临床检验主管技师 临床检验基础 第二章 红细胞检查

第二章红细胞检查

概要

红细胞生理RBC生成

衰老红细胞主要在脾破坏，分解为铁、珠蛋白和胆红素。

血红蛋白（hemoglobin，Hb）

1.Hb分子结构和特点

（1）结构：由两对珠蛋白肽链和4个亚铁血红素构成。

①珠蛋白：4条肽链（α、β链）

②亚铁血红素：原卟啉、铁

（2）特点

①正常情况下，99%血红蛋白为还原血红蛋白，1%为高铁血红蛋白。

②只有Fe2+状态的血红蛋白才能与氧结合，称为氧合血红蛋白。

③出生后3个月，HbA占95%以上，而HbF＜1%。

④血红蛋白合成受红细胞生成素、雄激素调节。

⑤血红蛋白相对分子质量为64458。

⑥血红蛋白降解产物为珠蛋白、血红素。

红细胞计数

【检测原理】

1.手工显微镜法：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入血细胞计数池，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求出每升血液中红细胞数量。

稀释→充池→计数→计算

2.血液分析仪法：用电阻抗和（或）光散射原理。【稀释液】

1.Hayem液

氯调渗，硫防聚，高汞防腐且有毒。

2.枸橼酸钠稀释液：

枸橼酸钠---抗凝和维持渗透压

甲醛---防腐和固定红细胞

氯化钠---调节渗透压

蒸馏水

3.普通生理盐水或加1%甲醛的生理盐水。

改良牛鲍计数板（血细胞计数板）

【血细胞计数板口诀】

改良牛鲍H型，上下两池容点1，

四角中央五大格，四角单线白细胞，

单线分成16中，中央双线红与血，

双线分成25中，每中单线16小。

【操作方法】

稀释液2ml＋血10μl→混匀→充池→静止3～5min →镜检

【计算】

白细胞影响：

通常白细胞总数较少，仅相当于红细胞的1/500～1/1000，对结果影响很小，可以忽略不计。但白细胞过高者（WBC＞100 ×109/L），红细胞计数结果应进行校正。

校正方法有两种：

一：直接将患者红细胞数减去白细胞数。

二：在高倍镜下勿将白细胞计入，白细胞体积常比红细胞略大，中央无凹陷，细胞核隐约可见，无黄绿色折光。

【方法学评价】

1.手工显微镜法

是传统方法，不需要特殊设备，但操作复杂、费时。

2.血液分析仪法

是常用方法，比手工法精确（如电阻抗计数法的变异系数为2%，手工法则大于11%），且操作简便、快速。当白细胞数量明显增高时，会干扰红细胞计数和体积测定而产生误差。成本高，环境条件要求高。

【质量控制】

1.手工法：误差原因

①样本：血液发生凝固，使细胞计数减少或分布不均。

②操作：稀释、充池、计数不规范。

③器材：微量吸管、计数板不标准。

④固有误差（计数域误差）

2.仪器法：应严格按规程操作，并定期进行室内质控和室间质评。

【参考值】

成年男性：（4.0～5.5）×1012/L

成年女性：（3.5～5.0）×1012/L

新生儿：（6.0～7.0）×1012/L

医学决定水平：

高于6.8×1012/L，应采取治疗措施。

低于参考值低限，为诊断贫血界限。

低于1.5×1012/L，应考虑输血。

【临床意义】

1.生理性变化

●增多

年龄、性别、精神因素、剧烈体力劳动或运动、新生儿、高原居民等。

●减少

老年人、妊娠中后期等。

2.病理性变化

（1）RBC和Hb减少

贫血：单位容积血液中RBC数量、Hb量或HCT低于参考值的下限。

1）急、慢性红细胞丢失过多：各种原因出血，如消化性溃疡、痔疮、十二指肠钩虫病等。

2）红细胞寿命缩短：各种原因溶血，如输血溶血反应、蚕豆病、遗传性球形细胞增多症等。

3）造血原料不足：如慢性失血者、先天性或后天性红细胞酶缺陷者、铁粒幼细胞贫血；某些药物，如异烟肼、硫唑嘌呤等；继发于某些疾病，如类风湿性关节炎、白血病、甲状腺功能亢进、慢性肾功能不全、铅中毒等。

4）骨髓造血功能减退：某些药物，如抗肿瘤药物、磺胺类药物、保泰松、有机砷等可抑制骨髓造血功能；物理因素，如X线、60钴、镭照射等可抑制骨髓造血功能。继发于其他疾病，如慢性肾功能衰竭；原发性再生障碍性贫血。

（2）RBC增多

1）相对增多：

呕吐、严重腹泻、多汗、多尿、大面积烧伤、晚期消化道肿瘤而长期不能进食等引起血液浓缩、血液中有形成分相对增多，多为暂时性增多。

继发性：

①心血管病：各种先天性心血管疾病，如房室间隔缺损。

②肺部疾病：肺气肿、肺源性心脏病、肺纤维化、矽肺和各种引起肺气体交换面积减少。

③异常血红蛋白病。

④肾上腺皮质功能亢进（库欣病）：可能与皮质激素刺激骨髓使红细胞生成偏高有关。

⑤某些药物，如肾上腺素、糖皮质激素、雄激素等。

原发性：如真性红细胞增多症（PV）、良性家族性红细胞增多症。

血红蛋白测定

【检测原理】

1.氰化高铁血红蛋白HiCN测定法：除SHb外

ICSH推荐参考方法，具有操作简单、显色快、结果稳定可靠、读取吸光度后可直接定值等优点。致命的弱点是氰化钾（KCN）试剂有剧毒，使用管理不当可造成公害。

氰化高铁血红蛋白测定法操作

（1）直接测定法

①加转化液：试管内加5ml HiCN转化液

②采血与转化：取全血20μl，加到盛有转化液的试管底部，用上清液反复冲洗吸管3次，充分混合，静置5min。

③测定：以符合WH0标准的分光光度计，波长540nm处，光径（比色杯内径）1.000cm，HiCN转化液或蒸馏水调零，测定吸光度（A）。

④计算：根据样本的吸光度（A）直接计算出血红蛋白浓度（g/L）

（A为测定管吸光度，44为毫摩尔消光系数，64458/1000为1mol/L Hb溶液中所含Hb克数，251为稀释倍数。）

（2）HiCN标准液比色法测定

HiCN参考液（50g/L、100g/L、150g/L、200g/L），分别测得540nm处的吸光度，以参考液血红蛋白含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线或求出K值。

①标准曲线绘制和K值计算

②样本吸光度（A）

③通过标准曲线查出样本血红蛋白浓度，或用K值计算，血红蛋白浓度Hb（g/L）＝K×A。

注意事项

（1）标本：异常血浆蛋白质、高脂血症、白细胞数超过30×109/L、脂滴等可产生浊度，干扰Hb测定。

（2）HiCN转化液是一种低离子强度、pH近中性的溶液（7.2±0.2）。样本中白细胞过高或球蛋白异常增高时，HiCN比色液会出现浑浊。

（3）HiCN贮存：转化液贮存在棕色有塞玻璃瓶中，不能贮存在塑料瓶中，否则会使CN-丢失，测定结果偏低。HiCN转化液在4℃保存一般可数月，不能在0℃以下保存，因为结冰可使高铁氰化钾还原，试剂失效。

（4）氰化钾试剂是剧毒品，测定后的废液应收集于广口容器中，首先以水稀释废液（1:1），再按每升上述稀释液加次氯酸钠35ml，充分混匀，敞开容器，放置15h以上，使CN-氧化成C02和N2挥发，或水解成C032-和NH4＋，再排入下水道。废液不能直接与酸性溶液混合，因为氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体。

2.十二烷基硫酸钠血红蛋白SDS测定法：

具有操作简单、呈色稳定、准确性和精确性符合要求、无公害等优点。但由于摩尔消光系数尚未最后确认，不能直接用吸光度计算Hb浓度，而且SDS试剂本身质量差异较大，会影响检测结果。

3.HiN3最大吸收峰542nm，显色快，结果稳定。

【参考值】

成年男性：120～160g/L（士/师：120～170g/L）

成年女性：110～150g/L

新生儿：170～200g/L

【临床意义】