定性免疫学检验的性能验证与质量控制(牛广华)

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临床免疫学检验的定性项目性能验证方案

临床免疫学检验的定性项目性能验证方案检验程序性能验证是临床实验室质量管理的关键技术要求，是保证实验室检测结果准确的前提。

根据中国合格评定国家认可委员会（CNAS）发布的《CNAS-GL038：临床免疫学定性检验程序性能验证指南》，要求申请认可或已获认可的医学实验室对临床免疫学（定性）检验程序，在新检验程序常规应用前、检验程序分析性能受影响后（如仪器主部件故障、仪器搬迁、环境失控等）、检验程序的任一要素（仪器、试剂、校准品等）变更等，都要对检验程序的性能进行验证或重新验证，通过验证结果来分析评估该检验程序是否符合实验室的质量管理要求并满足临床的诊断需要。

性能验证指标的选择应满足该项目检测的预期用途，临床免疫学定性检验程序的分析性能参数一般包括：符合率、精密度（重复性）、检出限、临界值、抗干扰能力、血清与血浆结果一致性等。

下面将对临床免疫学定性检验程序的符合率、精密度（重复性）、检出限和临界值这4个性能指标的验证方案进行介绍解释。

1符合率验证符合率验证的目的是评估该检验程序所检测结果的正确度，有两种验证方案，一是诊断符合率，采用国家标准血清盘或临床明确诊断的阴阳性样品进行比对；二是方法符合率，即与其他分析方法进行比对，包括用候选方法评估已知能力验证或室间质评的样本以及不同方法学或/和相同方法学在不同实验室之间的比对。

1.1诊断符合率验证选取国家标准血清盘或临床明确诊断的阴性样本20份（包含至少10份其他标志物阳性的样本）、阳性样本20份（包含至少10份浓度在cut-off值和2-4倍cut-off值之间的弱阳性样本，1份极高值阳性样本），随机分组分批检测样本，以国家标准血清盘或临床明确诊断的样本结果为金标准，计算候选检验程序所检测结果的诊断符合率，如表1，表1诊断符合率验证金标准合计+-候选检验程序+a b a+b -c d c+d合计n1n2n 诊断符合率计算：诊断灵敏度=[a/n1]×100%诊断特异性=[d/n2]×100%诊断符合率=[（a+d）/n]×100%验证通过标准：要求计算得出的诊断灵敏度、诊断特异性和诊断符合率不低于厂商检验方法声明。

免疫定性分析性能验证报告(cut off)

广东省中医院二沙岛分院检验科ELISA法检测乙肝五项、丙肝试剂盒CUTOFF值验证报告一、HBsAg1、目的：验证本实验室HBsAg ELISA 试剂盒的CUTOFF值是否适用于本实验室所属区域内的个体人群。

2、方法：选择60份健康人新鲜血清和60份HBsAg阴性而有其他免疫标志物阳性的患者新鲜血清，共120份，分三批进行检测，计算所有标本检测结果OD值的均值x和标准差SD,计算x+3SD并与CUTOFF值进行比较，若小于CUTOFF 发光值则CUTOFF值验证通过，反之则不通过。

3、室验数据：4、结果：x+3SD＝0.037+0.014*3＝0.079，试剂盒CUTOF值为0.105，故x+3SD 值小于CUTOFF值。

5、结论：本实验室HBsAg ELISA试剂盒所选择的CUTOFF值适用于本实验室所属区域内的99%正常人群。

二、HBsAb1、目的：验证本实验室HBsAb ELISA 试剂盒的CUTOFF值是否适用于本实验室所属区域内的个体人群。

2、方法：选择60份HBsAb阴性新鲜血清和60份HBsAb阴性而有其他免疫标志物阳性的患者新鲜血清，共120份，分三批进行检测，计算所有标本检测结果OD值的均值x和标准差SD,计算x+3SD并与CUTOFF值进行比较，若小于CUTOFF 发光值则CUTOFF值验证通过，反之则不通过。

3、室验数据：4、结果：x+3SD＝0.031+0.024*3＝0.103，试剂盒CUTOF值为0.105，故x+3SD 值小于CUTOFF值。

5、结论：本实验室HBsAb ELISA试剂盒所选择的CUTOFF值适用于本实验室所属区域内的99%正常人群。

三、HBeAg1、目的：验证本实验室HBeAg ELISA 试剂盒的CUTOFF值是否适用于本实验室所属区域内的个体人群。

2、方法：选择60份健康人新鲜血清和60份HBeAg阴性而有其他免疫标志物阳性的患者新鲜血清，共120份，分三批进行检测，计算所有标本检测结果OD值的均值x和标准差SD,计算x+3SD并与CUTOFF值进行比较，若小于CUTOFF 发光值则CUTOFF值验证通过，反之则不通过。

免疫定性项目性能验证

3.几个重要概念

阳性预示值：即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100% 阴性预示值:则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%

临床诊断（金标准）总计
阳性
阳性验证方法 A
阴性
B A+B
阴性
总计
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的试剂检测结果的影响（100,000人）
结果 + － 10%感染率检出 (+) 9,500 4,500 未检出 (－) 500 85,500 950 4,950 1%感染率检出(+) 未检出(－) 50 94,050
敏感性 (TP/[TP+FN])
验证的内容: 1.正确度（准确度） 2.精密度 3.敏感性 4.特异性 5.CUTOFF值验证 6.其他（需要时）
涉及免疫定性检测评价方法标准

EP15A2 EP17A EP12
医学实验室精密度和准确度的确认检出限与定量限的评价定性检测评价

临床实验室标准化协会

Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)

批间重复性的验证

高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间内单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所得S/CO值的均值和SD，计算批间CV%。判断结论：应≤试剂说明书所标明的批间变异。 ELISA的批间变异CV%应≤15%。

3. 敏感性
1）验证方法:
取10-20份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计

免疫定性项目性能验证报告材料-正本

免疫定性项目性能验证报告单位名称：河北省儿童医院科室名称：检验科实验室：免疫实验室仪器名称：STAR-FAME全自动酶免分析系统型号规格：STAR LET8CH-FAME 24/30仪器编号：173000-7552 146003-3441验证人员：闫红刘雪超审核人员：郭映辉批准人：李贵霞验证日期：2016年4月19日-2016年4月24日目录性能验证结果 (1)1、基本信息 (3)2、正确度验证 (4)3、精密度验证 (5)4、检出线验证 (9)5、阴阳性符合率 (15)1 基本信息1.1 仪器名称：STAR-FAME全自动酶免分析系统1.2试剂：项目试剂产家试剂批文试剂批号失效期HBsAg 英科新创国药准字S1******* 2015125143 2016-12-09HBSAb 英科新创国食药监械（准）字2013第3401320号2016016202 2017-01-17抗-HCV 英科新创国药准字S1******* 2015125824 2016-11-301.3质控品：项目生产厂家批文浓度批号失效期HBsAg 北京康彻思坦生物国制标物号10000958号0.5IU/ml 201504002 20170407HBSAb 北京康彻思坦生物国制标物号10001001号30mIU/ml 201406001 20160602抗-HCV 北京康彻思坦生物国制标物号10001091号0.5NCU/ml 201511005 201711192 正确度验证以卫生部临床检验中心室间质评结果为准；成绩在80%者即为验证通过。

附件：卫生部临检中心室间质量评价成绩表标本来源：卫生部临检中心批号：1521 1522 1523 1524 15251531 1532 1533 1534 15351611 1612 1613 1614 1615项目名称：HBsAg结果卫生部临检中心阳性阴性合计本室阳性 6 0 6 本室阴性0 9 9 合计 6 9 15 符合率：100% 100%项目名称：HBsAb结果卫生部临检中心阳性阴性合计本室阳性 4 0 4 本室阴性0 11 11 合计 4 11 15 符合率：100% 100%项目名称：抗-HCV结果卫生部临检中心阳性阴性合计本室阳性 5 0 5本室阴性0 10 10合计 5 10 15符合率：100% 100%3 精密度验3.1 批内精密度：3.1.1 实验方案：选择低值、中值质控品，连续检测20次，记录并保存原始检测数据，计算SD、CV值。

免疫定性项目性能验证报告---正本

免疫定性项目性能验证报告---正本————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：1第 1 页共 17 页免疫定性项目性能验证报告单位名称：河北省儿童医院科室名称：检验科实验室：免疫实验室仪器名称：STAR-FAME 全自动酶免分析系统型号规格：STAR LET8CH-FAME 24/30 仪器编号：173000-7552 146003-3441 验证人员：闫红刘雪超审核人员：郭映辉批准人：李贵霞验证日期：2016年4月19日-2016年4月24日第2页共 17 页目录性能验证结果...................................................... 1 1、基本信息 ................................................... 3 2、正确度验证 ................................................. 4 3、精密度验证 ................................................. 5 4、检出线验证 ................................................. 9 5、阴阳性符合率 (13)河北省儿童医院检验科性能验证报告第 3 页共 17 页1 基本信息1.1 仪器名称：STAR-FAME 全自动酶免分析系统 1.2试剂：项目试剂产家试剂批文试剂批号失效期 HBsAg 英科新创国药准字S1******* 2015125143 2016-12-09 HBSAb 英科新创国食药监械（准）字2013第3401320号 2016016202 2017-01-17 抗-HCV 英科新创国药准字S1*******20151258242016-11-301.3质控品：项目生产厂家批文浓度批号失效期 HBsAg北京康彻思坦生物国制标物号10000958号0.5IU/ml20150400220170407HBSAb 北京康彻思坦生物国制标物号10001001号 30mIU/ml 201406001 20160602抗-HCV 北京康彻思坦生物国制标物号10001091号 0.5NCU/ml 201511005 20171119第 16 页共 17 页2 正确度验证以卫生部临床检验中心室间质评结果为准；成绩在80%者即为验证通过。

定性免疫学检验的性能验证与质量控制

xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
结果判断-4
用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。
xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
检出限的验证
n检测限（limit of detection）是指检测方法可检测出的最低被测量浓度，也称检测低限（ lower limit of detection ）或最小检出浓度（ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏度（analytical sensitivity）。 n如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以测出的最低被测量浓度。
xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
筛查试验
n筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的存在情况。
n一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（即临床检出率大于95%），对其特异性的要求（和阳性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。
如粪便隐血检测
xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
n这里的C50指的是一个处于试剂检测临界点的样本浓度，其一旦确定，是不变的。 n试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信号值，每次测定都会有所差异。
xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
C5 浓度的定义
n一份样本，在多次重复实验中有95%的几率获得阴性结果时该分析物的浓度。

CNAS GL038 2019 临床免疫学定性检验程序性能验证指南

CNAS-GL038临床免疫学定性检验程序性能验证指南Guidance of Verification of Qualitative Measurement Procedures used in the Clinical Immunology中国合格评定国家认可委员会前言本文件由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）制定，是对CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》和 CNAS-CL02-A004：2018《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》中有关临床免疫学定性检验程序进行性能验证实验所做的具体解释和指导，供医学实验室和评审员参考使用。

本文件为首次发布。

临床免疫学定性检验程序性能验证指南1 范围本指南适用于申请认可或已获认可的医学实验室对临床免疫学（定性）检验程序进行性能验证实验活动，也可供评审员在现场评审过程中参考使用。

本指南主要适用于医学实验室使用的临床免疫学定性检验方法，其他专业领域使用的定性检验程序/方法可参考使用。

临床免疫学定性检验程序，也称临床免疫学定性检验方法，在本指南中统一称为临床免疫学定性检验程序（以下简称“检验程序”），包括纯定性免疫检验、半定量（滴度）的免疫检验和以定量方式报定性结果的免疫检验等各项检验活动。

本文件适用于医学实验室采用的经确认的检验程序。

2 规范性引用文件下列文件对于本指南的应用是必不可少的。

凡是注明日期的引用文件，仅该版本适用于本指南。

凡是未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改部分）适用于本指南。

WS/T 416-2013《干扰实验指南》WS/T 494-2017《临床定性免疫检验重要常规项目分析质量要求》WS/T 505-2017《定性测定性能评价指南》WS/T 514-2017《临床检验方法检出能力的确立和验证》3 术语和定义对于本标准，GB/T 29791.1-2013（ISO 18113-1：2009，IDT）中的定义适用。

定性免疫学检验的性能验证与质量控制

检出限的验证方法
样本选择：评估试剂分析灵敏度所使用的样本，如检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国家参考品标化的参考品进行检测，如没有国家参考品，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质，或与国际标准物质溯源的样本。验证方法：处于测定下限浓度（ C95 ）的样本，重复检测20次，应至少有18次以上为阳性反应。
精密度评估的基本原则（2）
评估精密度时，应至少评估两个浓度水平样本的精密度。所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少有一个浓度在医学决定水平左右，在定性测定，即为接近临界水平的浓度。
批内精密度的评估
评估方法：三个不同浓度的样本，在一个测试批内重复进行至少20次检测，计算所得S/CO值的均值和SD ，计算批内CV%。质量控制：检验时应同时至少测一个质控品。判断结论：应≤试剂说明书所标明的批内变异。 ELISA的批内变异CV%应≤10%。
（三）准确度验证
验证方法及指标：以与临床诊断、金标准方法和标准血清盘的检测比较来评价，常以敏感性（包括临床敏感性）/ 特异性（包括临床特异性）和阳性符合率/阴性符合率来表示。
临床特异性和临床敏感性
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中，其检测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率（即出现阳性结果和确定患者患病）。临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中，其检测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
（一）不精密度的验证
纯定性试验：采用浓度接近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性检测方法的不精密度。量值化定性试验：以COI（cut-off Index）或S/CO 比值作为分析方法的精密度评价指标。
纯定性测定不精密度的评估方法

基于ISO15189要求的免疫学定性试验性能验证方法的探讨

ｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ。ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆｔｈｅｂｌａｎｋａｎｄｓａｍｐｌｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ。ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＥＰ１５Ａ２ｓｔａｎｄａｒｄａｕ —
ＪｉａｎｇＴａｏ，ＬｉＪｕｎ，ＷａｎｇＣｈａｎｇｆｕ，ＺｈａｎｇＧｕｏｌｉａｎｇ，ＡｉＨｏｎｇｍｅｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｅｎｔｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉｎｇｚｈｏｕ，ＨｕｂｅｉＪｉｎｇｚｈｏｕ４３４０２０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｅｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅｔｅｓｔｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｉｎａｃｃｏｒｄａｎｃｅｗｉｔｈ
ＤｏＩ：１Ｏ．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３ — ４１３Ｏ．２０１４．０３．０３３
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７３ — ４１３０（２０１４）０３０３３２ — ０２

免疫定性实验性能验证

方法。
1、符合率 ——（2）方法符合率验证
2)验证方案：选取： 10份阴性样本（包含至少5份其他标志物阳性的样本） 10份阳性样本（包含至少5份弱阳性样本，1份极高值阳性样本）注：弱阳性样本浓度在CUT-OFF值和2-4 倍CUT-OFF之间
共20份样本，随机每4份分成一组。采用参比方法和候选方法均每天按照患者样本检测程序进行
性能验证的合格标准及验证人员
试剂盒说明书指标（先决条件！）国际和／或国内标准性能实验验证只能由本实验室人员在自己的场地、使用
自己的检测系统进行，厂家的数据、外单位的实验室测定结果、学术刊物发表论文结论、科技成果等均不能替代，只可做参考。
评价前的准备
实验室工作人员的培训熟悉待评价的试剂或系统掌握样本和试剂的处理和存储过程按厂商的要求进行，注意基质效应定性实验需进行阴性和阳性质控物测定
×100%
13、似然比(LR) 表达的是患某种疾病的患者所测定不同结果范围中，
患该病与不患该病的比值。在只有阳性、阴性结果时，一般分阳性似然比及阴性似然比两种。
阳性似然比：真阳性率( TPR)与假阳性率(FPR)的比值即为阳性似然比(+LR)。可用以描述当某就诊者的该诊断性试验结果为阳性时，其患病与不患病的机会比。显然阳性似然比的值越高，检验结果阳性时，诊断为某病的概率越大，该检测方法确诊疾病的能力就越强。其阳性似然比的计算公式为：
1、符合率 ——（1）诊断符合率验证
金标准（诊断准确度标准）
疾病
非疾病
候选实验
a(+，阳性)
b(+，阳性)
a+b
c( -，阴性) d( -，阴性)
c+d
n1

免疫定性项目性能验证

判断结论：应≤试剂说明书所标明的批间变异。 ELISA的批间变异CV%应≤15%。
3.敏感性
取10-20份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。
样
验
本
证
来
方
源
法
: :
临床诊断的阳性病人血清； ○ 厂家提供的阳性对照； ○ 决定性参考方法检测阳性的样本； ● 以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4这样稀释）
验证厂家提供的试剂参数能否在本实验室得到重现。
什么时候进行性能验证
使用新的检测试剂或系统时；单击此处添加正文。
更易于操作单击此处添加正文。
更经济单击此处添加正文。
更换检测试剂或系统时。更换新的试剂或系统意义：
更高的检测性能单击此处添加正文。
更能满足实验室测定要求单击此处添加正文。
一.定性临床应用与分类
1%感染率
检出 (+) 未检出 (－) 检出未检出(－) (+)
9,500
500
950
50
4,500
85,500 4,950 94,050
95%
95%
95%
95%
950/[950+4950]=16% 9500/[9500+4500]=6 7.9%
85500/[85500+500]= 94050/[94050+50]=99
4.特异性
一．验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。
2. 样本来源:体检样本,体检者确认符合要求后即可.
二．NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书. 三．比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很难收集到真正意义上的阴性样本.

CNAS GL 临床免疫学定性检验程序性能验证指南

本文件为首次发布。

本指南主要适用于医学实验室使用的临床免疫学定性检验方法，其他专业领域使用的定性检验程序/方法可参考使用。

本文件适用于医学实验室采用的经确认的检验程序。

2 规范性引用文件下列文件对于本指南的应用是必不可少的。

凡是注明日期的引用文件，仅该版本适用于本指南。

凡是未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改部分）适用于本指南。

免疫学检验技术—免疫学检验的质量控制

通常为含蛋白质的缓冲液，对测定结果无明显影响。
标准品浓度在方法的测定范围即可。
标准品的基本条件
在规定保存条件下具有良好的稳定性
无已知传染危险性，对已知的血液传播病原体必须做灭活处理。
标准品浓度在方法的测定范围即可。
二、定量、半定量和定性免疫检验
（一）定量免疫检验
• 定量免疫检验通常需要使用全自动免疫分析仪，在测定时须用校准品对仪器进行校准。
3、质控血清盘：用于特定的定性免疫测定试剂盒的评价
第二节免疫检验质量控制的特殊性
• 免疫学检验方法的种类较多，其测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此进行质量控制的手段不能照搬生化模式。
• 免疫检验质量控制包括定量、半定量和定性免疫检验三种类型。
一、标准品
（一）标准品的概念和分类
（三）定性实验
• 定性免疫检验是免疫学检验的重点，其测定方法有很多，常以“有”或“无”也即“阳性”或“阴性”来表达测定结果。
• 定性测定的室内质控要点是控制测定下限，设置临界cutoff 值（CO值）的低值弱阳性质控物是定性室内质控的关键。
• 应选择靶抗原或抗体浓度接近试剂盒或方法的测定下限的质控品进行室内质量控制，并与临床标本的测定同时进行，这一点对于使用肉眼判定测定结果的方法尤为重要
• 标准品（standard）指含量明确的处于一定基质中其特性明确的物质，通常用于比较检测未知的物质或成分。
• 标准品质量的优劣直接影响样品的测定结果。
• 根据标准品性质的差异，可分为三级：
一级标准品二级标准品三级标准品
为冻干品，内含载体蛋白，数量有限，可使用 10~20年。通常为国际标准品，由WHO指定的实验室制备

免疫定性项目性能验证报告 - 正本

附件：卫生部临检中心室间质量评价成绩表标本来源：卫生部临检中心批号：项目名称：HBsAg项目名称：HBsAb项目名称：抗-HCV3 精密度验3.1 批内精密度：3.1.1 实验方案：选择低值、中值质控品，连续检测20次，记录并保存原始检测数据，计算SD、CV值。

3.1.2 检测要求：批内精密度<15%。

3.1.3 结果HBsAg批内精密度中值样本X= 0.798 s= 0.029 cv=3.6%HBsAb批内精密度中值样本X= 1.278 s= 0.061 cv=4.8%HCV批内精密度中值样本X= 0.794 s= 0.048 cv=6.1%3.2 批间精密度：3.2.1 实验方案：选择低值、中值质控品，每天重复测定5次，连续进行4 天，记录并保存原始检测数据，计算SD、CV值。

3.2.2 检测要求：批间精密度20％3.2.3 结果HBsAg批间精密度中值样本X=0.68 s=0.08 cv=11.16HBsAb批间精密度中值样本X=1.58 s=0.20 cv=12.55HCV批间精密度中值样本X=0.77 s=0.07 cv=8.804 检出限验证4.1实验方案：根据康彻斯坦定值标准物浓度（见下表）的实际情况进行1:1，1:4，1:8，1:16稀释检测，各浓度一次做3个孔，然后计算出预测临界点(C50)，并重复检测20次进行验证C50；在此基础上，制备高于临界浓度20％和低于临界浓度20％的样本分别测定20次，记录阴性及阳性结果数。

临床免疫学定性检验程序性能验证指南-CNAS

本文件为首次发布。

本指南主要适用于医学实验室使用的临床免疫学定性检验方法，其他专业领域使用的定性检验程序/方法可参考使用。

本文件适用于医学实验室采用的经确认的检验程序。

2 规范性引用文件下列文件对于本指南的应用是必不可少的。

凡是注明日期的引用文件，仅该版本适用于本指南。

凡是未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改部分）适用于本指南。

CNAS-GL038：2019 免疫定性检验程序性能验证指南(2020 年9月1日第一次修订)

C/VASCNAS-GL038临床免疫学定性检验程序性能验证指南Guidance of Verification of Qualitative Measurement Procedures used in the Clinical Immunology中国合格评定国家认可委员会前言本文件由中国合格评定国家认可委员会（CNAS）制定，是对CNAS-CL02：2012《医学实验室质量和能力认可准则》CNAS-CL02-A004：2018《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学定性检验领域的应用说明》中有关临床免疫学定性检验程序进行性能验证实验所做的具体解释和指导，供医学实验室和评审员参考使用。

本文件为首次发布。

临床免疫学定性检验程序性能验证指南1范围本指南适用于申请认可或已获认可的医学实验室对临床免疫学（泄性）检验程序进行性能验证实验活动，也可供评审员在现场评审过程中参考使用。

本指南主要适用于医学实验室使用的临床免疫学定性检验方法，其他专业领域使用的定性检验程序/方法可参考使用。

临床免疫学定性检验程序*也称临床免疫学定性检验方法，在本抬南中统一称为临床免疫学定性检验程序（以下简称“检验程序”），包括纯定性免疫检验、半世量（滴度）的免疫检验和叹定疑方式报定性结果的免疫检验等各项检验活动。

本文件适用于医学实验室采用的经确认的检验程序。

2规范性引用文件下列文件对于本指南的.应用是必不可少的。

凡是注明日期的引用文件，仅该版本适用于本指南。

凡是未注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改部分）适用于本指南。

WS/T416-2013《干扰实验指南》WS/T494-2017《临床定性免疫检验重要常规项目分析质量要求》WS/T505-2017《定性测定性能评价指南》WS/T514-2017《临床检验方法检出能力的确立和验证》3术语和定义对于本标准，GB/T29791.1-2013（ISO18113-1：2009,IDT）中的定义适用，下列术语和定义适用于本指南。

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TP TP FP
TN TN FN TN TP TP FP TN FN
注1:式中： TP—分析物存在时检测结果为阳性的数量。 FP—分析物不存在时结果为阳性的数量。 TN—分析物不存在时检测结果为阴性的数量。 FN—分析物存在时检测结果为阴性的数量。
C50
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C50与试剂盒阳性反应判断值（CUT-OFF值）的区别
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这里的 C50 指的是一个处于试剂检测临界点的样本浓度，其一旦确定，是不变的。试剂盒 CUT-OFF 值指的是一个判断某一次测定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公式计算出来的信号值，每次测定都会有所差异。
C50
不正确
>=27/40(67.5%) 2 阳性结果（14-26）/40（35%-65%）正确
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不同C50重复检测次数与检出阳性数的关系
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如何获得系统或试剂的“临界点（C50）”
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定性测定精密度分析质量指标为C5-C95浓度区间（亦即“灰区”），这一区间范围≤C50±20%。
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分析物浓度接近临界值时的不精密度曲线
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两种不同方法的不精密度曲线比较
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C95
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性能验证专业知识技能准备
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应熟悉待验证的试剂或系统进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以及系统的质量控制等。制定质量保证计划确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）确定比较的方法
结果判断-2
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-20%～+20%浓度范围包含了C5-C95区间；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样本检测结果一致
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结果判断-3
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用该方法检测，C50+20%的样本检测结果一致，C50-20%的样本不一定能得到一致结果；需要用低于C50更大百分率浓度的样本（如-30%）进行补充试验。
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5.5 检验程序
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5.5.1.1 检验方法和程序的分析性能验证内容应参考试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证，至少应包括：检出限、符合率（采用国家标准血清盘或临床诊断明确的阴阳性样品各20份或与其他分析方法比对），如为定量方法应验证精密度（包括重复性和中间精密度）；并应明确检验项目的预期用途，如筛查、诊断、确认。
CNAS-CL39：2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明-2014改版
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性能验证的合格标准从何而来？
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试剂盒说明书（先决条件！）
国际和／或国内标准
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概念准备
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临床特异性和临床敏感性
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研究人群有一些研究的人群，仅包括健康人群和疾病严重的人群，而忽略了介于两种状态之间的人群和一些不典型的患病人群。将这部分人群剔除在研究人群之外，会优化评价的结果，造成试剂在实际应用当中结果简单明确的假象。因此，研究人群最好符合以下要求：
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C5 浓度的定义
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一份样本，在多次重复实验中有 95% 的几率获得阴性结果时该分析物的浓度。
C5
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C95 浓度的定义
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一份样本，在多次重复实验中有 95% 的几率获得阳性结果时该分析物的浓度。
试剂的检测结果阳性结果数阴性结果数共计敏感性特异性阳性预测值阴性预测值符合率
分析物阳性 TP FN TP+FN
TP TP FN TN TN FP
分析物阴性 FP TN FP+TN ×100% ×100% ×100% ×100% ×100%
共计 TP+FP FN+TN TP+FP+FN+TN
±20%仅用于举例，实验室也可根据检验目的和可接受的精密度选择± 10% 或±30%。
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只提供两种检测结果(-/+)的定性检测的精密度
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评价定性检测试剂或系统精密度时，需采用浓度接近临界值的分析物作为检测材料，不宜采用阴性低值或强阳性样本来评价定性检测方法的不精密度。
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筛查试验诊断试验确认实验 C50 C5 C95
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筛查试验
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筛查试验用于检测整个人群或部分人群中分析物的存在情况。一般而言，筛查试验应当具有较高的临床敏感性（即临床检出率大于95%），对其特异性的要求（和阳性预测值）则取决于对各种因素的综合考虑。
如粪便隐血检测
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诊断试验
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用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在。
诊断试验需具有良好的敏感性和特异性。
诊断试验后如需进行确认试验，对诊断试验的特异性要求可以稍微降低。如各种微生物培养
辽宁中医药大学附属医院临床个阶段； ——涵盖一些不典型的、较难诊断的患病人群； ——各组不同特征的人群均需有一定的数量。
总之，研究的人群要能够代表该检测系统或试剂预期使用的人群，否则给出的数据将存在偏倚。
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表1:敏感性、特异性和阳性预测值、阴性预测值的计算
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试验步骤
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制备评价用样本制备3份样本。一份浓度为C50，一份为C50+20% ，一份为C50-20%。每份样本的体积需保证40次或更多次重复检测的需要。评价方法每份样本检测40次，确定每一份样本结果为阳性和阴性的百分比。
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检出限的验证
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评估试剂分析敏感性所使用的样本，如检测项目有国家参考品，则可使用国家参考品或经国家参考品标化的参考品进行检测，如没有国家参考品，则使用可以溯源或量化的样本，如国际标准物质，或与国际标准物质溯源的样本，是更有意义的。处于测定下限浓度（如 C95 ）的样本，重复检测 20 次，应至少有18次以上为阳性反应。
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结果判断-4
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用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。
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检出限的验证
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准确度验证
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概
述
特定的定性免疫测定系统或试剂的准确度以与临床诊断、金标准方法和经过验证确认血清样本盘的检测比较来评价，常以敏感性（包括临床敏感性） / 特异性（包括临床特异性）和阳性符合率 / 阴性符合率来表示。
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结果判断-1
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-20%～+20%浓度范围在C5-C95区间之内；用该方法检测，浓度超过C50±20%的样本检测结果不一致；此结论错误率5% ，需使用更宽浓度范围的样本（如±30%）进行另外的试验。
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CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
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C50是否准确？
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40次测试
1 阳性结果 =<13/40(32.5%)
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样本准备
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质控品：可为商品质控品，有阳性和阴性。 C50和可能的C5（低于C50浓度20%）及C95浓度样本（高于 C50 浓度20% ）：用于重复性及最低检出限验证，不少于40次检测量）临床样本或血清盘（准确性验证）（不少于50份阳性和阴性样本）
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如何获得系统或试剂的“临界点（C50）”
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检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的临界浓度，但需验证。如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能够获得 50% 阳性和 50% 阴性结果的那个稀释度。这一稀释度的分析物浓度即为临界点（C50）。