公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定操作规程
大肠菌群的测定方法操作规程
文件制修订记录1、培养基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，煌绿乳糖胆盐肉汤，结晶紫中性红胆盐琼脂，无菌生理盐水。
2、操作步骤2.1样品的稀释：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
用1 mL 无菌吸管吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL 生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1 次，换用1支1 mL 无菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。
2.2选取2个～3个适宜的连续稀释度, 每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。
同时取1 mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。
2.3及时将15 mL～20 mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）约倾注于每个平皿中。
小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36℃±1℃培养24h～48 h。
3、平板菌落数的选择选取菌落数在15 CFU～150 CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。
典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm或更大。
4、证实试验从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内，36℃±1℃培养48h，观察产气情况。
凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
5、大肠菌群平板计数的报告经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以4.4中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。
大肠杆菌的检测：大肠菌群测定的操作细则(中英文对照版)
大肠杆菌的检测:大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。
1 设备和材料1.1 温箱:36±1℃。
1.2 冰箱:0~4℃。
1.3 恒温水浴:44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。
1.7 平皿:直径为90mm。
1.8 试管。
1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。
1.13 酒精灯。
1.14 试管架。
2 培养基和试剂2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。
2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。
3.1 检样稀释3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。
固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
大肠菌群测试片检测操作流程
大肠菌群测试片操作流程1.样品的前处理(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠菌群标准菌：挑取平板上大肠菌群标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（3）大肠菌群标准菌原液的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
大肠菌群测定操作规程
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大肠菌群测定操作规程
适用范围：大肠菌群系指一群在 36℃条件下培养 48h 能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革 兰氏阴性无芽孢杆菌。通常用此法作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量。
二． 1.
操作内容： 检验程序： 检样→ 稀释 → LST 发酵管（36±1℃，24±2h）
↓→不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 →BGLG（36±1℃，48±2h） → 不产气 → 大肠菌群阴性 → 报告 产气 → 大肠菌群阳性 → 报告 2. 操作方法：
2.1 以无菌操作，将检样 10ml 被测液放于含有 90ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶 内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成 1：10 的均匀稀释液。 2.2 用 1ml 灭菌吸管吸取 1：10 稀释液 1ml，沿管壁徐徐注入含有 9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的 试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液） ，振摇试管，混合均匀，做成 1：100 的稀释液。 （均 液的 PH 值应在 6.5～７.5 之间，必要时分别用 1mol/L 氢氧化钠（NaoH）或(1mol/L)盐酸（HCL） 调节。 2.3 另取 1ml 灭菌吸管，按上条操作顺序，做 10 倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用 1 支 1ml 灭菌吸管。 2.4 根据食品卫生标准要求或对检污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种 3 管。 2.5 初发酵试验：将待检样品接种于月桂基硫盐胰蛋白胨发酵管内，接种量在 1ml，每一稀释度接种 3 管， 36±1℃文箱内培养 24±2h， 置 观察倒管内是否有气泡产生， 如未产气则继续培养至 48h±2h. 记录在 24h 和 48h 内产气的 LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。 2.6 复发酵试验 用按种环从所有 48h±2h 内发酵产气的 LST 肉汤管中分别取培养物 1 环， 移种于 BGLB 肉汤管中， 36±1℃培养 48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 2.8 报告： 根据证实为大肠菌群阳性的管数， MPN 检索表 查 （见 GB/T4789.3 附表 B） 报告每 100ml ， （g） 大肠菌群的 MPN 值。
公共场所浴盆、脸(脚)盆微生物检验方法 大肠菌群测定
GB/T 18204. 12-2000前言为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB 9663—9673-1996、GB 16153-1996《公共场所卫生标准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。
本标准中的方法是与GB 9663～9673-1996、GB 16153-1996相配套的监测检验方法。
本标准第一次为仲裁法。
本标准为首次发布。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准起草单位：吉林省卫生防疫站、长春市卫生防疫站、黑龙江省卫生防疫站。
本标准主要起草人：刘亚平、李梅、张旭宏、刘艳芬、袁韧。
中华人民共和国国家标准公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法大肠菌群测定GB/T 18204.12-2000Methods of microbiological examinationfor bath tube and wash basin in public places-Determination of Coliform bacteria1范围本标准规定了公共场所浴盆、脸（脚）盆大肠菌群的测定方法。
本标准适用于公共场所浴盆、脸（脚）盆大肠菌群的测定。
2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 18204. 3-2000公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定GB/T 18204. 11-2000公共场所浴盆、脸（脚）盆微生物检验方法细菌总数测定3定义本标准采用下列定义。
大肠菌群coliform bacteria指一群在37℃、24 h能发酵乳糖、产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价公共场所浴盆、脸（脚）盆的卫生质量，推断右否被肠道致病菌污染的可能性。
4仪器和材料4.1 无菌滤纸片。
4.2恒温箱．4.3冰箱(0～4℃)。
大肠菌群的测定方法和步骤
大肠菌群的测定方法和步骤嘿，咱今儿就来聊聊大肠菌群的测定方法和步骤。
你说这大肠菌群啊，就像是一群调皮的小精灵，得把它们给找出来，弄清楚它们的情况呢！首先呢，得准备好各种各样的家伙什儿，就像战士上战场得拿好自己的武器一样。
什么培养皿啦、培养基啦，都得齐全咯。
然后呢，就是采样啦。
这可不能马虎，得从要检测的东西里面准确地取到样，就好像去果园里摘果子，得挑那些长得好的摘呀。
接下来就是培养啦。
把取来的样品放到合适的培养基里，给这些大肠菌群创造一个舒适的“家”，让它们能好好地生长。
这就好比给小树苗找了块肥沃的土地，让它们能茁壮成长。
培养的过程中可得细心照料着，温度啦、湿度啦都得控制好。
不然这些小精灵可不乐意好好表现呢。
过了一段时间后，就得去观察啦。
看看培养基上有没有出现那些特征性的菌落。
这就像是在一群孩子里面找那个最调皮的。
要是发现了可疑的菌落，还得进一步去验证呢。
就跟警察破案似的，得找到确凿的证据才能下定论。
最后确定了大肠菌群的情况，咱就能知道这个东西是不是干净卫生啦。
这可关系到大家的健康呢，可不是闹着玩的。
你想想啊，如果吃的东西或者用的东西里面大肠菌群超标了，那会咋样？那肯定会让人不舒服呀，说不定还会生病呢！所以说这个测定大肠菌群的事儿可重要了。
咱平时买东西的时候也得留个心眼，看看是不是经过严格检测的。
别稀里糊涂地就买了那些不靠谱的东西。
总之呢，大肠菌群的测定可不是个简单的事儿，但又特别重要。
咱得重视起来，把这些小精灵都给管得服服帖帖的，让大家都能吃得放心，用得安心，你说是不是？这可不是开玩笑的呀！。
大肠菌群检验方法及操作方法
大肠菌群检验方法及操作方法1、什么是大肠菌群：指一群需氧及兼性厌氧，在37℃能分解乳糖产酸、产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。
2、大肠菌群的组成：大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、产气克雷伯氏菌属和阴沟肠杆菌。
3、大肠菌群的测定意义◆粪便污染的指标菌：大肠菌群或粪大肠菌群◆以大肠菌群作为粪便指标菌原因：1)在粪便中数量最大；2)在外环境中存活的时间与致病菌大体相同；3)检测方法简便容易。
◆大肠菌群的测定意义：1)判断食品中否受到粪便污染。
2)有利于控制肠道传染病的发生和流行。
3)有利于控制食品在生产加工、运输、保存等过程中的卫生状况。
4、大肠菌群的生物学特性1 形态与染色：革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌。
2 发酵乳糖产酸产气3 培养特性：在EMB琼脂上的典型菌落:呈深紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，常有金属光泽；4 在麦康凯琼脂上的典型菌落：呈桃红色或中心桃红、圆形，扁平，光滑湿润。
5、大肠菌群检验方法及操作方法◆国家标准：◆三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试验(乳糖发酵试验)◆行业标准：◆两步法：推测试验→证实试验表1 大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征MPN法简介Most Probable Number Method最大可能数•对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。
•MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
6、粪大肠菌群的检验•粪大肠菌群：系一群需氧及兼性厌氧，在44.5℃培养24h内能发酵乳糖产酸产气和分解色氨酸产生靛基质的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
•于LST中36℃培养48h内产气，并于EC内培养44℃24h产气的一群细菌；在胰蛋白胨肉汤中于44.5℃，24h 内产生吲哚的耐热大肠菌群。
检验方法：7、检验注意事项1）从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。
公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法 大肠菌群测定
GB/T 18204. 5-2000前言为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB 9663～9673-1996、GB 16153-1996《公共场所卫生标准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准。
本标准中的方法是与GB 9663～9673-1996、GB 16153-1996相配套的监测检验方法。
本标准第一法为仲裁法。
本标准为首次发布。
本标准由中华人民共和国卫生部提出。
本标准起草单位：江苏省卫生防疫站、广东省卫生防疫站、天津市卫生防疫站。
本标准主要起草人：符晓梅、封幼玲、杭万双、蔡玟、张淑兰。
中华人民共和国国家标准公共场所毛巾、床上卧具微生物检验方法大肠菌群测定Methods of microbiological examinationfor towel and bedclothes in public places-Determination of Coliform bacteriaGB/T 18204. 5-20001 范围本标准规定了公共场所毛巾、床上卧具大肠菌群的测定方法。
本标准适用于公共场所内公用毛巾、床上卧具大肠菌群的测定。
2引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T 18204. 3-2000公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定3定义本标准采用下列定义。
大肠菌群coliform bacteria指一群在37℃、24 h能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价公用毛巾、床上卧具的卫生质量。
4 仪器见GB/T 18204. 3-2000中第3章。
5培养基和试剂见GB/T 18204. 3-2000申第4章。
6检验程序见GB/T 18204. 3-2000中第5章。
7操作步骤7.1 采样方法7.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的毛巾、床上卧具。
公共场所卫生检验方法 第4部分：公共用品用具微生物指标-最新国标
公共场所卫生检验方法第4部分：公共用品用具微生物指标1 范围本文件描述了公共场所公共用品用具表面细菌总数、真菌总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌和β-溶血性链球菌的采样与检验方法。
本文件适用于公共场所公共用品用具微生物指标的检验，其他场所参照执行。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4789.28 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB 19489 实验室生物安全通用要求3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
细菌总数 total bacteria count在营养琼脂培养基上经36℃±1 ℃培养48 h所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
大肠菌群 coliforms在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
金黄色葡萄球菌 staphylococcus aureus在Baird-Parker平板上生长良好，在血平板上可形成完全透明溶血环，血浆凝固酶试验阳性的革兰氏阳性球菌，常呈葡萄球状排列。
真菌总数 total fungi count在沙氏琼脂培养基上经28 ℃±1 ℃、3 d～5 d培养所形成的菌落数。
β-溶血性链球菌β-hemolytic streptococcus能产生溶血素，血平板上在菌落周围形成界限分明、完全透明的溶血环（β-型溶血）的化脓（或A群）链球菌和无乳（或B群）链球菌。
4 细菌总数原理36 ℃±1 ℃培养48 h 在公共用品用具的适当部位来回均匀涂抹进行样品采集，样品经过处理后，在营养琼脂培养基上经得到细菌总数的测定方法。
仪器和耗材本方法中使用的仪器和耗材如下： —— 高压蒸汽灭菌器； —— 干热灭菌箱； —— 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃； —— 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃； —— 冰箱：2 ℃～5 ℃； —— 电炉或微波炉； —— 天平：感量0.1 g ； —— 涡旋混合器； —— 放大镜或（和）菌落计数器； —— 无菌试管：18 mm ×150 mm ； —— 无菌平皿：直径90 mm ； —— 无菌刻度吸管：1 mL （0.01 mL 刻度）； —— 微量移液器：1 000 μL ； —— 灭菌棉拭子； —— 灭菌剪刀； —— p H 计或精密pH 试纸。
大肠菌群测试片操作流程
大肠菌群测试片检测操作流程1.样品的前处理:(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。
（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
（3）大肠杆菌标准菌：挑取平板上大肠杆菌标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。
用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。
2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液需用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。
（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（3）大肠菌群标准菌的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况而定)。
（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。
3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。
将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项在现代医学领域中，大肠菌群的检测方法和仪器使用知识及注意事项成为了一个备受关注的话题。
大肠菌群是指寄生在人体消化道中的一类微生物群集，它们在人体内发挥着非常重要的作用，包括促进食物消化、合成维生素和抵御有害微生物等。
了解大肠菌群的检测方法以及仪器的使用知识和注意事项，对于维护人体健康具有重要意义。
要确定人体内大肠菌群的状况，通常会采用多种检测方法。
其中最常见的是通过实验室检测人体排泄物中的菌群成分来判断其种类和数量。
这种方法需要采集受检者的粪便样本，并通过特殊的培养基和培养条件来筛选出大肠菌群，再通过显微镜或分子生物学方法来鉴定其种类和数量。
另一种常见的检测方法是通过血清学检测，通过检测受检者血中抗原和抗体水平变化来间接推测大肠菌群的状况。
还有基于DNA 测序技术的高通量测序方法，可以更准确地识别大肠菌群的组成和数量，但是成本较高。
在具体操作时，使用检测大肠菌群的仪器需要特别注意一些事项。
首先是要做好实验室的无菌操作，确保样品不被外界环境中的杂菌污染。
其次是要熟练掌握各种仪器的使用方法，包括显微镜、培养皿和PCR仪等。
在使用时要严格遵守使用说明，避免因误操作导致结果的不准确。
另外，针对不同检测方法，抽取样本的部位和存储条件也有所不同，需要严格按照标准操作规程操作，以保证结果的准确性。
对于大肠菌群的检测方法和仪器使用知识及注意事项，我个人认为，这些知识的掌握对于医学研究和临床诊断具有十分重要的意义。
通过检测大肠菌群的种类和数量，可以更准确地了解人体内微生物群集的状况，为诊断和治疗提供更科学的依据。
仪器的正确使用和注意事项的遵守，可以有效避免误操作带来的不准确结果，保障医学研究和临床诊断的准确性和可靠性。
大肠菌群的检测方法、仪器使用知识及注意事项是一个十分广泛而且复杂的领域，在医学领域有着重要的应用价值。
只有深入了解这些知识，才能更好地发挥它们在医学研究和临床诊断中的作用。
公共场所监测微生物检验原始记录[1]
![公共场所监测微生物检验原始记录[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/64963b3f11661ed9ad51f01dc281e53a58025190.png)
QRD2035-2007第页共页样品名称：公共场所监测样品样品编号：检验开始时间：执行标准：GB/T18204-2000公共场所卫生标准检验方法检验完成时间：仪器名称：电热恒温培养箱仪器型号：PYX-DHS 仪器编号：1212仪器名称：生化培养箱仪器型号：205B 仪器编号：PQJK-48检测方法：1．菌落总数：空气：将采送检平皿翻转；餐具、毛巾、卧具：吸取采样稀释液（1：10）2ml分注入两块平皿内，每皿1ml如污染严重再做十倍递增稀释，然后把冷却至45℃左右的营养琼脂培基15ml倾入平皿中，置℃温箱培养小时，计算平皿上的菌落数。
计算方法：空气（CFU/皿）=平皿上菌落平均数。
餐具（CFUcm2）=平皿上菌落平均数×稀释倍数/50毛巾、卧具（cfu/25cm2）=平皿上菌落平均数/2×稀释倍数2．茶具、毛巾、卧具大肠菌群检验（纸片法）：将已采样的纸片置℃温箱培养小时，观察结果。
纸片保持紫色不变为大肠菌群阴性；若变黄或出现红色斑点或片状红晕均报告检出大肠菌群。
理发用具大肠菌群检验（发酵法）：吸取采样稀释液5ml加入乳糖胆盐发酵管中，置℃温箱培养小时后观察，如不产气，则报告大肠菌群未检出；如产酸产气者，且进行分离培养及证实试验确定，则报告大肠菌群阳性。
3．霉菌：吸取采样稀释液（1：10）2ml分别注入两块平皿内，每皿1ml，根据污染程度做2～3个稀释度，然后把冷却至45℃左右的孟加拉红培养基15ml倾入平皿中，置℃温箱培养天，计算平皿上的菌落数。
计算方法：毛巾、卧具（CFU/25cm2）=平皿上菌落平均数/2×稀释倍数。
计算方法：霉菌（CFU/50cm2）=平皿上菌落平均数×稀释倍数。
4．金黄色葡萄球菌：取采样液5ml,接种于50mlSCDLP培养液中，充分混匀，℃温箱培备注：阴性－阳性+环境温度：温度℃湿度 %检测者：复核者：审核者：第页共页备注：阴性－阳性+环境温度：温度℃湿度 %检测者：复核者：审核者：。
公共卫生现场监督监测
GB 9670—1996 商场（店）、书店卫生标准
01
GB 9671—1996 医院候诊室卫生标准
02
GB 9672—1996 公共交通等候室卫生标准
03
GB 9673—1996 公共交通工具卫生标准
04
GB 16153—1996 饭馆（餐厅）卫生标准
05
常用微生物检测项目
方法：GB/T 18204.3—2000
胡刷采样：胡刷应浸泡在50ml无菌生理盐水中充分漂洗（或用棉试子在胡刷内外均匀地各涂抹两次)。一次性胡刷不采样。
现场采样操作的质量控制
*
*
每次监测前应对现场监测人员进行工作培训，其内容包括监测目的、计划安排、监测技术具体指导和要求、记录填写以及工作责任感等，以确保工作质量。
现场采样前，必须仔细阅读仪器使用说明，熟悉仪器性能及适用范围，能正确使用监测仪器。
取样后，取样器被压入到检测器的样品腔内，破坏密封开始混合试剂。样品腔内含有缓冲液，它将ATP冲到含有试剂的垫子上。
1
反应在样品腔内发生，检测装置测定所产生的光的强度。读数以相对光单位显示在显示屏上。
2
详细操作请参考仪器使用说明书。
3
使用电源：4节AA充电电池，1.5V。充电电池失效时应更换新电池。也可用普通五号电池代替。
3
测量时间：文化娱乐场所、商场，营业前后30min,结束前30min的噪声A声级。其余场所营业后60min测定。
甲醛测定
*
*
甲醛是一种有害的空气污染物。长期接触会使人的眼睛、鼻腔、和上呼吸道产生刺激作用。
测定方法有化学比色法如酚试剂法、乙酰丙酮法等；仪器法有微分脉冲极谱法、高压液相色谱法、气相色谱法等。
02
大肠菌群测定方法
大肠菌群及检验一、大肠菌群介绍大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。
两个标准方法在检测程序上略有不同。
（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
大肠检验步骤很详细
大肠菌群检验步骤进入无菌室步骤1．进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。
5—1小时。
2．关灯后0•5小时后放可进入。
3．进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套实验步骤1，进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。
（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）2，准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3，直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）4，再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）5，再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）6，再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液7，更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）8，再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）9，再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
盐水空白，吸1ml 生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。
）10，把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）11，梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样12，如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。
（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。
所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）13，取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14，再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。
（方法见标准）15，只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。
餐饮具表面大肠菌群的检测方法
餐饮具表面大肠菌群的测试片检测方法
1 适用范围：适用于餐（饮）具、食品加工器具等表面卫生状况的测定。
2 采样
2.1 随机抽取消毒后准备使用的各类食具(碗、盘、杯等)，取样量可根据大、中、小不同饮食行业每次采样6件～10件，每件贴纸片两张，每张纸片面积25cm2(5cm╳5cm)。
用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后，立即贴于食具内侧表面，30s后取下，置于无菌塑料袋内。
2.2 筷子以5只为一件样品，用灭菌1mL吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口端（约5cm)抹试纸片，每件样品抹拭两张，放入无菌塑料袋内。
3 培养：将已采样的纸片置于37℃恒温培养箱中培养16 h～18h，取出观察结果。
4 结果判断：若纸片保持紫蓝色不变，或有红色斑点但斑点周围无黄晕者为大肠菌群阴性；在红色斑点周围有黄晕，或纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。
国家标准规定：在50cm2的纸片上（即两片纸片上），大肠菌群不得检出。
大肠菌群（17个）大肠菌群（满视野）
1、所采样品应具有代表性每批食品应随机抽取一定数量的样品，再生产过程中，再不同时间内各取少量样品予以混合。
固体或半固体的食品应从表层、中层和底层、中间和四周等不同部位取样。
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1、目的
依据GB/T18204.3—2000公共场所茶具微生物检验方法大肠菌群测定，熟练掌握此规程，保证检验结果的准确性。
2、适用范围
本标准规定了公共场所内公用茶具大肠菌群的测定方法。
3、责任
使操作者熟悉本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。
4、内容：
4.1定义：大肠菌群
指一群在37℃、24h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌痒的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价被检物的卫生质量。
4.2 仪器：
高压蒸汽灭菌器。
干热灭菌箱。
培养箱：36℃±1℃。
冰箱。
电炉。
天平。
灭菌平皿：直径9cm。
灭菌刻度吸管：1mL,10mL。
灭菌棉拭子。
灭菌剪刀。
PH计或精密PH试纸。
4.3 培养基和试剂：
4.3.1乳糖胆盐发酵培养液
4.3.1.1成分：
蛋白胨20g
猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g
乳糖10g
0.04%溴甲酚紫水溶液25ml
蒸馏水1000ml
4.3.1.2制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH值至7.4，加溴甲酚紫溶液，混匀，分装到带有倒管的试管中，每管10ml，在115℃高压灭菌15分钟。
（注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍）
4.3.2伊红美兰琼脂
4.3.2.1成分：
蛋白胨10g
乳糖10g
磷酸氢二钾2g
琼脂17g
2.0%伊红水溶液20ml
0.65%美蓝溶液10ml
蒸馏水1000ml
4.3.2.2制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调pH值至7.1，分装到烧瓶内。
121℃高压灭菌15分钟备用，临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美篮溶液，摇匀，倾注平板。
4.3.3乳糖发酵管
4.3.3.1成分：
蛋白胨20g
乳糖10g
0.04%溴甲酚紫水溶液25ml
蒸馏水1000ml
4.3.3.2制法：将蛋白胨和乳糖溶于水中，调pH值至7.4，加入指示剂，分装到带有倒管
的试管中，每管3ml，在115℃高压灭菌15分钟。
4.3.4革兰氏染色液
4.3.4.1结晶紫染色液：
结晶紫1g
95%乙醇20ml
1%草酸铵水溶液80ml
将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
4.3.4.2革兰氏碘液：
碘1g
碘化钾2g
蒸馏水300ml
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300ml。
4.3.4.3脱色液：95%乙醇
4.3.4.4沙黄复染液：
沙黄0.25g
95%乙醇10ml
蒸馏水90ml
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
4.3.5染色法
4.3.
5.1将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染色1分钟，水洗。
4.3.
5.2滴加革兰氏碘液，作用1分钟，水洗。
4.3.
5.3滴加95%乙醇脱色，约30秒，水洗。
4.3.
5.4滴加复染液，复染1分钟，水洗，待干，镜检。
4.3.6染色结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
4.3.7大肠菌群快速检验纸片
4.3.7.1质量要求：纸片必须符合食（饮）具用大肠菌群快速检验纸片质量标准。
4.3.7.2质量标准：每张纸片5c m×5cm，pH值7.0～7.4，包装无菌，生产厂家经卫生部门审核认可。
4.4 检验程序：
大肠菌群检验程序如下：
见GB/T 18204.3—2000中第5章。
4.5 操作步骤
4.5.1 采样方法
4.5.1.1 随机法：随机抽取清洗消毒后准备使用的茶具。
4.5.1.2 涂抹法：使用测定细菌总数时采集的样品，无需重采。
4.5.1.3 纸片法：用灭菌生理盐水湿润5cm×5cm大肠菌群快速测定纸片两张，分别贴在茶具内、外缘口唇接触处，约30s后取下，置于无菌塑料袋内。
4.5.2 检验方法
4.5.2.1 发酵法
4.5.2.1.1 用测定细菌总数剩余的检样，倒入双料乳糖胆盐发酵培养液中。
置36℃±1℃培养箱内培养24h。
4.5.2.1.2 观察是否产酸、产气，若有变黄和气体产生，该管推测是检验阳性。
如不产酸、产气则为大肠菌群阴性。
4.5.2.1.3 自推测性检验阳性管中取一接种环培养液，转种伊红美蓝琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实性试验。
4.5.2.1.4 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行染色镜检；
同时接种乳糖发酵管，置36℃±1℃培养24h。
4.5.3 纸片法
将已采样的纸片置36℃±1℃培养箱内培养16～18 h，观察结果。
4.6 结果报告
4.6.1发酵法
凡乳糖发酵管最终产酸、产气，革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告检出大肠菌群。
4.6.2纸片法
纸片保持紫蓝色不变，则报告为大肠菌群阴性；纸片变黄，并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕，则报告检出大肠菌群。