肝素检验细则
肝素钠效价检测方法
肝素钠效价检测方法试剂：羊血浆（冰冻保存）、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置）、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg肝素钠标准溶液。
4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品M mg，溶解并用0.9%生理盐水定容至100ml，再取V ml定容至25ml即得待检样品溶液，冷藏保存。
估计M及V的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时V只尽量小于10且取整数，从而计算出M值。
4.2.2.3检测方法：将恒温水域调制37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用。
取2组10只试管，分别加入标样110ul、120ul……200ul，然后每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入8%柠檬酸钠溶液20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml及过滤后的羊血浆1ml。
并将每只试管盖好管盖，倒转3—4次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域1h。
1h后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的1∕2凝固点及体积。
凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落。
②3∕4凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落。
③1∕2凝固：大约一半体积的溶液凝固。
④1∕4凝固：少量溶液凝固。
⑤0凝固：溶液悟凝固现象。
若相邻两管跳过1∕2凝固点则1∕2凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数。
)待检样品效价计算公式：4.2.2.4F=待检样品估计效价×标品1∕2凝固点微升数÷样品1∕2凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在30℃以下。
食品级肝素钠 标准
食品级肝素钠标准一、化学结构食品级肝素钠是一种糖胺聚糖，其基本结构由葡糖胺和艾杜糖醛酸组成，具有强烈的抗凝血活性。
其分子式为C15H23NO6Na2，分子量为360.37。
二、纯度和含量食品级肝素钠应具有较高的纯度和含量。
其纯度应不低于95%，即每100mg 样品中至少含有95mg肝素钠。
三、物理性质1.外观：食品级肝素钠应为白色或类白色粉末，无异味。
2.颗粒度：应通过400目筛，筛余物不大于1%。
3.水分：应小于5%。
4.溶解性：在pH值为7.0的磷酸盐缓冲液中，肝素钠应完全溶解。
四、微生物学标准食品级肝素钠应符合国家相关微生物学标准，不得检出大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌。
五、原料要求1.原料来源：食品级肝素钠应来源于猪、牛等大型哺乳动物的肝脏。
2.原料质量：原料应无腐败、霉变等现象，符合国家相关规定。
六、生产工艺1.提取：采用物理或化学方法从动物肝脏中提取肝素钠。
2.纯化：通过离子交换、凝胶过滤等方法去除杂质，提高肝素钠的纯度。
3.干燥：采用真空干燥等方法去除水分，保持产品质量稳定。
七、包装和储存1.包装：食品级肝素钠应采用无毒、密封性好的包装材料进行包装，标明品名、规格、生产日期、保质期等信息。
2.储存：储存环境应干燥、通风、阴凉，避免阳光直射和高温。
保质期为两年。
八、安全性评估食品级肝素钠应经过安全性评估，证明其对人体无毒害作用，不产生不良反应。
安全性评估可以包括急性毒性试验、亚慢性毒性试验、慢性毒性试验等。
此外，食品级肝素钠还应经过过敏原测试，证明其对过敏体质者无致敏作用。
肝素
低分子量肝素的活性/抗凝血活性的比值为1.5～4.0，而普通的肝素为1，保持了肝素的抗血栓作用而降低了 出血的危险。具有半衰期长，生物利用度高等优点，正广泛应用于血栓栓塞性疾病的预防及治疗，其有效性和安 全性均优于普通肝素，量效关系明确，可用固定剂量无需实验室监测调整剂量，应用方便。有实验证明:来自水蛭 素的Hiru-log多肽比肝素抗凝安全。低分子量肝素可以降低鼠移植肾脏免疫活性。方法:异体移植受体皮下注射 低分子量肝素2mg/（kg·d），每周5天，持续24周。结果:低分子量肝素治疗后移植肾单核吞噬细胞，T细胞的浸 润减少，主要组织相容性抗原M HC-Ⅱ的表达降低。实验结果表明:低分子量肝素可以降低鼠移植肾脏免疫活性从 而减轻移植肾脏慢性排斥反应。
外观与性状：白色或类白色结晶粉末 密度：2.18 g/cm3 沸点：644.9ºC at 760mmHg 闪 点 ： 3 4 3 . 8 ºC 折射率：1.711 稳定性：吸湿性，可以在室温下保存至少12个月的钠盐。 储存条件：保存在阴凉、干燥、密封和避光的容器中。远离火源。保护容器/钢瓶免受物理伤害。
肝素（肝素）是一种粘多糖硫酸酯，其相对分子量为6000～20 000。低分子肝素是普通肝素经过物理分离法， 化学裂解法与合成法等使标准肝素解聚而成。主要用于防治血栓形成和栓塞，治疗各种原因的弥散性血管内凝血 （DIC）以及其他体内外抗凝血，如心肌梗死及肺、脑、外周血管栓塞，体外循环等。
海关编码： WGK Germany：2 安全说明：S24/25 RTECS号：MI0850000
方法一、酶解-树脂法酶解取100kg新鲜肠黏膜(总固体5%-7%),加苯酚200ml (0.2%),如气温低时可不加。在 搅拌下加入绞碎胰0.5-1kg(0.5%-1%),用 300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液调节pH8.5-9,升温至40-45℃,保温23h。pH8,再加5kg粗食盐(5%)升温至90℃左右,用6mol/L HCl调节pH 6.5左右,停止搅拌,保温20min,以布袋过滤, 得酶解滤液。肠黏膜[胰浆,NaOH]→[pH8.5-9, 40-45℃,保温2-3h]肠黏膜液[NaCl, 6mol/L HCl]→[pH8; 90℃, pH6.5]滤液吸附、洗涤、洗脱取上述滤液冷至50℃以下,用6mol/L NaOH调节pH7,加入5kgD-254强碱性阴 离子交换树脂,搅拌5h左右,交换完毕,弃去液体,用自来水漂洗树脂至水清,用与树脂等体积的2mol/L NaCl,搅拌 洗涤15min,弃去洗涤液,再加2倍树脂体积的1.2mol/L NaCl洗涤2次。用约树脂体积一半的5mol/L NaCl洗脱1h, 收集洗脱液,然后用约树脂体积的1/3的3mol/L NaCl洗脱2次,合并洗脱液。滤液[D-254树脂, NaOH]→[pH7, 5h] 吸附[NaCl]→[2mol/L→1.2mol/L, →5mol/L, →3mol/L]洗脱液沉淀、脱水、干燥将洗脱液用滤纸浆助滤,过 滤1次,澄清滤液以体积计加入用活性炭处理过的0.9倍的95%乙醇,冷处沉淀8-12h。虹吸上清液弃去,按100kg黏 膜加300ml的比例向沉淀中补加蒸馏水,再加入4倍量95%乙醇,冷处放置6h,收集沉淀,用无水乙醇脱水1次,丙酮脱 水2次,置P2O5干燥器中真空干燥,得肝素钠粗品。洗脱液 →沉淀物[无水乙醇;丙酮]→[P2O5]肝素钠粗品脱色、 沉淀、干燥用20g/L(2%)氯化钠溶液配成100 g/L(10%)的肝素钠溶液,以40g/L(4%)高锰酸钾溶液进行氧化脱色, 每亿单位估计加入0.65mol高锰酸钾。先将药液调至pH8,预热80℃,在搅拌下加入高锰酸钾,保温2.5h,以滑石粉 作助滤剂,过滤,收集滤液。将滤液调节pH6.4,用0.
肝素实验报告
实验名称：肝素抗凝活性检测一、实验目的1. 了解肝素的抗凝机制；2. 掌握肝素抗凝活性的检测方法；3. 学会使用凝血酶时间法检测肝素抗凝活性。
二、实验原理肝素是一种硫酸化的粘多糖，具有强大的抗凝血作用。
肝素通过增强抗凝血酶III （ATIII）的活性，从而抑制凝血酶的生成，达到抗凝的目的。
肝素抗凝活性的检测通常采用凝血酶时间法，通过测量加入肝素后凝血酶生成所需的时间来评估肝素的抗凝活性。
三、实验材料1. 肝素钠盐；2. 硫酸钾溶液；3. 0.9%氯化钠溶液；4. 红细胞悬液；5. 凝血酶；6. 移液器；7. 计时器；8. 试管；9. 玻璃棒。
四、实验步骤1. 配制肝素溶液：取肝素钠盐适量，加入硫酸钾溶液溶解，制成1mg/ml的肝素溶液；2. 配制红细胞悬液：取0.9%氯化钠溶液，加入红细胞，配制成浓度为5%的红细胞悬液；3. 准备试管：取试管若干，每支试管加入0.5ml红细胞悬液；4. 加入肝素：向每支试管中加入不同浓度的肝素溶液，对照组加入等量的0.9%氯化钠溶液；5. 加入凝血酶：向每支试管中加入等量的凝血酶；6. 记录凝固时间：将试管放入37℃水浴中，观察并记录每支试管出现凝固现象所需的时间；7. 数据处理：计算肝素溶液的半数有效浓度（EC50）。
五、实验结果1. 肝素溶液的浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml；2. 各组试管的凝固时间分别为：10.5、9.2、7.8、6.5、5.2、4.0分钟；3. 肝素溶液的EC50为0.4mg/ml。
六、实验讨论1. 本实验结果表明，肝素具有明显的抗凝活性，其EC50为0.4mg/ml，说明肝素在较低浓度下即可发挥显著的抗凝作用；2. 肝素抗凝活性的检测方法简便、易行，适用于临床和科研工作；3. 在实际应用中，应严格控制肝素的用量，以免引起出血等不良反应。
七、实验总结本实验通过检测肝素抗凝活性，了解了肝素的抗凝机制，掌握了肝素抗凝活性的检测方法。
肝素检测细则
肝素盐检测细则一．效价F：（标准≥150IU/mg），环境温度要求20~30℃。
F=标品微升数*预估效价/样品微升数1.1试剂：1羊血浆（冷冻保存，使用时室温解冻，过滤）28IU/mg肝素钠标准品30.9%生理羊水：9g氯化钠（精确至0.01g）溶解于100ml去离子水中，并定容至1000ml，待用。
40.25%氯化钙溶液：用0.9%生理盐水配制，取1.25gCaCl2（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至500ml，待用。
58%柠檬酸钠溶液：用0.9%生理盐水配制，取20g柠檬酸钠（精确至0.0001g）溶于100ml生理盐水中，溶解并定容至250ml，待用。
1.2测定8%柠檬酸钠溶液用量：取3支试管分1、2、3，分别加入标准品溶液110ul，再依次加入8%柠檬酸钠溶液10ul、20ul、30ul，→分别加入0.25%氯化钙溶液0.8ml，加入过滤好的羊血浆1ml，摇匀，置于37℃水浴中10min，观察凝固情况，取半凝固管的柠檬酸钠量xul作为后续的加量标准。
2.1待测品配制：M=20/样品预估效价（g）称取Mg待测样品（精确至0.0001g），溶解于生理盐水中，并定容至100ml，取溶液2ml溶液溶解定容至50ml，取5ml样品溶液于试管中剩余样液冷藏保存。
2.2测定：标准管：取10支试管分别加标品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
待测管：取10支试管分别加样品溶液100ul、110ul、120ul、……190ul，加入8%柠檬酸钠溶液xul，0.25%氯化钙溶液0.8ml，过滤好的羊血浆1ml，37°C水浴1h，记录半凝固点。
二．PH值精确称取0.4g样品（精确至0.01g）溶于40ml去离子水中，测定其PH值，记录室温，湿度。
肝素血浆检验报告
肝素血浆检验报告一、概述肝素血浆检验是一种常用的临床检验方法，用于评估患者的凝血功能状态。
本报告旨在介绍肝素血浆检验的原理、指标解读以及临床意义。
二、原理肝素血浆检验是基于肝素的溶血试验原理。
肝素是一种天然的抗凝剂，可通过抑制凝血酶的活性来阻止血液凝结。
在肝素血浆检验中，加入一定量的肝素到患者的血浆中，观察血浆是否出现溶血现象来评估肝素的抗凝效果。
三、指标解读1. 检测范围肝素血浆检验是评估肝素抗凝效果的一种方法，用于检测肝素在血浆中的抗凝浓度。
根据血浆中肝素的浓度，可以判断患者的凝血功能状态。
2. 正常范围正常情况下，血浆中的肝素浓度应在一定范围内，具体数值因实验方法和设备而定。
一般来说，肝素浓度在0.3-0.7 IU/mL之间被认为是正常的。
3. 异常结果及其可能原因肝素血浆检验的异常结果可能与以下因素有关：•肝素用量不足：如果患者使用的肝素剂量低于推荐剂量，肝素浓度可能低于正常范围。
•肝素用量过量：过量使用肝素可能导致肝素浓度超过正常范围。
•肝素滥用：乱用肝素或长时间使用肝素，可能导致肝素浓度异常。
•肝素代谢异常：某些疾病状态或药物使用可能影响肝素的正常代谢，导致肝素浓度异常。
4. 应用价值肝素血浆检验是评估患者凝血功能状态和肝素抗凝效果的重要方法。
通过检测血浆中的肝素浓度，可以帮助医生调整肝素剂量，确保肝素的抗凝效果达到理想水平。
对于需要长期使用肝素的患者，定期进行肝素血浆检验可以帮助监测肝素的浓度，及时调整治疗方案。
四、结论肝素血浆检验是一种简单有效的评估肝素抗凝效果的方法。
通过检测血浆中的肝素浓度，可以帮助医生了解患者的凝血功能状态，调整肝素剂量，确保肝素的抗凝效果达到理想水平。
对于长期使用肝素的患者，定期进行肝素血浆检验非常重要，以监测肝素的浓度变化，及时调整治疗方案。
肝素-化学验证报告
一次性使用人体静脉血样采集容器中添加剂浓度的测定方法第3部分:肝素验证报告单位名称：山东省医疗器械产品质量检验中心（盖章）日期：2014.9.一、概述一次性使用人体静脉血样采集容器（简称：采血管）与一次性使用无菌静脉血样采集针配套使用，采集静脉血样进行临床检验。
含有不同添加剂或附加物的采血管用途有所不同，肝素广泛在肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。
肝素可加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用。
肝素是红细胞渗透性试验理想的抗凝剂。
目前测定肝素效价的方法有生物测定法和化学分光光度法，多用于测定肝素钠注射液，本标准采用亚甲蓝分光光度法测定采血管中肝素的效价，利用肝素与亚甲蓝溶液发生褪色反应，且吸光度的降低与溶液中肝素的浓度呈正比来测定肝素的效价。
二、验证方案方法学验证、肝素钠和肝素锂的等同性实验。
三、样品描述本次标准验证样品信息见表1。
表1 标准验证样品信息四、验证结果（数据、图、表）1、方法学验证1.1吸收波长的选择及亚甲蓝溶液浓度的确定配制不同浓度的亚甲蓝溶液，在200-800nm范围内进行扫描，最大吸收波长为664nm。
当溶液中亚甲蓝最终浓度为4mg/L时吸光度值约为0.8比较合适。
1.2反应时间及稳定性考察精密量取10 IU/mL 的肝素钠标准溶液，置25mL容量瓶中，加入0.1g/L 亚甲蓝溶液1mL，加水稀释至刻度，摇匀，立即置可见- 紫外分光光度计中进行时间扫描2h，记录图谱，结果表明反应在1h 后稳定，2h内基本无变化。
因而选择反应时间为1h。
1.3线性范围实验配制浓度范围0.05-0.25IU/mL的肝素钠系列标准溶液，在664nm 处，以水为参比，测定每种浓度溶液的吸光度，以浓度C(IU/mL) 为横坐标，吸光度 A 为纵坐标，计算回归方程y = -1.529 x + 0.844，相关系数r = 0.999，结果表明肝素钠浓度在0~0.25IU/mL 范围内，吸光度与浓度呈正比，且相关性良好。
肝素钠含量检测操作规程
肝素钠含量检测操作规程肝素钠含量检验操作规程1范围1.1适用于肝素钠生产车间过程控制中各控制点肝素钠含量的检测。
2定义2.1肝素钠化验指对肝素效价的检测过程。
3参考《美国药典》4职责4.1相应职责由车间化验员承担。
5操作程序5.1仪器、用具与试剂5.1.1恒温水浴锅5.1.2试管架5.1.310ml具塞试管5.1.4100ul或250ul微量进样器5.1.510ml刻度吸管5.1.62ml刻度吸管5.1.71ml可调式加液器5.1.820ml带塞样瓶5.1.90.9%氯化钠溶液5.1.100.25%氯化钙溶液5.1.11经过标定的绵羊血浆5.1.128.0u/ml肝素钠标准溶液5.1.13计时器5.2操作步骤5.2.1取样5.2.1.1根据车间生产实际，一般酶解液、洗涤液、沉淀废液取样量为8±2ml，吸附废液为20±2ml。
特殊情况可适当多取，取样要做到均匀有代表性。
5.2.2样品检测5.2.2.1根据实际情况将试管摆放在试管架上。
5.2.2.2用100ul微量进样器取8.0u/ml肝素标准溶液，加标准品之前，用标准液冲洗进样器两次，根据标定的血浆灵敏度n，分别按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入一排5支10ml具塞试管中，作为标准溶液的浓度梯度。
5.2.2.3.1酶解液、洗涤液、沉淀废液进样：用同一个进样器取供试液，取之前先用供试液将进样器冲洗三次，然后再按n-20ul、n-10ul、n ul、n+10ul、n+20ul的量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
5.2.2.3.2吸附废液进样：用2ml刻度吸管取供试液，取之前先用供试液将刻度吸管冲洗三次，然后再按600ul、800ul、1000ul、1200ul、1400ul进样量加入另一排5支10ml具塞试管中，作为供试液浓度梯度。
加样时要非常精确，不能有气泡产生；这一步是本试验的关键步骤。
1208肝素生物测定法
1208肝素生物测定法本法系用于肝素类产品的效价测定。
测定方法分为抗Ⅱa因子/抗Xa因子效价测定法和凝血时间测定法，凝血时间测定法又分为兔全血法、血浆复钙法、APTT法。
抗Ⅱa因子/抗Xa因子效价测定法本法系通过微量显色法比较肝素标准品与供试品抗Ⅱa因子和抗Xa因子的活性，以测定供试品的效价。
抗Ⅱa 因子测定法试剂（1）三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液（pH8.4) 取三羟甲基氨基甲烷6.06g，氯化钠10. 23g，乙二胺四醋酸二钠2.8g，聚乙二醇6000 l.0g，加水800ml使溶解，用盐酸调节pH值至8.4，用水稀释至1000ml。
（2）抗凝血酶溶液取抗凝血酶（ATⅢ)，加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液（pH8.4)溶解并稀释制成每lml中含抗凝血酶0.25IU的溶液。
（3）凝血酶溶液取凝血酶（FⅡa )，加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液（pH8.4)溶解并稀释制成每lml中约含5IU的溶液，调整浓度使其在以三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液（pH8.4)代替肝素作为空白溶液（B1、B2）的抗Ⅱa因子实验中，在405nm波长处的吸光度值在0.8〜1.0。
（4）发色底物溶液取发色底物S-2238(或其他FⅡa特异性发色底物），加水制成0.003mol/L的溶液，临用前用水稀释至0.625mmol/L。
标准品溶液与稀释液的制备试验当日，取肝素标准品，复溶后制成标准品溶液。
取标准品溶液适量，加三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液（pH8.4)分别稀释制成4 个不同浓度的溶液。
该浓度应在log剂量-反应的线性范围内，一般为每1ml中含0.0085〜0.035IU，相邻两浓度之比值（r）应相同。
供试品溶液与稀释液的制备除另有规定外，按供试品的标示量或估计效价（A T），用三羟甲基氨基甲烷-聚乙二醇6000缓冲液（pH8.4)，照标准品溶液与稀释液的制备法制成4 个不同浓度的溶液，相邻两浓度之比值（r）应与标准品相等，供试品与标准品各剂量组的反应值应相近。
肝素化的标准
肝素化的标准
肝素化的标准是指患者在接受肝素治疗时需要满足一定的临床指标和
药物监测要求。
具体标准如下：
1. 临床指标标准：
a. 血栓症状或体征：患者有相关的静脉血栓栓塞症状或体征，如
深静脉血栓、肺栓塞等。
b. 高血凝状态：患者存在高凝血状态，如抗磷脂抗体阳性、特发
性或继发性抗凝系统抗体阳性等。
c. 心脏瓣膜病：患者存在二尖瓣狭窄、人工心脏瓣膜等需要抗凝
治疗的心脏瓣膜病变。
d. 急性冠脉综合征：患者出现急性冠脉综合征（如不稳定型心绞痛、非ST段抬高型心肌梗死）需要抗凝治疗。
e. 血栓性血小板减少性紫癜：患者出现血栓性血小板减少性紫癜，需要抗凝治疗。
2. 药物监测要求：
a. 部分凝血活酶时间（APTT）：在肝素治疗期间，定期检测患者
的APTT，确保在治疗范围内。
b. 抗Xa活性：尽可能监测肝素的抗Xa活性，以评估肝素的治疗
效果和调整剂量。
c. 临床评估：密切观察患者的临床症状和体征，及时评估治疗效
果和副作用。
以上是肝素化的标准，确保患者在接受肝素治疗时的安全性和有效性。
具体的治疗方案应根据患者的病情和医生的建议进行制定。
肝素钠简介检测及生产精制工艺流程
谢谢大家！
【性状】 本品为白色或类白色的粉末；有引 湿性。 本品在水中易溶。 【比旋度】 取本品，精密称定，加水溶解并 稀释制成每1ml 中含40mg的溶液，依 法测定 （附录Ⅵ E），比旋度应不小于＋35°。 【鉴别】 (1) 取本品与肝素标准品，分别加水 制成每1ml 中含2.5mg 的溶液，照 电泳法（附 录Ⅴ F第三法）试验，供试品和标准品所显斑 点的迁移距离之比应为0.9 ～1.1 。 (2) 本品的 水溶液显钠盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。 【检查】 酸碱度 取本品0.10g ，加水10ml溶解 后，依法测定（附录Ⅵ H），pH 值应为5.0 ～ 7.5 。
本品系自猪的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡 萄糖的钠盐，属粘多糖类物质，通过激活 抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)而发挥抗凝作用。它对 凝血过程的三个阶段均有影响，在体内外 均有抗凝作用，可延长凝血时间、凝血酶 原时间和凝血酶时间。口服不吸收，皮下、 肌肉或静脉给药均吸收良好。 三、肝素钠检测 （药典版） 拼音名：Gansuna 英文名：Heparin Sodium 本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨 基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质，具有 延长血凝时间的作用。按干燥品计算，每 1mg 的效价不得少于150 单位。
五、肝素钠精制新工艺 本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素， 在该过程中采用低温离心技术,解决在除 酸性蛋白过程中，粗品肝素钠中残留杂 蛋白在纯化过程中很难被除去的缺点。 在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂 蛋白进行酶解,再结合一次氧化除杂过程, 从而提高精品肝素钠的效价和效价回收 率。
1、工艺流程 2、溶解 称取适量肝素钠粗品加质量分数3%左右NaCI 溶液进行溶解。50℃水浴加热，用NaOH溶液 调pH至8.0静置2小时，过滤除不溶性杂质。 3、酶解法除蛋白 肝素在动物体内是以肝素-蛋白质复合物的形 式存在，通过酶解或盐解去除复合物的蛋白 质成分，游离肝素。但在实际生产过程中， 复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的， 粗品中总存在数量不等的蛋白质。粗品肝素 钠必须经过精制，可以进一步去除粗品中残 存的结合蛋白质，不仅因杂蛋白的去除而提 高效价，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到释 放而获得较高活性。
肝素生物测定法
（1）兔全血法
■[修订]
取管径均匀（0.8cm×3.8cm 或 1.0cm×7.5cm） 、清洁
干燥的小试管若干支， 每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液 0.1ml,每种浓 度不得少于 3 管，各浓度的试管支数相等。取刚抽出的兔血适量，分别注入小试 管内，每管 0.9ml,立即混匀,避免产生气泡，并开始计算时间。将小试管置 37℃ ±0.5℃恒温水浴中，从动物采血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过 3 分钟，注意观察并记录各管的凝结时间。 （2）血浆复钙法■[修订] 取上述规格的小试管若干支，分别加入血浆一定量， 置 37℃±0.5℃恒温水浴中预热 5～10 分钟后，依次每管加入一种浓度的标准品 或供试品稀释液及 1％氯化钙溶液， 每种浓度不得少于 3 管,各浓度的试管支数相 等，血浆、肝素稀释液和氯化钙溶液的加入量分别为 0.5ml、0.4ml 和 0.1ml， 或 0.8ml、0.1ml 和 0.1ml，加入氯化钙溶液后，立即混匀，避免产生气泡，并 开始计算时间，注意观察并记录各管凝结时间。
பைடு நூலகம்
（3）APTT 法
取血液凝固分析仪样品杯若干，每管依次加入血浆 50μl、
一种浓度的标准品或供试品稀释液 50μl、APTT 试剂 50μl，混匀，应避免产生 气泡。37℃±0.5℃预温 180 秒后，每管再加入 CaCl2 试剂 50μl，然后立即用血 液凝固分析仪测定含药血浆的凝结时间，即活化部分凝血活酶时间（APTT） 。标 准品或供试品稀释液每个浓度的测定次数不得少于 3 次， 各浓度的测定次数应相 同。测定时，血浆、标准品或供试品稀释液、APTT 试剂、CaCl2 试剂的加入比例 和预温时间可根据仪器或试剂的说明书适当调整。 测定顺序以保证标准品和供试 品测定的平行性为原则， 应尽量保证相同浓度的标准品和供试品稀释液的测定时 间接近。■[增订] 将上述方法测得的■[修订]]凝结时间换算成对数，照生物检定统计法（附录 中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。 测定法（1）的可信限率（ＦＬ％）不得大于 10％。 测定法（2）的可信限率（ＦＬ％）不得大于 5％。 ）
肝素的提取及鉴定
肝素的提取及鉴定
肝素的提取也称为肝素的分离纯化，一般采用生物制药技术对肝素进行提取和分离。
具体操作流程如下：
1. 将猪或牛的肺或肉类均匀切成小块，加入盐水搅拌均匀。
2. 用醋酸钠缓冲液调节pH值，使pH值保持在5.0—5.5之间。
3. 加入蛋白酶及胰酶发酵消化，分离出肝素。
4. 用甲醇或乙醇进行沉淀，收集沉淀物并冷冻干燥。
5. 使用薄层色谱或高效液相色谱对肝素进行分离纯化，得到纯的肝素。
肝素的鉴定：
1. 纯度检测：使用高效液相色谱检测肝素的纯度。
2. 分子量检测：使用凝胶过滤色谱或梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳检测肝素的分子量。
3. 活性检测：使用凝血酶原时间等生化实验检测肝素的活性。
4. 结构分析：通过核磁共振、质谱等手段对肝素的结构进行分析。
总之，在提取肝素时要注意操作规范，确保肝素质量达到要求，从而实现对肝素的鉴定。
肝素钠注射液检验操作规程_概述说明以及解释
肝素钠注射液检验操作规程概述说明以及解释1. 引言：1.1 概述肝素钠注射液是一种常用的抗凝血剂，广泛应用于临床医学中。
其作用是通过抑制凝血过程中的凝血酶形成，防止血栓的生成和扩展。
为了确保肝素钠注射液的质量和安全性，需要对其进行检验操作规程的制定与执行。
1.2 文章结构本文主要分为引言、肝素钠注射液检验操作规程的重要性、内容与要点、执行中常见问题及解决方案以及结论五个部分。
通过这些内容的阐述，旨在全面介绍肝素钠注射液检验操作规程，并提出相应建议和措施。
1.3 目的本文旨在概述肝素钠注射液检验操作规程并解释其重要性。
通过明确检验操作规程的意义与价值，强调制定该规程所带来的实际效益。
同时，也将介绍操作规程所包含的内容与要点，以及执行过程中可能遇到的问题和对应解决方案。
最后，总结表达对该操作规程的完善与推广建议，为相关领域的从业人员提供参考。
2. 肝素钠注射液检验操作规程的重要性：2.1 肝素钠注射液的用途和作用：肝素钠注射液是一种常用的抗凝血药物，通常用于预防和治疗血栓性疾病，如深静脉血栓、肺栓塞等。
它通过抑制凝血酶的活性，降低凝血过程中纤溶酶原被激活并导致纤维蛋白降解产物析出，从而发挥抗凝作用。
由于肝素钠注射液的应用广泛，其质量和安全性至关重要。
2.2 检验操作规程的意义和价值：肝素钠注射液检验操作规程是保证产品质量和使用安全的重要保障。
通过制定标准化的操作规程，可以确保检验过程的严谨性、可复现性和快速高效性。
合理的操作规程能够有效识别潜在问题或错误，并及时采取纠正措施，提高产品质量稳定性及使用安全。
2.3 为什么需要制定肝素钠注射液检验操作规程：制定肝素钠注射液检验操作规程的主要目的是确保产品质量的一致性和稳定性，以及使用安全性。
这样可以预防低质量肝素钠注射液的使用和销售，并减少由于药物缺陷引起的不良事件和患者风险。
操作规程还可以指导操作人员正确进行样品采集、保存、处理和测试等环节，降低人为因素对结果的影响。
依诺肝素质量标准
依诺肝素质量标准1. 产品描述与定义依诺肝素是一种低分子量肝素，主要应用于肺血栓栓塞和静脉血栓栓塞等疾病的预防和治疗。
依诺肝素以注射剂的形式供应。
2. 性状和外观依诺肝素应呈无色或几乎无色、透明的溶液，不应有可见的异物。
3. 标准要求3.1 粒度依诺肝素注射剂的粒径分布应符合以下要求：- 95%的粒径应小于等于10微米；- 99%的粒径应小于等于15微米。
3.2 透明度依诺肝素注射剂的透明度应符合以下要求：- 使用2英寸玻璃比色皿检测，不得有可见沉淀或浑浊，光透过度应达到98%以上。
3.3 酸碱度（pH）依诺肝素注射剂的酸碱度应符合以下要求：- pH值应在5.0至7.0之间。
3.4 游离钠含量依诺肝素注射剂的游离钠含量应符合以下要求：- 游离钠含量不得超过每毫升15微克。
3.5 杂质依诺肝素注射剂中杂质含量应符合以下要求：- 重金属杂质（如铅、砷、铬等）含量不得超过每毫升5微克；- 其他有害杂质含量不得超过每毫升25微克。
3.6 活性成分含量依诺肝素注射剂的活性成分含量应符合以下要求：- 每毫升依诺肝素注射剂应含有不少于90国际单位的活性成分。
4. 性能验证与测试方法4.1 粒径测试方法：采用光散射法测定依诺肝素颗粒的粒径大小。
4.2 透明度测试方法：使用2英寸玻璃比色皿，对依诺肝素溶液的透明度进行测定。
4.3 酸碱度测试方法：采用电位法测定依诺肝素注射剂的pH值。
4.4 游离钠含量测试方法：采用离子选择电极法测定依诺肝素注射剂中游离钠的含量。
4.5 杂质测试方法：采用相关的色谱法或其他适用的分析方法对依诺肝素注射剂中的重金属和其他有害杂质进行测定。
4.6 活性成分含量测试方法：采用适用的生化法或其他准确的分析方法测定依诺肝素注射剂中的活性成分含量。
5. 包装与储存依诺肝素注射剂应采用符合相关药品包装标准的密封包装，并在阴凉干燥的条件下储存，远离光线和热源。
注：以上依诺肝素质量标准仅供参考，具体标准应根据实际情况和相关法规进行制定。
肝素检验细则
肝素钠检验项目附细则一、效价测定操作步骤：1. 标准品制备：精密称量肝素钠标准品数量(mg)×197u/mg=总单位数×0.93=美国羊血浆法总单位数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际加入的蒸馏水毫升数。
精确加入蒸馏水。
分装封口备用。
2. 效价测定：2.1 样品的制备：精确称量待测肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。
吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。
2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。
充分混匀后置37℃水浴锅中孵育1小时。
结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品21V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb二、比旋度测定当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光的振动平面向左或向右旋转。
偏振光旋转的度数称为旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。
偏振光透过长1dm ，且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度下，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。
物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：1．仪器旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。
肝素抗Xa检测简介
肝素抗Xa 检测简介用途肝素是一种发色底物法测定血浆中肝素活性的方法，用于肝素治疗的监测。
概述和解释肝素通过与抗凝血酶III 的结合，能够加速凝血因子Xa 和凝血酶的灭活。
未组分和低分子量肝素制剂广泛应用于抗凝治疗。
各类病人之间肝素治疗的剂量存在很多影响因素。
采用肝素检测试剂能够同时监测低分子量和普通肝素制剂的疗效。
方法学原理在试验孵育期间，A TIII 能灭活因子Xa 。
肝素起催化反应的作用。
硫酸葡萄糖（DS ）释放连接于干扰因子的肝素，使之参与反应。
在孵育后，FXa 残余量通过动力学方法采用发色底物在405nm 测定吸光度增加而得出。
游离结合结合＋肝素＋肝素DS DS →[]残留肝素剩余＋＋标本FXa ATIII -FXa ATIII FXa ⎯⎯⎯→⎯ 三肽＋染料发色底物残留⎯⎯⎯→⎯FXa警告和注意事项1. 适用于体外诊断。
2. 含有叠氮钠的试剂应小心处理：勿吞服或接触皮肤或粘膜！叠氮钠接触重金属，如铜或铅时会发生爆炸。
3. 因子Xa 试剂或A TIII 试剂中每位供血者必须检测HBsAg 、抗HCV 、抗HIV1和抗HIV2。
仅阴性结果才能用于制造。
在产品制造过程中，人源性材料加热到60℃10小时，以灭活病毒。
但是，由于无法证明所有的感染源都不存在，所以源自人血液的物质应认真处理，按照生物危害物质处理。
标本为了分离血浆，小心混合1份枸橼酸钠溶液（0.109mol/L ，如3.2％）和9份静脉全血，避免产生泡沫。
立即离心，1500×g ，至少10分钟标本稳定性：-20℃ 1月15～25℃ 8小时贮存在-20℃血浆必须在37℃10分钟内溶解，在8小时内完成检测。
操作手工法：测试杯：1cm 厚度波长：405nm因子Xa试剂，底物试剂和塑料测试杯/试管应预温到37℃，A TIII试剂放置室温（15～25℃）。
手工2步法（半微量试验）评价试验结果从参考曲线上获得，在试验前必须建立参考曲线，采用治疗用素制剂和同一分析方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
肝素钠检验项目附细则
一、效价测定
操作步骤：
1. 标准品制备：精密称量肝素钠标
准品数量(mg)×197u/mg=总单位
数×0.93=美国羊血浆法总单位
数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际
加入的蒸馏水毫升数。
精确加入
蒸馏水。
分装封口备用。
2. 效价测定：
2.1 样品的制备：精确称量待测
肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。
吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。
2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。
充分混匀后置37℃水
浴锅中孵育1小时。
结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品2
1V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：
所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb
二、比旋度测定
当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对
称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使
偏振光的振动平面向左或向右旋转。
偏振光旋转的度数称为
旋光度。
旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时
针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆
时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。
偏振光透过长1dm ，
且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度
下，测得的旋光度称为比旋度。
比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。
物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。
旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：
1．仪器
旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。
并经过检定的旋光计。
旋光计的检定：可用标准石英旋光管进行校正，读数误差应符合规定。
2．测定方法
将测定管用供试液体或固体物质的溶液（取固体供试品，按各药品项下的方法制成40mg/ml）冲洗数次，缓缓注入供试液或溶液适量（注意勿使发生气泡），置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。
用同法读取旋光度3次，取3次的平均数，计算供试品的比旋度或浓度。
3．注意事项
（1）每次测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再校正l次，以确定在测定时零点有无变动。
如第2次校正时发现零点有变动，则应重新测定旋光度。
（2）配制溶液及测定时，均应调节温度至20℃±0.5℃（或各品种项下规定的温度）。
（3）供试物质的溶液应充分溶解，供试液应澄清。
（4）物质的比旋度与测定光源、测定波长、溶剂、浓度和温度等因素有关。
因此，表示物质的比旋度时应注明测定条件。
结果要求：不小于+35°。
所需主要仪器及价格：旋光仪单价：2000rmb
三、电泳实验
操作步骤
第三法琼脂糖凝胶电泳法
1仪器装置电泳室及直流电源同纸电冰。
2试剂(l)醋酸-锂盐缓冲液(ph3.0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氧氧化锂调节pH值至3 0，再加水至1000ml。
(2)甲苯胺蓝溶液取甲苯胺蓝0.1g．加水100ml使溶解。
3操作法(1)制胶取琼脂糖约0.2g，加水l0ml，置水浴中加热使溶胀完全．加温热的醋酸锂盐缓冲液(pH3.0)l0ml，混匀，趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻板上．厚度约3mm静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层．即得。
(2)对照品溶液及供试品溶液的制备照备品种项下规定配制。
(3)样与电泳在电泳槽内加入醋酸锂盐缓冲液(pH3.0)。
将凝胶板置于电泳槽架上，经滤纸桥浸人缓冲液。
于凝胶板负极端分别点样1ul，立即接通电源。
在电压梯度约30v/cm、电流强度1～2mA/cm的条件下，电泳约20分钟，关闭电源。
(4)染色与脱色取下凝胶板，用甲苯胺蓝溶液染色，用水洗去多余的染色藏至背景无色为止。