细胞裂解液 - 360文档中心

组织裂解液和细胞裂解液如何配制

组织裂解液和细胞裂解液如何配制组织裂解液和细胞裂解液是在实验室中用于将组织或细胞中的生物分子（如蛋白质、核酸等）裂解或溶解的溶液。

这些液体通常包含一系列试剂和缓冲液，以帮助维持理想的酸碱平衡和溶解条件。

以下是组织裂解液和细胞裂解液常见的配制方法。

1. 常用的组织裂解液配方为RIPA裂解液（RIPA lysis buffer），其成分包括：- 50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.4）-150mM氯化钠（NaCl）- 1% NP-40或Triton X-100-0.5%钠脱氧胆酸或SDS-0.1%SDS-1mMEDTA-1mM苯甲硫酸酯（PMSF）2.配制方法：a. 称取所需量的Tris-HCl缓冲液和NaCl溶解于蒸馏水中；b. 加入适量的PMSF和其他表面活性剂（如NP-40、Triton X-100）；c.配制完毕后，pH应调整至理想值；d.将裂解液过滤或使用高速离心去除悬浮物。

细胞裂解液的配制：1.常用的细胞裂解液配方为RIPA裂解液（同组织裂解液配方）或RIPA缓冲液（不含表面活性剂），以避免破坏裂解液中的蛋白质。

2.配制方法：a.同组织裂解液的步骤1；b.不加入表面活性剂，方便后续蛋白质的分析。

同时，裂解液的配制可以根据实验需要做出适当更改，以满足特定的研究目的和条件。

在裂解液的配制过程中，需要注意以下几点：1.所选择的缓冲液的pH应调整到适合所需实验的范围内，以确保溶液的稳定性；2.表面活性剂的添加量应适中，以满足蛋白质溶解的需要，但过多的添加会造成裂解液的稀释和稳定性下降；3.裂解液的配制应注意在低温下进行，以防止试剂的降解和活性的损失；4.在裂解液的使用过程中，最好将裂解液与细胞/组织充分接触，并且较长时间地孵育，以满足完整的裂解过程。

裂解液配制方法

裂解液配制方法 The document was finally revised on 20211、红细胞裂解液（去除红细胞）配制试剂所需材料：1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solutiona) NH4Cl (1.5 M) 80 gb) KHCO3 (100 nM) 10 gc) Na4EDTA (10 nM) 3.7 gd) Distilled H2O 1000 mL2. 1N HCl or 1N NaOH（调节pH值用）配制步骤：1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中；2.调节溶液pH值到，加去离子水定容到1000ml；3.在制备工作液时，将此储存液稀释10倍后使用。

保存：储存液储存于2-8°C不能超过半年（六个月）；2.在使用前，工作液每天都应该新鲜配制放置于室温，当日用不完的弃掉。

2、ripa裂解液NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟） L(100μg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 μmol/Lμg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） mlAprotinin（抑蛋白酶肽）μmol/L(1μg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于LHEPES；Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）3、细胞裂解液（Tris－HCL）1．1M Tris 溶液的配置取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解。

2．1M Tris－HCL Ph=溶液的配置取 1M Tris 溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=（需浓盐酸约），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用。

植物单细胞裂解液

植物单细胞裂解液
植物单细胞裂解液是一种将植物细胞完全破裂并释放细胞内物质的液体。

通常，植物单细胞裂解液是通过物理方法（如颤震、切割、研磨等）或化学方法（如酶解、甲醇浸提等）将植物细胞完全破裂得到的。

这样可以使植物细胞内的蛋白质、核酸、碳水化合物等溶解物质释放出来，并可进一步通过离心、过滤等步骤进行分离和提取。

植物单细胞裂解液常用于生物学研究、分析和工业生产等领域，可以用于提取植物细胞中的酶、激素、色素、抗原等物质。

酵母细胞裂解液成分

酵母细胞裂解液成分一、胞内蛋白质酵母细胞裂解液中最主要的成分之一就是胞内蛋白质。

酵母细胞是真核生物，其细胞内含有多种蛋白质，包括结构蛋白、酶类蛋白、转运蛋白等。

这些蛋白质在细胞内发挥着重要的生物学功能，裂解液中的胞内蛋白质可以通过不同的分离技术进行纯化和研究。

二、细胞壁成分酵母细胞裂解液中还含有细胞壁成分。

酵母细胞壁是由多种多糖组成的复杂结构，包括β-葡聚糖、甘露聚糖、β-葡胺聚糖等。

这些细胞壁成分在酵母细胞的生长和分裂过程中起着重要的作用，同时也可以作为研究酵母细胞壁合成和降解的重要材料。

三、核酸酵母细胞裂解液中含有丰富的核酸。

核酸是生物体内的重要生物大分子，包括DNA和RNA。

酵母细胞裂解液中的核酸可以通过不同的技术进行提取和纯化，用于研究酵母细胞的基因组和转录组。

四、代谢产物酵母细胞裂解液中还含有多种代谢产物。

酵母细胞是一种典型的发酵微生物，其代谢途径复杂，包括糖酵解、脂肪酸代谢、氨基酸代谢等。

酵母细胞裂解液中的代谢产物可以通过不同的技术进行分离和分析，用于研究酵母细胞的代谢途径和代谢产物的调控。

五、细胞器和膜蛋白酵母细胞裂解液中还含有细胞器和膜蛋白。

酵母细胞是真核生物，其细胞内含有多种细胞器，如线粒体、内质网、高尔基体等。

这些细胞器在细胞的生物学过程中发挥着重要的作用，裂解液中的细胞器和膜蛋白可以通过不同的分离和纯化技术进行研究。

六、小分子化合物酵母细胞裂解液中还含有多种小分子化合物。

这些小分子化合物包括氨基酸、核苷酸、糖类、有机酸等。

酵母细胞裂解液中的小分子化合物可以通过不同的技术进行分离和分析，用于研究酵母细胞的代谢途径和生物合成过程。

七、其他成分除了以上提到的成分外，酵母细胞裂解液中还含有一些其他的成分。

例如，酵母细胞裂解液中可能含有一些离子，如钠离子、钾离子、钙离子等。

这些离子在酵母细胞的生长和代谢过程中起着重要的作用。

酵母细胞裂解液是一种含有多种重要成分的溶液。

这些成分包括胞内蛋白质、细胞壁成分、核酸、代谢产物、细胞器和膜蛋白、小分子化合物以及其他成分。

细菌细胞裂解液配方

细菌细胞裂解液配方细菌细胞裂解液是一种含有多种细胞成分的液体，可以用于分离、纯化、检测和分析细胞内的各种基因、蛋白质和代谢产物。

以下是一组常用的细菌细胞裂解液配方：配方一：Tris-HCl裂解液- Tris-HCl缓冲液（pH 8.0） 50mM- EDTA 1mM- Lysozyme 1mg/mL步骤：将含菌量为10^8cfu/mL的蒸馏水悬液加入裂解液中（10mL/1mL），在室温下振荡30min-1h，最终离心，将沉淀洗涤后获取裂解液。

配方二：甘油-SDS裂解液- Tris-HCl缓冲液（pH 8.0） 50mM- EDTA 1mM- Lysozyme 1mg/mL- 10%甘油 10mL- 10%SDS 10mL步骤：将含菌量为10^8cfu/mL的蒸馏水悬液加入裂解液中（10mL/1mL），在室温下振荡30min-1h，最终离心，将沉淀洗涤后获取裂解液。

配方三：BugBuster裂解液- BugBuster蛋白质裂解液 20mL- Benzonase 70U/mL步骤：将含菌量为10^8cfu/mL的蒸馏水悬液加入裂解液中（10mL/1mL），在室温下振荡30min-1h，最终离心，将沉淀洗涤后获取裂解液。

配方四：液氮裂解液- 液氮 200-300mL步骤：将含菌量为10^8cfu/mL的细胞悬液倒入液氮中，将混合物充分研磨，研磨时需要在液氮中浸泡，并间歇性振荡，直到细胞破裂。

然后将混合物离心，将上清液收集。

以上是常用的几种细菌细胞裂解液配方。

每种配方针对不同的细胞类型、目的和实验需求，都有其独特的优点和适用性。

根据实验情况和需要，选择适宜的裂解液，能更加高效、准确地进行细胞裂解和成分分离分析。

通用细胞裂解液

通用细胞裂解液产品简介：多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如去Triton、SDS、NP-40等。

通用细胞裂解液(Common Lysis Buffer )，是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞，并获得总蛋白的裂解液。

所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，主要由Tris、Triton X-100等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

用Common Lysis Buffer得到的蛋白，可以用leagene BCA蛋白浓度测定试剂盒(PT0001)测定蛋白浓度。

由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不宜用Bradford 法测定由通用细胞裂解液获得样本的蛋白浓度。

主要成分：主要由Tris-HCl、NaCl、低浓度Triton X-100，低浓度sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA等多种蛋白酶抑制剂组成。

自备材料：1、高速离心机2、微量移液器3、PMSF，亦可采购Leagene的苯甲基磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L)(PI0011)操作步骤（仅供参考）：(一)贴壁培养细胞1、取Leagene Common Lysis Buffer 置于室温溶解混匀后，使用前取适当量的裂解液加入PMSF，使其最终浓度为1mM。

2、去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3、按照6孔板每1孔加入100～200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入Common LysisBuffer。

移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。

冰上或4℃裂解30～60min。

4、10000～12000g，4℃离心10～15min(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

红细胞裂解液的配制

红细胞裂解液的配制我在一个公司的网站上看到的红细胞裂解液的说明书上说操作要点是：1.在37度预热；2.充分混匀细胞我就是这样做的，效果还可以。

不过我只做流式细胞仪的检测，活性没测。

我的裂解液是0.16M NH4Cl，0.13mM EDTA，12mM NaHCO3我用的方法：全血：裂解液=1：3，如2ml的全血加上6ml的红细胞裂解液，充分混匀后，室温静置5mim，1000rpm离心6~10min。

红细胞裂解得非常充分。

0.15 M NH4CL, 0.01 M NaHCO3 and 1 mM EDTA (Sigma)Ammonium chloride (NH4Cl) 8.29 g 0.155 MPotassium bicarbonate (KHCO3) 1 g 10mMEDTA 0.37 g 1mMH2O 1l.Filter with 0.45µm filteraliquot in 100 ml aliquotsfilter the solution to be used with 0.2µm filter.我们用的是Tris-NH4Cl,具体配方如下:NH4Cl:4.15克加双蒸水500ml,取450ml;Tris:1.0297克加双蒸水50ml,再加上上面的450ml,共计500ml,高压灭菌,用时加10-20ml,静置5min,效果蛮好.9月29日我用的配方氯化铵3.735g，tris 1.3g，加在500ml水中，ph约7.2。

将全血约5ml加入配好的加入30ml裂解液的50ml试管中5分钟或15分钟，发现5分钟组细胞要多些，15分钟组细胞要少些，而且红细胞仍然有。

如何配置细胞裂解液

如何配Байду номын сангаас细胞裂解液
如何配置细胞裂解液
组织裂解液（全细胞蛋提取）：
1：Tris-HCL 50mmoL/L PH 7.4
2: Nacl 150 mmoL/L
3: 去氧胆酸钠0.25%
4：NP-40或Triton-x-100 1%
5: EDTA 1 mmoL/L
6：PMSF 1 mmoL/L
7：Aprotinin 1μg/ml
8: leupeptin 1μg/ml
9: pepstain 1μg/ml
其中:7,8,9作用不持久，要使用前加入。
细胞裂解液：1：NP-40裂解体系：150 mmoL/L Nacl 1.0%NP-40或Triton-x-100
50 mmoL/L Tris(PH8.0)
2：RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl
1.0%NP-40或Triton-x-100
0.5%脱氧胆酸钠
0.1%SDS
50 mmoL/L Tris( ph8.0)
如何配置细胞裂解液如何配置细胞裂解液组织裂解液(全细胞蛋提取): 1:tris-hcl 50mmol/l ph 7.4 2: nacl 150 mmol/l 3:去氧胆酸钠0.25% 4:np-40或triton-x-100 1% 5: edta 1 mmol/l 6:pmsf 1 mmol/l 7:aprotinin 1μg/ml 8: leupeptin 1μg/ml 9: pepstain 1μg/ml 其中:7,8,9作用不持久,要使用前加入. 细胞裂解液:1:np-40裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 50 mmol/l tris(ph8.0) 2:ripa裂解体系:150 mmol/l nacl 1.0%np-40或triton-x-100 0.5%脱氧胆酸钠 0.1%sds 50 mmol/l tris( ph8.0) 下载文档原格式( word原格式 ,共1页)

细胞裂解液原理

细胞裂解液原理
细胞裂解液是一种用于将细胞（尤其是植物细胞）破碎和释放其内部物质的混合液体。

其原理基于细胞结构的破裂和细胞膜的破坏，从而使细胞内的细胞器和分子释放出来。

细胞裂解液通常包含以下成分：
1. 渗透剂：如EDTA、甘露醇等，用于调节溶液的渗透压，促进细胞膜的溶解。

2. 破碎剂：如洗涤剂（如Tween-20、Triton X-100）或去离子水，用于破坏细胞膜的完整性，使细胞溶胀和破裂。

3. 结合剂：如离子液体，可与细胞的核酸和蛋白质结合，防止其在裂解过程中的降解。

4. 酶：如蛋白酶、核酸酶等，可用于降解细胞内的蛋白质和核酸分子。

5. 缓冲溶液：用于维持溶液的pH值，防止酶的活性受到影响。

细胞裂解液的使用步骤通常包括将细胞样品与裂解液混合均匀、静置一段时间以让裂解发生、离心沉淀细胞碎片和细胞器，收集上清液中的细胞内物质。

总之，细胞裂解液通过破坏细胞膜的完整性，使细胞内的物质释放出来，以用于进一步的实验分析或应用。

红细胞裂解液原理

红细胞裂解液原理
红细胞裂解液是一种用于分解红细胞的溶液，其主要成分是一种化学物质，可以溶解红细胞膜，使红细胞内部的细胞器和溶液成分释放出来。

红细胞裂解液的原理是通过改变细胞外环境的渗透压和离子浓度来破坏红细胞的结构。

通常，红细胞在等渗溶液中可以维持其正常的形态和功能。

然而，当红细胞置于高渗透溶液中时，溶液中的溶质引起红细胞内部的水分向外流动，导致细胞内部的渗透压增高。

这种渗透压的不平衡最终会导致红细胞膜的破裂，释放出红细胞内部的细胞器和溶质。

红细胞裂解液中的化学物质通常包括一种或多种溶解酶，如血红蛋白酶。

这些酶能够与红细胞膜上的特定蛋白质结合，从而溶解红细胞膜，使细胞内部的内容物得以释放。

同时，一些红细胞裂解液中还含有适量的盐类和缓冲剂，以维持溶液的酸碱度和离子浓度，从而提供适宜的环境来完全溶解红细胞。

红细胞裂解液的使用在许多实验室和临床应用中被广泛采用。

例如，它可以用于获取血液样本中的血红蛋白、细胞内细胞器和溶质，进而进行血型鉴定、研究红细胞组分、分析血红蛋白的结构和功能等。

此外，在临床诊断过程中，红细胞裂解液也可用于处理样本，清除红细胞残留物，减少样本含红细胞造成的干扰。

总的来说，红细胞裂解液通过改变细胞外环境的渗透压和离子浓度，以及溶解酶的作用，可以有效地破坏红细胞膜，使红细
胞内部的细胞器和溶质得以释放。

这为血液分析和临床诊断提供了一种重要的实验工具和样本处理方法。

细胞裂解液中edta的作用

细胞裂解液中edta的作用细胞裂解液中EDTA的作用1. 引言细胞裂解是生物学研究中的重要步骤，通过裂解细胞并释放细胞内的分子，可以进行分子生物学实验和分析。

而在细胞裂解液中加入EDTA（乙二胺四乙酸）可以起到多种作用，本文将详细介绍EDTA在细胞裂解液中的作用。

2. 与金属离子的络合•EDTA具有多个螯合（络合）基团，可以与金属离子形成稳定的络合物。

•在细胞裂解液中，EDTA可以与细胞内的金属离子（如钙、镁等）发生络合反应，使细胞膜和细胞脏器解离，从而促进细胞的裂解。

3. 与核酸酶的抑制•细胞裂解过程中，存在大量的核酸酶。

这些酶可以降解RNA和DNA，对细胞内的核酸进行破坏。

•EDTA具有抑制核酸酶活性的作用，通过与核酸酶中的金属离子发生络合作用，从而减少核酸的降解，保护细胞内的核酸完整性。

4. 建立渗透压•细胞在生理条件下具有一定的渗透压。

•加入EDTA可以调节细胞裂解液的渗透压，使其与细胞内环境更接近，有利于维持细胞内分子的完整性。

5. 活化酶•EDTA还具有激活某些酶的作用，如金属依赖的酶（如DNA聚合酶）。

•在细胞裂解液中添加适量的EDTA可以提高特定酶的活性，从而更好地满足后续实验的需求。

6. 结论细胞裂解液中的EDTA发挥着多种重要作用，包括与金属离子的络合、抑制核酸酶活性、调节渗透压和活化酶等。

这些作用使得EDTA成为细胞裂解实验中不可缺少的试剂，能够有效地促进细胞的裂解，并保护细胞内分子的完整性。

通过合理使用EDTA，我们可以获得更准确、可靠的实验结果，推动科学研究的进展。

以上就是关于细胞裂解液中EDTA作用的介绍，希望对读者有所帮助。

感谢阅读！。

细胞裂解液选型与配制方法

细胞裂解液是以去污剂为基础、针对细胞裂解应用、成分优化的缓冲液和试剂。

对于不同细胞类型、蛋白定位、以及下游应用，需要不同的细胞裂解液进行有效的细胞裂解和蛋白提取。

去污剂主要类型及其作用根据去污剂类型、蛋白定位、及目的蛋白性质来确定细胞裂解液的种类。

去污剂主要类型及其作用根据蛋白定位不同推荐的裂解液种类常用细胞裂解液#RIPA缓冲液最初以其开发的测定方法(放射免疫沉淀测定法)来命名，是两种离子去污剂和一种非离子去污剂的Tris缓冲液,也是哺乳动物细胞或软组织裂解和蛋白提取的常用选择。

常用配方：25 mM Tris-HCl, pH 7.6150 mM NaCl1% NP-401%去氧胆酸钠0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)兼容应用：BCA及去污剂兼容型的Bradford试剂蛋白浓度测定、SDS-PAGE、蛋白质免疫印迹、ELISA及纯化等。

#IP缓冲液是一种修饰型的RIPA缓冲液（不含SDS），可有效溶解细胞蛋白，但无法释放基因组DNA或破坏蛋白复合物，可兼容下游的免疫沉淀或者亲和吸附的应用。

常用配方：25 mM Tris-HCl, pH 7.4150 mM NaCl1% NP-401% mM EDTA5% 甘油兼容应用：BCA及去污剂兼容型Bradford试剂蛋白浓度测定、蛋白质免疫印迹、ELISA、免疫沉淀及报告基因检测。

#NP-40缓冲液NP-40是一种非离子型聚氧乙烯表面活性剂，常作为细胞裂解缓冲液或其他用于提取和溶解蛋白质的溶液的组分。

常用配方：150mM NaCl1.0% NP-4050mM Tris-HCl，pH值8.0兼容应用：BCA及去污剂兼容型Bradford试剂蛋白浓度测定、蛋白质免疫印迹、ELISA、免疫沉淀。

#Tris-Triton缓冲液非离子型表面活性剂，常用作细胞裂解缓冲液或其他用于提取和溶解蛋白质的溶液。

Trition X-100效果介于NP-40和SDS之间。

常用配方：10mM 三羟甲基氨基甲烷(Tris)，pH值7.4100mM NaCl1mM EDTA1mM EGTA1% Triton X-10010% 甘油0.1% SDS0.5% 去氧胆酸钠兼容应用：。

ripa裂解液成分

ripa裂解液成分RIPA裂解液成分解析RIPA（Radio Immuno-Precipitation Assay）裂解液是常用的细胞和组织裂解液，广泛应用于生化实验中。

它的主要作用是通过破坏细胞膜和核膜，释放细胞内的蛋白质和其他溶解性分子，用于进一步的分析和研究。

本文将对RIPA裂解液的主要成分进行详细解析。

1. 缓冲液RIPA裂解液中的缓冲液是维持裂解液pH值的关键成分。

一般使用Tris缓冲液或磷酸盐缓冲液，能够在一定程度上稳定细胞裂解过程中的pH值，保证实验结果的准确性。

2. 盐类RIPA裂解液中常添加一定浓度的盐类，如氯化钠和磷酸二氢钠。

这些盐类可以提供离子强度，维持细胞裂解液的渗透压，有利于保持细胞内蛋白质的溶解状态。

3. 表面活性剂RIPA裂解液中通常添加非离子型表面活性剂，如Triton X-100或Tween-20。

这些表面活性剂可以破坏细胞膜的完整性，使细胞内容物释放出来。

同时，它们还能够改善裂解液的渗透性，促进细胞内溶质的扩散。

4. 蛋白酶抑制剂为了保护目标蛋白质免受蛋白酶的降解，RIPA裂解液中常加入蛋白酶抑制剂。

常用的蛋白酶抑制剂包括苯甲烷磺酰氟化物（PMSF）、氯化苯甲基磺酰氟（TPCK）和氯化苯甲基磺酰甲基（TLCK）等，它们能够抑制多种蛋白酶的活性。

5. 螯合剂为了保护目标蛋白质免受金属离子的影响，RIPA裂解液中常添加螯合剂。

EDTA是一种常用的螯合剂，它能够与金属离子形成稳定的络合物，防止金属离子对蛋白质的影响。

6. 胰蛋白酶抑制剂胰蛋白酶抑制剂（PI）是一种特殊的蛋白酶抑制剂，能够抑制胰蛋白酶的活性。

在RIPA裂解液中加入PI可以有效地抑制细胞裂解液中胰蛋白酶的活性，防止其降解目标蛋白质。

7. 磷酸盐RIPA裂解液中的磷酸盐通常用于调节裂解液的pH值和离子强度。

磷酸盐可以提供缓冲能力，保持裂解液的稳定性，并且能够调节细胞裂解液的渗透压。

8. 辅助成分除了上述主要成分外，RIPA裂解液中还可能包含其他辅助成分，如甘油、甲基磺酰氯（MESNA）等。

组织裂解液和细胞裂解液的配制

组织裂解液和细胞裂解液如何配制一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 去垢剂0.1% SDS 去垢剂2ug/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂使用前加入2ug/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂使用前加入1 mM PMSF 蛋白酶抑制剂1.5 mM EDTA 蛋白酶抑制剂1mM NaVanadate 磷酸脂酶抑制剂任选以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中;2、冷的PBS 中加入1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate 钒酸钠任选3、对数期生长状态佳的细胞,75cm至少3-4瓶90%以上生长面积;二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上, 用吸液管吸出培养液;加入足够的冷的PBS 在培养瓶中充分洗涤细胞表面,以洗去瓶中残留的培养基,倒掉PBS ,重复以上操作2-3遍;在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS,尽量在冰上操作;2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液每75cm2 培养瓶加1ml. 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞,如果所需要刮的同种细胞有多瓶,则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮由于处理后的细胞裂解液较粘稠,所以宜用直径大点的吸液管吸取;3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中置于冰上,然后重复步骤2以刮取剩下的细胞;4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中,样品插入冰盒进行超声,超声强度以不产生泡沫为准,超声每次2-3秒,重复3-4次;如仍有细胞碎片或沉淀,应离心10000rpm,10分钟,留取上清;5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计,在A280测定,分装保存在-70℃;4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl pH 8.0 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF苯甲基磺酰氟0.1mmol/L100µg/mlPepstatin胃蛋白酶抑制剂1 µmol/L0.7µg/mlLeupeptin亮抑制肽0.5mg/mlAprotinin抑蛋白酶肽0.3µmol/L1µg/ml注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPESpH8.0;Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存裂解操作程序：离心收集1×107个细胞加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀如为组织进行匀浆4℃放置15~30min4℃离心,15 000rpm,10min,取上清备用;方法三•细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；2. 溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性•推荐RIPA buffer:•. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系•· 150 mM NaCl 等渗体系•· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂•· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂•· 5 µg/ml Aprotinin 抑肽酶蛋白酶抑制剂•· 5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂•· 1% Triton x-100 破坏细胞•·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂•细胞裂解液的主要目的：1.利用去污剂破坏脂质双分子层,破裂细胞；2. 溶解蛋白；3. 蛋白变性使其稳定；4. 抑制蛋白酶活性•推荐RIPA buffer:•. 50 mM Tris-HCl pH 7.4 缓冲体系•· 150 mM NaCl 等渗体系•· 1 mM PMSF 强大的蛋白酶抑制剂•· 1 mM EDTA 变性剂和稳定剂•· 5 µg/ml Aprotinin 蛋白酶抑制剂•· 5 µg/ml Leupeptin 蛋白酶抑制剂•· 1% Triton x-100 破坏细胞•·1% Sodium deoxycholate 中度变性剂和蛋白溶解剂•·0.1% SDS 强变性剂和蛋白溶解剂••其中PMSF等蛋白酶抑制剂最好另外配制,－20℃保存,用前混合;蛋白酶抑制剂较贵,如果你的经费有限,可以仅用PMSF试一试,能出结果就可以;•用于普通的Western、IP或co-IP,我们推荐使用Western及IP细胞裂解液P0013,该裂解液已被国内各大研究机构广泛使用,用户普遍反映很好;裂解细胞或组织后,没有非常粘滞的透明状DNA团块形成,不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作;另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测;对于某些特殊蛋白的IP,如果发现Western及IP细胞裂解液P0013效果不是非常理想,可以尝试用RIPA裂解液强、中或弱或NP-40 裂解液;如果发现IP的时候背景很高,即非特异的蛋白也被IP下来,则需要选用裂解强度较高的裂解液,例如RIPA裂解液强或中;如果发现目的蛋白无法被IP下来,则说明裂解液的强度过强,可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液弱或NP-40裂解液;对于某些难溶解蛋白的Western,如果发现Western及IP细胞裂解液效果不是非常理想,可以尝试使用裂解强度更高的裂解液,例如RIPA裂解液强、中或SDS裂解液; ••RIPA裂解体系：150 mmoL/L Nacl, 1.0% NP-40或Triton-x-100 ,0.5%脱氧胆酸钠, 0.1% SDS, 50 mmoL/L Tris ph8.0;•一、组织裂解液配制组织裂解液配方：`7M Urea60. 06 4.2042 g2M thiourea76.12 1.5224 g100mM DTT 0.1543 g4% CHAPS 0.4 g0.5mM EDTA 0.00146 g40Mm Tris 0.0485 g2%v/v NP-40 0.2 ml1%v/v Triton X-100 0.1 ml5mM PMSF用前加0.00871 g2%pharmalyte 0.2ml共10ml分装成400µl/每管可应用于30-80毫克组织裂解注：已配好分装成400µl/每管可供应用不需另配细胞裂解液配方：6M Urea60. 06 1.8018 g2M thiourea76.12 0. 7613 g65mM DTT 0.050 g4% CHAPS 0.2 g40Mm Trisbase 0.02425 g共5ml分装成200µl/每管可应用于50-100ml培养瓶内的细胞裂解细胞裂解液：组织裂解液配方：7 mol/L 尿素、7M Urea60. 06 4.2042g2 mol/L硫脲、 2M thiourea76.12 1.5224 g2% NP-40、2%v/v NP-40 0.2 ml1% Triton X-100、1%v/v Triton X-100 0.1 ml65 mmol/L DTT、0.1003g 100mM DTT 0.1543 g 5 mmol/L PMSF、5mM PMSF用前加0.00871 g 4% CHAPS、4% CHAPS 0.4 g40 mmol/L Tris、40Mm Tris 0.0485 g2% pharmalytepH3-10、2%pharmalyte 0.2ml0.5mM EDTA 0.00146 g25 mg/L DNase I、7 mg/L RNase A、20 mg/L aprotinin、20 mg/L leupeptin、2 mmol/L Na3VO4、Phosphatase Inhibitor Cocktail 1Phosphatase Inhibitor Cocktail 21ml水化液配方：8M Urea60.06 0.48048 g2% CHAPS 0.02 g痕量溴酚兰0.4 µl1%的痕量溴酚兰10mg+1000µl双蒸水450µl水化液加DTT 0.00135mgor 400µl水化液加DTT 0.00126mg各种细胞裂解液的功用都分别是什么,SDS ,NP-40 ,TritonX-100有何作用SDS ,NP-40 ,TritonX-100这三种去垢剂的作用是不同的,或者说作用力量强弱不同;SDS属于离子型去垢剂,最厉害,基本可以把细胞完全破掉,DNA会释放出来,裂解液变得很粘稠;NP-40是很温和的去垢剂,1%浓度的基本可以破坏掉胞膜,而对核膜破坏的作用弱,结合特定的buffer可以获得胞浆蛋白;TritonX-100的能力介于NP40和SDS之间,偏向于NP40,也是常用的细胞裂解液成分之一,在保护蛋白活性方面有一定作用SDS基本会使蛋白变性失活;但是去垢剂属性只是一方面,buffer、配比、浓度、提取方法和材料处理也都是关键因素,建议参考分子克隆来做;。

组织裂解液和细胞裂解液如何配制

组织裂解液和细胞裂解液如何配制一、细胞裂解液配制方法一一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂)0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中。

2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞，75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）。

二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上，用吸液管吸出培养液。

加入足够的冷的 PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面，以洗去瓶中残留的培养基，倒掉PBS ，重复以上操作2-3遍。

在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS，尽量在冰上操作。

2、向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml). 然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞，如果所需要刮的同种细胞有多瓶，则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠，所以宜用直径大点的吸液管吸取)。

3、吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中（置于冰上），然后重复步骤2以刮取剩下的细胞。

4、尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中，样品插入冰盒进行超声，超声强度以不产生泡沫为准，超声每次2-3秒，重复3-4次。

如仍有细胞碎片或沉淀，应离心10000rpm,10分钟，留取上清。

5、取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计，在A280测定），分装保存在 -70℃。

4方法二NP-40 or Triton-100 1%TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/LNaCl 150mmol/LPMSF（苯甲基磺酰氟）0.1mmol/L(100µg/ml)Pepstatin(胃蛋白酶抑制剂) 1 µmol/L(0.7µg/ml)Leupeptin（亮抑制肽） 0.5mg/mlAprotinin（抑蛋白酶肽）0.3µmol/L(1µg/ml)（注：PMSF 贮存液：100mmol/L即17.4mg/ml于异丙醇中；Aprotinin 贮存液：10mg/ml溶于0.01mol/LHEPES(pH8.0);Leupeptin 贮存液：10mg/ml溶于水中；Pepstatin 贮存液 10mg/ml于甲醇液中.均于-20℃保存）裂解操作程序：* 离心收集1×107个细胞* 加入4℃预冷1%NP-40裂解液100µl* 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀（如为组织进行匀浆）* 4℃放置15~30min* 4℃离心，15 000rpm,10min，取上清备用。

细胞裂解液成分

细胞裂解液成分
细胞裂解液是指将细胞破碎后产生的液体，它的成分取决于破碎的细胞类型和使用的破碎方法。

一般来说，细胞裂解液的主要成分包括：
1. 蛋白质：细胞裂解过程中释放出的蛋白质是其中主要的成分之一，其中包括酶类、结构蛋白、转运蛋白等。

2. 核酸：DNA和RNA是细胞中主要的核酸分子，它们也会在细胞破碎时释放出来。

3. 磷脂类物质：细胞膜主要由磷脂类物质构成，当细胞破裂时，这些磷脂类物质也会被释放出来。

4. 糖类物质：细胞中含有多种糖类物质，比如糖原、葡萄糖等，它们也会在细胞破裂时被释放出来。

5. 离子和小分子代谢产物：包括钙、镁、钠、钾等离子和一些代谢产物，如尿素等。

细胞裂解液的成分因破碎方法不同而有所差异，如超声波、离心、研磨等方法。

此外，细胞裂解液也可以经过不同步骤的处理，如超声波和离心可以用于不同的应用场景，因此裂解液成分也随之发生改变。