医学-病毒的分类及微生物检验
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毒包涵体。包涵体对病毒的诊断有一定价值。观察病毒 CPE。病理标本根据病理特征，再配合组化染色技术进行 诊断。
（二）病毒蛋白抗原检测
1. 酶联免疫技术（ELISA） 2. 免疫荧光标记技术（IF） 3. 放射免疫标记（SPRIA）
根据病毒体的形态、基因结构和复制模式 等特征将病毒分为科和亚科；
在科或亚科中又根据理化特性和血清学特 性等分病毒属，属名后缀为—virus，属下分为 不同的病毒种。
分类
可将病毒分为科、亚科和属 常用核酸类型分类 1 DNA virus (DNA病毒中有9科 ) 2 RNA virus ( ssRNA－ 7 科. ssRNA＋ 7 科. dsRNA 2科 ) 3 反转录病毒 (DNA和RNA反转录病毒中有2科) 依传播方式和感染部位分类 1 虫媒病毒 2 肠道病毒 3 呼吸道病毒 4 肝炎病毒 5 性传播病毒
动物接种是最原始的分离病毒的方法，但目前少用。
（二）病毒的鉴定
1．病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标 （1）细胞病变（ cytopathic effect, CPE ）
大多数病毒属溶细胞型感染，在敏感细胞内增殖会 出现CPE。CPE表现为细胞内颗粒增多、圆缩、聚集、融 合，有的可形成包涵体，出现细胞溶解、脱落、死亡等。
（一）病毒的分离培养
1．细胞培养：原代培养细胞、 二倍体细胞株、传代细胞 系或株
标本接种后溶细胞型感染病毒可致细胞出现细胞病毒 效应（CPE），稳定感染病毒细胞并不出现明显病变，但 被感染的细胞膜表面会表达病毒蛋白等标志物，如血凝素 、神经氨酸酶、病毒特异性抗原等。 2．鸡胚培养和动物接种：
流感病毒的分离培养虽可用犬肾传代细胞（MDCK）, 但鸡胚接种仍是最常用的敏感而特异的方法。
2．病毒感染性测定及病毒数量测定
（1）空斑形成试验（plaque formation） （2）50%组织细胞感染量 （3）感染复数
（Multiplicity of infection, MOI）
三、病毒感染的快速诊断
病毒的分离与鉴定是病毒诊断的金标准，
但临床实验室应用困难，而且费时，对临床病 毒感染症的诊治帮助不大。快速诊断主要指临 床标本绕过分离培养复杂而较长的过程，直接 在电镜下观察病毒颗粒，或直接检测标本中的 病毒成分和IgM抗体等，以作出快速和早期诊 断。
病毒的分离与鉴定当然是病毒病原学诊断的金标准， 但因病毒是严格细胞内寄生，病毒分离必须
有活的细胞支持，故病毒的分离鉴定较困难。
一、标本的采集、运送和处理
• 1. 应在感染早期（发病1～2天内）采集。 • 2. 必须无菌操作，对用于病毒分离培养的污染标本用
高浓度抗生素处理过夜，必要时需加抗真菌药物等 • 3. 及时送检，送检的组织等可放入含有抗生素的50%
包膜上带有血凝素的病毒感染敏感细胞后， 血凝
素会出现于细胞膜表面，使感染细胞能与加入的红细胞结 合出现红细胞吸附现象，这是检测正粘病毒和副粘病毒的
间接指标。
（3）中和试验（neutralization test, NT）
用抗某病毒血清先与待测病毒悬液混合，经作用一定 时间后接种敏感细胞，培养后观察CPE或 红细胞吸附现 是否消失，即特异性抗体是否能 中和相应病毒的感染。 如用不同浓度的抗血清 进行中和试验，还可根据抗体的 效价对待测病毒 液进行半定量检测。
病毒的分类
一、 分类原则
• 核酸的性质与结构 • 病毒大小与形态 • 衣壳对称性和壳粒数目 • 有无包膜 • 对理化因素的敏感性 • 抗原性 • 生物学特性（繁殖方式、宿主范围、传播途径和致病性）
二、病毒分类系统和命名
（一）病毒分类一般系统 病毒分类系统将病毒分类为 科(families)、
属(genera)、种(species)等三级，或科、亚科、 属、种等四级。
抗体 检测 ELISA RIA IF WB
二、病毒的分离与鉴定
以下情况需考虑进行病毒分离与鉴定： 1. 病程长且诊断困难的病人。 2. 怀疑为新现病毒（emergent virus）感染或已被消 灭
的病毒性疾病怀疑“死灰复燃”。 3. 为鉴别临床上具有相同症状的疾病。 4. 监测所用减毒活疫苗。 5. 用于病毒生物学性状的研究或流行病学调查等。
不同病毒的CPE特征不同。因此，观察病毒所致 CPE的特点，根据细胞类型，细胞病变种类可对标本中感 染的病毒进行判定。
脊髓灰质炎病毒感染所致CPE
a. 未感染的vero细胞（一种非洲绿猴肾细胞系） b. 脊髓灰质炎病毒感染的vero细胞（显示细胞圆缩、分散 、
坏死、脱落）。
（2）红细胞吸附（hemadsorption）
（一）形态学检查
1．电镜和免疫电镜检查
含有高浓度病毒颗粒（≥107颗粒/ml）的样品，可直 接应用电镜技术观察。对含低浓度病毒的样本可用免疫电 镜技术，或用超速离心机将标本离心进行电镜观察，以提 高检出率和特异性。电镜下不仅能观察病毒的形态学特征 ，还可测量病毒的大小。
2．光学显微镜检查
病理标本或含有脱落细胞及针吸细胞的标本检测病
甘油缓冲盐水或二甲基亚砜中低温冷藏。 • 4. 血清学检查的标本，尤其检测抗病原体的IgG型抗
体，应分别在发病初期和恢复期采集双份血清，只 有当恢复期血清抗体效价比初期升高4倍或以上， 才具有确诊意义。
标本采集
分离培养鉴定 (污染标本用抗生素处理过夜)
快速诊断
鸡胚 细胞培养
红细胞凝 CPE
集试验 电镜检测
（二）非寻常病毒的分类
1 卫星病毒（satellites） 2 类病毒（viroids） 3 朊粒（prion）
第三节 病毒学诊断
自身免疫病和肿瘤密切相关。病毒性疾病在人类疾 病中占有十分重要的地位。
由于病毒感染的防治原则不同于细菌等其他微生物， 尽早判定病人感染或某传染病的流行是由病毒所致，是 医生和微生物学实验室的责任和任务。
红细胞凝 中和试验
集抑制试 TCID50
验
pfu测定
MOI测定
动物接种 观察发病 情况 中和试验 免疫学检 测 ID50测定 LD50测定
形态学 电镜观察 病毒颗粒 （大小、 形态） 光学显微镜 观察 包涵体
病毒成分检测
抗原 检测 ELISA Iቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ RIA WB
核酸检测 核酸电泳 核酸杂交 PCR 基因芯片 基因测序
（二）病毒蛋白抗原检测
1. 酶联免疫技术（ELISA） 2. 免疫荧光标记技术（IF） 3. 放射免疫标记（SPRIA）
根据病毒体的形态、基因结构和复制模式 等特征将病毒分为科和亚科；
在科或亚科中又根据理化特性和血清学特 性等分病毒属，属名后缀为—virus，属下分为 不同的病毒种。
分类
可将病毒分为科、亚科和属 常用核酸类型分类 1 DNA virus (DNA病毒中有9科 ) 2 RNA virus ( ssRNA－ 7 科. ssRNA＋ 7 科. dsRNA 2科 ) 3 反转录病毒 (DNA和RNA反转录病毒中有2科) 依传播方式和感染部位分类 1 虫媒病毒 2 肠道病毒 3 呼吸道病毒 4 肝炎病毒 5 性传播病毒
动物接种是最原始的分离病毒的方法，但目前少用。
（二）病毒的鉴定
1．病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标 （1）细胞病变（ cytopathic effect, CPE ）
大多数病毒属溶细胞型感染，在敏感细胞内增殖会 出现CPE。CPE表现为细胞内颗粒增多、圆缩、聚集、融 合，有的可形成包涵体，出现细胞溶解、脱落、死亡等。
（一）病毒的分离培养
1．细胞培养：原代培养细胞、 二倍体细胞株、传代细胞 系或株
标本接种后溶细胞型感染病毒可致细胞出现细胞病毒 效应（CPE），稳定感染病毒细胞并不出现明显病变，但 被感染的细胞膜表面会表达病毒蛋白等标志物，如血凝素 、神经氨酸酶、病毒特异性抗原等。 2．鸡胚培养和动物接种：
流感病毒的分离培养虽可用犬肾传代细胞（MDCK）, 但鸡胚接种仍是最常用的敏感而特异的方法。
2．病毒感染性测定及病毒数量测定
（1）空斑形成试验（plaque formation） （2）50%组织细胞感染量 （3）感染复数
（Multiplicity of infection, MOI）
三、病毒感染的快速诊断
病毒的分离与鉴定是病毒诊断的金标准，
但临床实验室应用困难，而且费时，对临床病 毒感染症的诊治帮助不大。快速诊断主要指临 床标本绕过分离培养复杂而较长的过程，直接 在电镜下观察病毒颗粒，或直接检测标本中的 病毒成分和IgM抗体等，以作出快速和早期诊 断。
病毒的分离与鉴定当然是病毒病原学诊断的金标准， 但因病毒是严格细胞内寄生，病毒分离必须
有活的细胞支持，故病毒的分离鉴定较困难。
一、标本的采集、运送和处理
• 1. 应在感染早期（发病1～2天内）采集。 • 2. 必须无菌操作，对用于病毒分离培养的污染标本用
高浓度抗生素处理过夜，必要时需加抗真菌药物等 • 3. 及时送检，送检的组织等可放入含有抗生素的50%
包膜上带有血凝素的病毒感染敏感细胞后， 血凝
素会出现于细胞膜表面，使感染细胞能与加入的红细胞结 合出现红细胞吸附现象，这是检测正粘病毒和副粘病毒的
间接指标。
（3）中和试验（neutralization test, NT）
用抗某病毒血清先与待测病毒悬液混合，经作用一定 时间后接种敏感细胞，培养后观察CPE或 红细胞吸附现 是否消失，即特异性抗体是否能 中和相应病毒的感染。 如用不同浓度的抗血清 进行中和试验，还可根据抗体的 效价对待测病毒 液进行半定量检测。
病毒的分类
一、 分类原则
• 核酸的性质与结构 • 病毒大小与形态 • 衣壳对称性和壳粒数目 • 有无包膜 • 对理化因素的敏感性 • 抗原性 • 生物学特性（繁殖方式、宿主范围、传播途径和致病性）
二、病毒分类系统和命名
（一）病毒分类一般系统 病毒分类系统将病毒分类为 科(families)、
属(genera)、种(species)等三级，或科、亚科、 属、种等四级。
抗体 检测 ELISA RIA IF WB
二、病毒的分离与鉴定
以下情况需考虑进行病毒分离与鉴定： 1. 病程长且诊断困难的病人。 2. 怀疑为新现病毒（emergent virus）感染或已被消 灭
的病毒性疾病怀疑“死灰复燃”。 3. 为鉴别临床上具有相同症状的疾病。 4. 监测所用减毒活疫苗。 5. 用于病毒生物学性状的研究或流行病学调查等。
不同病毒的CPE特征不同。因此，观察病毒所致 CPE的特点，根据细胞类型，细胞病变种类可对标本中感 染的病毒进行判定。
脊髓灰质炎病毒感染所致CPE
a. 未感染的vero细胞（一种非洲绿猴肾细胞系） b. 脊髓灰质炎病毒感染的vero细胞（显示细胞圆缩、分散 、
坏死、脱落）。
（2）红细胞吸附（hemadsorption）
（一）形态学检查
1．电镜和免疫电镜检查
含有高浓度病毒颗粒（≥107颗粒/ml）的样品，可直 接应用电镜技术观察。对含低浓度病毒的样本可用免疫电 镜技术，或用超速离心机将标本离心进行电镜观察，以提 高检出率和特异性。电镜下不仅能观察病毒的形态学特征 ，还可测量病毒的大小。
2．光学显微镜检查
病理标本或含有脱落细胞及针吸细胞的标本检测病
甘油缓冲盐水或二甲基亚砜中低温冷藏。 • 4. 血清学检查的标本，尤其检测抗病原体的IgG型抗
体，应分别在发病初期和恢复期采集双份血清，只 有当恢复期血清抗体效价比初期升高4倍或以上， 才具有确诊意义。
标本采集
分离培养鉴定 (污染标本用抗生素处理过夜)
快速诊断
鸡胚 细胞培养
红细胞凝 CPE
集试验 电镜检测
（二）非寻常病毒的分类
1 卫星病毒（satellites） 2 类病毒（viroids） 3 朊粒（prion）
第三节 病毒学诊断
自身免疫病和肿瘤密切相关。病毒性疾病在人类疾 病中占有十分重要的地位。
由于病毒感染的防治原则不同于细菌等其他微生物， 尽早判定病人感染或某传染病的流行是由病毒所致，是 医生和微生物学实验室的责任和任务。
红细胞凝 中和试验
集抑制试 TCID50
验
pfu测定
MOI测定
动物接种 观察发病 情况 中和试验 免疫学检 测 ID50测定 LD50测定
形态学 电镜观察 病毒颗粒 （大小、 形态） 光学显微镜 观察 包涵体
病毒成分检测
抗原 检测 ELISA Iቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ RIA WB
核酸检测 核酸电泳 核酸杂交 PCR 基因芯片 基因测序