英文文献讲解

含有NADP结合区（红色）和G6P结合区（蓝色）两个保守功能域，具 有多个磷酸化位点和跨膜区域，表明PsG6PDH可能作为膜受体而起作用
结果与讨论
系 统 发 生 树
实验部分
甜杨 高效稳定的离体培养wk.baidu.com系的建立 总RNA的提取 基因组DNA的制备
G6PDH基因的分离和克隆
植物表达载体的构建和遗传转化
实验部分
G6PDH活性的测定：荧光光学法
SOD活性的测定：NBT光化学还原法 POD活性的测定：愈创木酚法
MDA含量的测定：TBA（硫代巴比妥酸）反应法
结果与讨论
MDA POD
SOD
over-expressing
G6PDH
结果与讨论
Increased cytosolic G6PDH activity is involved in POD and SOD activity and induction of frezzing resistance in poplar cuttings.
植物表达载体的构建和遗传转化
转PsG6PDH基因烟草材料的获得
超氧化物歧化酶 SOD活性的测定 过氧化物岐化酶 POD活性的测定 丙二醛MDA 含量的测定
低温抗性实验
电导率的测定
PsG6PDH在转基因烟草耐低温中的可能作用
结果与讨论
The predicted tertiary structure of PsG6PDH protein
背景介绍
甜杨中分离G6PDH基因
生物学分析
该基因可能编码胞质PsG6PDH 而且与基因胁迫有关
PsG6PDH的原核表达
验证了其编码框的完整性
导入烟草进行表达和分析
对其功能进行进一步鉴定
实验部分
实验部分
甜杨 高效稳定的离体培养体系的建立 总RNA的提取 基因组DNA的制备
G6PDH基因的分离和克隆
（1）未经15℃低温驯化：培养温度直接从25 ℃下降 到4 ℃，每隔12h观察烟草的表型变化(结果如图Fig.4.a)
（2）经15 ℃低温驯化：培养温度先降至15 ℃后缓慢
下降到-4 ℃，按0.5 ℃/h逐步降低温度，在每处理温 度下24h，观察烟草的表型变化(结果如图Fig.4.b)
结果与讨论
(a). Without cold-acclimation
结果与讨论
(b). With clod-acclimation
结果与讨论
Transgenic tobacco lines carrying poplar PsG6PDH exhibited a greater cold tolerance than WT plants
实验部分
电导率的测定：
取生长性状一致的野生型和转基因烟草，在25℃ 、4 ℃、0 ℃、-2 ℃、-4 ℃五个不同温度下分别 处理两小时，选择相同位置的叶片，用0.5mm的 打孔器打孔，选择10个小圆片置于试管中，加入 5ml去离子水，抽真空20min后，静置一小时， 用电导仪测定电导值S1。将样品沸水浴30min， 静置一小时，测定电导值S2.
低温是限制植物生长，发育和分布的重要环境因素之一， 低温不但降低植物的生命合成活性，抑制正常的生理代谢 过程，而且严重时还会导致植物死亡。 低温寒害是农业、林业生产的主要自然灾害之一。
常规育种存在的不足：
育种周期长，杂交方式单一，杂交难度大等局限性， 杂交工序复杂费时，易受季节、气候、地域及水分等 多种环境因素限制。
背景介绍
甜杨(Populus suaveolens)：属杨柳科(Salicacae)，
主要分布于大兴安岭北部及漠河一带，是研究木本 植物抗冻性及有关抗冻基因克隆的理想材料。
G6PDH(葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)：磷酸戊糖途径的
关键性调控限速酶，其主要功能是为脂肪酸合成、 氮还原和谷胱甘肽等生物分子合成提供还原力 NADPH，也为核酸合成提供戊糖；此外，还参加 非生物逆境胁迫应答反应。因此，G6PDH 对植物 的生长发育起着非常重要的作用。
Functional analysis of PsG6PDH, a cytosolic glucose-6-phosphate dehydrogenase gene from Populus suaveolens, and its contribution to cold tolerance improvement in tobacco plants
实验部分
低温抗性试验：
取生长性状一致的野生型和转基因烟草
（1）未经15℃低温驯化：培养温度直接从25 ℃下降 到4 ℃，每隔12h观察烟草的表型变化(结果如图Fig.4.a)
（2）经15 ℃低温驯化：培养温度先降至15 ℃后缓慢
下降到-4 ℃，按0.5 ℃/h逐步降低温度，在每处理温 度下24h，观察烟草的表型变化(结果如图Fig.4.b)
Published by Biotechnology letters: 21， May,2013 Factor：1.853
报告人： 专业：生物学基地 年级：2011级 日期：2014年5月11号
主要内容
1.背景介绍
2. 实验方法
3. 结果与讨论 4. 实验结论 5. 前景展望
背景介绍
低温的危害：
甜杨G6PDH基因在烟草中的表达，有助于膜 保护性酶POD和SOD活性的提高及细胞膜的 稳定，进而提高了转基因烟草的耐低温能力。
实验部分
Increased transcription of cold-stress related genes in tobacco plants over-expressing PsG6PDH
电解质渗透率（EL）=S1/S2
结果与讨论
A. variation of electrical conductivity of tobacco leavea after serial treatments at 25,4,0,-2,-4℃,respectively
Blow 0℃,EL of both transgenic lines was significant lower than that of WT
G6PDH基因的分离和克隆
植物表达载体的构建和遗传转化
转PsG6PDH基因烟草材料的获得
超氧化物歧化酶 SOD活性的测定 过氧化物岐化酶 POD活性的测定 丙二醛MDA 含量的测定
低温抗性实验
电导率的测定
PsG6PDH在转基因烟草耐低温中的可能作用
实验部分
低温抗性试验：
取生长性状一致的野生型和转基因烟草
转PsG6PDH基因烟草材料的获得
超氧化物歧化酶 SOD活性的测定 过氧化物岐化酶 POD活性的测定 丙二醛MDA 含量的测定
低温抗性实验
电导率的测定
PsG6PDH在转基因烟草耐低温中的可能作用
实验部分
植 物 表 达 载 体 的 构 建 ：
PsG6PDH
实验部分
烟草的遗传转化：
利用经典的的叶盘转化法把甜杨G6PDH基因转 入烟草，经过含Kan和Cef培养基的筛选、继代 和生根培养，得到一批转基因烟草。
Up-regulated
结论
甜杨PsG6PDH的组成性表达，不会影响 烟草的表型生长，而且在低温胁迫下可 以提高烟草的抗寒能力。因此，可作为 植物抗寒冻遗传改良的新的外源基因。
前景展望
1.由于植物抗寒冻性状受多基因控制，因此有必要从 多基因的作用层次上来探讨植物抗寒冻的作用机制。 2.采用生物信息学技术设计甜杨G6PDH基因的突变 体，研究G6PDH突变体及其活性，以及在转基因植 物中的抗性作用。经过改造可能会获得活性更强的 G6PDH。
30 days old，将植株转入土壤，在植物培养箱 中under 15%，a 16/8h light/dark photoperiod for 1 month。 Used for cold tolerance assays and gene expression analyses
实验部分
甜杨 高效稳定的离体培养体系的建立 总RNA的提取 基因组DNA的制备
感谢大家的聆听！