氨基转换作用2009(精)
转氨作用实验报告
转氨作用实验报告竭诚为您提供优质文档/双击可除转氨作用实验报告篇一：实验六纸层析法观察转氨基作用实验报告实验六纸层析法观察转氨基作用【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用09救援一班第三大组李岚宇20XX222336室温：28°（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理。
2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。
（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。
氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。
各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸+丙氨酸谷氨酸+丙酮酸本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
纸层析属于分配层析。
以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。
有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。
由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：ALT物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。
（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/Lna2hpo4溶液81ml与0.2mol/Lnah2po4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。
3(:转氨作用实验报告)、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0nnaoh仔细调至ph7.4后,加磷酸盐缓冲液至100ml。
转氨基作用
转氨基作用在药物研发中的应用为治疗 氨基酸代谢疾病提供了新的思路和方法
• 药物设计和研发 • 疾病诊断和治疗 • 生物技术领域的研究和应用
转氨基作用在生物技术领域的应用
转氨基作用在生物技术领域具有广泛的应用前景
• 利用氨基酸转氨酶进行生物合成和生 物降解研究 • 利用氨基酸转氨酶进行基因工程和蛋 白质工程研究 • 利用氨基酸转氨酶进行生物传感器和 生物芯片研究
• 调节生物体内氨基酸代谢平衡 • 参与蛋白质合成和降解 • 为生物体提供能量
生物体内外环境因素对转氨基作用的影响多种多样
• 缺氧、pH值、温度等环境因素对转氨基作用速率产生影响 • 生物体内激素、神经递质等信号分子对转氨基作用速率产生影响
04
转氨基作用与代谢疾病
转氨基作用与氨基酸代谢疾病的关系
• 肾脏参与氨基酸的排泄和重 吸收 • 转氨基作用在肾脏内发生
转氨基作用与 肾脏疾病的关 系在医学研究 和临床应用中 具有重要作用
02
• 研究肾脏疾病的发病机制 • 诊断和治疗肾脏疾病 • 药物设计和研发
05
转氨基作用的研究与应用
转氨基作用的研究进展
转氨基作用的研究进展不断取得新突破
• 氨基酸转氨酶的结构和功能研究取得重要成果 • 转氨基作用调控机制研究取得重要进展 • 转氨基作用与疾病关系的研究不断深入
转氨基作用与氨基酸代谢疾病密切相关
• 氨基酸代谢疾病是由氨基酸代谢过程 中某些酶的缺陷引起的 • 转氨基作用是氨基酸代谢过程中的关 键步骤
转氨基作用与氨基酸代谢疾病的关系在 医学研究和临床应用中具有重要作用
• 研究氨基酸代谢疾病的发病机制 • 诊断和治疗氨基酸代谢疾病 • 药物设计和研发
转氨基作用与肝脏疾病的关系
转氨基作用 jxPPT精选文档
【实验讨论】
1．如果对照管在沸水中煮的时间不够充分， 会在层析结果中出现什么现象？ 2.比较谷氨酸和丙氨酸Rf值的大小,并说明 为什么? 3.你的结果中有谷氨酸吗?为什么?
25
若有不当之处，请指正，谢谢！
26
11
【实验原理】
茚三酮显色反应
茚三酮
H2O
茚三酮水合物
氨基酸 蓝紫色化合物
12
【实验仪器和试剂】
1、实验器材
培养皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水 浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格 尺
2、实验试剂
（1）0.01M pH7.4磷酸缓冲液
（2）0.1M丙氨酸溶液
（3） 0.01Mａ-酮戊二酸溶液酶：
GPT 谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase） GOT 谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminade）
所有转氨酶的辅酶都是维生素B6的磷酸 酯--- 磷酸吡哆醛。
5
【实验原理】
R1氨基酸 （ 丙氨酸）
丙氨酸
对照
与已知的标准的氨基酸Rf进行对比，指出条带所对应的氨 基酸，并根据结果解释转氨作用。
23
【注意事项】
1.匀浆器的正确使用 . 2.对照管的煮沸时间要充分 . 3.手不要在滤纸上乱摸 . 4.点样量不可过多，点样过程中应注意不要造成滤 纸污染（手和唾液都含有氨基酸）。 点样点直径 <0.5cm, 一般 点3-5 滴,前一滴干后, 才可点第二滴. 5．在滤纸上划线时只需用铅笔，不可用其它笔 6．烘烤时要注意明火。 7．点样时毛细管不能交叉污染。 8. 茚三酮的喷量要适中 .
实验：转氨基作用
——纸 层 析 法
氨基转换作用2009
材料
肌肉糜：取兔子肌肉1 肌肉糜：取兔子肌肉1g，置 研钵中， 研钵中，加0.9% 氯化钠溶 ml， 液3ml，在低温下研磨成细 离心5分钟（3000转 浆，离心5分钟（3000转/ ），弃去沉淀 弃去沉淀， 分），弃去沉淀，2只编号（1、2），向每个试管各加 、取试管 只编号 只编号（ 、 ），向每个试管各加0.5mL 1%谷氨 ），向每个试管各加 谷氨 酸溶液,0.5mL 1%丙酮酸溶液 丙酮酸溶液,0.5mL 0.1% KHCO3和 酸溶液 丙酮酸溶液 和 0.25mL 0.025%溴醋酸 混匀。然后分别加入肌肉糜提取液 溴醋酸, 溴醋酸 混匀。 0.5ml，混匀，将其中一试管立即在沸水浴中加热 分钟做 ，混匀，将其中一试管立即在沸水浴中加热2-3分钟做 对照。 对照。用试管帽塞住另一只试管 置于45℃水浴中保温40 置于 ℃水浴中保温 min。 。 2. 保温完毕，取出试管。向每只试管中各加 保温完毕，取出试管。向每只试管中各加2% HAc溶液 滴， 溶液4滴 溶液 再置于沸水浴中2min，使蛋白质完全沉淀。过滤收集滤液 再置于沸水浴中 ，使蛋白质完全沉淀。 或取1毫升在 管中高速离心1分钟 毫升在EP管中高速离心 或取 毫升在 管中高速离心 分钟
实验五 氨基转换作用
目的要求：了解转氨酶在代谢过程中的重要作用 目的要求：
学习应用纸层析法鉴定氨基转换反应
实验原理
体内α-氨基酸的 氨基在氨基转换酶的作 体内 氨基酸的α-氨基在氨基转换酶的作 氨基酸的 用下，移换至α-酮酸的过程 酮酸的过程， 用下，移换至 酮酸的过程，称氨基转换作 用。
转氨酶 (aminotransferase)
4. 当酚溶液扩展到直径约 当酚溶液扩展到直径约 直径约7-8cm时，取出滤纸。 时 取出滤纸。 铅笔画下酚溶液扩展边缘 用吹风机吹干。 画下酚溶液扩展边缘， 用铅笔画下酚溶液扩展边缘，用吹风机吹干。用喷 雾器喷以0.1%茚三酮溶液，再用热风吹干。用铅笔 茚三酮溶液， 雾器喷以 茚三酮溶液 再用热风吹干。 圈下各显色点。测定各显色点的Rf 并解释之。 圈下各显色点。测定各显色点的 值，并解释之。 注意: 当温度、滤纸质量和展开剂等都相同时， 注意 当温度、滤纸质量和展开剂等都相同时，对 于一个化合物比移值Rf是一个特有的常数 于一个化合物比移值 是一个特有的常数 。
实验六 纸层析法观察转氨基作用 实验报告
实验六纸层析法观察转氨基作用【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用09救援一班第三大组李岚宇2009222336室温：28°（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理。
2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。
（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。
氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。
各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸+ 丙氨酸−−→←ALT谷氨酸+ 丙酮酸本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
纸层析属于分配层析。
以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。
有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。
由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。
（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml与0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。
3、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0 N NaOH仔细调至pH7.4后, 加磷酸盐缓冲液至100ml。
2009年厦门大学生物化学考研真题_真题-无答案
2009年厦门大学（生物化学）考研真题(总分158,考试时间90分钟)1. 填空题填空题请完成下列各题，在各题的空处填入恰当的答案。
1. 尿素循环与三羧酸循环是通过中间产物______和______的代谢联系起来。
2. 体内硫酸根的主要来源是______。
3. 在体内具有氧化还原作用的最小肽称为______。
4. 活性葡萄糖是指______。
5. 当两条不同来源的DNA或RNA链之间存在______时，在一定条件下形成双螺旋分子，这个过程称为______。
6. 在天然的氨基酸中，含硫的氨基酸有______、______两种。
7. 酶的反竞争性抑制剂使酶的Vmax______，Km______。
8. 可用于测量生物样品中核酸含量的元素是_______。
9. 糖代谢中间产物中含有高能磷酸键的是_______。
10. 糖类、脂类、氨基酸氧化分解时，进入三羧酸循环的主要物质是_______。
11. 在各种RNA中，_____含量最多，______寿命最短，_____含稀有碱基最多。
12. 在球蛋白分子外部主要是_____基团，分子内部主要是______基团。
13. 代谢物在细胞内的生物氧化与在体外燃烧的主要区别是_______、_______和_______。
14. 氨基酸的转氨基作用是指在转氨酶的催化下，_______和_______之间的氨基转移作用。
15. 嘌呤碱在不同生物的分解终产物不同，人类的是_______，哺乳类动物则分解为_______，硬骨鱼产生_______，海洋无脊椎类动物最终形成_______。
16. 对Michaelis型的酶来说，如果要求酶促反应v=10％Vmax，则[s]应为Km的倍数是______。
17. 谷氨酸的pK1=2．19，pK2=9．67，pKR=4．25，其等电点为______。
2. 单项选择题单项选择题下列各题的备选答案中，只有一个是符合题意的。
1. 下列物质中哪种不是糖胺聚糖?( )A. 果胶B. 肝素C. 透明质酸D. 硫酸软骨素2. 下列脂类化合物中哪个含有胆碱基?( )A. 磷脂酸B. 神经鞘磷脂C. 神经节苷脂D. 葡萄糖脑苷脂3. 下列氨基酸中，哪个含有吲哚环?( )A. 组氨酸B. 色氨酸C. 半胱氨酸D. 精氨酸4. 典型的蛋白质α一螺旋结构是( )。
浙大生化实验报告氨基转换反应
浙大生化实验报告氨基转换反应实验目的：1. 了解尿素循环和氨基酸代谢的概念。
2. 掌握氨基转换反应的基本原理和方法。
3. 熟悉氨基转换反应的实验步骤和操作技巧。
实验原理：氨基转换反应是将氨基酸中的氨基转化为尿素排除体外的过程。
氨基酸进入肝脏后，通过转氨酶作用，将其氨基转移至α-酮酸中，生成相应的α-氨基酸。
肝细胞内存在尿素循环，即氨酸通过一系列酶的作用，转化为尿素，最后排出体外。
这一过程中，合成尿素的酶有五种，其中肝素合成酶（OTC）是尿素循环的速率限制酶。
在氨基转换反应中，尿素循环起到了重要的作用，通过测定血中尿素和谷草转氨酶（AST）的活性，可以判断肝脏的状态和氨基酸代谢状况。
实验步骤：1. 取适量的血清置于试管中，记录试管编号。
2. 分别在不同的试管中加入不同的试剂：试管A：加入5μl生理盐水。
试管B：加入2μl L-谷氨酰胺。
3. 在每个试管中加入10μl 的反应液，混匀后放置于37℃水浴中反应1小时。
4. 在每个试管中加入40μl 的去离子水，混匀后加入2ml 三氯醋酸（TCA）沉淀蛋白质。
5. 试管中的混合液混匀后，离心5min，将上清液转移到新的试管中，加入40μl 的1.5%四氯化碳（TCB）、200μl 1%吲哚丙酮、200μl 2.5%氨水，混匀后放置于室温下反应10min。
6. 在每个试管中加入2ml 甲醇，混匀后离心5min。
7. 将上清液转移到新的试管中，加入1ml 1.5%四氯化碳（TCB）。
8. 在每个试管中加入等量的去离子水，混匀后放入比色皿中，使用比色计测定各试管中产生的7-羟-库欣胆酸的吸收值。
实验结果：试管编号反应液产生的7-羟-库欣胆酸吸收值A 生理盐水 X实验分析：通过测定各试管中产生的7-羟-库欣胆酸吸收值，可以判断氨基转换反应的情况，以及肝脏的状态和氨基酸代谢状况。
通过比较试管B和试管C的吸收值，可以得出氨基酸代谢是否正常。
如果试管B的吸收值比试管C高，则说明肝脏合成尿素的能力正常，代谢氨基酸的能力也正常。
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2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。
（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。
氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。
各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸 + 丙氨酸谷氨酸 + 丙酮酸本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
纸层析属于分配层析。
以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。
有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。
由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示： ????ALT物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。
（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/L Na2HPO4溶液81ml与0.2mol/L NaH2PO4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。
实验十二转氨作用(精)
实验十二 转氨作用【实验目的】1．通过实验掌握水平方向滤纸层析原理和技术 2．了解转氨作用过程。
【实验原理】转氨基作用是由转氨酶（氨基转移酶）催化的，在这个反应中，α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间交换，α-氨基酸转变成相应的α-酮酸，α-酮酸变成新的一种α-氨基酸。
转氨基作用是一种可逆反应。
每个转氨基反应均由专一的转氨酶所催化，在不同的生物有机体中均有转氨酶分布。
本实验是将丙氨酸和α-酮戊二酸与肝匀浆一起水浴反应，肝中的丙氨酸氨基转移酶（ALT ，又称谷丙转氨酶GPT ）含量丰富，该酶可将丙氨酸的氨基转移给α-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。
利用圆盘纸层析鉴定谷氨酸的存在，并且验证组织中的转氨作用。
在肝脏谷丙转氨酶(GPT)催化的转氨基作用，反应方程式如下：CHCOOH CH 2NH 2CH 2COOH ++COCOOH CH 3CHCH 3COOH NH 2CCOOH CH 2OCH 2COOH 谷氨酸丙氨酸丙酮酸α‐酮戊二酸【实验材料】1． 实验器材培养皿；表面皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格尺。
2． 实验试剂⑴ 0.01M pH7.4磷酸缓冲液：0.2MNa 2HPO 4溶液81ml , 0.2MNaH 2P04溶液19ml 混匀，蒸馏水稀释20倍。
⑵ 0.1M 丙氨酸溶液：称取丙氨酸0.891克先溶于少量0.01MpH7.4磷酸缓冲液中，以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑶ 0.01M ａ-酮戊二酸溶液：称取ａ-酮戊二酸1.461克先溶于少量0.01M pH7.4磷酸缓冲液中，用1M Na0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑷ 0.1M 谷氨酸溶液：称取谷氨酸0.735克先溶于少量0．01M pH7.4磷酸缓冲液中， 以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸缓冲液加至100ml 。
2009年厦门大学(生物化学)考研真题
2009年厦门大学（生物化学）考研真题(总分：158.00，做题时间：90分钟)一、填空题(总题数：18，分数：36.00)1.填空题请完成下列各题，在各题的空处填入恰当的答案。
（分数：2.00）__________________________________________________________________________________________解析：2.尿素循环与三羧酸循环是通过中间产物______和______的代谢联系起来。
（分数：2.00）__________________________________________________________________________________________正确答案：(正确答案：精氨琥珀酸草酰乙酸)解析：3.体内硫酸根的主要来源是______。
（分数：2.00）__________________________________________________________________________________________正确答案：(正确答案：半脱氨酸代谢)解析：4.在体内具有氧化还原作用的最小肽称为______。
（分数：2.00）__________________________________________________________________________________________正确答案：(正确答案：谷胱甘肽)解析：5.活性葡萄糖是指______。
（分数：2.00）__________________________________________________________________________________________正确答案：(正确答案：葡萄糖-6-磷酸)解析：6.当两条不同来源的DNA或RNA链之间存在______时，在一定条件下形成双螺旋分子，这个过程称为______。
转氨基作用
纸层析
丙 1
谷
2
滤纸条沿纵 轴捻成灯芯
（四）茚三酮显色
展层完成后，热风吹干滤纸。氨基酸与茚三酮反 应产生兰紫色物质。 画出斑点位置，计算Rf值
原点到层析点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
Rf＝
茚三酮显色
丙 1
谷
2Leabharlann 意事项1. 为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操 作时带手套。 2. 重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了 茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。
液体
分子大小
3、分配层析
分配系数：溶质在互不相溶的两相中溶解度不同， 在终点时达到一种平衡，其比值为一个常数，即分 配系数（α）。
α=
固定相内溶质的浓度 流动相内溶质的浓度
是一种连续抽提法。一种溶剂通常是被结合在固定 的惰性支持物（柱、膜、纸）上的水，另外一相由 流动的被水饱和的有机溶剂构成，它流过固定相。 如果某一混合物的各组分在这两相中的分配系数有 足够的差异，它们就可以被分离。
Rf＝
原点到层析点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层 析滤纸的质量和层析温度等因素有关。
仪器、材料和试剂
1、实验仪器
(1) 匀浆器。 (2) 离心管（1.5ml）和离心机（台式） (3) 37度恒温水浴 (4) 毛细玻璃管 (5)层析滤纸（Whatmann 滤纸） (6)吹风机 (7)培养皿 (8)手套
4、纸层析
纸层析是最简单的液——液相分配层析。 纸层析以滤纸为惰性支持物，滤纸纤维上 的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定 相，有机溶剂为流动相。有机相流经固定 相支持物时，与固定相之间连续抽提，使 物质在两相间不断分配而得到分离。
实验十二转氨作用(精)
实验十二 转氨作用【实验目的】1．通过实验掌握水平方向滤纸层析原理和技术 2．了解转氨作用过程。
【实验原理】转氨基作用是由转氨酶（氨基转移酶）催化的，在这个反应中，α-氨基酸的氨基与α-酮酸的酮基之间交换，α-氨基酸转变成相应的α-酮酸，α-酮酸变成新的一种α-氨基酸。
转氨基作用是一种可逆反应。
每个转氨基反应均由专一的转氨酶所催化，在不同的生物有机体中均有转氨酶分布。
本实验是将丙氨酸和α-酮戊二酸与肝匀浆一起水浴反应，肝中的丙氨酸氨基转移酶（ALT ，又称谷丙转氨酶GPT ）含量丰富，该酶可将丙氨酸的氨基转移给α-酮戊二酸，产生丙酮酸和谷氨酸。
利用圆盘纸层析鉴定谷氨酸的存在，并且验证组织中的转氨作用。
在肝脏谷丙转氨酶(GPT)催化的转氨基作用，反应方程式如下：CHCOOH CH 2NH 2CH 2COOH ++COCOOH CH 3CHCH 3COOH NH 2CCOOH CH 2OCH 2COOH 谷氨酸丙氨酸丙酮酸α‐酮戊二酸【实验材料】1． 实验器材培养皿；表面皿；滤纸；匀浆器；试管；试管架；恒温水浴锅；毛细管；移液管；喷雾器；剪刀；铅笔；格尺。
2． 实验试剂⑴ 0.01M pH7.4磷酸缓冲液：0.2MNa 2HPO 4溶液81ml , 0.2MNaH 2P04溶液19ml 混匀，蒸馏水稀释20倍。
⑵ 0.1M 丙氨酸溶液：称取丙氨酸0.891克先溶于少量0.01MpH7.4磷酸缓冲液中，以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑶ 0.01M ａ-酮戊二酸溶液：称取ａ-酮戊二酸1.461克先溶于少量0.01M pH7.4磷酸缓冲液中，用1M Na0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸盐缓冲液加至100ml 。
⑷ 0.1M 谷氨酸溶液：称取谷氨酸0.735克先溶于少量0．01M pH7.4磷酸缓冲液中， 以1MNa0H 仔细调节至pH7.4后，用磷酸缓冲液加至100ml 。
转氨基作用(精)
0.5 37℃ 10min 1.0 0.5 1.5
0.5 沸水浴 10min 1.0 0.5 1.5
置37℃水浴中40min，保温完毕，立即将测定管放入沸水中 10min以终止反应，取出冷却后。
3、层析：
①
点样：Ala；Glu；测定管；空白管；（滤纸的 处理，点样3-4次）
②
展层：约25min后，溶剂前缘距滤纸边缘约1cm 时即可取出，用吹风机吹干。
转氨基作用与
氨基酸纸层析
咸宁学院医学院生化教研室
• 一、目的要求：
验证氨基酸的氨基移换作用
了解纸层析基本原理。 初步掌握利用纸层析法分离及鉴定氨基酸的技 术（包括：点样、展层、显色等技术）。
• 二、实验原理：
1、转氨基作用： Ala+α-酮戊二酸
ALT
丙酮酸+Glu
2.层析法
层析法又称色谱法（Chromatography），是广 泛应用的一种生物化学技术。层析法是利用混合物各 组分物理化学性质（如溶解度、吸附能力、电荷和分 子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不 同区域，借此将各组分分离。 层析系统有两个相，一个相称为固定相；另一
个相称为流动相。由于各组分受固定相的阻力和受流
动相的推力影响不同，各组分移动速度各异，从而使
各组得到分离。
按两相所处的状态分类
流动相 液 体 气 体
方法名称
液相层析法（LC）
气相层析法（GC）
固定相
固
体
液
体
固
体
液
体
分离原理
吸
附
分
配
吸
附
分
配
方法名称
液-固层析法 （LSC）
氨基的功效与作用_氨基的副作用
氨基*的功效与作用_氨基*的副作用
引导语：氨基*是人体必需的营养成分，它对我们人体都有哪些作用和功效呢?以下是小编收集整理的关于氨基*的功效与作用相关内容，欢迎阅读参考!
氨基*的功效与作用：
1、消除疲劳、保持精力旺盛、改善亚健康状态
*氨*能缓解压力、避免沮丧、焦虑等状态，稳定情绪、保持旺盛精力。
2、改善睡眠质量
*氨*有促进睡眠的效果，有"天然安眠*"的美誉。
3、提高免疫力
氨基*是构*体免疫系统的基本材料，氨基*的数量和质量，与免疫系统功能强弱密切相关，*氨*、苯*氨*、赖氨*等是生成抗体的所必需的原材料，补充全面均衡的氨基*，是提高人体免疫力的关键。
4、促进病后、术后恢复
支链氨基*(亮氨*异亮氨*和缬氨*)可以加快病人的康复速度。
氨基*的副作用
作为机体内第一营养要素的蛋白质，它在食物营养中的作用是显而易见的，但它在人体内并不能直接被利用，而是通过变成氨基*小分子后被利用的。
即它在人体的胃肠道内并不直接被人体所吸收，而是在胃肠道中经过多种消化酶的作用，将高分子蛋白质分解为低分子的多肽或氨基*后，在小肠内被吸收，沿着肝门静脉进入肝脏。
一部分氨基*在肝脏内进行分解或合成蛋白质;另一部分氨基*继续随血液分布到各个组织器官，任其选用，合成各种特异*的组织蛋白质。
起氮平衡作用
每天摄取的氨基*个一定要和自己的饮食适当，如果摄入少了达不到补充的效果，但是如果摄入过多就会产生副作用对身体也是不好的。
多种氨基**理学作用
氨基*在婴幼儿与*体内有不同的代谢作用。
使用普通的氨基*输液，
婴幼儿体内苯*氨*羟化酶的活*低，易产生高苯*氨*血症。
氨基酸转氨作用
氨基酸转氨作用嘿，朋友！今天咱们来聊聊这个神奇的“氨基酸转氨作用”。
你知道吗？氨基酸在咱们身体里可像是一群活泼的小精灵，到处蹦跶，发挥着各种各样重要的作用。
而这其中的转氨作用，那更是妙不可言！转氨作用就好比是一场奇妙的舞蹈，氨基酸们在这个舞台上交换着彼此的“舞伴”。
原本和这个结合的，突然就换成了另一个。
听起来是不是有点神奇？想象一下，咱们的身体就像是一个巨大的工厂，而氨基酸就是工厂里的重要原材料。
转氨作用呢，就是负责调配这些原材料的关键环节。
如果没有它，这个工厂可就乱套啦！它到底是怎么一回事呢？简单来说，就是一种氨基酸的氨基转移到一种酮酸上，生成新的氨基酸和新的酮酸。
这就好像是你把手中的苹果递给了我，我把我手里的香蕉递给了你，咱俩都有了新的收获。
比如说，谷氨酸把它的氨基给了丙酮酸，于是就产生了丙氨酸和α-酮戊二酸。
这是不是很有意思？那氨基酸转氨作用对咱们身体有啥重要性呢？这可太重要啦！它能帮助咱们合成非必需氨基酸。
啥叫非必需氨基酸？就是身体自己能合成，不一定要从食物里获取的那些氨基酸。
这就像是家里有个自己能生产东西的小作坊，多方便啊！而且呀，转氨作用还和咱们身体的能量代谢有关系呢！通过它产生的一些物质，可以进一步参与到能量的产生过程中，为咱们的身体活动提供动力。
这不就像是给身体这个大机器不断加油，让它能跑得更快更稳嘛！要是这个转氨作用出了问题，那可就麻烦啦！就好像工厂的生产线卡住了，会导致一系列的毛病。
可能会影响到蛋白质的合成，让咱们身体的修复和生长变得困难。
也可能会让代谢紊乱，身体的平衡被打破，各种不舒服的症状就可能找上门来。
所以说，氨基酸转氨作用虽然听起来有点复杂，但它可是咱们身体里不可或缺的一部分。
咱们得好好爱护自己的身体，让这些小精灵们能欢快地跳着它们的舞蹈，为咱们的健康服务！总之，氨基酸转氨作用就像是身体里的一场魔法秀，虽然看不见摸不着，但却实实在在地影响着咱们的生活和健康。
咱们得重视它，了解它，让身体这个神奇的工厂一直正常运转下去！。
植物体内转氨基作用
取3支干燥洁净的试管编号，按下表分别 加入试剂和酶液（单位ml）。
管号
0.1Mα-酮戊 二酸溶液
1
0.5
2
0.5
3
-
0.1M丙氨 0.5
磷酸缓冲液 (pH7.5)
1.5 2.0 2.0
试管摇匀后，置于37℃水浴30min，取出后 各加3滴30%三氯乙酸溶液终止酶促反应，再转 入沸水浴处10min，使蛋白质完全变性沉淀，冷 却后（离心或过滤，取上清液或滤液）备用。
（三）层析鉴定
1.饱和：将盛有约10ml扩展剂的培养皿置于密闭 的层析缸内，使缸内空气饱和。
2.标记：层析滤纸一张作标记。离底边2cm处用 铅笔轻轻划一条与底边平行的线，并等距离地 在直线上确定5个点作为点样原点。
3.点样：毛细管吸取上述上清液或滤液及谷氨酸、 丙氨酸标准液分别点样，反应液点5～6滴，标 准试剂液点加2滴 ，干后重复点一次，直径最 大不超过3mm。
本实验反应体系中的底物为丙氨酸和α酮戊二酸，将其与绿豆芽匀浆制备的酶液一起 保温，在植物转氨酶的催化下会产生丙酮酸与 谷氨酸。利用纸层析法鉴定出谷氨酸的存在， 则证明植物体内具有转氨基作用。
谷丙转氨酶
【实验材料和主要仪器、试剂】 1.实验材料
绿豆芽
2.实验仪器
研钵、试管、移液管、恒温浴箱、层析缸、层 析纸、毛细管、吹风机
4.展层：点样后，用线将滤纸绑成筒状（两边 不能接触），直立于培养皿中（点样面朝外， 点样端朝下），盖上层析缸盖展层。当溶剂扩 展至滤纸上沿约1厘米时，取出滤纸，用铅笔 描出溶剂前沿界线，吹干。
5.显色：用喷雾器均匀喷上0.5%茚三酮乙醇溶 液，热风吹干即可显出各层析斑点。
6.测量色谱图中的各色素斑的Rf值，进而比较 酶反应液与氨基酸标准品，得出结论。
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2.点样
用毛细管分别吸取以上两种滤液及标准谷氨 酸、标准丙氨酸，依次点在标明号码的原点处， 以吹风机吹干，再重新点样2次。注意斑点不能太 大，一般直径约2mm为宜。
谷丙转氨酶
L－谷氨酸
丙酮酸
α-酮戊二酸
L－丙氨酸
由于谷氨酸、丙酮酸在肌肉糜中可循其他代谢途径分解和转 化，影响氨基转换过程的观察，因此在反应体系中添加溴乙酸以 抑制谷氨酸和丙酮酸的其他代谢过程。
试剂和器材
试剂 1%谷氨酸（中性）；1%丙酮酸钠 （中性）；0.1%KHCO3；0.025％ 溴醋酸（中性）；2% 醋酸；0.1% 标准谷氨酸；0.1%标准丙氨酸。
操作方法
一、转氨酶作用
1、取试管2只编号（1、2），向每个试管各加0.5mL 1%谷氨 酸溶液,0.5mL 1%丙酮酸溶液,0.5mL 0.1% KHCO3和 0.25mL 0.025%溴醋酸, 混匀。然后分别加入肌肉糜提取液 0.5ml，混匀，将其中一试管立即在沸水浴中加热2-3分钟做 对照。用试管帽塞住另一只试管 置于45℃水浴中保温40 min。 2. 保温完毕，取出试管。向每只试管中各加2% HAc溶液4滴， 再置于沸水浴中2min，使蛋白质完全沉淀。过滤收集滤液 或取1毫升在EP管中高速离心1分钟
转氨酶参与氨基酸的分解和合成，是人体代谢过程 中必不可少的“催化剂”； 以谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）最为 重要。 GPT 主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中，在肝脏中 活力最大。GPT升高是肝脏功能出现问题的一个重 要指标。
本实验是将谷氨酸与丙酮酸在肌肉糜中 谷氨酸－丙酮酸氨基转换酶（简称谷－丙转 氨酶）的作用下进行氨基转化反应，然后用 纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
材料
展开剂：酚饱和水溶液：2份酚加1 份水混合放入分液漏斗，振荡。静 置24hr后分层，取下层酚置瓶中备 用；通风橱里
显色剂：0.1%茚三酮正丁醇溶液。
肌肉糜：取兔子肌肉1g，置 研钵中，加0.9% 氯化钠溶 液3ml，在低温下研磨成细 浆，离心5分钟（3000转/ 分），弃去沉淀，得肌肉糜 提取液。
11月14日 11月15日 11月21日 11月22日
周二晚上做实验的所有同学。104人 周四晚上做实验的所有同学。100人 周五下午做实验的所有同学。98人 周一下午B类（2）实验的所有同学。88人
备注：1.如最后一次实验的同学，本次实验报告隔一周后 由班长 代收，集中送到生物楼4—316室。 2.B类（2）实验同学的课程，第11周恢复正常上 课时间，即11月23日进行质粒DNA的抽提实验（实验 52）。
3.另取一条滤纸卷成实心筒状，直径约2mm,将此小筒插入 滤纸中心小孔（不可突出纸面之上），使层析滤纸通过此小 筒与酚溶液相连。然后将滤纸平放在盛饱和酚的培养皿上。 另取一培养皿盖在滤纸上，此时酚溶液即由滤纸中心孔向四 周扩散。
4. 当酚溶液扩展到直径约7-8cm时，取出滤纸。 用铅笔画下酚溶液扩展边缘，用吹风机吹干。用喷 雾器喷以0.1%茚三酮溶液，再用热风吹干。用铅笔 圈下各显色点。测定各显色点的Rf 值，并解释之。
注意: 当温度、滤纸质量和展开剂等都相同时，对 于一个化合物比移值Rf是一个特有的常数 。
三、计算公式
Rf＝原点至斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离
思考题
1. 什么叫转氨作用？ 2. 根据所学理论阐明转氨作用在蛋白质的合成与分解及糖、 脂肪代谢中有何作用？
重要通知
第十周的蛋白质分离纯化大实验安排在周末进行，第九周 周末开始。实验时间08：30~17：00，中午可以轮换去 吃午餐。实验具体日期及班级安排如下：
实验五 氨基转换作用
目的要求：了解转氨酶在代谢过程中的重要作用
学习应用纸层析法鉴定氨基转换反应
实验原理
体内α-氨基酸的α-氨基在氨基转换酶的作 用下，移换至α-酮酸的过程，称氨基转换作 用。
转氨酶 (aminotransferase)
转换酶中的一类。催化氨基酸和a-酮酸 或 醛酸之间的氨基转换反应，生成与原来的a酮酸或醛酸相应的a-氨基酸或ω- 氨基酸，原 来氨基酸转变成相应的酮酸。转氨酶催化的 反应都是可逆的