维生素B12注射液含量测定 ppt课件
8维生素B12注射液的定性鉴定及含量
实验原理
维生素B12注射液含量测定： 标准维生素B12的 E1cm 361nm 207
1%
中国药典2015年版规定：本品维生素B12的灭菌水溶 液，含维生素B12应为标示量的90.0%-110.0%。
实验步骤
1.
参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。 接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤
2. 取维生素B12注射液1支（1mL:0.5mg），全部转入
25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，
置于1cm石英比色皿中以蒸馏水作参比溶液， 在波长230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次 吸光度，并记录每次测量的吸光度A值，
在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间隔2nm 测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最大吸收峰 位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551，
试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
实验步骤
3.
依据在361nm处测得的吸光度值，计算
试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的
2018/12/11
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色
结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
实践四、维生素B12的含量测定
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三、实验原理
结构特点：含钴的卟啉类化合物 临床用途：控制恶性贫血 性状：红色晶体物质
在361nm有最大吸收。 可以采用紫外分光光度法测 定含量。
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三、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验原理
吸光系数法
1、配制待测溶液，计算配制浓度的百分浓度Cx；
2、以溶剂作为空白参比，测定待测溶液的吸光度Ax；
3
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数据处理
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
E1% 1cm（样） 207
=
Ax
100%
0.0025 207
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3、计算待测溶液的吸收系数
E = 1% 1cm（样品）
Ax Cx
4、计算含量
w%
E1% 1cm（样品）
E1% 1cm（标准）
已知E11c%m（标）=207
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四、实践步骤
• 1、维生素B12样品溶液的配制：
准备0.5mg/ml 注射液
取5.00ml
定容至100ml
C样
0.5mg/ml 5.00ml 100.00ml
=0.0025g/100ml
• 2、以纯化水为参比，测定样品溶液的吸光度
• 3、计算样品含量
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四、实践步骤
• 3、计算样品含量
E = 1% 1cm（样）
Ax Cxl
=
Ax 0.0025 1
%
EE1111cc%%mm（ （样 标） ）100%=
维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析
实验十六维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析一、实验目的1．掌握定性鉴别的方法和吸光系数法的定量方法；2．熟悉紫外分光光度计的操作方法；3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。
二、实验原理维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。
维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。
通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液其标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500μg等规格。
维生素B12的水溶液在278n m±1nm、361nm±1nm与550nm±1nm三波长处有最大吸收。
药典规定，在361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70～1.88。
361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度比值在3.15～3.45范围内，这为定性鉴别E值（207）为测定注射液的依据。
药典规定，以361nm±1nm处吸收峰的百分吸光系数%11cm实际含量的依据。
三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、石英吸收池、容量瓶、吸量管。
2．试样维生素B12注射液。
四、实验内容与步骤1．试样溶液制备精密吸取维生素B12注射液样品（100μg/mL）3.0mL，置于10mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得试样溶液。
2．测定将试样稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在278nm、361nm波长处与550nm 波长处分别测定吸光度。
五、数据处理1．定性鉴别根据测得的278nm、361nm与550nm波长处的吸光度数据，计算该两两波长处的吸光度比值，并与药典规定的幅度值比较，进行维生素B 12的鉴别。
2．吸光系数法将361nm 波长处测得的吸光度A 值与48.21相乘，即得试样稀释液中每毫升含维生素B 12的微克数。
按照百分吸光系数的定义，每100mL 含1g 维生素B 12的溶液（1％）在361nm 处的吸光度应为207。
《维生素测定》课件
维生素B测定
维生素B是维持身体健康所必需的重要营养素。我们将介绍测定维生素B的方 法和操作步骤，并讨论实验注意事项以及解读和应用结果。
维生素D测定
维生素D在钙和磷的代谢中起着重要作用。我们将学习测定维生素D的方法和 操作步骤，并探讨实验注意事项以及解读和应用结果。
维生素测定的应用
除了在科学研究中的应用，维生素测定技术还在食品、保健品的检测以及临床医学中得到广泛应用。我 们还将展望维生素测定技术的发展和应用前景。
《维生素测定》PPT课件
通过本课件，我们将深入探讨维生素测定的方法和重要性，并了解各种维生 素的测定技术和应用。
么是维生素？
维生素是人体所需的有机化合物，可分为水溶性和脂溶性两类。我们将讨论 它们的定义、分类以及人体对维生素的需求。
维生素测定的意义
维生素含量的检测对于我们了解食物的营养成分非常重要。维生素缺乏或过量对健康有危害，我们将探 究这些危害。
维生素测定的方法
化学法
使用化学方法可以准确测定维生素的含量。我们将讨论这些方法的技术原理、操作步骤，以及它们的优 缺点。
生物学法
生物学法也是一种常用的测定维生素的方法。我们将介绍它的技术原理、操作步骤，以及它的优缺点。
维生素A、C、E的测定
我们将学习测定维生素A、C、E的方法和操作步骤，并探讨实验注意事项以 及解读和应用结果。
维生素B12的教学PPT
03
维生素B12缺乏的症状和影响
维生素B12缺乏的症状
消化系统症状
可能出现食欲不振、腹胀、腹泻 、便秘等症状。
精神症状
可能出现抑郁、焦虑、易怒等症 状。
01
02
贫血
由于红细胞生成减少，可能出现 贫血症状，如乏力、头晕等。
03
04
神经系统症状
可能出现记忆力减退、反应迟钝 、手足麻木、无力等症状。
维生素B12缺乏对神经系统的影响
维生素B12是红细胞形成的必需 营养素，有助于维持红细胞的正 常形态和功能，预防贫血和相关 疾病。
02
缺乏维生素B12可能导致巨幼细 胞性贫血，表现为贫血、乏力、 头晕等症状，严重时可能导致神 经系统受损。
维持神经系统健康
维生素B12是神经系统正常运作的重 要物质，参与神经递质的合成和代谢 ，有助于维持神经元的正常功能。
维生素B12的检测方法
血液检测
通过抽取静脉血液样本，检测血 清或血浆中的维生素B12水平。
尿液检测
检测尿液中维生素B12的排泄量， 但这种方法不如血液检测准确。
微生物培养
利用某些细菌对维生素B12的依赖 性进行检测，但这种方法较为繁琐。
维生素B12缺乏的诊断标准
血清维生素B12水平低于200 pg/mL：一般认 为这是维生素B12缺乏的阈值。
缺乏维生素B12可能导致神经系统病 变，如记忆力减退、情绪异常、肢体 麻木等症状，严重时可能导致痴呆和 神经性疾病。
参与蛋白质代谢
维生素B12在蛋白质代谢中发挥重要作用，参与氨基酸的合成和分解，影响身体 的生长和发育。
缺乏维生素B12可能导致蛋白质代谢紊乱，影响身体的正常生理功能，如影响伤 口愈合、免疫功能等。
VB12注射液鉴别实验教学
2、定量分析
样品名称 所用仪器 型号 测定序号 吸光度A 吸光度 平均值 结果：含量= 1 检验日期 检测波长 2 3
数据处理
计算样品标示量（含量）
对照样品标示量%=90%-110%，合格
结果讨论
1、试比较用标准曲线法及吸收系数法定量的优 缺点。
2、利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液 在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、 吸收峰 波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解 释。
数据记录
1、定性鉴别
波长（nm） 峰3 277 278 279 峰2 360 A 0.421 0.423 0.403 0.761
A361 /A550=3.15~3.45
A361 /A278=1.70~1.88
361
362 峰1 549
0.778
0.756 0.245
550
551
0.246
0.243
按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
4 检测器 5 信号显示系统
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用方法
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
1.接通电源，开机预热钟
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
2.调节波长
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
3.比色皿加样，依次放入比色槽中 注意：手拿比色皿毛 面，高度为比色皿的 2/3。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
4.调“100%”：光标调到T,将参比溶液对准光路， 按“100%”，仪器自动校正；完毕后显示“100.0”， 即T=100%。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
5. 测定吸光度：将样品溶液对准光路，仪器数值 变动；完毕后显示即样品溶液的吸光度。
维生素B12注射液含量测定
《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案《维生素B12注射液含量测定》项目教学案例：维生素B12注射液含量测定一项目任务：维生素B12注射液含量测定1 适用专业：中专药剂、检验专业2 适用岗位： QC人员3 学习时间：2课时二教学设计的指导思想在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。
但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。
我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。
采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。
三项目教学目标：根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。
1.知识与技能目标：1）学会查阅所需检验药品的质量标准；2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液；3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算；2.过程与方法目标：1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程；3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力；3.情感与价值观目标：1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为；2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则；四教学重点和难点项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。
维生素的分析与检验-----维生素B12含量的测定
《生物产品的分析与检验》维生素的分析与检验-----维生素Ｂ12含量的测定目 录1. 认识维生素2. 维生素B12对人体的意义3. 维生素B12的性质4. 维生素B12测定方法一、认识维生素维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质。
维生素广泛存在于动、植物和微生物体内。
维生素类物质的分类（按其溶解性质分）脂溶性维生素：主要有A、D、E、K等水溶性维生素：主要有B族（B1、B2、B12等）、维生素C、烟酸、叶酸、泛酸等。
维生素测定方法主要有化学分析法、比色法、分光光度法（紫外和荧光）、层析法、色谱法（气相色谱和高效液相色谱）和微生物法等。
二、维生素B12对人体的意义维生素B 12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血，防止大脑神经受到破坏。
自然界中的维生素B 12都是微生物合成的，高等动植物不能制造维生素B12 维生素B 12是需要一种肠道分泌物（内源因子）帮助才能被吸收的惟一的一种维生素。
当人体肠胃异常，缺乏这种内源因子，即使膳食中来源充足也会患恶性贫血。
植物性食物中基本上没有维生素B 12。
三、维生素B12的性质维生素B 12(vitamin B12)，又称钴胺素，是含钴的B族维生素之一;在pH小于3或大于8的强酸或碱性溶液中极易分解，遇强光或紫外线易被破坏。
维生素B 12在紫外区波长处有最大吸收。
在361nm波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长。
三、维生素B12含量测定方法◆测定维生素B12的方法有微生物法、比色法、紫外分光光度法、离子交换层析法、原子吸收分光光度法和高效液相色谱法。
紫外分光光度法是较常见的方法。
◆以维生素B12注射液中B12含量的测定为例介绍紫外分光光度法测定维生素Ｂ12含量的方法。
测定方法一、紫外分光光度法测定维生素Ｂ12含量（一）测定原理在紫外区278nm（纳米）、361nm与550nm波维生素B长处有最大吸收。
在361nm波长处的吸收峰干扰因素少，通常以361nm作为测定波长，测定待测溶液的吸光度，用吸光度计算含量。
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液
【实验内容】
1. 对照品溶液和样品溶液的配制
准确称取维生素B12 对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL 的溶液。
精密吸取维生素B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，得到待测
样品溶液（按标示含量稀释成25μg/ml 的溶液）。
2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别
取对照品溶液进行光谱扫描（250 ~ 600 nm），得到维生素B12 的吸收曲线，寻找吸收峰，
扫描后可得到在278nm，361 nm 和550 nm 波长处出现的3 个吸收峰，然后在以上3 个吸
收峰处测量维生素B12 注射液的吸光度，并计算A361/A278 和A361/A550 的比值。
3. 维生素B12 的定量测定
根据吸收曲线选择最大吸收波长（在361 nm 或附近）作为测量波长，测量维生素B12
【注意事项】
1. 注意石英比色皿的操作使用；
峰位置波长略有差异。
这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须对仪器进行定期的校正。
3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？
吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。
校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离Beer定律线性关系，也可以应用于测定。
因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正，可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差，与前一种方法相比，虽然操作步骤要繁琐些，但准确、可靠，是测定最常用的方法。
维生素B12注射液质量分析
质量分析
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1
目录
实训目的
实训内容
实训原理
实训注意
实训报告
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2
实验目的
了解注射剂常规检查 标示百分含量计算
紫外-可见分光光度计使用
查阅中国药典
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3
实训原理
维生素B12注射 液分子结构中有 共轭体系，具有 紫外吸收。
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4
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5
实训内容
仪器
吸光度：
A1=
A2=
A3=
样品1：维生素B12注射液标示量﹪=
样品2：维生素B12注射液标示量﹪=
样品3：维生素B12注射液标示量﹪=
标准规定：
检验结果：
检验人：
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13
实训报告
检品名称： 生产单位： 剂 型： 批 号： 包 装： 检验目的： 检验日期： 检验依据：
检验结论：
二、药品检验报告
K为与温度（t，℃）有关的 常数。
K=0.05916+0.000198（t— 25）
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7
制剂常规检查
取供试品5支，将内容物 注入经标化的量具内在室 温下检视，每支的装量均 不得少于其标示量。
取供试品20支将药液转移至洁净透 明的适宜容器内；将供试品置于遮 光板边缘处，在明视距离分别在黑 色和白色背景下，手持供试品颈部 轻轻旋转和翻转容器使药液中可能 存在的可见异物悬浮轻轻翻摇后即 用目检测重复3次。
规 格： 有 效 期： 检验数量： 检验项目: 报告日期：
检验报告人：
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14
精选PPT
15
标示 % 量 10 % 0 E 1 1A c % m 110D 0每支容量 V供 S
维生素含量测定_PPT幻灯片
维生素E：
含量测定：气象色谱法 色谱条件 1、色谱柱：硅酮（OV-17），载气： N2 2、检测器：氢火焰离子化检测器（FID） 3、内标—中国药典2005版
实验原理：
维生素C具有很强的还原性，在稀醋酸酸性溶液中，可被碘定量氧化，以淀 粉为指示剂，终点为溶液显蓝色。根据碘滴定液消耗的体积，可计算出维生素C 的含量。
检验原始记录
检验原始记录
品名 维生素C
规格
批号 1101001 数量
取样日期 2011 年 04 月 18 日
依据 《药典》2005版第二部 方法：
报告日期 2011 年 04 月 18 日
取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀 粉指示液1ml，立即用 碘滴定法（0.05mol/L）滴定，至溶液显蓝色并在30s内不褪。每1ml碘 滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6
武汉述元科技发展有限公司
规格 包装
有效期
25kg/桶 36个月
检验目的
含量测定
收检日期
2011/04/18
检验依据
《药典》2005版第二部
检验项目
标准规定
报告日期
2011/04/18
检验结果
【含量测定】 含C6H8O6
依法检验，不得少于99.0%
99.2%
结论：《中国药典》2005年二部规定维生素C含C6H8O6不得少于99.0％ 检验者：钱淑芳核对者： 温度：20 湿度： % 2011 年 04 月18 日
维生素的类型
1、脂溶性：维生素A、维生素E
维生素A ： 含量测定：紫外分光光度法
1、维生素A醋酸酯的环己烷溶液在328nm 有最大吸收， 吸收系数E=1530；
项目：维生素B12注射液含量测定
（通则0401） P56
13
三、实验实施
1
2 3 34
在给定波长±2nm处 测样品吸光度，选择 实际最大吸收波长
34
测定波长是多少？
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用 4.确定测定波长
测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的
吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长
作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波
W样（V样）：
品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数 后再计算含量。
37
（通则0401）
37
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
5.供试品溶液的吸光度值的测定
供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸 光度以在0.3～0.7之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合
维生素B12注射液含量测定
一、 任务依据
【中国药典】2015版 二部 P1236
维生素B12注射液
本品为维生素B12的灭菌水溶液。含维生素B12（ C63H88CoN14O14P）应为标示量的90.0%~110.0%
【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定
量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液，照紫 外-可见分光光度法（通则02401），在361nm的波长处
维生素B12含量的测定
实验四维生素B12含量的测定目的要求1、掌握紫外分光光度计的原理和使用方法。
2、熟悉吸光系数法定量分析方法的应用。
重点1、比吸光系数的概念和定量测定方法。
2、比吸光系数与摩尔吸光系数的关系。
难点比吸光系数的定义与定量测定方法及应用。
仪器设备紫外分光光度计、石英比色皿、容量瓶、移液管、纸镜头等。
内容提要1、维生素B12标准溶液的配制（或用标准品）。
3、购置维生素B12注射液或片剂等样品。
4、1%浓度标准品维生素吸光度的测定（1cm比色皿）。
5、1%浓度样品维生素吸光度的测定。
6、分别求得样品和标准品的比吸光系数。
7、将样品的比吸光系数与标准品的比吸光系数值比较，计算出样品的质量百分数。
操作要点1、仪器的准备（校准、预热）2、仪器的操作步骤（讲解示范）。
3、设置波长(361nm)、调零、调满度。
4、测定。
5、数据记录与结果处理。
6、将比色皿洗净装盒，关机。
7、填写仪器使用记录和实验周志。
注意事项1、开启电源，使仪器预热20分钟。
2、开机前，先确认仪器样品室内是否有东西档在光路上（以免影响仪器自检）。
3、若无标准品可采用文献的吸收系数，但不一定可靠，因测定条件不同。
思考题1、本实验是否可用玻璃比色皿？在紫外分光光度计上，还有其它方法能测其含量吗？2、维生素B12在361nm和550nm波长处与最大吸收，其在361nm的吸光度与550nm处的吸光度的比值为3.15-3.45（中国药典），如果要对维生素B12进行定性鉴别，如何操作？3、《中国药典》规定，维生素B12注射液的正常含量应为表示量的90.0%-110%，根据本实验结果判断是否符合要求？并分析误差产生的原因？。
紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量
实验四 紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量一、实验目的1、理解紫外—可见分光光度法定性分析、定星分析的原理。
2、掌握紫外—可见分光光度法测定维生素B12含量的原理。
3、掌握UV—7502PC紫外—可见分光光度计的结构、原理与操作。
二、原理分子中的电子发生跃迁需要的能量约在1~20eV之间，其对应的吸收光的波长范围大部分处于紫外和可见光区域，通常将分子在这一区域的吸收光谱称为电子光谱或紫外—可见吸收光谱。
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律，即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。
1. 紫外-可见分光光度计的基本结构紫外-可见分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录系统组成。
图1 紫外—可见分光光度计基本结构图2.透光率和吸光度如图2所示：入射光强度I0，吸收光强度I a，透过光强度I t， 反射光强度为I r I0═ I a + I t + I r被测溶液和参比的吸收池同样材料和厚度，反射光强度影响相互抵消，上式简化为I0═ I a + I t透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；反之，透光率愈小，溶液对光的吸收愈多透光率的负对数称为吸光度，用符号A 表示。
维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定之欧阳引擎创编
新乡医学院分析化学实验课教案首页欧阳引擎（2021.01.01）授课教师姓名及职称：八、授课方法教师示范讲述，学生操作九、使用教材《分析化学实验》自编教材十、教研室主任签字审查意见新乡医学院化学教研室年月日实验维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定一、实验目的1.掌握分光光度计的使用方法；2.掌握注射剂含量的测定和计算方法；3.熟悉测绘吸收曲线的一般方法。
二、实验原理维生素B12是含Co的有机化合物，其注射液为粉红色至红色的澄明液体。
要测定B12注射液的含量，可以用紫外－可见分光光度法测定，用此法进行含量测定，必须知道B12的λmax，λmax可以通过绘制吸收曲线来得到。
吸收曲线：将不同波长的单色光依次通过被分析的物质，分别测得不同波长下的吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标所描绘的曲线。
吸光度最大时对应的波长为λmax，在λmax处测吸光度。
B12在278，361，550nm处有最大吸收，在λmax处测得A，根据吸光系数法可以求出注射液中B12的含量。
吸光系数法：A=Ecl实验中要求测361nm处的A，相应的吸光系数为207。
三、仪器与试剂752型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g·L-1维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。
四、实验步骤1．752型分光光度计的使用（1）开启电源开关，使仪器预热20分钟。
（2）用波长选择旋钮设置所需的分析波长。
（3）将装参比溶液的比色皿置于光路，打开样品室盖，调节T旋钮，使显示器指针指在“0.00％”。
（4）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，调节A旋钮，使显示器指针指在“100.00％”。
（5) 重复操作(3)和(4)，直至仪器显示稳定。
（6）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，进行测定，在显示器上读出A。
（7）仪器使用完毕，关闭电源，拔下电源插头。
取出比色皿，洗净、晾干。
复原仪器，盖上防尘罩。
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6.吸光度测定 1.将参比液、测定液装于吸收池中。
A1=
2.以参比液为空白，测定吸光度，记录。 A2=
7.记录与计算 1.计算供试品的百分含量% 2.计算平均百分含量%
标示量%= 平均百分含量%
8.结果与判定 1.将测得的含量与药典规定值比较，得出 结论。 2.相对偏差均应在±0.5%以内。
相对偏差= 结论：
测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数（
E1% 1cm
）为
207计算，即得。
1. 实验原理
二、 任务分解
紫外-可见分光光度计 紫外-可见分光光度法是通过被测物质在紫 外光区或可见光区的特定波长处或一定波长范 围内的的吸光度，对该物质进行定性和定量分 析的光学分析方法。 定量分析通常选择物质的最大吸收波长处
220
<0.8
340
<0.8
（通则0401） P56
三、实验实施
（二）. 供试品溶液的配制
维生素 B12注射液 水 10.00ml
平行配制2份
100ml
三、实验实施
1.移液管使用
三、实验实施
1.移液管使用
移液管、刻度吸管 移液管的的拿持
润洗
三、实验实施
1.移液管使用
吸液
调节液面
放出液体
三、实验实施
操作内容
数据记录
1. 杂散光的检查
定期检查
1.仪器检定
2.波长准确度、吸光度准确度检定。
3. 杂散光的检查
2.配制供试品溶液
精密量取一定体积定量稀释成规定浓度 的溶液。
供试品的名称、批号、 生产厂家。
3.比色皿配对
使用的石英吸收池必须洁净。当吸收池 中装入同一溶剂，在规定波长测定各吸 收池的透光率，如透光率相差在0.3%以 下者可配对使用，否则必须加以校正。
测出吸光度，然后用对照品或吸收系数求算出 被测物质的含量，多用于制剂的含量测定。
二、 任务分解
2.计算
根据维生素B12注射液【含量测定】中内容要求 描述，“用水定量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液”。
【规格】（1）1ml：0.05mg （2）1ml：0.1mg （3）1ml：0.25mg （4）1ml：0.5mg （5）1ml：1mg （6）2ml：0.5mg
规格型号 北京通用T6
石英 10ml 100ml 500ml 100ml 2ml 500ml 塑料
数量 1台
1套 1支 2支 1支 1个 1支 1个 1个
用途 含量测定
含量测定 溶液配制 溶液配制 洗涤、稀释
稀释 定容 废液杯 移液
二、 任务分解
二、 任务分解
3. 制定计划 (3)操作步骤
测定步骤
（通则0401）
P55-56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
2.吸光度准确度 精密称取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg
，置1000ml量瓶中，用0.005mol/L硫酸液溶解并稀释至 1000ml，用配对的1cm石英池，以0.005mol/L硫酸液为空 白，在235、257、313、350nm分别测定吸光度，然后换 算成 E11c%m，测得值应符合表1中规定的允差范围。
维生素B12注射液含量测定
ppt课件
1
一、 任务依据
【中国药典】2015版 二部 P1236
维生素B12注射液
本品为维生素B12的灭菌水溶液。含维生素B12（ C63H88CoN14O14P）应为标示量的90.0%~110.0%
【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定
量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液，照紫 外-可见分光光度法（通则0401），在361nm的波长处
表1 维生素B12注射液含量测定所需药品
药品名称
规格
数量
用途及可用量
维生素B12注射液 2ml：0.5mg/2盒
2盒
药品，1人
水
纯化水
500ml，1人 仪器清洗、溶剂
二、 任务分解
3. 制定计划
(1)填写所需溶液、药品及仪器
表2 维生素B12注射液含量测定所需仪器
仪器名称 紫外-可见分光光度计
石英比色皿 移液管 容量瓶 洗瓶 小烧杯 胶头滴管 大烧杯 洗耳球
（二）. 供试品溶液的配制
配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时取容 积一般不少于5ml。含量测定时供试品应称取2份，如为对照品比 较法，对照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2 份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴 别或检查可取样品1份。
（通则0401） P56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
表1 分光光度法允差范围
波长 235 257 313 350
吸收强度 最小 最大 最小 最大
吸收系数 E1% 1cm
124.5 144.0 48.6 106.6
允差范围 123.0～126.0 142.8～146.2
47.0～50.3 105.5～108.5
二、 任务分解
3测. 定制步定骤 计划操作内容 (34收.)溶操剂空作白步吸 骤将白溶（剂即置空1白c光m路石中英不吸置收任池何中物，质以）空测气定为其空
吸收光度
数据记录 溶剂空白吸收=
5.确定测定波 长
除另有规定外，在规定的吸收峰±2nm处， 测定波长= nm 再测几点的吸光度，吸光度最大的波长应 在规定的波长±2nm以内，并以吸光度最 大的波长作为测定波长。
（通则0401） P56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
3 .杂散光的检查 可按表2所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石
英池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表2中规定。
试剂
碘化钠 亚硝酸钠
表2 杂散光的检查及限度
浓度（%，g/ml） 测定用波长（nm） 透光率（%）
1.00 5.00
计算稀释倍数
以下均以规格2ml：0.5mg为例
样品溶液：实际使用的维生素B12注射液
供试品溶液：按要求配制的每1mL中约含维生
素B12 25μg的溶液。
稀释倍数
样品溶液浓度 供试品溶液浓度
0.5mg
0.25mg
25ug
2ml
ml 0.025 mg
10
1ml
ml
二、 任务分解
3. 制定计划
(1)填写所需溶液、药品及仪器
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
1.波长准确度 1.1 波长准确度的允差范围 紫外-可见分光光度计波长准确 度允许误差，紫外区为±1nm，500nm处±2nm。
（通则0401）
P55-56
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
1.2 波长准确度检定方法 1.用低压汞灯检定 2.用仪器固有的氘灯检定 3.用氧化钬玻璃检定 4.用高氯酸钬溶液检定