萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究

萌发小麦种子中淀粉酶酶学性质研究（东北农业大学，生命科学学院，黑龙江省哈尔滨市150030）

摘要：

酶是酶是一种生物催化剂，它具有催化剂属性，同是也具有一些无机催化剂所不具有的特性。催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。是生物催化剂，能通过降低反应的活化能加快反应速度，但不改变反应的平衡点。本实验通过利用淀粉酶水解还原糖，还原糖能使3，5-二硝基水杨酸还原，生成棕色的3-氨基-5硝基水杨酸。淀粉酶活力与还原糖的量成正比，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位质量样品在一定时间内生成还原糖的量表示酶活力。以淀粉在碘液中显蓝色性质，探究酶活性影响因素，常见的影响因素有：温度 pH 活性剂和抑制剂等。

Abstract:Enzyme is a biological catalyst is an enzyme, the catalyst having the property, the same also has some inorganic catalysts do not have the characteristics. Proteins catalyze specific chemical reactions,RNA or a composite thereof. Are biological catalysts,by reducing the activation energy of the reaction to accelerate the reaction rate, but does not change the equilibrium reaction. In this study, the use of enzymatic hydrolysis of starch sugar, sugar makes 3,5-dinitrosalicylic acid reduction ,a brown 3-amino-nitro-salicylic acid.Proportional to the amount of amylase activity and reducing sugars,measuring the amount of amylase in starch sugar produced by colorimetry ,a unit mass of the sample at the certain time.

关键词：

淀粉酶活性温度 PH 激活剂和抑制剂

引言：

新陈代谢是生命活动的基础，是生命活动最重要的特征。而构成新陈代谢的许多复杂而有规律的物质变化与能量变化，都是在酶催化下进行的。生物的生长发育、繁殖、遗传、运动、神经传导等生命活动都与酶的催化过程紧密相关，可以说，没有酶的参与，生命活动一刻也不能进行。酶是细胞产生的，受多种因素调节控制的具有催化能力的生物催化剂，与一般催化剂比较有以下不同点：酶易失活、酶具有很高的催化效率、酶具有高度专一性、酶活性受到调节和控制。而调节和控制又包括调节酶浓度、抑制剂和激活剂的调节等。[1]

按照淀粉酶水解淀粉的作用方式，可以分为α-淀粉酶、β-淀粉酶、异淀粉酶和麦芽糖酶四种类型。实验证明，当谷类种子萌发时，两类淀粉酶（α，β型）都存在，淀粉酶总酶

活性随种子萌发将升高，有利于淀粉被降解为植物生长发育所需的葡萄糖。许多微生物包括细菌、真菌和酵母都能生产淀粉酶，这些廉价的淀粉酶来源，已广泛应用于食品、医药、饲料和环保等生产实践中。［2］

酶活力是指酶催化某一化学反应的能力，酶活力的大小可以在一定条件下所催化的某一化学反应的反应速率来表示。酶催化的反应速率越大，酶的活力越高；反应速率越小，酶的活力zx]越低，所以测定酶的活力就是侧订酶促反应速率。[3]通过两种方法可以进行酶活力的测定，其一测定完成一定量的反应时间，其二测定单位时间内的酶催化的反应量。而本实验所采用的是方法二，测定5min内反应量。酶活力的测定方法有分光光度法、荧光法、同位素测定方法、电化学方法，还有一些适用于个别酶的方法，如旋光法、量气法、量热法和层析法等。本实验采用的是分光光度法。

1 材料与方法

1.1材料

实验材料为小麦。

1.2主要实验仪器及试剂

离心机分光光度计容量瓶研钵

电炉恒温水浴离心管

标准麦芽糖溶液（1mg/ml）

3，5-二硝基水杨酸 0.1 mol/l的柠檬酸缓冲液 1% 淀粉溶液等

1.3实验方法

1.3.1麦芽糖标准曲线的制作

取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表13-1加入试剂

管号 1 2 3 4 5 6

麦芽糖标准液/ml 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0

蒸馏水/ml 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0

麦芽糖含量/ml 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0

3,5-二硝基水杨酸/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0

光密度值0 0.044 0.101 0.158 0.215 0.273

摇匀，置沸水浴煮沸5分钟。取出后流水冷却，加蒸馏水定容只20ml. 以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定光密度。以麦芽糖含量为横坐标，光密度纵坐标，绘制标准曲线。实验数据的记录如表13-2

麦芽糖含量0 0.4 0.8 1.2 1.6 2

光密度值0 0.044 0.101 0.158 0.215 0.273

标准曲线绘制如图13-3

1.3.2淀粉酶粗酶液的提取

称取2g萌发3d的小麦种子，置于研钵中，加入少量石英砂和2mL蒸馏水，研磨匀浆。将匀浆到入刻度试管中，定容至25mL。提取液在室温下放置提取15-20min，每隔数分钟搅动一次，使其充分提取。然后在4000r/min转速下离心10min，将上清液倒入一个干净的试管中，即为淀粉酶粗酶液。［3］

1.3.3酶活力的测定

取3支干净试管，编号，按表13-4加入试剂