肝素检验细则

肝素钠检验项目附细则

一、效价测定

操作步骤：

1. 标准品制备：精密称量肝素钠标

准品数量(mg)×197u/mg=总单位

数×0.93=美国羊血浆法总单位

数（uspu ）÷8 uspu/ml=需要实际

加入的蒸馏水毫升数。精确加入

蒸馏水。分装封口备用。

2. 效价测定：

2.1 样品的制备：精确称量待测

肝素粗品40~50mg 放入容量瓶中，再向其中加入1mg:1ml 比例的生理盐水，至样品全部溶解。吸取0.5ml 上述溶液至西林瓶中，再按照公式：估效价÷16-0.5计算出生理盐水量，加入西林瓶中。

2.2 样品的测定：依据估计血浆标准凝固点±10ul 、±20ul 分别向试管中加入标准品和待测样品，再向各试管中加入1ml 血浆和0.8ml 的氯化钙生理盐水。充分混匀后置37℃水

浴锅中孵育1小时。结果按照公式计算：实际效价=凝固点样品2

1V 凝固点21V 标准品 ×估效价 结果要求：

所需主要仪器及价格：电子天平 单价：1000（物理）~2000（电子）rmb 水浴锅 单价：800rmb

二、比旋度测定

当平面偏振光通过含有某些光学活性物质（如具有不对

称碳原子的化合物）的液体或溶液时，能引起旋光现象，使

偏振光的振动平面向左或向右旋转。偏振光旋转的度数称为

旋光度。旋光度有右旋、左旋之分，偏振光向右旋转（顺时

针方向）称为“右旋”，用符号“+”表示；偏振光向左旋转（逆

时针方向）称为“左旋”，用符号“-”表示。偏振光透过长1dm ，

且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，在一定波长与温度

下，测得的旋光度称为比旋度。比旋度是旋光物质的重要物理常数，可以用来区别药物或检查药物的纯杂程度，也可用来测定含量。

物质的旋光度不仅与其化学结构有关，而且还和测定时溶液的浓度、光路长度以及测定时的温度和偏振光的波长有关。

旋光度测定法的测定方法主要包括以下几个方面：

1．仪器

旋光计：《中国药典》规定，应使用读数至0.01。并经过检定的旋光计。

旋光计的检定：可用标准石英旋光管进行校正，读数误差应符合规定。

2．测定方法

将测定管用供试液体或固体物质的溶液（取固体供试品，按各药品项下的方法制成40mg/ml）冲洗数次，缓缓注入供试液或溶液适量（注意勿使发生气泡），置于旋光计内检测读数，即得供试液的旋光度。用同法读取旋光度3次，取3次的平均数，计算供试品的比旋度或浓度。

3．注意事项

（1）每次测定前应以溶剂作空白校正，测定后，再校正l次，以确定在测定时零点有无变动。如第2次校正时发现零点有变动，则应重新测定旋光度。

（2）配制溶液及测定时，均应调节温度至20℃±0.5℃（或各品种项下规定的温度）。

（3）供试物质的溶液应充分溶解，供试液应澄清。

（4）物质的比旋度与测定光源、测定波长、溶剂、浓度和温度等因素有关。因此，表示物质的比旋度时应注明测定条件。

结果要求：不小于+35°。

所需主要仪器及价格：旋光仪单价：2000rmb

三、电泳实验

操作步骤

第三法琼脂糖凝胶电泳法

1仪器装置电泳室及直流电源同纸电冰。

2试剂(l)醋酸-锂盐缓冲液(ph3.0) 取冰醋酸50ml，加水800ml混合后，用氧氧化锂调节pH值至3 0，再加水至1000ml。

(2)甲苯胺蓝溶液取甲苯胺蓝0.1g．加水100ml使溶解。

3操作法(1)制胶取琼脂糖约0.2g，加水l0ml，置水浴中加热使溶胀完全．加温热的醋酸锂盐缓冲液(pH3.0)l0ml，混匀，趁热将胶液涂布于大小适宜(2.5cm×7.5cm或4cm×9cm)的玻板上．厚度约3mm静置，待凝胶结成无气泡的均匀薄层．即得。

(2)对照品溶液及供试品溶液的制备照备品种项下规定配制。

(3)样与电泳在电泳槽内加入醋酸锂盐缓冲液(pH3.0)。将凝胶板置于电泳槽架上，经滤纸桥浸人缓冲液。于凝胶板负极端分别点样1ul，立即接通电源。在电压梯度约30v/cm、电流强度1～2mA/cm的条件下，电泳约20分钟，关闭电源。

(4)染色与脱色取下凝胶板，用甲苯胺蓝溶液染色，用水洗去多余的染色藏至背景无色为止。