大肠杆菌的分离鉴定
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程
分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程鉴定粪便中的大肠杆菌是一项十分重要的实验，它可以帮助我们评估肠道健康状况，检测是否存在致病性大肠杆菌的感染，对于疾病的防控具有重要意义。
下面，我将详细介绍一下分离鉴定粪便中的大肠杆菌的实验流程。
我们需要准备实验所需的材料和试剂。
材料包括培养皿、接种环、培养基等，而试剂包括洗涤剂、生理盐水、大肠杆菌特异性培养基等。
在实验开始前，我们需要确保实验器具和培养基无菌，并且消毒实验台面和使用的工具，以避免外界微生物的干扰。
我们需要进行样品的处理和制备。
取一定量的粪便样品，并将其进行振荡或均匀搅拌，使其中的微生物均匀分布。
我们将取一小部分样品进行稀释，目的是为了在培养皿上获得适当的菌落数，方便观察和鉴定。
接着，我们把经稀释处理后的样品加入到培养基中，使细菌能够在适宜的温度下进行培养。
大肠杆菌通常在37摄氏度下培养，因此我们需要将培养皿放入恒温箱中，在一定的时间后进行观察。
在培养的过程中，我们需要定期检查培养皿的状态，观察是否有典型的大肠杆菌形态的菌落出现。
除了观察菌落形态之外，我们还可以利用生化试剂进行鉴定。
通过添加特定的生化试剂，如甲酚红葡萄糖琼脂培养基、大肠杆菌的IMViC生化试剂等，可以帮助我们鉴定大肠杆菌。
这些试剂可以根据大肠杆菌的代谢特点，进行色素反应或气体产生反应，从而帮助我们确认目标菌株的身份。
我们需要进行进一步确认。
在鉴定出大肠杆菌后，我们可以利用进化树分析等生物信息学方法，对其遗传特征进行分析，以确保其准确性。
我们还可以进行致病性检测，通过PCR等分子生物学技术检测目标菌株是否携带致病因子，从而评估其致病性。
通过以上的实验流程，我们可以较为准确地分离鉴定粪便中的大肠杆菌。
这项实验的结果将为我们提供重要的信息，有助于评估肠道健康状况，及时发现致病性大肠杆菌的感染，为疾病的预防和控制提供重要依据。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
分离大肠杆菌的方法
分离大肠杆菌的方法大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，具有广泛的应用价值。
在科学研究和实际应用中，需要将大肠杆菌与其他细菌分离开来，以便进行进一步的研究和利用。
下面将介绍几种常用的分离大肠杆菌的方法。
1. 革兰氏染色法革兰氏染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，也适用于分离大肠杆菌。
该方法基于细菌细胞壁的染色反应，将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
大肠杆菌属于革兰氏阴性菌，通过革兰氏染色可以将其与革兰氏阳性菌区分开来。
2. 培养基选择法大肠杆菌对不同培养基有特定的生长要求，可以利用这一特性进行分离。
常用的培养基有MacConkey培养基和Eosin Methylene Blue (EMB) 培养基。
这两种培养基中都含有特定的抑菌剂，可以抑制大肠杆菌以外的其他细菌的生长，从而使大肠杆菌能够生长并形成特征性的菌落。
3. 双层琼脂糖平板法双层琼脂糖平板法是一种常用的分离大肠杆菌的方法。
该方法利用了大肠杆菌产生气体的特性。
首先，在琼脂糖平板上均匀涂抹待分离样品，然后在上层平板上加上一层液体琼脂糖。
如果样品中存在大肠杆菌，它们会在培养过程中产生气体，使液体琼脂糖上升形成气泡，从而可以观察到特征性的气泡形成。
4. PCR 筛选法PCR 筛选法是一种高效的分离大肠杆菌的方法。
它利用了大肠杆菌特有的基因序列，通过特异性引物扩增目标基因片段，并通过凝胶电泳分离和鉴定。
这种方法具有高灵敏度和高特异性，可以快速、准确地分离大肠杆菌。
总结起来，分离大肠杆菌的方法有革兰氏染色法、培养基选择法、双层琼脂糖平板法和PCR 筛选法等。
在实际应用中，可以根据具体需要选择适合的方法进行分离和鉴定。
这些方法的应用不仅可以帮助科研人员深入了解大肠杆菌的特性和生理功能，还可以为医学诊断、食品安全等领域提供有力的支持。
大肠杆菌的培养实验与分离
成功地培养微生物的关键。
大肠杆菌的培养实验与分离
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
（１）消毒定义：
是指杀灭病原微生物的方法。
（2）灭菌的定义：
是指杀灭或清除环境中一切微生物（包括芽胞、孢子） 的方法
3.常用的消毒与灭菌的方法
大肠杆菌的Байду номын сангаас养实验与分离
大肠杆菌的培养实验与分离
（四）大肠杆菌的划线分离
1、划线分离法
注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划 线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h
病毒
病毒界
细菌 微生物包括哪五类： 放线菌
原核生物界
真菌
真菌界
原生动物 原生生物界
特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用 光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细 胞结构.且体内一般大不肠杆含菌的有培养叶实验与绿分离素.不能进行光合作用.
(二)细菌的常识
1、结构
2、分裂
3、生殖 4、变异类型 5、在基因工程中的
2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌； 桌面及人手用酒精棉球消毒
3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三 角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁 操作.
4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌
5.平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的 水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养 基，造成污染.
大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌 大肠杆菌的培养实验与分离
细菌的革兰氏染色
革兰氏染色法是一种用于细菌的染 色法。此法将细菌分为两类，即革兰 氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰 氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后， 再用脱色液处理，细菌仍保留染色液 的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两 种菌的差别在于细胞壁的成分不同。
实验一大肠杆菌的培养和分离
操作时右手无名指和小指 夹住封口膜，另外三指持 三角瓶，左手拿培养皿并 打开上盖的一边，在酒精 灯火焰旁操作。
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（三）大肠杆菌的接种
将斜面上培养的大肠杆菌菌种用接种环接种到灭菌后的LB液 体培养基中，将三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原。
注意事项: 1.在火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌，冷却后方能取菌； 3.接种时右手拿着接种环，右手 无名指和小指夹住斜面的棉塞和 三角瓶封口膜； 4.取菌后封口膜和棉塞复原.
LB（Luria-Bertani）液体培养基：蛋白胨10g/L，酵母提取液5g/L，
氯化钠10g/L。
（可用于大肠杆菌的扩大培养）
配制50mL的LB培养基：蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠 0.5g，加50mL水溶解。
LB（Luria-Bertani）固体培养基：50ml LB（Luria-Bertani）液 体培养基中再加入1g琼脂制得。（可用于大肠杆菌的划线分离） 固体培养基可根据需求制成平面或斜面。
培养基：一般 121℃灭菌15min 有葡萄糖：500g/cm2（90℃以上）灭菌30min 有尿素等不能加热的物质：G6玻璃砂漏斗（玻璃砂漏斗用
后需用1mol/L的HCl浸泡，抽滤去酸）
进行操作时，注意瓶口、壁上等不能沾有培养基，否则易发生污染。
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大肠杆菌的培养和分离实验操作步骤
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• 实验器材
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（四）大肠杆菌的扩大培养
三角瓶在37℃，每分钟200转的摇床上振荡培养12h。
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（五）大肠杆菌的划线分离
1、操作步骤 （1）灼烧接种环； （2）接种环冷却后，从在摇床上培养了12h的菌液中蘸取菌液； （3）在近火焰处，用带菌液接种环在固体培养基上划线。
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌的分离鉴定
大肠杆菌是一种重要的肠道细菌，对于科学家和医生来说具有重要的研究和治疗价值。
分离和鉴定大肠杆菌的方法有许多种，本篇文章将介绍几种比较常见的方法。
1. 感染部位样本的获得
首先需要获得感染部位的样本，可分为分泌物、血液、尿液、粪便等。
获得样本的方
法可以根据不同部位进行取样，比如粪便可以通过肛门插入取样器进行获取。
2. 抗生素筛选
将样本接种于相应的富营养基质，对其中加入多种抗生素。
根据对应的扩散系数，只
有大肠杆菌具有生长优势，因此只有大肠杆菌能够在抗生素的存在下继续生长。
3. 纯化
从上面的富营养基质中挑选具有脐带颜色和形态特征的菌落，将其在富营养基质上进
行纯化。
纯化后的大肠杆菌能在多种富营养基质上进行生长即可分离。
4. 经典分离法
包括肉汤琼脂平板法、 MacConkey琼脂平板法、格拉莫琼脂平板法、 EMB琼脂平板法等一系列基本细菌检测方法。
1. 化学特性法
常用方法有氧化氨酸特性试验、熏蒸酸特性试验、脱氧氮碱试验、醛类试验等。
通过
观察变化与发色的差异，以及其化学反应程度来判断是否为大肠杆菌。
通过观察菌落形态、革兰染色阳性反应、运动情况、气体代谢情况等特性判断是否为
大肠杆菌。
可采用比色相比法、蛋白溶液胶片法、氧测定法、etc。
3. 抗原性鉴定
通过采用血相似抗原、鞭毛抗原、菌体抗原等抗原进行抗血清试验，来确定是否为大
肠杆菌。
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及市售药物比较
仔猪大肠杆菌的分离鉴定及市售药物比较仔猪大肠杆菌是引起仔猪腹泻的常见病原菌之一，对仔猪的健康和生长发育造成严重影响。
对仔猪大肠杆菌进行分离鉴定并选择适当的市售药物进行比较，对于控制仔猪腹泻具有重要意义。
一、仔猪大肠杆菌的分离鉴定1. 样品采集为了分离鉴定仔猪大肠杆菌，首先需要收集相关的样品。
可以从仔猪粪便、肠道分泌物等样品中进行采集。
2. 分离培养将样品接种到含有适当选择性抑制剂和诱导剂的培养基中，进行培养。
利用大肠杆菌的生理生化特性进行分离纯化。
3. 鉴定检测通过形态学观察、生理生化试验和分子生物学方法进行鉴定检测。
包括菌落形态、革兰氏染色、氧化酶试验、发酵试验、PCR等方法。
二、市售药物比较1. 抗生素目前市面上常见的用于治疗仔猪大肠杆菌感染的抗生素包括青霉素、氨氯地平、头孢霉素等。
这些抗生素可以通过口服、注射等方式进行给药。
2. 肠道免疫调节剂除了抗生素外，还有一些肠道免疫调节剂也被用于治疗仔猪腹泻。
比如益生菌、益生元等产品，可以通过调节肠道菌群平衡，增强免疫力来缓解仔猪大肠杆菌感染引起的腹泻。
3. 中成药市面上还有一些中成药，如藿香正气水、黄连素片等，也被用于治疗仔猪大肠杆菌感染。
这些中成药多具有清热解毒、抗菌消炎等功效，对于缓解腹泻症状有一定效果。
三、药物比较及选择建议1. 疗效比较通过临床试验和实验室研究，可以对不同药物的疗效进行比较。
比如抗生素和肠道免疫调节剂在治疗仔猪大肠杆菌感染时的疗效、耐药性等进行比较和评估。
2. 安全性比较除了疗效之外，还要考虑药物的安全性。
比如抗生素的滥用可能导致细菌耐药和残留问题，而肠道免疫调节剂多具有较好的安全性。
3. 综合选择根据疾病的病原特性、个体动物的状态以及药物的疗效和安全性进行综合选择。
一般建议在临床治疗中，可以综合应用不同类型的药物，从不同角度进行治疗。
四、注意事项在选择和使用药物时，需要注意以下事项：1. 严格按照药品说明书和兽医指导进行用药，避免滥用和超量用药。
大肠杆菌的分离鉴定
斜面和深层均为红色
斜面为红色；深层为黄色； 若产生H2S，为黑色
分离鉴定---麦康凯培养基
原理：在培养基中含有胆盐，可抑制大部分革兰氏阳 性菌的生长，培养基含乳糖，大肠杆菌能分离乳糖， 使pH下降（中性指示剂5.5--7.5，红--黄）形成红色 菌落，而沙门氏菌和志贺氏菌，不能分解乳糖，菌落 小且为无色
点
击
此 验大
处 及肠
添 生杆
加 化菌
副 实的
标 验分
题
离
鉴
定
、
药
敏
实
202X
目的要求
熟悉鉴别培养基的原理 了解大肠杆菌的主要生理生化特性
一、鉴别培养
菌种 培养基类别
麦康凯培养基
大肠杆菌
红色菌落
沙门氏杆菌
无色或浅黄色菌落
SS琼脂培养基
红色菌落
浅黄色菌落
伊红美兰琼脂培养基
三塘铁培养基
紫红色或紫黑色并带有金 粉红色菌落 属光泽菌落
结果判定
鲜桃红色或微红色， 菌落中心呈深桃红色
圆形，扁平，边缘整 齐，表面光滑，湿润
二、药敏试验
方法：取一菌种，用灭菌的 接种环致密划线于琼脂表面 （可重复来回划线），用无 菌镊子，将各种抗菌药物圆 纸片，分别贴于培养基表面。 各片距离相等，370C，24h后， 观察结果。
药敏结果判定
抑菌直径（mm） 敏 感 性
>20
极敏感
15-20
高敏感
10-14
中敏感
<ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ0
低敏感
0
不敏感
三、生化实验
1糖发酵试验
• 原理：各种细菌具有不同的酶，有的细菌能分解某些 糖类而产酸产气，有的细菌虽能分解某种糖类，但只 产酸不产气，有的细菌则不能分解。从而鉴别细菌。
大肠杆菌分离流程和注意事项
大肠杆菌分离流程和注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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大肠杆菌生态型的分离和鉴定
大肠杆菌生态型的分离和鉴定大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，可以生长在肠道环境中，并对我们的身体有一定的影响。
在某些情况下，大肠杆菌可能成为宿主的潜在病原体，导致各种各样的疾病，对人类健康产生威胁。
因此，分离和鉴定大肠杆菌生态型具有重要的理论和应用价值。
1. 大肠杆菌的分离方法大肠杆菌生态型的分离可以采用直接接种和间接接种两种方法。
直接接种是指直接从样品中分离大肠杆菌。
样品可以是粪便、河水、土壤、食品等。
分离方法包括平板法、层析法、滤膜法等。
其中，平板法是最常用的方法。
将样品在平板上均匀涂抹并培养，然后观察生长的菌落形态，确定菌落是否属于大肠埃希菌属，并通过生化反应或分子生物学方法进行鉴定。
间接接种是指先将样品进行富集处理，然后再进行分离鉴定。
这种方法可以增加分离率。
常用的富集方法包括至少三次传代法、血琼脂富集法、浮游细胞富集法等。
2. 大肠杆菌的鉴定方法大肠杆菌属于革兰氏阴性细菌，常规鉴定常用的方法有生化鉴定、血清学鉴定、荧光抗体鉴定和分子生物学鉴定等。
生化鉴定是指通过观察菌落形态和生化反应来鉴定大肠杆菌。
例如：甲烷酸盐形成试验、尿素酶试验、氧化-还原试验等。
根据不同的鉴定结果来判断是否属于大肠埃希菌属。
血清学鉴定是指利用抗原抗体反应来鉴定大肠杆菌。
将尿液或血清等待测样品与大肠杆菌特异性抗体反应，通过反应产生的抗原抗体复合物来鉴定样品中是否存在大肠杆菌。
荧光抗体鉴定是指利用荧光标记的抗体与大肠杆菌的抗原结合，然后使用荧光显微镜观察荧光信号。
由于荧光抗体的检测灵敏度高，可以在高样品背景下检测到非常低的大肠杆菌浓度。
分子生物学鉴定是指通过PCR扩增、DNA杂交等方法来鉴定大肠杆菌。
这种方法可以检测到非常低的浓度，并具有高度的特异性。
综上所述，分离和鉴定大肠杆菌生态型是一项非常重要的任务。
研究大肠杆菌的分离和鉴定方法，有助于提高大肠杆菌相关疾病的诊断和治疗，从而保护人类健康。
实验大肠杆菌培养和分离
实验大肠杆菌培养和分离
比较消毒与灭菌
比较 理化因素的作 消灭微生物的数 芽孢和孢子能否
项
用强度
量
被消灭
消毒 灭菌
较为温和
部分生活状态 的微生物
强烈
全部微生物
不能
实验大肠杆菌培养和分离
3、常用的灭菌和消毒的方法
（1）灭菌方法：
高压蒸汽灭菌 （湿热灭菌）
实验大肠杆菌培养和分离
2、成分 水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子
(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 调节pH 真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5 有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压
实验大肠杆菌培养和分离
实验1： 大肠杆菌的培养和分离
实验大肠杆菌培养和分离
一、基础知识： (一)微生物
病毒 细菌
微生物包括哪五类： 放线菌
真菌
原生生物
病毒界 原核生物界
真菌界 原生生物界
特点：结构简单,形体微小.通常要用光学显微镜或 电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且 体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.
菌落的概念
菌落：单个或少数细菌在固体 培养基上大量生长繁殖时，所 形成的肉眼可见的具有一定形 态结构的子细胞群体。
大肠杆菌
不同微生物形成的菌落具有不同 大肠杆菌菌落： 的特征，是鉴定菌种的重要依据。白色或乳白色，光滑
如菌落的大小、形状、边缘、光泽度、颜色、透明度等。
酵母菌
放线菌
霉菌
实验大肠杆菌培养和分离
均匀混浊生长
大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1
鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏实验1 前言大肠杆菌是Escherich是在1885年发现的，在相当长得一段时期内，一直被当做正常菌群的组成部分，认为是非致病性的。
直到20世纪中叶，人们才认识到大肠杆菌是肠道常驻菌，分布非常广泛，并且一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物的致病性，尤其是对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症。
禽大肠杆菌病（Avian colibacil-losis）是由致病性大肠杆菌（Es-cherichia coli）引起的局部或全身性疾病，包括急性败血症、气囊炎、肝周炎、心包炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、眼炎、关节炎、脐炎、肉芽肿以及肺炎等，最常见的为气囊炎、输卵管炎等【1-4】。
在临床上往往不单独发病，一般继发于一些病毒性如新城疫、马立克氏病、传染性支气管炎等。
1.1 大肠杆菌病的危害鸡大肠杆菌病发生较为严重，在鸡群中发病率为11%~69%，死亡率为3.2%~72.9%，本病常易成为其他疾病的并发病或继发病，特别是饲养环境和饲养管理条件不良，均可导致鸡大肠杆菌病的发生，若不及时防治，可继发其他病，如感染后对沙门氏菌、新城疫、法氏囊等细菌病和病毒病的易感性增高。
发病鸡群长时间出现零星死亡，累计死亡率在5％~20％．严重时甚至高达50％，对畜禽各中品种和不同畜禽均可感染发病，该病给养殖业带来了巨大的经济损失。
1.2 大肠杆菌病的危害特点1.2.1 抗原构造复杂和血清型极多大脯杆菌的抗原主要由茵体抗原(0)154个，荚膜抗原(K)89个，鞭毛抗原(H)49个。
1.2.2 传染途径多样大脑杆茵病既可蛭消化道、呼吸道感染发病，又可经交配、经蛋传播。
1.2.3 发病季节不定性大脑杆菌病一年四车均可发生，但冬春寒冷和气温多变车节多发。
1.2.4 易出现耐药株采用药物浩疗疲病，问接地控制了低耳龄雏鸡大厮杆菌痛的发生，但同时也培育了大量大脑杆菌耐药菌株。
1.2.5 病型复杂大腑杆菌病的病原性与某些血清型有关。
分离大肠杆菌的方法
分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，常存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体有益，但某些菌株也可以引起严重的感染和疾病。
因此，分离大肠杆菌并进行进一步研究和鉴定是非常重要的。
本文将介绍几种常用的分离大肠杆菌的方法。
1. 纯培养基分离法纯培养基分离法是分离大肠杆菌的常用方法之一。
首先，可以使用选择性培养基，如MacConkey琼脂培养基，其中含有发酵大肠杆菌的特定物质（如乳糖）。
大肠杆菌能够利用乳糖产生酸，导致琼脂变成红色。
然后，从样品中接种适量的细菌在含有选择性培养基的琼脂平板上进行培养。
大肠杆菌会在琼脂上生长并形成典型的红色菌落。
2. 群体分离法群体分离法是一种通过分离菌落的方法来分离大肠杆菌的有效方法。
首先，将样品均匀涂布在含有琼脂的培养基上，并在适当的温度下进行培养。
大肠杆菌在琼脂上形成单独的菌落，而其他细菌可能形成不同形状或颜色的菌落。
然后，通过挑选典型的菌落进行分离并进行进一步鉴定。
3. 抗生素敏感性试验大肠杆菌对不同抗生素的敏感性有所不同，因此抗生素敏感性试验可以作为分离大肠杆菌的方法之一。
将大肠杆菌接种在含有不同抗生素的琼脂平板上，然后观察菌落的生长情况。
大肠杆菌对某些抗生素具有抗性，因此在含有这些抗生素的琼脂平板上，大肠杆菌的生长会受到抑制，而其他细菌则可能继续生长。
通过观察菌落的生长情况，可以初步判断出含有大肠杆菌的菌落。
4. 生化试验生化试验是一种通过检测大肠杆菌所产生的特定酶或代谢产物来分离和鉴定大肠杆菌的方法。
例如，大肠杆菌能够产生β-半乳糖苷酶，可以将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖。
通过将大肠杆菌接种在含有乳糖的培养基上，并添加某种指示剂，如菲嗪红，可以观察到培养基的颜色变化。
如果大肠杆菌存在，培养基会变成黄色。
5. 分子生物学方法分子生物学方法是一种准确且快速的分离大肠杆菌的方法。
通过检测大肠杆菌特有的基因或DNA片段，如16S rRNA基因，可以准确鉴定大肠杆菌。
大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1
大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验1
实验目的：
2. 学会药敏试验的操作方法。
实验原理：
本实验采用分离培养法和生理生化试验法鉴定大肠杆菌，并进行药敏试验。
分离培养法：将待检菌涂布于无机盐蔗糖琼脂平板上，进行无菌措施后，封好后放置于37℃恒温培养箱中培养约24小时。
生理生化试验法：将培养好的菌涂布于氧气萎缩培养基上，培养几十小时后进行各项生理生化试验，如酸碱反应、气体产生、吸附染料、半胱氨酸脱羧反应等，以确定菌的生理特征。
药敏试验：将培养好的菌按黏贴法涂布于药敏试验纸片上，将纸片贴在特定的试验板上，经过孔隙效应作用后，观察菌株的生长情况，如有抑制则为敏感，无抑制则为耐药。
实验步骤：
1. 首先进行无菌操作，将待检样品均匀涂布于琼脂平板上，分别在不同方向进行划纹，待干燥后翻转培养。
2. 取出培养好的菌，进行生理生化试验。
如酸碱反应、气体产生等。
4. 将培养好的菌均匀涂布于药敏试验纸片上，用特定的试验板进行孔隙效应，作用时间为24小时。
5. 经过孔隙效应作用后，取下试验纸片，观察菌株的生长情况。
实验结果：
1. 经过无菌操作后，将待检样品成功涂布于琼脂平板上，实验结果为大肠杆菌生长良好。
2. 通过生理生化试验鉴定为大肠杆菌。
3. 药敏试验结果表明，待检菌株对甲氧苄啶、氯霉素等药品敏感，对红霉素等药品耐药。
结论：。
实验1：大肠杆菌的培养和分离
04 实验结果与分析
大肠杆菌的培养结果
培养基上生长情况
大肠杆菌在培养基上生长良好，菌落 形态呈圆形、湿润、表面光滑，颜色 为乳白色。
生化反应
大肠杆菌能够发酵乳糖产酸，在生化 反应中表现出特定的特征性变化。
菌落计数
通过菌落计数，我们得到了大肠杆菌 的菌落数量，菌落数量在适宜的条件 下随着培养时间的延长而增加。
详细描述
将接种后的培养皿放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度和湿度。在培养过程中，要定期观察大肠杆 菌的生长情况，记录生长曲线，以便后续分析。培养过程中要保持培养皿的清洁，防止杂菌污染。
大肠杆菌的分离
总结词
分离是通过一定的技术手段将目标微生物从混合菌群中单独 获取的过程。
详细描述
在大肠杆菌培养完成后，采用涂布法或划线法将菌落分离， 获得单菌落。分离过程中要保证无菌操作，避免交叉污染。 分离得到的单菌落可用于后续的鉴定和实验研究。
了解大肠杆菌的生物学特性
了解大肠杆菌的形态、染色、生化反 应等生物学特性，能够通过实验结果 判断所分离的菌株是否为大肠杆菌。
了解大肠杆菌的致病性，包括其产生 的毒素、侵袭力、抵抗力等方面的特 性，为后续实验和研究提供基础。
掌握微生物实验的基本操作
掌握微生物实验的基本操作，包括无菌操作、显微镜使用、细菌计数、菌种保存 等，能够独立完成微生物实验。
条件致病菌
在特定条件下，大肠杆菌可引 起肠道外感染，如败血症、新
生儿脑膜炎等。
抗原结构
大肠杆菌具有O抗原、H抗原 和K抗原，可用于血清学分型
。
大肠杆菌的培养基
01
02
03
基础培养基
如肉汤培养基、营养琼脂 培养基等，提供大肠杆菌 生长所需的基本营养成分。
奶牛乳房炎病原——大肠杆菌的分离与鉴定
测器 、 质谱等方法检测峰的纯度 。因为在强制降解试验条件下
产生 的降解产 物较兽药货架期产 生的降解 产物复杂 、未知杂 质多 ， 分离难度大 ， 上述 分析方法可有效地显示 各色谱峰 的纯 度， 以免因分离度不符合要求 ， 导致分析结果 的不准确。如不 具备检测峰纯度的试验条件 ，可通过适 当调整 流动相 比例使 色谱峰保 留时 间发生改变 ，用 同份经加速破坏试验 的供 试品 溶液进样 ， 然后 比较流动相调整前后杂质峰的个数 ； 也可采用 Ｔ Ｃ法 比较 同份经加速破坏 试验的供试品溶液在不 同展开系 Ｌ 定情 况 ， 然后 进一步调整破坏 试验条件 （ 如光照强度 、 酸碱浓 度、 破坏的时间 、 温度等 ） 以得到能充分反 映降解物与样品分 ， 离 的结果 和图谱 。另外 ， 通过 比较试验前后主峰面积 的变化 ， 还可粗略估算 降解物对样 品的响应值 ，了解样 品在 各种条 件 下的稳定性 ， 为包装及贮藏条件的选择等提供信息。对于性质 相对稳定 的兽药 ， 如有充分的文献依据或试验依据 ， 则可 以免 做强制降解试验。
匀， 用无菌的小镊子捏取药敏纸片 ， 置于血琼脂 培养基表面。 ３ ℃温箱 ， ７ 需氧培养 ２ ４小时后 ， 测量抑菌环直径。根据杭
－ ●／ １ Ｉ｝ 工 Ｈ ，＾ ＂ ＷＪ ｋＨ● Ｉ Ｉ 厶、 １ Ｉ ｝ Ｊ
低度敏感 ： 对青霉素 Ｇ、 复方新诺 明 、 阿莫西林 、 氨苄青霉索具
酵蔗糖 ， 分解尿素 ， 利 用柠檬 酸盐 ； 不 不 ＭＲ试 验 阳 性 ； — Ｖ Ｐ试
无菌采取奶牛乳房 中的奶样 ， 将采集的奶样放人 １ ０毫升
无 菌 离 心 管 中 ，然 后 送 到 黑 龙 江 八 一 农 垦 大 学 实 验 室 ４ ℃保
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伊红美兰琼脂培养基
三塘铁培养基
紫红色或紫黑色并带有金 粉红色菌落 属光泽菌落
斜面和深层均为红色
斜面为红色；深层为黄色； 若产生H2S，为黑色
分离鉴定---麦康凯培养基
• 原理：在培养基中含有胆盐，可一直大部 分革兰氏阳性菌的生长，培养基含乳糖， 大肠杆菌能分离乳糖，使pH下降（中性指 示剂5.5--7.5，红--黄）形成红色菌落，而 沙门氏菌和志贺氏菌，不能分解乳糖，菌 落小且为无色
生化实验—硫化氢实验
• 结果：培养基变黑为阳性，不产生黑色为 阴性。大肠杆菌为阴性，沙门氏菌为阳性
生化实验—硝酸盐还原实验
• 原理：有些细菌能将培养基中的硝酸盐还 原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐 与对位氨基苯磺酸起作用后，在与α-萘胺 反应，生成红色偶氮化合物。
• 方法：将被检细菌接种于硝酸钠蛋白胨培 养基内，370C温箱内培养24h。Leabharlann >20极敏感
15-20
高敏感
10-14
中敏感
<10
低敏感
0
不敏感
生化实验——糖发酵试验
• 原理：各种细菌具有不同的酶，有的细菌能分解某些糖类 而产酸产气，有的细菌虽能分解某种糖类，但只产酸不产 气，有的细菌则不能分解。从而鉴别细菌。
• 方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别接种在各种含指 示剂的糖发酵管内，将发酵管倒置与370C温箱内培养24h
生化实验—硝酸盐还原实验
• 结果：再加试剂甲、乙各2滴，在30S内出 现红色即为阳性；若无颜色出现加少量的 锌渣，随后出现红色，则是真正的红色
生化实验——糖发酵试验
• 结果：培养液不变色----无变化（—）
•
陪养液变为黄色----产 酸（+）
• 培养液变黄并有气泡----产酸产气（+）
生化实验—硫化氢试验
• 原理：某些细菌能分离蛋白质中的含硫氨 基酸，生成硫化氢，遇培养基中的铅盐或 铁盐，形成黑色的沉淀物。
• 方法：将需要鉴别的细菌纯培养物，分别 接种在硫化氢培养基中，370C温箱内培养 24h
术式
两试管斜面移植时，左手斜持菌种管 和被将接种琼脂斜面管，使管口相齐，管底 放在拇指和食指间，松动两管棉塞，将管口 进行火焰灭菌，使其靠近火焰，将接种环深 入管内，现在无菌生长的培养基上接触使之 冷却，再挑取少量的细菌后，拉出接种环， 立即伸入另一管斜面培养基上，勿碰到斜面 和管壁，直达斜面底部，从底部开始划曲线， 向上到斜面顶端，管口火焰灭菌，塞好棉塞， 接种完毕。接种环火焰灭菌后，放下接种棒 最后在斜面管壁上注明日期、接种者。置 370C，温箱培养
结果判定
• 鲜桃红色或微红色，菌 落中心呈深桃红色
• 圆形，扁平，边缘整齐， 表面光滑，湿润
药敏试验
方法：取一菌种，用灭 菌的接种环致密划线 于琼脂表面（可重复 来回划线），用无菌 镊子，将各种抗菌药 物圆纸片，分别贴于 培养基表面。各片距 离相等，370C，24h 后，观察结果。
结果判定
抑菌直径（mm） 敏 感 性
实验二、大肠杆菌的分离鉴定 及生化实验
山东农大禽病学实验室 2011年04月22日
目的要求
• 熟悉选择和鉴别培养基的原理 • 了解大肠杆菌的主要培养特性 • 熟悉掌握大肠杆菌生理生化特性
鉴别培养
菌种 培养基类别
麦康凯培养基
大肠杆菌
红色菌落
沙门氏杆菌
无色或浅黄色菌落
SS琼脂培养基
红色菌落
浅黄色菌落