免疫凝集反应及临床应用
免疫学临床应用
（二） 抗原或抗体的检测方法
凝集反应 沉淀反应 补体参与的抗原抗体反应 免疫标记技术
（一）凝集反应（agglutination）
颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）与 抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。
1 、直接凝集(direct agglutination) 玻片凝集、试管凝集
2、间接凝集（indirect agglutination） 可溶性抗原包被在乳胶颗粒或红细胞表面，与相应 抗 体混合出现的凝集现象。
3、细胞因子检测
可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功 能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。
①免疫学方法：ELISA、RIA等。
②细胞生物学方法 ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等
4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验
（1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损
免疫重建(immunoreconstitution)
将免疫功能正常个体的造血干细胞或淋巴细胞移植 给患有免疫功能缺陷的个体，使后者的免疫功能全部 或部分得到恢复。
一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法
二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗
三、主动免疫治疗（active immunotherapy） 和被动免疫治疗（passive immunotherapy）
（三）计划免疫
二、新型疫苗的发展 三、疫苗的应用
1、抗感染 2、抗肿瘤 3、计划生育 4、防止免疫病理损伤
复习题
一、名词解释 凝集反应、沉淀反应、ELISA、人工主动免疫、 人工被动免疫、类毒素、LAK细胞、TIL细胞
二、问答题 1、简述抗原抗体反应的特点。 2、何谓免疫标记技术？简述三大免疫标记技术 的原理和应用。 3、试比较人工主动免疫与人工被动免疫。
临床免疫学：凝集试验
凝胶内沉淀 反应
凝胶免疫电 泳技术
絮状沉淀试验 免疫浊度测定
单向免疫扩散试验 双向免疫扩散试验
对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫电泳 免疫固定电泳
37
一、单向免疫扩散试验
原理：将一定量的抗体混入琼脂糖凝胶中， 让待测抗原在凝胶中自由扩散,在两者比例合 适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原 的浓度成正相关。
3
1896年Widal反应诊断伤寒病。 1900年Landsteriner在血凝现象的基础上发现人类
ABO血型系统,并于1930年获得诺贝尔奖。
反应阶段：
• 抗原抗体的特异性结合 • 出现肉眼可见的凝集现象
4
临床应用：定性或半定量检测
根据凝集现象的出现与否定性判断抗原抗体 是否对应。
将血清标本倍比稀释后再进行反应，以出现 凝集反应的最高稀释度作为抗体的滴度（效 价）。
【熟悉】 1、对流免疫电泳、免疫电泳的原理。 2、免疫固定电泳的临床应用和双向免疫扩散的实 际应用。
【了解】单向免疫扩散、对流电泳和免疫电泳的应用。
35
沉淀反应的概念 沉淀反应（precipitation）是指可溶 性抗原与相应抗体在适当条件下发生
特异性结合产生可见沉淀物的现象。
36
沉淀反应
液相沉淀反 应
58
技术要点
先将患者血清或血浆在醋纤膜或琼脂 上作区带电泳，根据血清蛋白质的电荷 、分子量等不同将其分开。 为了精确识别单克隆区带，样品同时 在六条泳道上进行测试。 然后将IgG、IgA、IgM、κ轻链和λ 轻链的抗血清加于分离的蛋白质泳道； 参考泳道则加蛋白质固定剂，用于区带 对照，作用一定时间后洗去游离蛋白质 ，染色后观察结果，对样品中所含成分 及其性质进行分析、鉴定。
凝集反应的原理及应用
凝集反应的原理及应用引言凝集反应是一种常见的生物学实验技术，它通常用于检测血清中的特定抗原或抗体。
凝集反应基于抗原与抗体之间的专一性相互作用，以可见的凝集成型来指示它们的相互结合。
本文将探讨凝集反应的原理及其在医学诊断和生物科研中的应用。
凝集反应的原理凝集反应的核心原理是抗原-抗体相互作用。
当抗原与其相应的抗体结合时，它们会形成一个稳定的复合物。
这种复合物的形成通常是由于抗原-抗体结合部位特异性相互吸引力的结果。
凝集反应在生物体内起着至关重要的作用，对维持免疫系统的正常功能起着关键作用。
凝集反应的过程可分为两个阶段：敏感化和凝集。
敏感化阶段在敏感化阶段，抗原首先与抗体结合形成可溶复合物。
这个过程可以理解为抗原与抗体之间的互相识别和结合。
抗原通常是一种生物标志分子，例如细菌的表面抗原、病毒的外壳蛋白等。
抗体则是由机体产生的专一性蛋白质，能够识别和结合抗原。
凝集阶段在凝集阶段，敏感化的抗原-抗体复合物会以可见的聚集形式存在。
这种聚集可以是线状的、颗粒状的或网状的。
凝集的形态与抗原和抗体之间的作用、复合物的浓度和环境条件有关。
凝集反应的结果可以通过肉眼直接观察到，因此凝集反应是一种简单而可靠的实验技术。
它可以用来检测疾病标记物、识别细菌和病毒、测定血型和检测免疫反应等。
凝集反应的应用凝集反应具有广泛的应用领域，以下列举了其中一些常见的应用：1.医学诊断：凝集反应常用于诊断感染性疾病，如肺炎、流感和细菌感染等。
它可以快速、简便地检测血清中的抗原或抗体，并帮助医生判断疾病类型和病情。
2.免疫学研究：凝集反应可以用来研究免疫系统的功能和特性。
它可以用来检测特定抗原对应的抗体水平，评估免疫反应的强度和效果。
3.血型鉴定：凝集反应常用于血型鉴定，确定血细胞表面的特定抗原类型。
这对于输血和器官移植等医疗操作至关重要。
4.病原体检测：凝集反应可用于识别细菌、病毒和寄生虫等病原体。
它可以快速检测标本中是否含有特定的病原体，并帮助确定感染的种类和严重程度。
免疫学凝集反应实验报告
免疫学凝集反应实验报告1. 背景1.1 免疫学凝集反应免疫学凝集反应是一种常用于检测抗原和抗体之间相互作用的免疫学实验方法。
在凝集反应中，抗原与抗体结合形成可见的混合凝集物，通过观察凝集物的形态和强度，可以判断是否存在特定的抗原或抗体。
1.2 实验目的本实验旨在通过免疫学凝集反应检测某种特定抗原和抗体之间的相互作用，并分析实验结果，为后续的相关研究提供基础支持。
2. 实验设计与方法2.1 实验材料•血清样本：包含目标抗原的血清样本。
•抗体试剂：特异性抗体，用于与目标抗原发生凝集反应。
•Buffer液：用于稀释血清样本和抗体试剂。
•凝集板：用于装载反应液。
2.2 实验步骤1.准备工作：将所需材料准备齐全，并清洗凝集板。
2.取一块凝集板，标注样本位置。
3.向每个凝集板孔中加入等体积的buffer液，作为空白对照。
4.序号为1-10的凝集板孔中分别加入不同浓度的血清样本，每个孔加入相等体积的样本。
5.在每个凝集板孔中加入相等体积的抗体试剂，使其与血清样本充分混合。
6.轻轻摇动凝集板，使反应液均匀混合。
7.置于适宜的环境温度，反应一定时间（根据抗原和抗体的特点和供应商建议进行）。
8.观察凝集板孔底部是否出现可见凝集反应，并记录凝集反应的强度和形态。
9.对凝集反应进行分析并得出结论。
3. 结果与分析3.1 凝集反应观察观察实验结果发现，在血清样本和抗体试剂反应后，部分凝集板孔底部出现明显的凝集反应。
凝集反应的形态呈现为小颗粒状凝聚体。
3.2 结果分析根据凝集反应的形态和强度，可以初步判断样本中是否含有目标抗原。
凝集反应的强度越强，说明样本中抗原的浓度越高；凝集反应的形态越明显，说明样本中存在的抗原与抗体结合能力越强。
对于凝集反应未出现或凝集反应较弱的样本，可能是由于抗原浓度过低或抗体试剂的工作效能不佳导致的。
因此，可以针对这些样本进行进一步的稀释或更换抗体试剂。
3.3 结论综合分析实验结果，初步可以得出以下结论：•在血清样本和抗体试剂的反应中，部分样本中存在目标抗原。
医学免疫学：实验2 凝集反应(ABO血型测定)
实验目的:
检测血清标本中有无HBsAb
材料:
48孔ELISA板
阳性对照血清（HBsAb） 阴性对照血清 酶标二抗
乙肝病毒表面抗体 诊断试剂盒
洗涤液
底物A和B
微量加样器，待测血清标本等
实验方法
微孔板已包被HBsAg
HBsAg
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
+ + — — ① ① ① ① ② ② ② ②A + + — — ③ ③ ③ ③ ④ ④ ④ ④B + + — — ⑤ ⑤ ⑤ ⑤ ⑥ ⑥ ⑥ ⑥C + + — — ⑦ ⑦ ⑦ ⑦ ⑧ ⑧ ⑧ ⑧D
实验结果
颜色变化或OD（吸光度）值
酶标板
酶标仪Βιβλιοθήκη 样+-1 2 3456
每孔加 50μl 不同的血清样本 Positive control (HBsAb) ：1 滴 Negative control (NS): 1 滴
加样
+
- sample
加酶结合物
enzyme
每孔加酶结合物1滴 混匀， 37 ℃ 30 min.
放射物标记技术 酶标技术
免疫荧光技术
酶联免疫吸附试验
酶免疫组化技术
双抗体夹心法
竞争法
双抗原夹心法
间接法
直接法
原理：间接ELISA法(酶联免疫吸附试验)
不显色
洗涤
洗涤
1.包被已知抗原 2.加入待测标本 （未知抗体？） 3.加入酶标二抗 （即抗抗体 ：抗人Ig的抗体） 4.加入底物
颜色改变 = 待测标本中存在抗体
实验结果
呈红色片状凝集颗粒为阳性 实验结束后，洗涤试管；
免疫学凝集反应实验报告
免疫学凝集反应实验报告一、实验目的本实验旨在通过免疫学凝集反应实验，了解抗原-抗体反应的基本原理，掌握凝集反应的方法和技巧。
二、实验原理1. 抗原-抗体反应抗原是指能够诱导机体产生特异性免疫反应的物质，通常是蛋白质、多糖或脂质等大分子化合物。
当抗原进入机体后，会刺激机体产生相应的抗体，抗体与抗原结合形成复合物，从而发挥免疫作用。
2. 凝集反应凝集反应是指在特定条件下，由于抗原与抗体结合形成可见的凝集现象。
这种现象可以用于检测血清中是否存在某种特定的抗体或抗原。
三、实验步骤1. 制备试剂将所需试剂按比例配制好，并进行必要的消毒处理。
2. 样品处理将待测样品进行必要的处理，如离心、稀释等。
3. 加入试剂将样品加入已经配制好的试剂中，并混匀。
4. 观察结果观察混合液是否出现凝集现象，并记录结果。
四、实验注意事项1. 实验过程中应严格按照操作规程进行，避免操作失误。
2. 试剂的配制和消毒处理应注意卫生和安全。
3. 样品处理时应注意离心速度和时间，避免对样品造成损伤。
4. 操作时应注意洁净卫生，避免污染试剂和样品。
五、实验结果分析通过本次实验，我们成功地观察到了抗原-抗体反应产生的凝集现象。
根据观察结果，我们可以判断待测样品中是否存在特定的抗体或抗原。
此外，在实验过程中我们也掌握了凝集反应的方法和技巧，并了解了抗原-抗体反应的基本原理。
六、实验结论通过本次免疫学凝集反应实验，我们深入了解了抗原-抗体反应的基本原理，并掌握了凝集反应的方法和技巧。
这对于我们今后在医学、生物学等领域开展相关研究具有重要意义。
举例说明玻片凝集反应的临床应用(一)
举例说明玻片凝集反应的临床应用(一)玻片凝集反应在临床应用中的重要性玻片凝集反应是一种常见的实验室诊断技术，它能够检测血清中的一些特定抗体和抗原，从而帮助医生们诊断疾病。
以下是一些临床应用的例子：1. 检测风湿热玻片凝集反应在检测风湿热方面非常有用。
在风湿热患者的血清中会存在相应的抗体，这些抗体能够和某些抗原发生反应，从而导致玻片发生凝集。
2. 检测梅毒感染玻片凝集反应也可用于梅毒感染的检测。
梅毒是一种性病，如果不及时诊断和治疗，会带来很多严重的后果。
使用玻片凝集反应检测血清中的梅毒抗体，可以在早期诊断和治疗该疾病。
3. 检测细菌性感染玻片凝集反应还可用于检测某些细菌性感染。
例如，肺炎克雷伯杆菌、葡萄球菌等在患者血清中会存在相应的抗体，这些抗体能够和玻片上的抗原发生反应，从而观察到玻片凝集。
4. 检测免疫缺陷病毒玻片凝集反应还可以用于检测免疫缺陷病毒病（AIDS）的感染。
在某些患者的血清中会存在抗体，这些抗体可与玻片上的抗原发生反应，导致玻片凝集。
总之，玻片凝集反应在临床应用中有着广泛的应用，它可以帮助医生们准确、快速地诊断出某些疾病，从而可以给予患者更加及时有效的治疗。
5. 辅助诊断类风湿关节炎玻片凝集反应还可以作为类风湿关节炎的辅助诊断方法。
类风湿关节炎是一种自身免疫性疾病，患者血清中常会存在类风湿因子，这些因子能够与玻片上的抗原反应而产生凝集现象。
6. 筛查肝炎病毒感染玻片凝集反应也可以用于筛查肝炎病毒感染。
在某些患者血清中会出现对肝炎病毒的特异性抗体，这些抗体能够与特定的抗原发生反应，从而可以触发玻片凝集的现象。
7. 病毒抗体检测玻片凝集反应还可用于检测某些病毒的抗体。
例如，疱疹病毒、流感病毒等在患者血清中会存在相应的抗体，这些抗体能够和玻片上的抗原发生反应，从而观察到玻片凝集。
8. 吸入性过敏性疾病玻片凝集反应在吸入性过敏性疾病的诊断方面也有所应用。
例如，花粉、尘螨等在患者血清中会存在相应的抗体，这些抗体能够和玻片上的抗原发生反应，从而导致玻片凝集。
举例说明玻片凝集反应的临床应用
举例说明玻片凝集反应的临床应用玻片凝集反应是一种体外检测方法，用于检测抗原与抗体之间的相互作用。
它在临床上应用广泛，以下是一些常见的临床应用：1. 检测风湿因子：玻片凝集反应是检测风湿因子的常用方法之一。
风湿因子是一种自身抗体，通常与风湿性关节炎等风湿类疾病相关。
通过检测血清中的风湿因子，可以帮助诊断和评估风湿性疾病的严重程度。
2. 检测感染性疾病：玻片凝集反应还可用于检测一些感染性疾病，如肺炎球菌感染、流感病毒感染等。
通过检测血清中的特定抗体，可以确定是否感染了某种病原体。
3. 评估肝炎病毒感染：在肝炎病毒感染的诊断和治疗中，玻片凝集反应也有着重要的应用。
肝炎病毒感染会引起人体产生一些特定的抗体，这些抗体可以通过玻片凝集反应来检测。
4. 诊断系统性红斑狼疮：玻片凝集反应也可用于系统性红斑狼疮的诊断。
该疾病通常伴随着一些自身抗体的产生，这些抗体可以通过玻片凝集反应来检测。
5. 检测肿瘤标志物：玻片凝集反应还可用于检测一些肿瘤标志物，如癌胚抗原、甲胎蛋白等。
这些标志物可以通过检测血清中的特定抗体来诊断和评估肿瘤的严重程度。
6. 评估免疫功能：玻片凝集反应也可用于评估人体免疫功能的状态。
通过检测血清中的特定抗体，可以确定人体的免疫功能是否正常。
7. 确定输血配型：玻片凝集反应还可用于确定输血前的配型。
通过检测受血者血清中的抗体和供血者血液中的抗原，可以确定是否存在不相容的情况。
8. 检测药物过敏反应：玻片凝集反应还可用于检测一些药物过敏反应。
一些药物会引起人体产生特定的抗体，通过检测血清中的这些抗体，可以确定是否存在药物过敏反应。
9. 辅助诊断结缔组织病：玻片凝集反应可用于辅助诊断一些结缔组织病，例如系统性硬化症和多发性肌炎等。
通过检测血清中的特定抗体，可以确定是否存在结缔组织病。
10. 检测妊娠合并症：玻片凝集反应可用于检测妊娠合并症，例如子痫前期和胎儿宫内生长受限等。
通过检测血清中的特定抗体，可以确定是否存在妊娠合并症。
凝集反应的临床应用
凝集反应的临床应用凝集反应是一种常用的免疫学检查方法。
它是通过检测抗体与抗原发生特定的凝集反应，来判断体内是否存在特定的抗体或抗原。
在临床实践中，凝集反应被广泛应用于诊断各种疾病、监测治疗效果以及疫苗效力的检测等方面。
凝集反应在感染疾病的诊断中起到了非常重要的作用。
许多微生物在感染人体后会产生特定的抗原，而人体会相应地产生相应的抗体。
利用凝集反应可以检测是否存在相应的抗体或抗原，从而诊断疾病。
例如，利用肺炎球菌抗原检测试剂可以检测肺炎球菌抗原是否存在于尿液中，以判断是否患有肺炎球菌感染。
此外，凝集反应还可以用于诊断食品中毒、结核病、淋病等多种疾病。
在监测治疗效果方面，凝集反应也发挥了积极的作用。
例如，对于一些病毒性疾病，如乙型肝炎、艾滋病等，可以利用不同的凝集反应方法监测病毒抗体或病毒载量的变化，以判断治疗效果和预后。
此外，在抗生素治疗感染疾病的过程中，医生还可以通过凝集反应观察抗生素治疗的效果，根据结果做出调整治疗方案的决策。
凝集反应还可以应用于疫苗效力的检测。
很多疫苗都是通过激发机体产生相应的抗体来起到预防疾病的作用。
因此，疫苗的效力也可以通过监测接种后机体内是否产生了相应的抗体来评价。
例如，乙肝疫苗的效力可以通过检测接种后患者抗体水平的变化来评估。
对于某些高风险人群，如医护人员和部分工人，他们可能会接触到人传染禽流感病毒，因此接种相关疫苗可以大大减少他们感染病毒的风险。
在接种双价人类乳头瘤病毒（HPV）疫苗后，可通过检测患者血清样本中的抗体水平，对疫苗的接种效果进行评估。
总之，凝集反应在临床应用中起到了非常重要的作用，可用于诊断感染疾病、监测治疗效果和评估疫苗效力。
随着科技的不断进步，凝集反应也在不断发展和完善，为疾病的诊断和治疗提供更为准确和可靠的手段。
临床免疫学检验-第五章凝集反应和沉淀反应
Radial Immunodiffusion (RID)
Two methodologies of RID
Fahey method A linear relationship
exists between the log of the protein concentration and the diameter of the precipitin ring prior to equivalence (or completion)
FIGURE 6-5 Diagrammatic representation of radial & double immunodiffusion. : precipitation reactions in gels yield visible precipitin lines; no visible
Ability of a test to correctly identify individuals who HAVE a given disease/condition
How likely is the test to detect the presence of a characteristic in someone with the characteristic?
简单易行 特异性好 灵敏度低(10µg/ml) 时间长
免疫电泳技术
免疫电泳技术（immunoelectrophoresis technique）是可溶性抗原和抗体在直流电场 的作用下，在凝胶内加速定向运动，彼此相 遇结合，在比例合适处形成可见的沉淀物。
免疫电泳技术
免疫凝集法
免疫凝集法免疫凝集法是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗原与抗体之间的相互作用。
通过免疫凝集反应，可以便捷、快速地检测出某种抗原或抗体的存在，从而有助于诊断疾病、深入了解分子相互作用和开发新药等方面的研究。
免疫凝集法的原理是基于抗体与抗原间的特异性结合作用，从而形成可见的凝集物。
凝集物的形成使得液体呈现不透明的状况，这是由于较大的凝集物散射光线而引起的。
因此，通过观察凝集的形成，可以了解到是否存在目标抗原或抗体。
免疫凝集法有多种类型，包括直接凝集法、间接凝集法和逆凝集法等。
其中，最常用的是直接凝集法和间接凝集法。
直接凝集法是指在试验系统中直接加入特定抗原和抗体，并观察是否出现凝集反应。
该方法适用于已知特定抗原和抗体之间的关系，并且抗体能够和抗原结合产生凝集。
间接凝集法是指首先在试验系统中加入与抗原相对应的抗体，并且抗体能和抗原结合。
然后，加入可与抗体结合的辅助抗体，形成大的凝集复合物。
该方法适用于抗原与抗体之间的结合较弱，不易形成直接凝集复合物的情况。
逆凝集法是指首先在试验系统中加入可与抗体结合的聚合物，形成大的凝集复合物。
然后加入与抗原相对应的抗体，使得凝集复合物解离。
该方法适用于抗原与抗体结合较弱，不易形成直接凝集复合物的情况。
免疫凝集法的操作相对简单、快速，并且可以同时测试多个样本。
因此，这种方法广泛应用于临床诊断、流行病学调查和生物研究等领域。
在临床诊断中，免疫凝集法可以用于检测病毒、细菌和真菌感染等。
例如，通过检测病毒相关的抗体，可以确定病毒感染的类型和程度。
另外，免疫凝集法还可以用于肿瘤标志物的检测，从而帮助早期诊断和治疗肿瘤。
在流行病学调查中，免疫凝集法可以用于检测人群中是否存在某种病原体的感染。
例如，通过检测到人体中的特定抗体，可以了解到某种传染病的流行情况，并采取相应的控制措施。
在生物研究中，免疫凝集法被广泛应用于研究蛋白质相互作用、疾病机制等方面。
例如，通过这种方法可以了解到某种蛋白质是否与特定抗体结合，从而推断出其可能的功能和作用途径。
凝集实验的原理及应用是什么
凝集实验的原理及应用是什么1. 原理凝集实验是一种常用的生物学实验方法，用于检测抗体与抗原之间的相互作用。
它基于凝集反应的原理，即当抗体与抗原相结合时，会形成可见的凝集物。
凝集实验的原理可以归纳为以下几点：•抗体与抗原的特异性结合：抗体是免疫系统中产生的一种蛋白质，具有特异性，可以与特定的抗原结合。
当抗原与抗体结合时，会发生凝集反应。
•交联凝集：抗体与多个抗原结合时，会形成交联凝集。
交联凝集的形成最常见于溶液中的可溶性抗原，此时会形成可见的凝集物。
2. 应用凝集实验在生物学研究和临床诊断中具有广泛的应用。
下面列举了几种常见的应用：•血型鉴定：凝集实验可以用于血型鉴定。
不同的血型之间存在着特定的抗原和抗体反应关系。
凝集实验可以通过观察血液样本与不同类型的抗血清的反应来确定血型。
•免疫沉淀：凝集实验可以用于检测特定蛋白质与抗体之间的相互作用。
通过将待测蛋白与抗体共同加入溶液中，如果它们之间存在相互作用，将会形成可见的凝集。
•病原体诊断：凝集实验可以用于检测病原体感染。
许多病原体在感染过程中会产生特定的抗原，通过将患者样本与特定抗体结合，可以观察到是否发生凝集反应，从而判断是否存在病原体感染。
•免疫沉淀：凝集实验可以用于研究蛋白质之间的相互作用。
通过将待测蛋白与特定抗体结合，观察是否发生凝集反应，可以判断蛋白质之间的相互作用关系。
3. 实验步骤凝集实验的基本步骤如下：1.准备试样：根据需要，准备待测的抗原和抗体样本。
2.加入抗体：将待测抗原样本与特定抗体共同加入溶液中。
3.摇匀混合：轻轻摇晃试管，使抗体和抗原充分混合。
4.观察凝集反应：观察溶液中是否出现可见的凝集物。
5.结果分析：根据凝集的程度和形态，判断抗原和抗体之间的反应。
4. 结论凝集实验是一种常用的生物学实验方法，通过检测抗体与抗原之间的凝集反应，可以实现血型鉴定、病原体检测和蛋白质相互作用等应用。
凝集实验的原理基于抗体与抗原之间的特异性结合和交联凝集的原理。
免疫05 第五章 免疫凝集试验
本章小结
免疫凝集试验是指颗粒性抗原或覆盖了可溶性抗原（或 抗体）的致敏载体颗粒与相应抗体（或抗原）结合后，在适 宜的电解质条件下出现肉眼可见的凝集现象。包括直接免疫 凝集试验、间接免疫凝集试验等。
根据载体不同有多种试验类型，如协同免疫凝集试验、 间接免疫血凝试验、胶乳颗粒凝集试验、明胶颗粒凝集试验 、炭颗粒凝集试验、甲苯胺红颗粒凝集试验等。Coombs试验 也是临床常用的免疫凝集试验之一。
二、间接免疫凝集试验的临床应用
抗原的检测： 用于原体可溶性抗原的检测：如乙型肝炎病毒表面 抗原，细菌、腺病毒及流感病毒等的抗原鉴定和细菌可溶 性产物如外毒素等。 用于检测各种蛋白质成分：如尿液绒毛膜促性腺激素、纤 维蛋白原等血浆蛋白成分等。
间接免疫凝集试验的临床应用
抗体的检测： 用于检测细菌、病毒、螺旋体、寄生虫等感染后产生 的抗体：如抗人类免疫缺陷病毒抗体、抗溶血素O、梅毒螺 旋体抗体等。 用于检测自身免疫性疾病的抗体：如类风湿因子、抗 DNA抗体和抗甲状腺蛋白抗体等。 用于超敏反应患者的抗体测定：如青霉素抗体、某些 花粉抗体等。
（一）正向间接免疫凝集试验：测抗体
间接免疫凝集试验的类型
（二）反向间接免疫凝集试验：测抗原
间接免疫凝集试验的类型
（三）间接免疫凝集抑制试验：可测抗原，也可测抗体
间接免疫凝集试验的类型
（四）协同免疫凝集试验：测抗原，原理与反 向间接免疫凝集试验相似。
所用载体是细胞壁含有A蛋白（SPA）的金黄色 葡萄球菌，SPA具有与IgG（IgG3除外）的Fc段结合 的特性。
免疫凝集试验可作定性检测，也可进行半定量检测。 适当的室内质量控制措施可保证检测方法的有效性和检 测结果的可靠性。
Thank you !
免疫凝集反应实验报告
免疫凝集反应实验报告免疫凝集反应实验报告免疫凝集反应是一种常用的实验方法，用于检测特定抗原和抗体之间的相互作用。
通过观察凝集反应的形成与否，可以判断样品中是否存在目标物质，从而进行疾病的诊断和治疗。
在本次实验中，我们选择了血清中的抗体作为检测目标。
首先，我们需要制备一系列稀释的抗原溶液，以便与待测抗体发生反应。
这些抗原溶液可以是细菌、病毒、细胞膜蛋白等。
在实验中，我们选择了一种常见的病原体，即流感病毒。
接下来，我们需要将待测抗体与抗原溶液混合。
在混合过程中，抗体与抗原之间会发生特异性结合，形成免疫复合物。
当抗原与抗体的浓度适当时，免疫复合物会发生凝集反应，即形成可见的沉淀物。
为了观察凝集反应的结果，我们采用了显微镜进行观察。
将混合液滴在载玻片上，然后放置在显微镜下进行观察。
如果出现了凝集反应，我们可以看到显微镜下形成的沉淀物。
沉淀物的形状和大小可以提供有关抗原与抗体结合程度的信息。
在实验过程中，我们发现了一些有趣的现象。
首先，我们发现凝集反应的程度与抗原与抗体的浓度有关。
当抗原或抗体的浓度过高或过低时，凝集反应的程度都会减弱。
这是因为在过高或过低的浓度下，抗原与抗体的结合机会减少，从而减少了凝集反应的可能性。
其次，我们还观察到了凝集反应的时间和温度对实验结果的影响。
在适宜的温度下，凝集反应的速度会加快，形成的凝集物也更为明显。
然而，过高或过低的温度都会影响凝集反应的进行，甚至完全阻止凝集的形成。
因此，在进行免疫凝集反应实验时，选择适宜的温度非常重要。
最后，我们还进行了一些控制实验，以确保实验结果的准确性。
例如，我们在反应中添加了阴性对照组，即不含抗原的溶液。
通过与阴性对照组进行比较，我们可以排除非特异性凝集的可能性。
此外，我们还进行了阳性对照实验，即添加已知含有抗原的溶液。
阳性对照实验的结果可以验证我们实验的可靠性和准确性。
总结起来，免疫凝集反应是一种简单而有效的实验方法，用于检测特定抗原和抗体之间的相互作用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
.
间接凝集反应
➢正向间接凝集试验 ➢反向间接凝集试验 ➢间接凝集抑制试验 ➢协同凝集试验
.
正向间接凝集反应
用抗原致敏载体--检测抗体
.
间接Coombs试验
检测血清中游离的不完全抗体
.
临床应用
➢检测母体Rh(D)抗体 ➢检测红细胞不相容的输血所产生 的血型抗体
.
.
免疫凝集反应及临床应用
刘静 2014.11.26
凝集反应定义
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗 原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏 颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应， 在一定条件下，形成肉眼可见的凝集现象。
.
凝集反应
反应阶段：
➢抗原抗体的特异性结合阶段
➢出现肉眼可见的凝集现象
➢ 当致敏明胶颗粒与样品血清作用时，若血清 含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色 凝集
➢ 常用于抗HIV-1抗体和抗精子抗体的检测
➢ 梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)
.
抗球蛋白参与的血凝试验
.
抗球蛋白参与的血凝试验
➢ 又称Coombs试验，利用抗球蛋白抗体作为第二 抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体 ，使红细胞凝集
红细胞 抗原 致敏
待测抗体
间接血凝试验原理
.
致 敏 红 细 胞
集红 细 胞 凝
血凝试验强度
-：红细胞沉积于孔底 +：红细胞沉积于孔底，周围有散在少量凝集 ++：红细胞形成凝集，面积较小，边缘较松散 +++：红细胞形成片层凝集，面积略多于++ ++++：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状
.
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 弃掉0.5
菌液 1
2 3 45 6 7
结 果
试管凝.集试验原理
试管凝集试验结果判断
上清 清亮 轻度混浊 中等混浊 混浊 与对照相同
沉淀 大的凝集块 大多凝集管底 小、部分凝集块 很小的凝集颗粒 无凝集现象
.
凝集程度 ++++ +++ ++ + -
管底沉淀 凝集程度
➢ 用于检测抗红细胞不完全抗体
➢ 不完全抗体：能与颗粒抗原牢固结合，但一般不 出现可见反应，多为7S的IgG
➢ 诊断免疫性溶血性贫血的主要方法
.
抗球蛋白参与的血凝试验
分为两种方法： ➢ 直接Coombs试验 ➢ 间接Coombs试验
.
直接Coombs试验
检测红细胞上的不完全抗体
.
临床应用
➢新生儿溶血症 ➢自身免疫性溶血症 ➢特发性自身免疫性贫血 ➢医源性溶血
.
混 合
SPA
IgG
原理图
SPA- IgG
SPAIgG-待测 抗原凝集
颗粒 .
待测抗原
按载体分类间接凝集试验
➢间接血凝试验 ➢胶乳凝集试验 ➢明胶凝集试验
.
间接血凝试验
➢ 以红细胞为载体的间接凝集试验。 ➢ 将已知抗原(或抗体）致敏红细胞，
与相应抗体（或抗原）特异结合，出 现红细胞凝集现象。
.
.
自身红细胞凝集试验
➢ 与一般间接血凝试验不同 之处为反应中的红细胞是未 经致敏的受检者新鲜红细胞 ➢ 主要试剂材料为抗红细胞 单克隆抗体，能与红细胞结 合，但不引起凝集反应 ➢ 这种抗体与另一特异性抗 体连接成的双功能抗体可用 于检测标本中的抗原 ➢ 如与特异性抗原连接，则 可用于检测标本中的抗体 ➢ 反应中的标本为受检者的 全血 ➢ HIV抗体、HBV抗原检测
反应特点：
➢IgM的作用比IgG大数百倍
➢IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全 抗体
.
可见反应形成
.
环境因素
电解质：稀释液或缓冲液（8.5g/L NaCl） pH：pH6～pH9（ pH3为细菌抗原的等电点） 温度：15℃～40℃，37℃最适（ 4℃特例 ） 反应时间：不同反应时间不同 外力：震荡或搅拌
.
反向间接凝集反应
用抗体致敏载体----检测抗原
.
间接凝集抑制反应
用抗原致敏载体--检测抗原
有凝集颗
粒为阴性
.
协同凝集反应
➢ 反向间接凝集试验，载体为金黄色葡 萄球菌
➢ 金黄色葡萄球菌的细胞壁成分A蛋白， 和IgG的Fc段结合，使Fab段暴露在菌 体表面， Fab段仍然保持正常的抗体 活性。
➢ 利用这种特性可以将特异性IgG结合在 菌体上，形成致敏颗粒，检测特异性 抗原。
.
胶乳凝集试验
➢ 以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应
➢ 胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定 ，均一性好
➢ 但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细 胞
➢ 因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度 不及血凝试验
.
明胶凝集试验
➢ 以明胶为载体颗粒的间接凝集反应
➢ 用粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原或重组抗原
.
分类：直接与间接凝集反应
.
直接凝集反应 direct agglutination
颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质 的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。
包括：
玻片凝集试验 试管凝集试验
.
➢玻片凝集试验：
定性 已知抗体检测抗原 简便、快速 菌种的诊断或分型 ABO血型的鉴定
.
➢试管凝集试验：
半定量 已知抗原检测抗体 易引起抗原的非特异性凝集 肥达试验
试管凝集试验 结果判断
最高稀释比例
待测血清的滴度
.
间接凝集反应 indirect agglutination
将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表 面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解 质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象
.
载体种类
➢RBC、白பைடு நூலகம்土、活性炭、某些细 菌、聚苯乙烯胶乳颗粒
良好载体有如下几点基本要求：①在生理盐水或缓冲液无自凝倾向；②大小 均匀；③比重与介质相似，短时间内不能沉淀；④无化学或血清学活性；⑤吸 附抗原（或抗体）后，不影响其活性。