临床免疫学凝集反应

第五章凝集反应

本章考点

1.概述

2.直接凝集反应

3.间接凝集反应

第一节概述

细菌、红细胞等颗粒抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象，称凝集反应。

凝集反应分为两个阶段：①抗原抗体的特异性结合；②出现可见的颗粒凝聚。

凝集反应的特点：凝集试验是一个定性的检测方法，即根据凝集现象的出现与否判定结果阴性或阳性；也可以进行半定量检测，即将抗体作一系列稀释，与抗原结合产生凝集的最高稀释倍数作为其效价或滴度。由于凝集反应灵敏度高、方法简便，因而在临床检验中被广泛应用。

第二节直接凝集反应

直接凝集反应：其原理是细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原，在适当的电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称直接凝集反应。参加凝集反应的抗原称凝集原，抗体则称为凝集素。从方法上来讲，有玻片法和试管法两类。

玻片法凝集主要用于抗原的定性分析，短时间便能观察结果，一般用来鉴定菌种或分型；也用于人类AB0血型的测定。

试管凝集反应是用定量抗原悬液与一系列递度倍比稀释的待检血清混合，保温静置后，根据每管内颗粒凝集的程度，以判断待检血清中有无相应抗体及其效价，可以用来协助临床诊断或流行病原调查研究。例如Widal反应、Well-Felix反应、输血时也常用于受体和供体两者间的交叉配血试验。

第三节间接凝集反应

间接凝集反应是将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒载体表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在适宜电解质存在的条件下，出现特异性凝集现象，称间接凝集反应。

根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的方式，间接凝集反应分为4类：①正向间接凝集反应；

②反向间接凝集反应；③间接凝集抑制反应；④协同凝集反应。

图14 （正向）间接凝集反应（查抗体）

图15 （反向）间接凝集反应（查抗原）

图16 间接凝集抑制试验（查抗原）

（上图为标本中含有待测抗原，下图为标本中无待测抗原，注意凝集说明标本中没有待测抗原）

间接凝集反应适用于各种抗体和可溶性抗原的检测。以载体来分，常用的为红细胞、胶乳颗粒及明胶颗粒等。

常用的试验有：

1.间接血凝试验：其原理是将抗原（或）抗体包被于红细胞表面，成为致敏载体，然后与相应的抗体（或抗原）结合，从而使红细胞被动地凝聚在一起，出现可见的凝集现象。

间接血凝试验可分为三类：①红细胞包被抗原，用以检测抗体的血凝，称为正向间接血凝反应（PHA）；

②红细胞包被抗体，用以检测抗原的血凝反应，称为反向间接血凝反应（RPHA）；③先将可溶性抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）混合然后再加入抗原（或抗体）致敏的红细胞，则能抑制原先的血凝现象，称为正向（或反向）间接血凝抑制试验。间接血凝抑制试验可用于检测抗体、自身抗体、变态反应性抗体，也可测定抗原。

间接血凝试验—：红细胞沉积于管底；1+：红细胞沉积于管底，周围有散在少量凝集；2+：红细胞形成片层凝集，面积较小，边缘较松散；3+：红细胞形成片层凝集，面积多于2+；4+：红细胞形成片层凝集，均匀布满孔底，或边缘皱缩如花边状。

2.胶乳凝集试验：胶乳凝集试验也是一种间接凝集试验，所用载体为聚苯乙烯胶乳，是一种直径约为

0.8μm大小的圆形颗粒，带有负电荷，可物理性吸附蛋白分子，但这种结合牢固性差。胶乳凝集试验分试管法和玻片法两种。胶乳凝集试验用于检测抗溶血素O、RF等。

3.明胶凝集试验：将全病毒抗原及重组抗原吸附在粉红色明胶颗粒上，来检测相应抗体。

间接凝集反应具有快速、敏感、操作简便、无需特殊的实验设备等特点，而且能用于抗原或抗体的测定，因此在临床检验中广为应用。

（1）抗原的检测：反向间接凝集试验用于检测病原体可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。

（2）抗体的检测：可用于检测细菌、病毒和寄生虫等感染后产生的抗体，例如间接凝集试验或明胶颗粒凝集试验用于检测抗人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体以诊断艾滋病、乳胶凝集试验用于检测抗溶血素O等。

第四节自身红细胞凝集试验

其基本原理是抗人O型红细胞的单克隆抗体能与任何种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应，这种抗体与另一特异性抗体连接成的双功能抗体，可用于检测标本中的抗原；如与特异性抗原连接，则可用于检测标本中的抗体。这一试验与上述血凝试验的区别在于反应中的红细胞是未经致敏的受检者新鲜红细胞，因此反应中的标本为受检者的全血。自身红细胞凝集可用于HIV抗体、HBsAg的检测，灵敏度与间接血凝试验相仿。

第五节抗人球蛋白参与的血凝试验

抗人球蛋白参与的血凝试验，称Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的一种很有用的方法。包括直接Coombs试验和间接Coombs试验，分别检测红细胞上的不完全抗体和游离在血清中的不完全抗体。

Coombs试验除广泛应用于血液病的检测，如自身免疫性溶血性贫血、药物诱导的溶血、新生儿溶血症等。还可采用专一特异性的抗球蛋白的血清如抗IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗补体血清等，分析结合于红细胞上的不完全抗体的免疫球蛋白亚类。

图18 Coombs试验（上图为直接试验，下图为间接试验）

习题29 ABO血型鉴定最常采用的方法是

A.正向间接凝集反应

B.反向间接凝集反应

C.玻片凝集法

D.试管凝集法

E.间接凝集抑制反应

[答疑编号500734050101]

『正确答案』C（属于直接凝集反应）

习题30 外裴试验最常采用的方法是

A.正向间接凝集反应

B.反向间接凝集反应

C.玻片凝集反应

D.试管凝集法

E.间接凝集抑制反应

[答疑编号500734050102]

『正确答案』D

习题31 SPA协同凝集试验中的抗体类别是

A.IgM

B.IgG

C.IgA

D.IgE

E.IgD

[答疑编号500734050103]

『正确答案』B

『答案解析』SPA协同凝集反应属于间接凝集反应，但所用载体既非天然红细胞，也非人工合成的聚合物颗粒，而是一种金黄色葡萄球菌。它的菌体细胞壁中含有A蛋白（SPA）。SPA具有与IgG的Fc段结合的特性，因此当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体。如与相应抗原接触，即出现反向间接凝集反应。

习题32 下列有关协同凝集试验中的叙述中，错误的是

A.属于间接凝集反应

B.以金黄色葡萄球菌作为颗粒性载体

C.菌体的细胞壁中含有SPA，可与IgG特异性结合

D.IgG通过其Fab段结合菌体

E.主要应用于可溶性抗原的检出

[答疑编号500734050104]

『正确答案』D

习题33-1 不能促使凝集现象出现的措施是

A.增强溶液离子强度

B.增加溶液的粘度

C.增加蛋白质或电解质

D.通过离心使复合物沉沉

E.降低溶液离子强度

[答疑编号500734050105]

『正确答案』A

『答案解析』除了A之外，其他措施均可促使凝集现象的出现。本题超出教材内容。

习题33-2 凝集试验中，为促成凝集现象出现，可采用多种方法，但不包括