食品中致病性大肠埃希氏菌及检验-
食品大肠埃希氏菌标准
食品大肠埃希氏菌标准一、什么是大肠埃希氏菌？大肠埃希氏菌（Escherichia coli，简称E. coli）是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于环境中，同时也是人类和动物肠道中的重要共生菌。
大肠埃希氏菌的某些菌株可引起人类食物中毒和感染，造成严重的健康问题。
二、食品大肠埃希氏菌标准的重要性食品安全是人民群众关心的重要问题之一，而大肠埃希氏菌是食品中最为常见的致病菌之一。
制定和执行食品大肠埃希氏菌标准对于保护消费者的生命健康具有重要意义。
1. 食品大肠埃希氏菌标准的目的食品大肠埃希氏菌标准的目的是规范生产和加工环节中对大肠埃希氏菌的控制要求，最终保障食品的安全性和卫生质量。
2. 食品大肠埃希氏菌标准的依据制定食品大肠埃希氏菌标准的依据主要包括国内外相关法律法规和科学研究成果，例如食品安全法、食品卫生法、食品安全国家标准等。
三、食品大肠埃希氏菌标准的内容要求1. 食品大肠埃希氏菌指标食品大肠埃希氏菌标准中会规定食品中大肠埃希氏菌的允许限量，不同食品的指标可能存在差异。
例如，在生肉类食品中，大肠埃希氏菌数目必须小于某个特定值才能合格。
2. 检测方法和要求食品大肠埃希氏菌标准中还包括了针对大肠埃希氏菌的检测方法和要求。
这些方法需要科学准确，并且易于操作。
常用的检测方法包括传统培养法、PCR法等。
3. 食品贮藏和运输要求食品大肠埃希氏菌标准还规定了食品的贮藏和运输要求，以确保在食品生产、储存和运输过程中不发生大肠埃希氏菌的污染和繁殖。
4. 生产企业的责任与义务食品大肠埃希氏菌标准还明确了食品生产企业的责任与义务。
企业必须建立健全的质量管理体系，保证生产过程符合相关标准要求，并对产品进行严格的自检、抽检和监督检验。
四、食品大肠埃希氏菌标准的执行与监督1. 监督机构和责任部门食品大肠埃希氏菌标准的执行和监督是食品安全监管部门的职责，他们承担着对食品生产企业的日常监督、抽样检测和追溯调查等工作。
2. 处罚措施对于违反食品大肠埃希氏菌标准的生产企业，监督机构将会采取相应的处罚措施，例如责令召回不合格产品、暂停生产许可证、罚款等。
牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定
牛肉样品中产志贺毒素大肠埃希氏菌和肠致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定朱应飞，聂 翔，熊丽霞，吴学平，占忠旭，匡佩琳（江西省检验检测认证总院食品检验检测研究院，江西南昌 330000）摘 要：于2018年9月—2019年3月，每个月从超市和农贸市场中抽取20个样本，共抽取140个牛肉及制品样本，在qPCR初筛时stx阳性率为45.8%，eae的阳性率为52.2%。
每月的stx初筛阳性率分别为65%、60%、80%、5%、25%、45%和40%；eae初筛阳性率分别为70%、70%、65%、0%、40%、65%和55%。
检出携带stx基因的产类志贺毒素大肠埃希氏菌样本4份，样本阳性菌株检出率为2.9%；检出携带eae基因的肠致病性大肠埃希氏菌样本12份，样本阳性菌株检出率为8.6%。
关键词：产志贺毒素大肠埃希氏菌；肠致病性大肠埃希氏菌；分离；鉴定Isolation and Identification of Shiga Toxin Producing Escherichia coli and Enteropathogenic Escherichia coli in BeefSamplesZHU Yingfei, NIE Xiang, XIONG Lixia, WU Xueping, ZHAN Zhongxu, KUANG Peilin (Jiangxi General Institute of Testing and Certification Food Testing Institute, Nanchang 330000, China)Abstract: From September 2018 to March 2019, 20 samples were taken from supermarkets and farmers’ markets every month, with a total of 140 beef and product samples taken. the positive rate of stx was 45.8%, and the positive rate of eae was 52.2%. The monthly positive rates of stx initial screening positive rates of 65%, 60%, 80%, 5%, 25%, 45%, and 40%, respectively; The positive rates of eae initial screening were 70%, 70%, 65%, 0%, 40%, 65%, and 55%, respectively. Four Shiga toxin producing Escherichia coli samples carrying the stx gene were detected, with a positive strain detection rate of 2.9%; From September 2018 to March 2019, 12 samples of enteropathogenic Escherichia coli carrying the eae gene were detected, with a positive strain detection rate of 8.6%.Keywords: Shiga toxin producing Escherichia coli; enterogenic Escherichi coli; separation; appraisal产志贺菌毒素的大肠杆菌（Shiga Toxin Producing Escherichia coli，STEC）和肠致病性埃希氏菌（Enterogenic Escherichi coli，EPEC）是世界上最重要的食源性病原体之一。
大肠埃希氏菌O157H7NM检验(食品微生物学检验)
食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/N M检验1范围本标准规定了食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM(E s c h e r i c h i a c o l i O157:H7/NM)的检验方法㊂本标准适用于食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM的检验㊂2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:2.1恒温培养箱:36ħʃ1ħ㊂2.2冰箱:2ħ~5ħ㊂2.3恒温水浴箱:46ħʃ1ħ㊂2.4天平:感量0.1g㊁0.01g㊂2.5均质器㊂2.6显微镜:10倍~100倍㊂2.7无菌吸管:1m L(具0.01m L刻度)㊁10m L(具0.1m L刻度)或移液器及吸头㊂2.8无菌均质杯或无菌均质袋:容量500m L㊂2.9无菌培养皿:直径90mm㊂2.10p H计或精密p H试纸㊂2.11长波紫外光灯:365n m,功率ɤ6W㊂2.12微量离心管:1.5m L或2.0m L㊂2.13磁板㊁磁板架㊁样品混合器㊂2.14微生物鉴定系统㊂3培养基和试剂3.1改良E C肉汤(m E C+n):见A.1㊂3.2改良山梨醇麦康凯琼脂(C T-S MA C):见A.2㊂3.3三糖铁琼脂(T S I):见A.3㊂3.4营养琼脂:见A.4㊂3.5半固体琼脂:见A.5㊂3.6月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MU G(MU G-L S T):见A.6㊂3.7氧化酶试剂:见A.7㊂3.8革兰氏染色液:见A.8㊂3.9 P B S-T w e e n20洗液:见A.9㊂3.10亚碲酸钾(A R级)㊂3.11头孢克肟(C e f i x i m e)㊂3.12大肠埃希氏菌O157显色培养基㊂3.13大肠埃希氏菌O157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂㊂3.14鉴定试剂盒㊂3.15抗-E.c o l i O157免疫磁珠㊂第一法常规培养法4检验程序大肠埃希氏菌O157:H7/NM常规培养法检验程序见图1㊂图1大肠埃希氏菌O157:H7/N M常规培养法检验程序5操作步骤5.1增菌以无菌操作取检样25g(或25m L)加入到含有225m L m E C+n肉汤的均质袋中,在拍击式均质器上连续均质1m i n~2m i n;或放入盛有225m L m E C+n肉汤的均质杯中,8000r/m i n~ 10000r/m i n均质1m i n~2m i n㊂36ħʃ1ħ培养18h~24h㊂5.2分离取增菌后的m E C+n肉汤,划线接种于C T-S MA C平板和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上, 36ħʃ1ħ培养18h~24h,观察菌落形态㊂在C T-S MA C平板上,典型菌落为圆形㊁光滑㊁较小的无色菌落,中心呈现较暗的灰褐色;在大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上的菌落特征按产品说明书进行判定㊂5.3初步生化试验在C T-S MA C和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上分别挑取5个~10个可疑菌落,分别接种T S I琼脂,同时接种MU G-L S T肉汤,并用大肠埃希氏菌株(A T C C25922或等效标准菌株)做阳性对照和大肠埃希氏菌O157:H7(N C T C12900或等效标准菌株)做阴性对照,于36ħʃ1ħ培养18h~ 24h㊂必要时进行氧化酶试验和革兰氏染色㊂在T S I琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色,产气或不产气,不产生硫化氢(H2S)㊂置MU G-L S T肉汤管于长波紫外灯下观察,MU G阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,MU G阴性的应无荧光产生,大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MU G试验阴性,无荧光㊂挑取可疑菌落,在营养琼脂平板上分纯,于36ħʃ1ħ培养18h~24h,并进行下列鉴定㊂5.4鉴定5.4.1血清学试验在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落,用O157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂作玻片凝集试验㊂对于H7因子血清不凝集者,应穿刺接种半固体琼脂,检查动力,经连续传代3次,动力试验均阴性,确定为无动力株㊂如使用不同公司生产的诊断血清或乳胶凝集试剂,应按照产品说明书进行㊂5.4.2生化试验5.4.2.1自营养琼脂平板上挑取菌落,进行生化试验㊂大肠埃希氏菌O157:H7/NM生化反应特征见表1㊂表1大肠埃希氏菌O157:H7/NM生化反应特征生化试验特征反应三糖铁琼脂底层及斜面呈黄色,H2S阴性山梨醇阴性或迟缓发酵靛基质阳性甲基红-伏普试验(M R-V P)M R阳性,V P阴性氧化酶阴性西蒙氏柠檬酸盐阴性赖氨酸脱羧酶阳性(紫色)鸟氨酸脱羧酶阳性(紫色)纤维二糖发酵阴性棉子糖发酵阳性MU G试验阴性(无荧光)动力试验有动力或无动力5.4.2.2如选择生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统,应从营养琼脂平板上挑取菌落,用稀释液制备成浊度适当的菌悬液,使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统进行鉴定㊂5.4.3毒力基因测定(可选项目)样品中检出大肠埃希氏菌O157:H7或O157:NM时,如需要进一步检测V e r o细胞毒素基因的存在,可通过接种V e r o细胞或H e L a细胞,观察细胞病变进行判定;也可使用基因探针检测或聚合酶链反应(P C R)方法进行志贺毒素基因(s t x1㊁s t x2)㊁e a e㊁h l y等基因的检测㊂如使用试剂盒检测上述基因,应按照产品的说明书进行㊂6结果报告综合生化和血清学试验结果,报告25g(或25m L)样品中检出或未检出大肠埃希氏菌O157:H7或大肠埃希氏菌O157:NM㊂第二法免疫磁珠捕获法7检验程序大肠埃希氏菌O157:H7/NM免疫磁珠捕获法检验程序见图2㊂图2大肠埃希氏菌O157:H7/N M免疫磁珠捕获法检验程序8操作步骤8.1增菌同5.1㊂8.2免疫磁珠捕获与分离8.2.1应按照生产商提供的使用说明进行免疫磁珠捕获与分离㊂当生产商的使用说明与下面的描述可能有偏差时,按生产商提供的使用说明进行㊂8.2.2将微量离心管按样品和质控菌株进行编号,每个样品使用1只微量离心管,然后插入到磁板架上㊂在漩涡混合器上轻轻振荡E.c o l i O157免疫磁珠混悬液后,用开盖器打开每个微量离心管的盖子,每管加入20μL E.c o l i O157免疫磁珠悬液㊂8.2.3取m E C+n肉汤增菌培养物1m L,加入到微量离心管中,盖上盖子,然后轻微振荡10s㊂每个样品更换1只加样吸头,质控菌株必须与样品分开进行,避免交叉污染㊂8.2.4结合:在18ħ~30ħ环境中,将上述微量离心管连同磁板架放在样品混合器上转动或用手轻微转动10m i n,使E.c o l i O157与免疫磁珠充分接触㊂8.2.5捕获:将磁板插入到磁板架中浓缩磁珠㊂在3m i n内不断地倾斜磁板架,确保悬液中与盖子上的免疫磁珠全部被收集起来㊂此时,在微量离心管壁中间明显可见圆形或椭圆形棕色聚集物㊂8.2.6吸取上清液:取1支无菌加长吸管,从免疫磁珠聚集物对侧深入液面,轻轻吸走上清液㊂当吸到液面通过免疫磁珠聚集物时,应放慢速度,以确保免疫磁珠不被吸走㊂如吸取的上清液内含有磁珠,则应将其放回到微量离心管中,并重复8.2.5步骤㊂每个样品换用1支无菌加长吸管㊂免疫磁珠的滑落:某些样品特别是那些富含脂肪的样品,其磁珠聚集物易于滑落到管底㊂在吸取上清液时,很难做到不丢失磁珠,在这种情况下,可保留50μL~100μL上清液于微量离心管中㊂如果在后续的洗涤过程中也这样做的话,脂肪的影响将减小,也可达到充分捕获的目的㊂8.2.7洗涤:从磁板架上移走磁板,在每个微量离心管中加入1m LP B S-T w e e n20洗液,放在样品混合器上转动或用手轻微转动3m i n,洗涤免疫磁珠混合物㊂重复上述步骤8.2.5~8.2.7㊂8.2.8重复上述步骤8.2.5~8.2.6㊂8.2.9免疫磁珠悬浮:移走磁板,将免疫磁珠重新悬浮在100μLP B S-T w e e n20洗液中㊂8.2.10涂布平板:将免疫磁珠混匀,各取50μL免疫磁珠悬液分别转移至C T-S MA C平板和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板一侧,然后用无菌涂布棒将免疫磁珠涂布平板的一半,再用接种环划线接种平板的另一半㊂待琼脂表面水分完全吸收后,翻转平板,于36ħʃ1ħ培养18h~24h㊂注:若C T-S MA C平板和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板表面水分过多时,应在36ħʃ1ħ下干燥10m i n~ 20m i n,涂布时避免将免疫磁珠涂布到平板的边缘㊂8.3菌落识别大肠埃希氏菌O157:H7/NM在C T-S MA C平板和大肠埃希氏菌O157显色琼脂平板上的菌落特征同5.2㊂8.4初步生化试验同5.3㊂8.5鉴定同5.4㊂9结果报告同第6章㊂附录A培养基和试剂A.1改良E C肉汤(m E C+n)A.1.1成分胰蛋白胨20.0g3号胆盐1.12g乳糖5.0gK2H P O4㊃7H2O4.0gK H2P O41.5gN a C l5.0g新生霉素钠盐溶液(20m g/m L)1.0m L蒸馏水1000m LA.1.2制法除新生霉素外,所有成分溶解在水中,加热煮沸,在20ħ~25ħ下校正p H至6.9ʃ0.1,分装㊂于121ħ高压灭菌15m i n,备用㊂制备浓度为20m g/m L的新生霉素储备溶液,过滤法除菌㊂待培养基温度冷至50ħ以下时,按1000m L培养基内加1m L新生霉素储备液,使最终浓度为20m g/L㊂A.2改良山梨醇麦康凯(C T-S M A C)琼脂A.2.1山梨醇麦康凯(S M A C)琼脂A.2.1.1成分蛋白胨20.0g山梨醇10.0g3号胆盐1.5g氯化钠5.0g中性红0.03g结晶紫0.001g琼脂15.0g蒸馏水1000m LA.2.1.2制法除琼脂㊁结晶紫和中性红外,所有成分溶解在蒸馏水中,加热煮沸,在20ħ~25ħ下校正p H至7.2ʃ0.2,加入琼脂㊁结晶紫和中性红,煮沸溶解,分装㊂于121ħ高压灭菌15m i n㊂A.2.2亚碲酸钾溶液A.2.2.1成分亚碲酸钾0.5g蒸馏水200m LA.2.2.2制法将亚碲酸钾溶于水,过滤法除菌㊂A.2.3头孢克肟(C e f i x i m e)溶液A.2.3.1成分头孢克肟1.0m g95%乙醇200m LA.2.3.2制法将头孢克肟溶解于95%乙醇中,静置1h待其充分溶解后过滤除菌㊂分装试管,储存于-20ħ,有效期1年㊂解冻后的头孢克肟溶液不应再冻存,且在2ħ~8ħ下有效期14d㊂A.2.4C T-S M A C制法取1000m L灭菌融化并冷却至46ħʃ1ħ的山梨醇麦康凯(S MA C)琼脂,加入1m L亚碲酸钾溶液和10m L头孢克肟溶液,使亚碲酸钾浓度达到2.5m g/L,头孢克肟浓度达到0.05m g/L,混匀后倾注平板㊂A.3三糖铁琼脂(T S I)A.3.1成分蛋白胨20.0g牛肉浸膏5.0g乳糖10.0g蔗糖10.0g葡萄糖1.0g硫酸亚铁铵[(N H4)2F e(S O4)2㊃6H2O]0.2g氯化钠5.0g硫代硫酸钠0.2g酚红0.025g或5.0g/L溶液5.0m L琼脂12.0g蒸馏水1000m LA.3.2制法除酚红和琼脂外,将其他成分加于400m L蒸馏水中,煮沸溶解,在20ħ~25ħ下校正p H至7.4ʃ0.2㊂另将琼脂加于600m L蒸馏水中,煮沸溶解㊂将上述两溶液混合均匀后,加入5%酚红水溶液5m L,混匀,分装小号试管,每管约2m L~4m L㊂于121ʎC10m i n或115ʎC15m i n,制成高层斜面㊂冷却后呈桔红色㊂如不立即使用,在2ħ~8ħ条件下可储存一个月㊂A.4营养琼脂A.4.1成分蛋白胨10.0g牛肉膏3.0g氯化钠5.0g琼脂15.0g蒸馏水1000m LA.4.2制法将各成分溶解于蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,校正p H至7.4ʃ0.2,分装㊂于121ħ高压灭菌15m i n㊂A.5半固体琼脂A.5.1成分蛋白胨1.0g牛肉膏0.3g氯化钠0.5g琼脂0.3g~0.4g蒸馏水100m LA.5.2制法将各成分溶解于蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,校正p H至7.4ʃ0.2,分装小试管,于121ħ高压灭菌15m i n㊂直立凝固备用㊂A.6月桂基硫酸盐蛋白胨肉汤-M U G(L S T-M U G)A.6.1成分胰蛋白胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾(K2H P O4)2.75g磷酸二氢钾(K H2P O4)2.75g十二烷基硫酸钠0.1g4-甲基伞形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷(MU G)0.1g蒸馏水1000m LA.6.2制法将各成分溶解于蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,于20ħ~25ħ下校正p H至6.8ʃ0.2,分装到带有倒管的试管中,每管10m L,于121ħ高压灭菌15m i n㊂A.7氧化酶试剂A.7.1成分N,N'-二甲基对苯二胺盐酸盐或N,N,N',N'-四甲基对苯二胺盐酸盐1.0g蒸馏水100m LA.7.2制法少量新鲜配制,于冰箱内避光保存,在7d内使用㊂A.7.3试验方法用无菌棉拭子取单个菌落,滴加氧化酶试剂,10s内呈现粉红或紫红色,即为氧化酶试验阳性㊂不变色者为氧化酶试验阴性㊂A.8革兰氏染色液A.8.1结晶紫染色液A.8.1.1成分结晶紫1.0g95%乙醇20m L1%草酸铵水溶液80m LA.8.1.2制法将结晶紫完全溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合㊂A.8.2革兰氏碘液A.8.2.1成分碘1.0g碘化钾2.0g蒸馏水300m LA.8.2.2制法将碘与碘化钾先行混合,加入蒸馏水少许充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300m L㊂A.8.3沙黄复染液A.8.3.1成分沙黄0.25g95%乙醇10.0m L蒸馏水90.0m LG B 4789.36 201611 A .8.3.2 制法将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释㊂A .8.4 染色法A .8.4.1 涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染液,染1m i n ,水洗㊂A .8.4.2 滴加革兰氏碘液,作用1m i n ,水洗㊂A .8.4.3 滴加95%乙醇脱色约15s ~30s ,直至染色液被洗掉,不要过分脱色,水洗㊂A .8.4.4 滴加复染液,复染1m i n,水洗㊁待干㊁镜检㊂A .9 P B S -T w e e n 20洗液按照商品用E .c o l i O 157免疫磁珠的洗液配方进行制备,或按照下列配方制备㊂A .9.1 成分氯化钠8.0g 氯化钾0.2g 磷酸氢二钠(N a 2H P O 41.15g 磷酸二氢钾(K H 2P O 4)0.2g T w e e n200.5g 蒸馏水1000m LA .9.2 制法将上述成分溶解于水中,于20ħ~25ħ下校正p H 至7.3ʃ0.2,分装锥形瓶㊂121ħ高压灭菌15m i n ,备用㊂。
基于多重PCR_检测食品中致泻大肠埃希氏菌
分析检测基于多重PCR检测食品中致泻大肠埃希氏菌谭 波，黄坤宁*（贵州省检测技术研究应用中心，贵州贵阳 550014）摘 要：目的：提高实验室对食品中致泻大肠埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）的检测能力与检测效率，验证DEC多重PCR试剂盒的适用性。
方法：依据《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》（GB 4789.6—2016）分离鉴定样品23-H770、23-X371，用DEC多重PCR检测试剂盒检测5种DEC的12条特征基因。
结果：23-H770未检出DEC，23-X371检出STEC/EHEC，阴、阳性对照菌种均检出GB 4789.6—2016中5种DEC目标条带与型别对照表相应基因条带，且空白对照12条目标基因条带均未检出。
结论：能力验证样品评价结果为“满意”，多重PCR检测试剂盒能快速准确检测EPEC、EIEC、ETEC、STEC/EHEC和EAEC。
关键词：多重PCR；致泻大肠埃希氏菌；电泳；检测Detection of Diarrheogenic Escherichia coli in Food Based onMultiplex PCRTAN Bo, HUANG Kunning*(Guizhou Testing Technology Research and Application Center, Guiyang 550014, China) Abstract: Objective: To improve the detection capability and efficiency of diarrheagenic Escherichia coli (DEC) in food, and to verify the applicability of DEC multiplex PCR kit. Method: Samples 23-H770 and 23-X371 were isolated and identified according to GB 4789.6—2016, and 12 characteristic genes of 5 species of DEC were detected with DEC multiple PCR detection kit. Result: DEC was not detected in 23-H770, STEC/EHEC was detected in 23-X371, and GB 4789.6—2016 were detected in all the five DEC target bands and corresponding gene bands in the genotype comparison table, while none of the 12 target gene bands were detected in the blank control. Conclusion: The evaluation result of ability verification sample is satisfactory. The multiplex PCR kit can detect EPEC, EIEC, ETEC, STEC/EHEC and EAEC quickly and accurately.Keywords: multiplex PCR; diarrheagenic Escherichia coli; electrophoresis; detection致泻大肠埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）是一类可引起人体腹泻症状的大肠埃希氏菌（Escherichia coli），常见的DEC主要有5种[1-2]。
埃希氏大肠菌及检验
埃希氏大肠菌及检验一、定义：大肠埃希氏菌更习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属，并且大肠杆菌株ATCC 11775是该属的模式菌种。
大肠杆菌的不同菌株间DNA相关性为80%，而与同科的志贺氏菌属（除鲍氏志贺氏菌外）的DNA相关性可达80-87%。
与人类疾病有关的大肠杆菌，统称为致泻性大肠杆菌（此名称不易与致病性大肠杆菌相混淆），一般包括五种：即肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）和粘附性大肠杆菌（EAEC）。
文献报道还有几种，象：凝集性大肠杆菌、即产VT毒素又具有侵袭性的大肠杆菌等，但目前尚未达成统一共识。
二、生物学特性：基本形态特征：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般大小约0.5μ-0.8μm*1.0μm-3.0μm,因生长条件不同，个别菌体可呈近似球状或长丝状。
此菌多单独存在或成双，但不呈长链状排列。
约有50%左右的菌株具有周生鞭毛而能运动，但多数菌体只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱；多数菌株生长有比鞭毛细、短、直且数量多的菌毛，有的菌株具有荚膜或微荚膜；不形成芽胞，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
培养特征：由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低于6.0或高于8.0则生长缓慢。
生化反应与血清学反应大肠杆菌属于卫生学意义的大肠菌群和粪大肠菌群的范畴，因此，必须符合大肠菌群和粪大肠菌群的有关定义，在检测大肠菌群、粪大肠菌群的基础上，可以应用I（吲哚）、M（甲基红）、Vi（3羟基-2-丁酮）、C（柠檬酸）即IMViC 生化试验对大肠杆菌作进一步鉴定，其IMViC结果为++--或-+--。
不同方法检测食品中大肠埃希氏菌O157
3 结论与讨论
养基、试剂和耗材；
（2）收到样品后，如不立即进行
能力验证活动对检验人员的操作能力和经验
要求较高，但除了检验人员的技术因素外，影响能
力验证结果的因素还有很多，如样品的保存、样品
的水化、加样的准确度以及培养温度和时间等
[11-12]
。
检验，应将样品按《参试指导书》置于-15 ℃冷冻保
存；
（3）样品检验时要注意冻干粉是否完全水化，且
色琼脂平板上均有 2 种形态菌落生长，其中 1 种呈
现大肠埃希氏菌 O157∶H7 的典型菌落形态，具体菌
落形态和初步生化实验结果见表 2。结果表明样品
23-F568 中未检出大肠埃希氏菌 O157∶H7，而样品
23-G520 中有可疑菌落，还需通过进一步生化实验
来进行验证。
全自动菌种生化鉴定系统分别进行生化鉴定试验。
（GB 4789.36—2016）中的第一法和实时荧光 PCR 方
法，分别对能力验证样品进行检测。结果显示，样品 23-G520 中未检出大肠埃希氏菌 O157∶H7；样品 23-F568 中检
出大肠埃希氏菌 O157∶H7，结果反馈为满意。在能力验证实验中，不同检测方法同时使用、综合判断, 能有效提高
2.1
[10]
杀菌消毒 。
1.3.2
实时荧光 PCR 试验
传统国标方法
样品的增菌、分离、初步生化实验、血清学鉴
定、生化试验等步骤按照《食品安全国家标准 食品
微生物学检验 大肠埃希氏菌 O157∶H7/NM 检验》
（GB 4789.36—2016）第一法操作，同时作阳性对照
和阴性对照实验。生化试验鉴定时自营养琼脂平
物菌种鉴定系统可将生化鉴定时间由 24~48 h 缩短
食品中大肠菌的检验
通过大肠传播疾病的途径：
主要是病原微生物随粪便排出后污染 了饮水，食品等经口传染的食物。
污染病原微生物的食品的危害：
1引起食物中毒 2传播人畜共患性疾病或者其他疾病
从食品中直接检查病原微生物困 难的原因：
第一，肠道病原微生物的种类很多， 要逐个检查并非易事，难以经常进行。 第二，污染的病原微生物数目较少， 不易检查出来。 第三，随病原菌同时污染的非病原菌 所占比例比病原菌大得多，在培养时 又比病原菌繁殖快，从而阻碍了病原 菌的生长。 第四，检验时需较复杂的设备和条件， 一般实验室难以进行这类检验工作。
3分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上划线分离， 置（36+1）摄氏度恒温箱内，培养18至24后取出，观察菌落 形态，做革兰氏染色。 4证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌落1至2个进行染色。镜检为 革兰氏阴性无芽孢杆菌时，挑取该菌落的另一部分，接种乳 糖复发酵管，置（36+1）摄氏度恒温箱内，培养（24+2)h， 观察产气情况。凡乳糖管产酸产气，证实有大肠菌群存在， 即为大肠菌群阳性。 5结果
（3）另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，做10倍递增稀释液， 如此每递增稀释1次即换用1支10ml吸管。
2乳糖发酵试验
选择3个稀释度，每个稀释度接种3管乳糖胆盐发酵管。接种量在 1ml以上者用双料乳糖胆盐发酵管；1ml及以下者用单料乳糖胆 盐发酵管，置（36+1)摄氏度恒温箱内，培养（24+2）h，如所 有发酵管都不产气则可报告为大肠菌群阴性，如有产气则继续进 行。
Ps:正常人类粪便便以典型大肠
杆菌为主，而腹泻患者粪便则大 肠菌群其他型别有明显的增加 测定大肠菌群所用培养基和检验常 用器材：
单料乳糖胆盐，伊红美蓝琼脂，肉汤，磷酸盐缓冲溶 液，生理盐水，革兰氏染色液，恒温培养箱，恒温水 浴锅，天平，显微镜，均质器或乳钵，温度计，灭菌 平皿，试管，广口瓶或三角瓶，吸管，载玻片，接种 针，玻璃珠，酒精灯，试管架。
食品中大肠埃希氏菌O157H7NM能力验证结果分析与讨论
分析检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM能力验证结果分析与讨论周 露（宝应县产品质量综合检验检测中心，江苏扬州 225800）摘 要：为了提升实验室食品中大肠埃希氏菌O157:H7/NM检测能力，本实验室参加了大连中食国实检测技术有限公司组织的大肠埃希氏菌O157:H7/NM检测能力验证活动。
根据《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》（GB 4789.36—2016），对疑似菌进行鉴定。
结果显示，编号143样品中检出大肠埃希氏菌O157:H7/NM，编号349、142样品中均未检出大肠埃希氏菌O157:H7/NM。
本实验室顺利完成能力验证，结果为满意。
关键词：能力验证；大肠埃希氏菌O157:H7/NM；食品检测Proficiency Testing Results and Analysis of Escherichia coliO157:H7/NM in FoodZHOU Lu(Baoying Comprehensive Center for Quality Inspection & Test of Product, Yangzhou 225800, China) Abstract: To strengthen the detection capability of Escherichia coli O157:H7/NM in food of laboratory, the laboratory participated in proficiency testing on Escherichia coli O157:H7/NM detection in foods by China CFAPA Testing Technology Company Limited of Dalian. The isolated suspicious colonies were identified by the method of GB 4789.36—2016. The results showed that Escherichia coli O157:H7/NM was detected in sample 143, and Escherichia coli O157:H7/NM was not detected in sample 349 or 142. The proficiency testing was successfully completed, and the satisfactory results were obtained.Keywords: proficiency testing; Escherichia coli O157:H7/NM; food testing微生物污染引起的食源性疾病是世界各国普遍关注的问题。
致病性大肠埃希氏菌及其检验
5）在鲜血琼脂平板上生长，有些菌株可见β溶血环。 6）在远藤琼脂上长成带金属光泽的红色菌落 7）在S．S琼脂平板上多不生长，少数生长的细菌， 也因发酵乳糖产酸而形成红色菌落； 8）在伊红美兰琼脂上形成紫黑色具有金属光泽的菌 落 9）在麦康凯琼脂上培养24小时后孤立菌落呈红色 •
埃希氏菌在S．S琼脂平板上形成红色菌落
• 在麦康基培养基上培养的大肠埃希杆菌 大肠埃 希杆菌产生粉红色乳糖发酵菌落。麦康基培养基 是肠道细菌的选择培养基，含胆盐、乳糖和pH指 示剂中性红。乳糖发酵菌落产生酸，将指示剂变 红。（麦康基琼脂，18小时，37℃）
革兰氏阴性杆菌
革兰氏阳性杆菌
大肠杆菌扫描电镜照片
大肠杆菌透射电镜照片
大肠杆菌革兰氏染色照片
致病性大肠埃希氏菌的检验
（四）血清学试验 • 假定试验： 从平板上选菌落生长稠密处挑取培养物，用致病 性大肠埃希氏菌、侵袭性大肠埃希氏菌、产肠毒 素大肠埃希氏菌多价O血清和出血性大肠埃希氏菌 O157血清做玻片凝集试验。不凝集的培养物可做 阴性报告。当与某一种多价O血清凝集时,再与该 多价血清所包含的单价血清做实验,如与某一种单 价O血清呈现强烈的凝集反应,即为假定实验阳性. 不凝集的培养物可做阴性报告。
一、埃希氏菌属生物学特性
致病性：（2）所致疾病 • 肠外感染：泌尿系统感染最常见病原菌。还可引 起胆囊炎、肺炎、新生儿或婴儿脑膜炎。 • 腹泻：产毒素大肠杆菌是婴儿及旅游者腹泻的主 要原因；致病性大肠杆菌是婴儿腹泻的主要原因； 侵袭型大肠杆菌主要引起较大儿童和成年人腹泻。
一、埃希氏菌属生物学特性
C-枸橼酸盐利用（citrate utilization）试验
• 利用枸橼酸盐生长 + • 不能利用 •
食品中致病菌大肠艾希氏菌的检测
食品中致病菌大肠艾希氏菌的检测食品中病原菌的检验主要包括食品原料及食品中各种病原菌的检验，如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、肉毒梭菌及毒素、巴氏杆菌等19种病原菌。
在此只介绍大肠希氏菌的检验，以掌握病原性大肠艾希氏菌检验的原理和方法。
病原性大肠艾希氏菌检验原理正常情况下，大肠艾希氏菌不致病，而且还能合成维生素B和K，生产大肠菌素，对机体有利。
但当机体抵抗力下降或大肠艾希氏菌侵入肠外组织或器官时，可作为条件性致病菌而引起肠道外感染。
有些血清型可引起肠道感染，已知的引起致病性大肠艾希氏菌有四类，即产肠毒素大肠艾希氏菌、出血性大肠艾希氏菌、肠道侵袭性大肠艾希氏菌和肠道致病性大肠艾希氏菌，后者主要引起新生儿的腹泻。
带菌的牛和猪是传播本菌引起食物中毒的重要原因，人的带菌亦可污染食品，引起中毒。
病原性大肠艾希氏菌检测方法一、增菌样品采集后应尽快检验。
以无菌操作称取检样25 g，加在225 mL营养肉汤中，以均质器打碎1 min或用乳钵加灭菌砂磨碎。
取出适量，接种乳糖胆盐培养基，以测定大肠菌群MPN，其余的移入500 mL广口瓶内，于36土1 ℃培养6 h。
挑取1环，接种于1管30 mL肠道菌增菌肉场内，于42 ℃培养18 h。
二、分离将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板;污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36土1 ℃培养18 h一24 h，观察菌落。
不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
三、生化试验1. 自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁(TSl)或克氏双糖铁琼脂(KI)。
同时将这些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH 7.2尿素、琼脂、KCN肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。
以上培养物均在36 ℃培养过夜。
2. TSI斜面产酸或不产酸，底层产酸，H2S阴性，KCN阴性和尿素阴性的培养物为大肠艾希氏菌。
致病性大肠埃希氏菌及其检验
详细描述
水源污染事件中，致病性大肠埃希氏菌的来源可能是生活污水、农业污水或工业废水等 。这种细菌可能通过污水排放进入水源，进而污染饮用水。在发展中国家或卫生条件较 差的地区，水源污染问题尤为突出，可能导致大规模的腹泻和肠道疾病流行。因此，对
控制措施
采取合理的抗生素使用策略、加强感染防控措施、提高公众 卫生意识等手段可以有效控制致病性大肠埃希氏菌的抗药性 。
04
致病性大肠埃希氏菌的预防和治疗
预防措施
保持个人卫生
经常洗手，避免接触污染水源，避免食用不洁食物。
饮食卫生
加强食品卫生监管，避免摄入污染的食品和水。
疫苗接种
针对高风险人群，如儿童和老年人，接种针对性的疫 苗。
详细描述
食源性疾病暴发通常与食品污染有关，而致病性大肠埃希氏菌是常见的污染源之一。这种细菌可能存在于畜禽、 水产以及蔬菜等食品中，导致消费者食用后出现中毒症状。在某些情况下，致病性大肠埃希氏菌还可能产生毒素 ，如志贺毒素和肠毒素，进一步增加疾病暴发的危险性。
水源污染事件中的致病性大肠埃希氏菌
总结词
培养温度
将培养基置于37℃左右的恒温 箱中培养，在24-48小时内观 察菌落形态。
菌落形态
致病性大肠埃希氏菌在显色培 养基上形成圆形、湿润、光滑 、半透明的菌落，呈紫黑色或 绿色。
染色观察
用革兰氏染色法处理菌落，可 见致病性大肠埃希氏菌为革兰 氏阴性短杆菌。
免疫学检测技术
酶联免疫吸附试验（ELISA）
THANK YOU
感谢聆听
DNA芯片技术
将致病性大肠埃希氏菌的基因片 段固定在芯片上，用标记过的探 针进行杂交检测。
常见致病菌检验—致泻大肠埃希菌检验
细菌性食物中毒
三 条件性致病菌食物中毒
（一）大肠杆菌食物中毒
大肠杆菌主要存在于人和动物肠道内，随粪便排出， 分布于自然界，如空气、水、土壤、食品等处。本菌污染 食品的途径与沙门氏菌污染食品的情况相同。
多价血清 单价血清
单价血清
单价血清
单价血清
OK多价1 O55：K59（B5） O86：K61（B7） O111：K58（B4） O127a：K63（B8）
OK多价2 O26：K60（B6） O125：K70（B15） O126：K71（B16） O128：K67（B12） OK多价3 O44：K74（L） O114：K90（B） O119：K69（B14） O142：K86（B）
❖ 不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也 要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
EMB培养基
菌落特征：黑紫色或紫红 色，圆形，边 缘整齐，表面 光滑，湿润， 常具有金属光 泽，也有的呈 紫黑色，不带 或略带金属光 泽。
3、生化检验
❖ 自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁 琼脂（TSI）或克氏双糖铁琼脂（KI）。同时将这 些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2 尿 素琼脂、KCN 肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。 以上培养物均在 36℃培养过夜。
靛基质试验：细菌分解蛋白质中的色氨酸 产生吲哚，吲哚与对二氨基苯甲醛作用， 形成玫瑰吲哚而成红色。
❖ 脲酶试验：细菌分解尿素产生两分子氨，使培养基 pH升高，指示剂酚红显示出红色，即证明细菌有脲 酶。
❖ 动力试验：有动力的细菌会沿着穿刺线扩散生长。
❖ 赖氨酸脱羧试验：细菌从赖氨酸脱去羧基（COOH），导致培养基pH变碱，指示剂溴麝香草酚 蓝就显示出蓝色，试验结果为阳性，如果细菌不能 脱酸，培养基不变则为黄色。
大肠埃希氏菌检测标准
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，其中某些菌株可能引起食物中毒或感染。
大肠埃希氏菌的检测标准可以根据不同的应用领域和目的而有所不同。
以下是一般食品安全和公共卫生领域中常见的大肠埃希氏菌检测标准：
食品中的大肠埃希氏菌检测：
检测方法：常用的检测方法包括培养法、分子生物学方法（如PCR）和免疫学方法（如ELISA）等。
培养法是最常用的方法，通过培养食物样品中的细菌并进行鉴定和计数。
标准数量限制：食品中大肠埃希氏菌的数量通常以菌落形成单位（CFU）来表示。
不同国家和地区可能有不同的标准限制，通常要求食品样品中大肠埃希氏菌数量低于一定的阈值。
饮用水中的大肠埃希氏菌检测：
检测方法：常用的检测方法包括多管发酵法、膜过滤法和分子生物学方法等。
多管发酵法和膜过滤法通过将水样进行培养并进行鉴定和计数。
分子生物学方法可以通过检测特定的基因序列来识别大肠埃希氏菌。
标准数量限制：饮用水中大肠埃希氏菌的数量通常以菌落形成单位（CFU）或基因检测结果来表示。
不同国家和地区可能有不同的标准限制，通常要求饮用水中大肠埃希氏菌数量低于一定的阈值。
一起致泻性大肠埃希菌食物中毒的病原学检测分析
食源性疾病是指人体因摄食有毒有害物质（包括生物性病原体）等致病因子所引发的疾病，无论是在发达国家还是发展中国家其都是目前最为突出的公共卫生问题之一[1]。
2020年6月，山东省淄博市某学校发生一起疑似食物中毒事件——6月29日~7月2日，该校陆续有30余人出现呕吐、恶心、腹痛、腹泻（多为水样便，3~6次/天）等消化系统症状。
经流行病学调查发现，发病患者均曾在该校食堂就餐，共同暴露食品为西红柿炒鸡蛋、炸虾、稀饭等，除一名患者为食堂内部工作人员外，其余均为学生，且共同进餐人数约200人。
本实验采用全自动医用P C R分析系统对采集样本混合样进行22种常见胃肠道感染相关病原体快速诊断，结果判定为致泻大肠埃希菌，然后利用实时荧光P C R技术对所有样本进行致泻大肠埃希菌初筛检验，同时进行样本中致泻大肠埃希菌的增菌培养、分离鉴定。
结果证实，导致本次食物中毒事一起致泻性大肠埃希菌食物中毒的病原学检测分析□ 王银平 吴莹 刘军 张群 淄博市疾病预防控制中心摘 要：本文对一起疑似食物中毒事件中所采集的样本进行病原学检测分析，希望能够为预防食物中毒提供科学依据。
应用全自动医用PCR分析系统对22种常见胃肠道感染相关病原体进行快速筛检，以实时荧光定量PCR技术进行毒力基因检测，并利用传统方法对病原菌进行分离培养。
检测数据显示，35份样本的22种常见胃肠道感染相关病原体检测结果为检出致病性大肠埃希菌（EPEC）；10份样本经实时荧光定量PCR技术检出EPEC毒力基因escV和内参基因uidA；经传统培养分离方法，最终从6份粪便样本中分离出目标菌EPEC。
因此得出结论，综合流行病学调查、临床症状和实验室检验结果，推断出这是一起由携带EPEC的食堂工作人员通过污染食物导致学生感染发病的突发公共卫生事件。
建议各级卫生监督部门加强对餐饮行业及其从业人员的监督检查力度，避免类似食物中毒事件的发生，进而保障人民的身体健康。
关键词：致泻性大肠埃希菌 食物中毒 实时荧光PCR 毒力基因件的病原体是携带毒力基因e s c V 和内参基因u i d A 的E P E C 。
食品中致病性大肠埃希氏菌及检验
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板 上的特征
EMB培养基，上为E.coli，
大肠杆菌在麦康凯琼脂（ＭａｃＣ）的特征
▪ 麦康凯琼脂（ＭａｃＣ）或伊红美兰（ＥＭＢ）琼脂 平板上，置３７°培养１８—２４小时，检查有无疑 似大肠杆菌菌落。大肠杆菌在麦康凯平板上的典型菌 落呈鲜艳的桃红、粉红色.
大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂平板上的特征
▪ 如仔猪黄、白痢、猪水肿病、牛腹泻 和败血症等均可由大肠杆菌引起。
一、埃希氏菌属生物学特性
▪ 形态与染色 本属细菌为革兰氏阴性 两端钝圆、中等大小的 无芽孢杆菌，绝大多数 周生鞭毛，能运动，周 身还有菌毛，不产生荚 膜，某些菌株有荚膜。
普通大肠埃希氏菌Escherichia Coli
一、埃希氏菌属生物学特性
5、肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)
▪ 致病性大肠埃希氏菌中，一般认为能 产生耐热(ST)和不耐热(LT)肠毒素的 两种菌株均可引起人的食物中毒。引 起大肠埃希氏菌中毒的主要是一些动 物性食品，如乳与乳制品、肉类、水 产品等，牛和猪是传播这种病菌、引 起中毒的主要原因。
▪ 1996年7月在日本就发生了大肠杆菌 0157型引起的食物中毒，造成9017多 人中毒，10人死亡，其原因与生食萝 卜苗有关，其中92例并发出血性肠炎 及出血性尿毒症。2001年，再江苏、 安徽等地爆发的肠出血性大肠杆菌 0157:H7食物中毒，造成177人死亡， 中毒人数超过2万人。
▪ 内毒素:大肠杆菌细胞壁具有内毒素的活性
▪ 肠毒素:有两种,不耐热肠毒素(LT),成分可能是蛋 白质,加热65℃经30min即被破坏. LT与霍乱菌肠 毒素作用相似,都是刺激小肠上皮细胞的腺苷环化 酶,使ATP转变为CAMP,促进肠黏膜细胞的分泌功能, 使肠液大量分泌,引起腹泻;耐热肠毒素(ST)无免 疫性,耐热,100℃经10-20min不被破坏,也可使肠 道细胞的CAMP水平升高,引起腹泻.
食品中致病性大肠埃希氏菌及检验
未来研究方向与技术发展
01
02
03
04
快速检测技术的研发
针对现有检测方法的局限性， 未来研究应致力于开发更快速 、准确的新型检测技术，如基 于分子生物学和免疫学的方法 。
提高检测的特异性
针对假阳性的问题，研究应关 注提高检测方法的特异性，降 低交叉污染对检测结果的影响 。
食品生产和销售环境的卫生管理
人员卫生
食品生产和销售人员应保 持良好的个人卫生习惯， 勤洗手、穿戴清洁的工作 服、帽、口罩等。
ห้องสมุดไป่ตู้
环境卫生
定期对食品生产和销售环 境进行清扫、消毒，保持 环境整洁卫生，防止致病 菌滋生。
设备卫生
食品生产和销售设备应定 期清洗、消毒，确保设备 的清洁卫生，防止致病菌 的滋生和传播。
特性
具有多种形态，如杆状、球状和丝状，通常为革兰氏阴性菌，无 芽孢，无鞭毛，有菌毛。
传播途径与危害
传播途径
通过食物、水、接触等途径传播 ，在污染的食物中繁殖，导致食 源性疾病。
危害
引发腹泻、呕吐、腹痛等症状， 严重时可导致脱水、电解质紊乱 、休克等严重后果。
食品中污染的来源
动物粪便
动物粪便中携带大肠埃希氏菌，污染水源和土壤， 进而污染食品。
05
结论与展望
当前存在的问题与挑战
检测方法的局限性
目前对于致病性大肠埃希氏菌的检测仍依赖于传统的培养 方法和生化鉴定，这些方法耗时长，且对于某些特殊菌株 的识别能力有限。
交叉污染与假阳性问题
在食品生产和处理过程中，致病性大肠埃希氏菌可能会与 其他细菌发生交叉污染，导致检测结果出现假阳性。
致泻大肠埃希氏菌检验
1目的本标准规定了食品中致泻大肠埃希氏菌的检验方法2适用范围本标准适用于食品和食物中毒样品中致泻大肠埃希氏菌的检验。
3 引用标准GB/T 4789.28-2003 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂4 设备和材料4.1 电子天平：0g～500g。
4.2 均质器。
4.3 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃。
4.4 恒温水浴箱：100℃，65℃～68℃，50℃。
4.5 显微镜10×～100×。
4.6 冰箱：0℃～4℃。
4.7 灭菌广口瓶：500ml。
4.8 灭菌锥形瓶：500ml，250ml。
4.9 灭菌试管：16mm×160mm、10mm×75mm。
4.10 灭菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、5ml（具0.1ml刻度）。
4.11 灭菌培养皿：直径90mm。
4.12 离心机。
4.13灭菌刀、剪子、镊子等。
5 培养基和试剂5.1 乳糖胆盐发酵管：按YJKZ/ZYW6-001中4.4规定。
5.2 营养肉汤：按YJKZ/ZYW6-074中4.01规定。
5.3 肠道菌增菌肉汤：按YJKZ/ZYW6-001中4.18规定。
5.5 伊红美蓝琼脂(EMB)：按YJKZ/ZYW6-001中4.3规定。
5.6 三糖铁琼脂(TSI)：按YJKZ/ZYW6-001中4.10规定。
5.7 糖发酵管(乳糖、鼠李糖、木糖和甘露醇)：按YJKZ/ZYW6-001中3.8规定。
5.8 赖氨酸脱羧酶试验培养基：按YJKZ/ZYW6-001中3.7规定。
5.9 尿素琼脂(pH7.2)：按YJKZ/ZYW6-001中3.5规定。
5.10 氰化钾(KCN)培养基：按YJKZ/ZYW6-001中3.6规定。
5.11 蛋白陈水、靛基质试剂：按YJKZ/ZYW6-001中3.4规定。
5.12 半固体琼脂：按YJKZ/ZYW6-001中4.11规定。
5.13 氧化酶试剂：按YJKZ/ZYW6-001中3.13规定。