧啶形成二聚体，从而破坏DNA构型，干扰 其正常复制，导致细菌死亡。
三、操作讲解与示范：观察细 菌在不同培养基中的生长现象 。
检查细菌常见的代谢产物并分 析其生化反应现象的意义。 四、学生动手操作
一、观看录像：消毒灭菌
二、消毒灭菌试验 讲解紫外线杀菌的原理； 抗生素敏感实验的原理与操作
消毒与灭菌方法
❖ 加热灭菌
➢ 干热灭菌 ➢ 湿热灭菌
❖ 过滤除菌 ❖ 辐射灭菌
• ②取肉汤管二支，分别注明加热100℃ l0min 及加热121℃ 20min，用毛细吸管吸取大肠埃希菌 肉汤培养物，于上述二支肉汤管中各加入菌液一 滴。混匀，再用接种环于二支肉汤管的任何一管 中取一环菌液接种于大肠埃希菌平板的对照处， 然后分别将肉汤管加热100℃ l0min及加热121℃ 20min(高压蒸气15磅、20min)，再各取一接种环 分别接种于平板的相应部位。枯草芽胞杆菌以同 法试验。
【材料】 普通琼脂平板一个、2.5％碘酒、75％乙醇。 【方法】
取普通琼脂平板一个，用蜡笔在平板背面玻璃上划 成五等分，并贴上标签；两人用手在培养基上各涂 一格，然后用2.5％碘酒、75％乙醇消毒手指后再各 涂另一格，留一格作对照，盖好平板，置37℃温箱 中培养24小时观察结果。
【结果】（填表）
[教学目标] 1.了解细菌代谢产物的生化检查方法。 2.熟悉常见的物理化学因素对细菌生 长的影响。
3.熟悉细菌对抗生素的敏感试验方法 与步骤。
4.掌握细菌在不同培养基中的生长现 象。
教学重点与难点：
重点：细菌在不同培养基中的 生长现象。
难点：药敏试验的判断，细菌 常见的代谢产物并分析其生化 反应现象的意义
【材料】 大肠埃希菌培养物、琼脂平板、接种环、酒精灯、 紫外线灯。 【方法】 ①以灭菌接种环挑取大肠埃希菌培养物，于琼脂 平板上作来回密集划线接种。 ②半启皿盖(将皿盖遮住涂面的1／2)，置于紫外 线灯下lm以内接受照射30分钟。 ③盖上皿盖，于37℃培养24小时后观察结果。
【结果观察】（填空）
平板上用黑纸遮盖部分
菌生长，未
遮盖部分 菌生长。这说明Fra Baidu bibliotek外线具有
作用，但
力弱。
（三）化学消毒法
1、皮肤消毒试验 【原理】
乙醇可使菌体蛋白脱水凝固或与菌体蛋
白、酶蛋白等结合而使之变性失活。70％～75 ％乙醇在15～30秒即将细菌杀死。但95％的乙 醇消毒效果反不如70％～75％为好，因高浓度 乙醇使菌体蛋白表面迅速凝固，影响乙醇继续 进入菌体内发挥作用。2.5％的碘酒可使菌体酶 蛋白中的硫氢基(-SH)改变，使酶失去活性，导 致机能障碍而死亡。
• 【材料】
• 琼脂平板两块、肉汤管两支、大肠埃希菌和枯 草芽胞杆菌肉汤培养物。
• 【方法】
• ①取琼脂平板两块，用记号笔分别在二平板 底部玻面上，注明大肠埃希菌和枯草芽胞杆菌， 并分别将二块平板底玻璃面划分三等份，于每块 平板的三等份上分别注明对照、加热100℃ 10min 及加热121℃ 20min。
皮肤消毒试验结果
37℃ 24h培养细菌生长情况
结果解释
消毒前手指皮肤
消毒后手指皮肤
对照(不接种)
•
2、 化学消毒剂对细菌的影响
•
【原理】
•
有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物，称为化学
消毒剂；浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂。由于化
学消毒剂对人体细胞往往具有毒性作用，故只能外用。不 同细菌对不同的化学消毒剂具有不同的敏感性。
（一）煮沸与高压灭菌法 【原理】 高温对细菌有明显的致死作用，主要机 制是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA 单螺旋断裂、细菌细胞膜功能受损及菌体内 电解质浓缩有关。 湿热灭菌法所需温度比干热法为低，时
间较短。尤其是高压蒸气灭菌，因增加压力 而提高沸点，灭菌效果最佳。有芽胞的细菌 由于对热的抵抗力比无芽胞细菌强，所以只 有采用高压蒸气灭菌法才能将芽胞彻底杀灭。
微孔滤膜过滤除菌
• 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的 方法。根据不同的需要选用不同的滤器和滤板材料 。微孔滤膜过滤器是由上下二个分别具有出口和入 口连接装置的塑料盖盒组成，出口处可连接针头， 人口处可连接针筒，使用时将滤膜装入两塑料盖盒 之间，旋紧盖盒，当溶液从针筒注入滤器时，此滤 器将各种微生物阻留在微孔滤膜上面，从而达到除 菌的目的。根据待除菌溶液量的多少，可选用不同 大小的滤器。此法除菌的最大优点是可以不破坏溶 液中各种物质的化学成分，但由于滤量有限，所以 一般只适用于实验室中小量溶液的过滤除菌。
【材料】 血液琼脂平板培养基、灭菌棉拭、接 种环、酒精灯。紫外线灯、 2.5％碘酒、 75％乙醇、1％龙胆紫、2％红汞、1:1000 新洁尔灭、无菌滤纸片、葡萄球菌培养液 、大肠埃希菌培养液、琼脂平板、无齿小 镊子。 抗生素纸片(青、链、氯、庆大霉 素、磺胺等)。
教学基本内容： 一、观看录像：消毒灭菌 二、 讲解紫外线杀菌的原理， 抗生素敏感实验的原理与操作
• 【材料】
➢ 放射线辐照灭菌 ➢ 紫外线灭菌
❖ 化学药品灭菌
干热灭菌
❖ 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质 凝固变性而达到灭菌的目的。
❖ 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关 ，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大 ，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝 固缓慢。
❖ 因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要 高（160～170℃），时间要长（1～2h），但 干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿 的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。
• ③将二块琼脂平板接种物置37℃培养24小时，比 较培养基上二种细菌的生长情况。
• 【结果观察】（填表） • 表: 煮沸和高压灭菌实验结果 细菌名称 100℃ 10分钟 121℃ 20分钟 枯草芽胞杆菌 大肠埃希菌
未加热(对照)
（二）紫外线杀菌法 【原理】 波长265～266nm的紫外线因与DNA吸收光谱致而有明显的杀菌作用。其机制是使细菌DNA相邻 的胸腺嘧啶形成二聚体，从而破坏DNA构型，干扰 其正常复制，导致细菌死亡。
三、操作讲解与示范：观察细 菌在不同培养基中的生长现象 。
检查细菌常见的代谢产物并分 析其生化反应现象的意义。 四、学生动手操作
一、观看录像：消毒灭菌
二、消毒灭菌试验 讲解紫外线杀菌的原理； 抗生素敏感实验的原理与操作
消毒与灭菌方法
❖ 加热灭菌
➢ 干热灭菌 ➢ 湿热灭菌
❖ 过滤除菌 ❖ 辐射灭菌
• ②取肉汤管二支，分别注明加热100℃ l0min 及加热121℃ 20min，用毛细吸管吸取大肠埃希菌 肉汤培养物，于上述二支肉汤管中各加入菌液一 滴。混匀，再用接种环于二支肉汤管的任何一管 中取一环菌液接种于大肠埃希菌平板的对照处， 然后分别将肉汤管加热100℃ l0min及加热121℃ 20min(高压蒸气15磅、20min)，再各取一接种环 分别接种于平板的相应部位。枯草芽胞杆菌以同 法试验。
【材料】 普通琼脂平板一个、2.5％碘酒、75％乙醇。 【方法】
取普通琼脂平板一个，用蜡笔在平板背面玻璃上划 成五等分，并贴上标签；两人用手在培养基上各涂 一格，然后用2.5％碘酒、75％乙醇消毒手指后再各 涂另一格，留一格作对照，盖好平板，置37℃温箱 中培养24小时观察结果。
【结果】（填表）
[教学目标] 1.了解细菌代谢产物的生化检查方法。 2.熟悉常见的物理化学因素对细菌生 长的影响。
3.熟悉细菌对抗生素的敏感试验方法 与步骤。
4.掌握细菌在不同培养基中的生长现 象。
教学重点与难点：
重点：细菌在不同培养基中的 生长现象。
难点：药敏试验的判断，细菌 常见的代谢产物并分析其生化 反应现象的意义