过滤膜法测粪大肠菌群数-国标方法
水质粪大肠菌群的测定（多管发酵法和滤膜法）HJ347-2017.pdf
水质 粪大肠菌群的测定粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便。
在44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。
用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。
粪大肠菌群的测定可以用多管发酵法和滤膜法。
第一篇 多管发酵法1 适用范围本标准适用于地表水、地下水及废水中粪大肠菌群的测定。
2原理多管发酵法是以最可能数（most probable number）简称MPN来表示试验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
不过只要每一稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显示阴性的稀释度。
因此在实验设计上，水样检验所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度而定。
3 培养基和试剂本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。
3.1单倍乳糖蛋白胨培养液：成分：蛋白胨10g牛肉浸膏3g乳糖5g氯化钠5g1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。
3.2 三倍乳糖蛋白胨培养液：按上述配方比例三倍（除蒸馏水外），配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液，制法同上。
3.3 EC培养液：成分：胰胨20g乳糖5g胆盐三号 1.5g磷酸氢二钾（K2HPO4）4g磷酸二氢钾（KH2PO4） 1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分加热溶解，然后分装于含有玻璃倒管的试管中。
GBT 肥料中粪大肠菌群的测定
GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
滤膜法检测粪大肠菌群方法
滤膜法检测粪大肠菌群方法摘要：在水质分析中，采用粪大肠菌群滤膜法所需的仪器简单，操作简便快捷，适用于地表水、地下水等杂质较少水样。
对此实验方法易产生的问题及影响测定值的因素进行分析，提出了几个关键的问题及改进措施，以提高粪大肠菌群测定的效率及精度。
关键词：粪大肠菌群滤膜法注意事项C35 A大肠菌群是卫生防疫和环境保护监督执法的重要评价指标。
多年来大肠菌群作为卫生环境评价的指标，在传染病防治、食品卫生质量监测、污水综合排放控制评价、水资源生态环境变化等方面发挥了巨大作用。
目前国内的粪大肠菌群检测方法有多管发酵法、滤膜法、酶法、LTSE法和纸片法等。
其中，滤膜法检测粪大肠菌群，是利用微孔滤膜过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜贴在选择性培养基上，经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型粪大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的粪大肠菌群数。
本研究主要是针对滤膜法再实际监测工作中的可行性，利用实际水样对滤膜法与发酵法监测结果进行对比，并对滤膜法的重复性和准确性进行统计与评价。
一、概述粪大肠菌群是总大肠菌群的一个亚种，直接来自粪便，它除了耐热，在44~44.5℃的高温条件仍可生长繁殖并将色氨基酸代写成吲哚处，其他特性均与总大肠菌群相同。
总大肠菌群中的细菌除了生活在肠道中，在自然环境中的水与土壤也经常存在，但在这些自然环境中生活的大肠菌群培养的最适合温度为25℃，如在37℃培养则仍可生长，但如果将培养温度上升至44℃则不可生长，而直接来自粪便的大肠菌群，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。
因此，可用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开。
在37℃培养生长的大肠菌群，包括粪便内生长的大肠菌群成为总大肠菌群 Total colifrom，在44.5℃仍能生长的大肠菌群称为粪大肠菌群 Fecal colifrom，粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。
粪大肠菌群的测定滤膜法方法验证报告
方法验证报告项目名称：粪大肠菌群的测定方法名称：水质粪大肠菌群的测定滤膜法报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1人员情况表1参加验证的人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2使用仪器情况登记表1.3 检测用试剂情况表3使用试剂登记表1.4 环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行监控。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力2.1适用范围本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的的测定。
本方法的检出限为:当接种量为100ml时，检出限为10CFU/L;当接种量为500ml时，检出限为2CFU/L。
2.2 样品保存采样后应在2h内检测，否则，应10℃以下冷藏但不得超过6h。
实验室接样后，不能立即开展检测的，将样品在4℃以下冷藏并在2h内检测。
2.3检测步骤2.3.1样品过滤根据样品的种类判断接种量，最小过滤体积为10ml ,如接种量小于10ml时应逐级稀释。
先估计出适合在滤膜上计数所使用的体积，然后再取这个体积的1/10和10倍，分别过滤。
理想的样品接种量是滤膜上生长的粪大肠菌群菌落数为20-60个，总菌落数不得超过200个。
当最小过滤体积为10ml 时，滤膜上菌落密度仍过大时，则应对样品进行稀释。
1：10稀释的方法为：吸取10ml样品，注入盛有90ml无菌水的三角瓶中，混匀，制成1：10稀释样品。
用灭菌镊子以无菌操作夹取无菌滤膜，贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2-3次。
样品过滤完成后，再抽气约5秒，关上开关。
2.3.2培养用灭菌镊子夹取滤膜移放在MFC培养基上，滤膜截留细菌面朝上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将培养皿倒置，放入恒温培养箱内，（44.5±0.5）℃培养24h±2h。
滤膜法测定粪大肠菌群
滤膜法测定粪大肠菌群37.1.1 主题内容与适用范围本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。
37.1.2 方法提要用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，经44.5℃培养后，计数典型菌落。
37.1.3 培养基与试剂37.1.3.1 MFC培养基37.1.3.1.1 成份A 胰胨 10gB 多胨 5gC 酵母浸膏 3gD 氯化钠 5gE 乳糖 12.5gF 胆盐3号(Bile salt No.3)或混合胆盐 1.5gG 琼脂 15gH 苯胺蓝 0.2gI 蒸馏水 1000mL37.1.3.1.2 制法: 在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[C(NaOH)＝0.2mol/L] 10mL，混合后，取500mL加入琼脂煮沸溶解，于另外500mL 蒸馏水中，加入除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀后调pH为7.4，加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板，不可高压灭菌。
制好的培养基应存放于2～10℃，不超过96h。
本培养基也可不加琼脂，制成液体培养基，使用时加2mL于灭菌吸收垫上，再将滤膜置于培养垫上培养。
37.1.3.2 EC培养基37.1.3.2.1 成份A 胰蛋白胨 20gB 乳糖 5g37.1.1 主题内容与适用范围本方法规定了生活饮用水中粪大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中粪大肠菌群数的测定。
37.1.2 方法提要用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，经44.5℃培养后，计数典型菌落。
37.1.3 培养基与试剂37.1.3.1 MFC培养基37.1.3.1.1 成份A 胰胨 10gB 多胨 5gC 酵母浸膏 3gD 氯化钠 5gE 乳糖 12.5gF 胆盐3号(Bile salt No.3)或混合胆盐 1.5gG 琼脂 15gH 苯胺蓝 0.2gI 蒸馏水 1000mL37.1.3.1.2 制法: 在1000mL蒸馏水中先加入玫红酸(10g/L)的氢氧化钠溶液[C(NaOH)＝0.2mol/L] 10mL，混合后，取500mL加入琼脂煮沸溶解，于另外500mL 蒸馏水中，加入除苯胺蓝以外的其他试剂，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，混匀后调pH为7.4，加入苯胺蓝煮沸，迅速离开热源，待冷却至60℃左右，制成平板，不可高压灭菌。
水质粪大肠测定方法
水质粪大肠测定方法我折腾了好久水质粪大肠的测定方法，总算找到点门道。
说实话，一开始我也是瞎摸索。
我最早尝试的时候，就像没头的苍蝇一样乱撞。
我知道传统的方法有滤膜法之类的。
就先说这个滤膜法吧，你得先采集水样，这就像是从大池塘里舀一勺水出来，不过这一勺水可得有讲究，要能代表整个池塘的情况。
采集完水样后，要把培养液准备好，这培养液就像是运动员的营养餐，是专门给粪大肠菌准备的“食物”，营养成分得合适。
然后把水样通过滤膜过滤，这个步骤就好比筛沙子，要把粪大肠菌留在滤膜上。
但是我刚开始的时候就弄错了滤膜的种类，结果根本测不出来，后来才知道要用专门用于这种测定的滤膜才行。
还有多管发酵法，这个方法开始的时候得把水样分装到好多小试管里头，就像把糖果分装到小盒子里一样。
给这些小试管里添加一些试剂，给粪大肠菌创造适合生长的环境。
我当时有一回呀，试剂的量没加准，有的加多了有的加少了，这就像做饭的时候盐放多放少了一样，结果就不准确了。
在这个过程中，温度也很关键，要给这些试管放在合适的温度下培养，就像孵小鸡一样，温度不对这小鸡可孵不出来，粪大肠菌也生长不好。
我在温度控制这块就吃过亏，当时设备有点问题，温度老是波动，导致最后的结果偏差特别大。
我又重新做了一遍，在整个过程中时刻盯着温度计，才得到了准确一点的结果。
对于这些水样里粪大肠菌的测定，要多次重复试验才能更准确。
你不能只做一次就觉得万事大吉了。
而且在每次操作之前，一定要把仪器设备都清洗干净，这就跟我们洗碗一样，如果碗没洗干净，下次吃饭肯定有问题，仪器不干净就会影响测定结果。
另外，我觉得有时候自己没什么把握的时候，多去看看那些标准的操作指南书或者向有经验的人请教请教很有必要。
虽然我在这个测定方法上还是会时不时出点小差错，但是每次出现错误后就变得更有经验，下次再做就会好很多了。
再来说说另外一种方法膜过滤- 多管发酵法。
这个方法先是膜过滤，这步的关键在于膜要是质量好又适合的。
我有一次图便宜用了个不太正规的膜，结果过滤效果不好。
GBT 肥料中粪大肠菌群的测定
GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200 r/min 充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
滤膜法测定地表水中粪大肠菌群的测量不确定度评定方法
滤膜法测定地表水中粪大肠菌群的测量不确定度评定方法2北京同仁堂健康药业股份有限公司摘要：通过对《水质粪大肠菌群的测定滤膜法》（HJ347.1-2018）的不确定度分析、评定，从结论中可分析该方法的实验误差，为该方法的提高该方法的数据准确的提供依据。
同时也可为其他水中微生物指标的不确定度评定提供参考。
关键词：粪大肠菌群；不确定度评定；地表水引言：粪大肠菌群即耐热大肠菌群，并非细菌学分类名称，而是卫生学用语，它们指的不是某一种或某一属细菌，而是一类细菌，是指在44.5℃培养24h，能够发酵乳糖产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
主要包括大肠埃希氏菌属和耐热的克雷伯菌属细菌，是生长于人和温血动物肠道中的一类肠道细菌。
它主要来自粪便，在自然界中易死亡，若检出则说明检测对象近期受到了粪便污染，水体中存在着被粪便污染的可能性，暗藏着中毒和传染病的威胁，对人群健康具有一定的危险性。
不确定度评定是表示被测量数据分散性的非负数值，是判断测定结果有效性的重要依据。
【1】通过对检测结果测量不确定度的评定，可以分析出检测过程中哪些因素需要重点关注，从而提高检测能力，确保数据准确。
本文分析滤膜法测定地表水中粪大肠菌群过程中引入不确定度的来源，比较各不确定度分量所占的比重，计算地表水中粪大肠菌群测定结果的测量不确定度，从而定量描述地表水中粪大肠菌群测定结果的测量扩展不确定度。
为类似粪大肠菌群测定结果不确定度的评定提供参考。
1材料与方法1.1试验材料地表水：采自北京市丰台区马草河；MFC培养基：北京陆桥技术股份有限公司；无菌滤膜：直径50mm，孔径0.45μm，广东环凯微生物科技有限公司。
1.2仪器与设备BHC-1300A2型生物安全柜：苏州博莱尔净化设备有限公司；BXM-30R型立式压力蒸汽灭菌器：上海博迅实业有限公司；GHP-9050N隔水式培养箱：上海一恒科学仪器有限公司；AB135-S电子天平（±0.1g）：瑞士梅特勒-托利多公司；MFS-3A-250-K不锈钢多联过滤系统：广东环凯微生物科技有限公司；采样瓶：500mL带旋塞的广口采样瓶；培养皿：直径90mm，北京陆桥技术股份有限公司。
GBT肥料中粪大肠菌群的测定
G B T肥料中粪大肠菌群的测定集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#GB/ 肥料中粪大肠菌群的测定1 范围本标准规定了肥料中粪大肠菌群的测定方法。
2 定义粪大肠菌群 fecal coliforms系指一群在℃±℃条件能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪大肠菌群数为每克（毫升）肥料样品中粪大肠菌群的最可能数（MPN）。
3 设备和材料（内容略）4 培养基和试剂培养基：遵照附录A的规定。
革兰氏染色液：遵照附录B的规定（略）。
5 检验步骤样品稀释在无菌操作下称取样品g或吸取样品10mL，加入到带玻璃珠的90 mL无菌水中，置于摇床上200r/min充分振荡30min，即成10-1稀释液。
用无菌移液管吸取 mL上述稀释液加入到45 mL无菌水中，混匀成10-2稀释液。
这样依次稀释，分别得到10-3，10-4等浓度稀释液（每个稀释度须更换无菌移液管）。
乳糖发酵试验选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液mL加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管，置℃±℃恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24h±2h。
如果所有乳糖胆盐发酵管都不产酸不产气，则为粪大肠菌群阴性；如果有产酸产气或只产酸的发酵管，则按进行。
分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置36℃±1℃条件下培养18h～24h。
证实试验从分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色。
染色反应阳性者为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽胞杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置℃±℃条件下培养24h ±2h。
观察产气情况，不产气为粪大肠菌群阴性；产气为粪大肠菌群阳性。
结果证实实验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克（毫升）肥料样品中的粪大肠菌群数。
附录 A（规范性附录）培养基乳糖胆盐发酵培养基蛋白胨g猪胆盐g乳糖g%溴甲酚紫水溶液m L蒸馏水1000m LpH值～制法：将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶解于蒸馏水中，校正pH，加入溴甲酚紫水溶液，然后分装试管，每管9mL，并放入一支倒置的小套管，高压灭菌115℃15min。
粪大肠杆菌测定方案
粪大肠杆菌的测定（滤膜法）方法参照HJ/T 347—2007，方法步骤为两大步第一部分为准备阶段：一、M-FC固体培养基的配制配制方法参照HJ/T 347—2007，用精密PH试纸测PH,用10％HCl和10％NaOH调节PH二、玻璃器皿的洗涤和包装1.洗涤玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。
培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲洗。
移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。
洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入烘箱中烘干，备用。
2.包装⑴移液管的吸端用细铁丝将少许棉花塞入构成1-⒈5cm长的棉塞。
棉塞要塞得松紧适宜，吸时既能通气，又不致使棉花滑入管内。
将塞好棉花的移液管的尖端，放在4-5cm宽的长纸条的一端，移液管与纸条约成30°夹角，折叠包装纸包住移液管的尖端，用左手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，字条螺旋式的包在移液管外面，余下纸头折叠打结，待灭菌。
⑵用棉塞将试管管口或锥形瓶瓶口塞住，用牛皮纸或报纸将瓶口或试管口捆扎好然后待灭菌。
⑶培养皿由一底一盖组成一套，用牛皮纸或报纸包好待灭菌。
三、无菌稀释水的配制1.去一个250ml的锥形瓶装90ml蒸馏水，放30颗玻璃珠于锥形瓶内，塞棉塞、包扎、待灭菌。
2.另取2支25mm×200mm的试管，分别装9ml蒸馏水，塞棉塞、包扎、待灭菌。
四、水样的稀释方法⑴将水样用力振摇，是可能存在的细菌凝团成分散状。
⑵以无菌操作方法吸取10ml充分混匀的水样，注入盛有90ml灭菌水的锥形瓶中混匀成1:10的稀释液⑶吸取1:10的稀释液1ml注入盛9ml灭菌水是试管中，混匀成1:100的稀释液。
同法依次稀释成1:1000的稀释液。
吸取不同浓度稀释液时，必须更换吸管。
第二部分为测定阶段此阶段完全参照HJ/T 347—2007滤膜法步骤，在紫外灭菌灯下操作，分3个培养皿，一个做空白对照，另外做两个平行样。
水中粪大肠菌群测定方法
水中粪大肠菌群测定方法嘿，咱今儿就来说说这水中粪大肠菌群测定方法。
你想想看啊，水这东西，咱天天都得用，喝的、洗的、用的，要是水里有啥不干净的东西，那可不得了！这粪大肠菌群就是得重点关注的家伙。
咱先来说说多管发酵法吧。
就好像是个大侦探在找线索一样，把水样分成好多份，分别放到不同的管子里，给它们创造适合的环境，然后等着看有没有啥反应。
这就像是在观察一群小“嫌疑人”，看谁露出马脚。
如果有管子里出现了一些特殊的现象，嘿，那可能就找到目标啦！还有滤膜法，这就像是给水流过一个特别的滤网。
把水过滤一遍，那些粪大肠菌群就可能被留在滤膜上。
然后再去观察这个滤膜，看看有没有它们的踪迹。
这就好像是在沙滩上找贝壳，仔细地搜寻着。
平板计数法也挺有意思呢！把水样涂在平板上，就像给它们安排了一个小舞台，然后等着看哪些家伙会冒出来，在这个小舞台上“表演”。
通过观察这些“小演员”的数量和状态，就能大概知道水里的情况啦。
你说，这测定方法是不是挺神奇的？就像是给水里的这些小东西来了一场大排查。
咱得认真对待啊，不然喝了不干净的水，那肚子可不得闹腾啊！这可不是开玩笑的事儿。
而且啊，测定的时候可得细心再细心，不能有一点马虎。
这就跟咱做一件重要的事情一样，得全神贯注，不能出岔子。
要是稍微不注意，可能就错过了关键的信息，那可不行。
想象一下，如果因为测定不准确，导致我们以为水是干净的，结果却不是，那会带来多大的麻烦呀！所以说，这水中粪大肠菌群测定可真是个重要的活儿，一点都不能含糊。
咱普通老百姓可能平时不太会去做这个，但咱得知道有这么回事儿，得关注咱喝的水是不是安全的。
这也是对自己和家人负责呀！可别小看了这小小的粪大肠菌群，它们要是在水里闹腾起来，那可不好收拾呢！总之呢，水中粪大肠菌群测定方法是保障我们用水安全的重要手段，我们得重视起来，让我们的生活用水干干净净、健健康康的，这样我们才能放心地使用呀！你说是不是这个理儿？。
水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法HJ 347.1-2018
中华人民共和国国家环境保护标准HJ 347.1-2018部分代替HJ/T 347-2007水质粪大肠菌群的测定滤膜法Water quality—Determination of fecal coliform—Membrane filtration（发布稿）本电子版为发布稿。
请以中国环境出版集团出版的正式标准文本为准。
2018-12-26 发布2019-06-01 实施生态环境部发布目次前言 (ii)1适用范围 (1)2规范性引用文件 (1)3术语和定义 (1)4方法原理 (1)5干扰和消除 (1)6试剂和材料 (2)7仪器和设备 (2)8样品 (3)9分析步骤 (3)10结果计算与表示 (5)11精密度和准确度 (6)12质量保证和质量控制 (6)13废物处理 (7)14注意事项 (7)附录A（资料性附录）粪大肠菌群检验记录及报告格式 (8)i前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水中粪大肠菌群的测定方法，制定本标准。
本标准规定了测定地表水、地下水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的滤膜法。
本标准是对《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T 347-2007）滤膜法部分的修订。
本标准首次发布于2007年，原起草单位为中国环境监测总站。
本次为第一次修订。
本次修订的主要内容如下：——完善了方法原理的表述；——增加了检出限；——增加了规范性引用文件、术语和定义、干扰和消除、仪器和设备、样品采集、样品保存、精密度和准确度、质量保证和质量控制、废物处理等章节；自本标准实施之日起，《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T347-2007）废止。
本标准的附录A为资料性附录。
本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。
本标准起草单位：辽宁省环境监测实验中心。
本标准验证单位：大连市环境监测中心、丹东市环境监测中心站、锦州市环境监测中心站、辽阳市环境监测站、铁岭市环境保护监测站和沈阳市疾病预防控制中心。
废水 水质 大肠菌群数 测定方法
废水是指工业或城市生活污水处理后排放的水体，其中含有大量的有害物质和微生物。
这些有害物质和微生物对水环境和生态系统造成了严重的污染和破坏。
对废水中的水质和微生物进行监测和检测成为保护环境和人类健康的必要措施之一。
本文将介绍废水中大肠菌裙数的测定方法，帮助读者了解如何科学、准确地检测废水中的微生物污染情况。
一、大肠菌裙数的含义大肠菌裙是一类能够在培养基上生长并产生气泡的革兰氏阴性细菌，主要包括大肠杆菌、粪链球菌等。
大肠菌裙数是指在一定体积的水样中含有的大肠菌裙的数量，是衡量水体中细菌污染程度的重要指标之一。
废水中的大肠菌裙数超标往往意味着水质受到了严重污染，可能会带来危害。
二、大肠菌裙数的测定方法1. MPN法MPN法即最概然数法，是一种常用的测定大肠菌裙数的方法。
其步骤如下：- 取不同稀释度的水样，分别加入含有营养物质的培养基中；- 观察各培养皿中是否有气泡生成，记录生成气泡的培养皿数；- 根据MPN表格查找出对应的大肠菌裙数。
MPN法的优点是不需要高精度的设备，能够进行粗略的大肠菌裙数测定。
但是由于操作繁琐，需要较长的培养周期，且准确度相对较低。
2. 膜过滤法膜过滤法是利用特制的孔径较小的滤膜过滤水样，然后将滤膜放入培养皿中进行培养，最后观察并计算大肠菌裙数的方法。
具体步骤如下：- 将水样通过膜过滤装置过滤，将滤膜放入含有培养基的培养皿中；- 培养一定时间后，观察并计算大肠菌裙的数量。
膜过滤法的优点是操作简便，准确度高，能够得到较为精确的大肠菌裙数。
但是相较于MPN法，膜过滤法需要使用较为昂贵的膜过滤装置和培养设备。
三、结语废水中的大肠菌裙数测定方法多种多样，每种方法都有其适用的场景和局限性。
在实际应用中，需要根据具体情况选择合适的大肠菌裙数测定方法，并严格按照规范操作，以确保测试结果的准确性和可靠性。
希望本文能够帮助读者更加深入地了解废水中大肠菌裙数的测定方法，为环境保护和人类健康做出贡献。
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌的检测方法国标
大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，可用于评价食品和水的卫生质量。
因此，大肠杆菌的检测方法在食品、水处理等领域被广泛采用。
本文将介绍国际上常见的大肠杆菌检测方法国标。
一、 ISO 9308-1：水质–检测和计数大肠杆菌–第1部分：膜过滤法
该标准适用于检测与供水、游泳池、浴缸等有关的水样中的大肠杆菌。
该标准使用膜过滤技术，将水样过滤通过0.45微米的滤膜上的杆菌层，然后将滤膜培养在培养基上，检测和计数大肠杆菌的数量。
该标准具有简便、快捷、准确等特点。
二、ISO 21150：食品和饲料–检测和计数大肠杆菌和厌氧菌–气相培养法
该标准适用于肉、肠衣、豆腐等食品样品，通过瓶内培养的方法检测大肠杆菌的数量。
该标准使用培养基使大肠杆菌产生二氧化碳，然后采用气相色谱技术检测二氧化碳的量，以计算大肠杆菌的数量。
该标准的优点是能在单一瓶中同时检测大肠杆菌和厌氧菌的数量。
三、ISO 9308-2：水质–检测和计数大肠杆菌和沙门氏菌–第2部分：多管发酵管技术
该标准适用于检测污染水样和废水样品中的大肠杆菌和沙门氏菌。
该标准使用多管发酵管技术，将水样转移到多个管子中，这些管子中的培养基不断地搅拌，检测管子中产生的气体，以检测大肠杆菌和沙门氏菌的数量。
该标准较为耗时，但能同时检测两种菌群。
以上三种标准是国际上常见的用于大肠杆菌检测的方法。
在具体应用中可以选择适宜的方法，选择合适的培养基，并按照标准操作规范执行测试，以得到准确可靠的检测结果。
滤膜法测定水质中粪大肠菌群方法验证10
检测分析方法验证报告报告编号:xxxxxxx方法名称：水质粪大肠菌群测定滤膜法验证人员：xxx xxx审核人员：xxx验证日期：xxxx年xx月xx日xxxxxx有限公司水质粪大肠菌群测定滤膜法一、方法依据本方法依据《水质粪大肠菌群的测定滤膜法》（HJ 347.1-2018）用滤膜法测定水中粪大肠菌群，适用于地表水、地下水、生活污水以及工业废水的粪大肠菌群测定。
本方法的检出限为，当接种量为100mL时，检出限为10CFU/L；当接种量为500mL时，检出限为2CFU/L。
二、方法原理将待测样品通过孔径为0.45μm的滤膜过滤，然后将滤膜置于MFC选择性培养基上，在44.5℃条件下培养24h，粪大肠菌群生长并发酵乳糖使指示剂变色，通过颜色判断是否产酸，并通过呈蓝色或蓝绿色菌落计数，测定样品中粪大肠菌群浓度。
样品采集时可加入硫代硫酸钠溶液消除活性氯对样品的干扰，或加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除重金属离子对样品的干扰。
参加验证的人员情况登记表使用仪器情况登记表使用试剂及溶剂登记表三、分析步骤3.1样品过滤3.1.1待检样品组本次选用的待检样品为xx水源水，其接种量为100mL、10mL,最小过滤体积为10mL，接种量小于10mL时，应逐级稀释。
在无菌操作下用灭菌镊子夹取无菌滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2次。
样品过滤完后在抽气3s。
3.1.2阳性对照：取一粒大肠埃希氏菌（ATCC 25922）磁珠置于BHI液体培养液中，24h培养，使之菌悬液浓度在109CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10-7至10-8。
取10-7大肠埃希氏菌菌悬液进行接种，其接种量为100mL、10mL，最小过滤体积为10mL，接种量小于10mL时，应逐级稀释。
在无菌操作下用灭菌镊子夹取无菌滤膜贴放在已灭菌的过滤装置上，固定好过滤装置，将样品充分混匀后抽滤，以无菌水冲洗器壁2次。
关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复
关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题的回复摘要：1.粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的问题2.关于检出限及结果报出的解答3.监测技术规范和标准的应用4.粪大肠菌群测定方法的多管发酵法和滤膜法5.检出限的计算方法及统计学意义正文：近期，关于地表水和地下水中粪大肠菌群及总大肠菌群检出限及结果报出的问题引起了广泛关注，然而，针对这一问题，目前尚无明确的答案。
本文将从地下水、地表水质量标准、监测技术规范以及粪大肠菌群测定方法等方面进行探讨。
首先，粪大肠菌群及总大肠菌群检出限的问题一直困扰着水质监测领域。
检出限是指在一定条件下，分析方法能够检测到的最小浓度。
针对这一问题，我国制定了一系列水质监测技术规范和标准，如《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法》(HJT347-2007) 等。
其次，关于检出限及结果报出的解答，目前尚无明确的答案。
不过，根据《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法》(HJT347-2007)，多管发酵法的检出限是根据统计学方法计算出来的MPN(最可能数) 值，而非试验方法所能达到的实际检出浓度。
这种方法具有一定的科学性和合理性，但在实际应用中仍存在诸多问题。
此外，监测技术规范和标准的应用也是解决检出限及结果报出问题的关键。
地下水、地表水质量标准以及相关监测技术规范的实施，有助于规范水质监测工作，提高监测数据的准确性和可比性。
粪大肠菌群测定方法有多管发酵法和滤膜法等。
其中，多管发酵法是一种常用的粪大肠菌群测定方法，其原理是将水样与发酵培养基混合，通过统计学方法计算出最可能数，从而推测水样中粪大肠菌群的数量。
滤膜法则是通过过滤水样，将滤膜上的菌落计数，从而得出粪大肠菌群的数量。
这两种方法各有优缺点，适用于不同的水质监测场合。
总之，关于粪大肠菌群等检出限及结果报出问题，需要综合考虑水质标准、监测技术规范、测定方法以及统计学意义等多个方面，以期得出更加准确、可靠的监测结果。
滤膜法测定总大肠菌群
滤膜法测定总大肠菌群1 主题内容与适用范围本方法规定了生活饮用水中总大肠菌群的滤膜测定方法。
本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。
2 方法提要用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。
3 培养基与试剂3.1 品红亚硫酸钠培养基3.1.1 成份A 蛋白胨10gB 酵母浸膏5gC 牛肉膏5gD 乳糖10gE 琼脂15~20gF 硫酸氢二钾3.5gG 无水亚硫酸钠5g左右H 碱性品红乙醇溶液(50g/L) 20mLI 蒸馏水1000mL3.1.2 储存培养基的制备先将琼脂加到500mL蒸馏水中，煮沸溶解，于另500mL蒸馏水中加入硫酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，补充蒸馏水至1000mL，混匀后调pH为7.2~7.4，再加入乳糖，分装，115℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。
3.1.3 平皿培养基的配制将上法制备的储存培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储存培养基内，并充分混匀(防止产生气泡)，立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿中。
待冷却凝固后置冰箱内备用。
此种以制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。
如培养基已由淡粉色变为深红色，则不能再用。
3.2 乳糖蛋白胨培养基3.2.1 成份A 蛋白胨10gB 牛肉膏3gC 乳糖5gD 氯化钠5gE 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mLF 蒸馏水1000mL3.2.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4，再加入1mL1.6％溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，115℃高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
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滤膜法-粪大肠菌群的测定
1、适用范围
本标准适用于地表水、地下水、及水中粪大肠菌群的测定。
用于检验加氯消毒的水样时，在滤膜法之前，先做试验，证实它所得的数据资料与多管发酵试验所得的数据资料具有可比性。
2、原理
滤膜是一种微孔性薄膜。
将水样注入已灭菌的放有滤膜（孔径0.45微米）的滤器中，经过抽滤，细菌即被截留在膜上，然后将滤膜贴于M-FC培养基上，44.5℃温度下进行培养，计数滤膜上生长的此特性的菌落数，计算出每1L水样中含有粪大肠菌群数。
3仪器：
滤膜（孔径0.45微米）、滤器、接液瓶、垫圈、无菌镊子夹
3、培养基和试剂
本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂，实验室用水为新制备的去离子水。
M-FC培养基：
胰胨 10g
蛋白胨 5g
酵母浸膏 3.0g
氯化钠 5.0g
乳糖 12.5g
胆盐三号 1.5g
1%苯胺蓝水溶10ml
1%玫瑰色酸溶液（溶于0.2mol/L氢氧化钠液中）10ml
蒸馏水 1000ml
制法：将上述培养基中的成分（除苯胺蓝和玫瑰色酸外），置于蒸馏水中加热溶解，调节PH为7.4，分装于小烧瓶内，每瓶100ml，于115℃灭菌20min。
储存于冰箱中备用，临用前，按上述配比，用灭菌吸管分别加入已煮沸灭菌的1%苯胺蓝溶液1ml及新配制的1%玫瑰色酸溶液（溶于氢氧化钠溶液）1ml，混合均匀。
加热溶解前，加入 1.2%～1.5%琼脂制成固体培养基。
如培养物中杂菌不多，则培养基中不加玫瑰色酸亦可。
4、步骤
水样的选择：水样量的选择根据细菌受检验的特征和水样中预测的细菌密度而定。
理想的水样体积是一片滤膜上生长20～60个粪大肠群菌落，总菌落数不超过200个。
滤膜及滤膜灭菌：将滤膜放入高压蒸汽灭菌锅里在121℃灭菌10min，滤器、接液瓶、垫圈分别用纸包好，在使用前经121℃灭菌20min，滤器也可用点燃的酒精棉球火焰灭菌。
过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，稳妥的固定好滤器。
将适量的水样注入滤器中，加盖，开动真空泵即可抽滤除菌。
培养：使用M-FC 培养基。
培养基含或不含琼脂，不含琼脂的培养基使已用M-FC 培养基饱和的无菌吸收垫。
将滤过水样的滤膜置于琼脂或吸收垫表面。
将培养皿紧密盖好后，置于能准确恒温于44.5℃±0.5℃的恒温培养箱或恒温水浴中，经24h ±2h 培养。
若用恒温水浴培养，则需用防水胶带封每个平皿，将培养皿重叠封入防水塑料袋或容器内，浸没在44.5℃±0.5℃恒温水浴中。
在培养时间内，装培养皿的塑料袋必须用重物坠于水面之下，以保持所需的严格温度，所有已制备的培养物都应该在过滤后30min 内浸入水浴内。
5、 结果计算
粪大肠菌群菌落在M-FC 培养基上呈蓝色或蓝绿色，其他非粪肠菌群菌落呈灰色、淡黄色或无色。
正常情况下，由于温度和玫瑰酸盐试剂的选择作用，在M-FC 培养基上很少见到非粪大肠菌 菌落。
必要时可将可疑菌落接种于EC 培养液，44.5℃±0.5℃培养24h ±2h ，如产气则证实为粪大肠菌菌群。
计数呈蓝或蓝绿色的菌落，计算出每1L 水样中含有粪大肠菌群数。
粪大肠菌群菌落数（个/L ）=)1000ml 过滤水样量（群菌落数滤膜上生长的粪大肠菌。