白细胞介素的制备及鉴定

白细胞介素的制备及鉴定

白细胞介素（IL）是指由白细胞或其他体细胞产生的能在白细胞间起调节和介导作用的因子。作为在免疫活性细胞间相互作用的介质和强有力的蛋白性调节因子，可以调节免疫反应、炎性反应、组织修复、组织移植反应和造血。白细胞介素已发现有多种，本实验以白细胞介素-2（IL-2）为例介绍IL的制备及鉴定方法。

一、目的要求

了解白细胞介素的概念、种类及其作用；掌握常用白细胞介素的制备及鉴定方法。二、实验原理

人或动物的脾细胞、淋巴细胞，在丝裂原刺激下诱生的天然白介素-2，主要存在于细胞的上清中。此为粗制天然白介素-2，然后通过硫酸铵沉淀、吸附等步骤进行纯化，并根据相关性质进行鉴定。

三、实验材料

RPMI1640培养基，丝裂原PHA，硫酸铵，吸附剂G2，细胞培养皿，细胞培养箱，离心机，清洁级小鼠。

四、实验方法

摘取小鼠的脾、四肢淋巴结、肠系膜淋巴结等组织，制成单个细胞悬液，用RPMI1640配成1.5×106个/ml细胞浓度，在PHA刺激下，37℃，5％CO2培养48h后离心取上清，用CTL细胞系检测其生物活性，即是粗制的天然白介素-2.

纯化步骤：在500ml收集的上清中缓慢加入固体硫酸铵，边加边搅拌，使其饱和度达45％，4℃搅拌过夜，9000r/m离心30min去沉淀。上清再加硫酸铵使其饱和度达80％，4℃搅拌过夜，9000r/m离心30min，取沉淀用PBS溶解，透析后用吸附剂G2 （30mg/ml）37℃搅拌吸附30min，离心、洗脱即得纯化的IL-2。

五、结果判定

（1）将获得的IL-2用Folin酚法测定蛋白含量。

（2）活性检定：采用CTL细胞株的渗入法进行活性鉴定，比活性必须在1×106U/mg 以上。

（3）纯度鉴定：用SDS-PAGE检测，银染法染色，在15ku出呈单一条带，然后经扫

描得白介素-2条带，占95％以上。