植物凝集素的分离纯化及部分性质测定
猴头菌凝集素的分离、纯化及理化性质的实验草案
猴头菌凝集素的分离、纯化及理化性质的实验草案
一、材料与方法
1.主要材料猴头菌
2.主要试剂硫酸铵(固体)
3.主要仪器离心机血凝板
4.试验方法
（1）凝集素分离纯化：
称取猴头菌实体100g，剪碎，加入适量的生理盐水并研磨均匀，将得到的提取液进行抽提，离心，在上清液加入固体硫酸铵达饱和度进行盐析，取沉淀透析除盐得凝集素粗品。
Sepharose 4B或6B经活化处理后，装柱并经缓冲液平衡，结合相应的糖分子。
凝集素粗品经同一缓冲液平衡后上柱，用平衡缓冲液洗去杂蛋白，至A280小于0.02后改用相应糖溶液洗脱，收集并检测A280。
收集的溶液透析除糖，冻干即得不同糖结合专一性的猴头凝集素纯品。
（2）凝集素的凝集活性：
把待测样品在血凝板上进行倍比稀释，加入2%血球悬液，静止后观察结果，以最后一个使红细胞凝集的孔的凝集素浓度作为最低抑制浓度。
（3）凝集素的理化性质：
①糖抑制试验：将不同的糖溶液倍比稀释后与等体积的不同凝集素相互孵育，然后与2倍体积的2%红细胞悬液相互作用，抑制凝集素的红细胞凝集活性的最小糖溶液浓度作为糖的最低抑制浓度。
②温度稳定性：凝集素在不同温度下（0，10，20，30，40，50，60，70，80，90，100℃）处理30 min后，检测其红细胞凝集活性。
③pH稳定性：凝集素与不同pH值（1-14）的缓冲液孵育60 min，然后调节pH至7.0，检测其红细胞凝集活性。
二、结果分析
三、讨论。
红藻琼枝麒麟菜中凝集素的提取、纯化及其性质研究
红藻琼枝麒麟菜中凝集素的提取、纯化及其性质研究黄丽波;沈伟哉;李药兰;岑颖洲;许少玉【期刊名称】《华西药学杂志》【年(卷),期】2002(17)6【摘要】目的从琼枝麒麟菜中分离纯化凝集素 ,并测定其生物活性。
方法采用缓冲液低温提取、4 0 %～ 90 %(NH4) 2 SO4分级盐析沉淀、SephadexG - 75凝胶过滤层析进行纯化 ;SDS -PAGE检测其纯度和测定分子量 ;考察该凝集素凝血活性的血型专一性 ,糖抑制性及高温、酸、碱处理下的稳定性。
结果琼枝麒麟菜中有凝集素 ,分子量为2 90 0 0。
该凝集素对人A、B、O和AB 4种类型血细胞均显凝血活性 ,该活性对高温、酸、碱处理有较好的稳定性。
结论琼枝麒麟菜中存在凝集素。
【总页数】3页(P406-408)【关键词】提取;纯化;性质;琼枝麒麟菜;凝集素;凝血活性;植物药【作者】黄丽波;沈伟哉;李药兰;岑颖洲;许少玉【作者单位】暨南大学生命科学技术学院化学系;暨南大学医学院解剖学教研室【正文语种】中文【中图分类】R284.2【相关文献】1.琼枝和异枝麒麟菜中硫酸酯基多糖不同提取方法的化学分析比较 [J], 梁智渊;岑颖洲;叶绍明;伍秋明2.麒麟菜多糖的研究——Ⅱ琼枝多糖溶液的流变性质 [J], 郑淑贞;林瑞洵;庞建昌;陈世雄3.麒麟菜多糖的研究——Ⅰ．琼枝多糖的性质及其红外光谱 [J], 郑淑贞;陈欣权;曾丽仙;庞建昌;林瑞洵;林慧贞4.超声波辅助酶法提取琼枝麒麟菜多糖及其理化性质研究 [J], 李继伟;杨贤庆;许加超;潘创;戚勃5.超声波辅助酶法提取琼枝麒麟菜多糖及其理化性质研究 [J], 李继伟;杨贤庆;许加超;潘创;戚勃因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
饲料中大豆凝集素的分离纯化与生物活性测定
２ ． ５ 后备母猪选育
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案 ，了解祖代、父代 、同胞 、半同胞的信息。
不 良的遗传性状将直接决定它们对肢蹄病 的易感程 度 ，肢 ３ 蹄病治疗 势、肢型与遗传有很大关系 。 治疗蹄病要 以准确诊断为基础 ，根据母猪 的临床症状 ，通 过细致 的问诊 、望诊 、触诊 以及各种特殊检查等诊断程序 ，确定 １ ． ３ 饲养管理 因素 １ ． ３ ． １ 饲养环境 如限位饲养方式、粗糙的地板、漏粪板尖锐的 肢蹄病 的发病原因，根据发病原 因的不同 ，采取相应的措施 ，如 边缘 、湿滑的地 面、不合理的粪尿沟、潮湿高温的环境都会引起 果是疾病引起的应该积极治疗原发病 ；如果是环境 因素引起的 ，
采用高碘酸钠法将林可霉素与牛血清 白蛋 白 （ Ｂ Ｓ Ａ）及鸡卵清蛋 白 （ Ｏ Ｖ Ａ）分别偶联 ，合成免疫原Ｌ Ｉ Ｎ — Ｂ Ｓ Ａ 和包被原Ｌ Ｅ Ｎ — Ｏ Ｖ Ａ， 中采 并 采用 紫外分光光度法 （ ｕ ｖ）和聚丙烯 酰胺凝胶 电泳 （ Ｓ Ｄ Ｓ — 高 。且Ｎ 一 乙酰基一 Ｄ 一 半乳糖胺对大豆凝集素的亲和力较高 ，所制 Ａ Ｇ Ｅ）进行鉴定 。结果表明，半抗原Ｌ Ｉ Ｎ 和载体蛋 白偶联成功。 备的大豆凝集素活性测定与标准品一致，试验结果表 明， 该法是 Ｐ 动物免疫试验 （ 免疫Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ￣纯系小 鼠 ）结果显示 ，３ 只小 鼠效价 目 前制备大豆凝集素的最优方法 。 均 达 １： ３ ０ ０ ０ ，且 ２ 号 小 鼠多 抗 血 清 抗 Ｌ Ｉ Ｎ的半 数 抑 制 质量 浓 度 Ｃ ５ ０ 为３ ． ８ ５ ｇ ， Ｌ ，与莫能菌素的交叉反应率为６ ． １ ９ ％，与其他药物 林可霉素人工抗原的合成与鉴定／ 张小辉 （ 河南省农业科学 Ｉ 无交叉反应。表明成功获得高效价 、特异性好 、亲和力高的鼠源 院 农 业部 动 物免 疫 学重 点 开放 实 验 室河 南 省动 物 免疫 学 重 Ｉ Ｎ 多抗 血清 。 点实验室 ，郑州 ４ ５ ０ ０ ０ ），职爱民，侯玉 泽…／ ／ 西北农 抗 Ｌ
绿豆凝集素的分离提取及其部分性质研究
绿豆凝集素的分离提取及其部分性质研究凝集素(Lectin)是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球（含血型物质），故名凝集素。
凝集素在动、植物体内广泛存在。
凝集素具有糖基结合特异性，一种凝集素仅对某一种特定的糖基专一性结合，因此凝集素可以作为探针等研究工具，并且研究凝集素的特异性有助于以分子或原子层次了解生命现象或病理变化。
本文对绿豆凝集素进行了分离提取及纯化，并对其部分基础性质进行初步研究。
绿豆凝集素的凝集活性检测采用凝血法检测，对新鲜兔血红细胞进行处理，戊二醛浓度0.15%(V/V)，固定时间为20min；胰蛋白酶浓度25U/mL，25℃处理15min；提高了兔血红细胞凝集灵敏度且延长了兔血红细胞保存时间。
绿豆凝集素的提取采用磷酸盐缓冲溶液(PBS)，最佳浸提溶液条件：0.2mol/L、pH7.2PBS。
将绿豆干粒粉碎100目，以料液比0.09（浸提液为1），NaCl浓度0.3mol/L，浸提时间4.16h，20℃下浸提，所得粗提液中绿豆凝集素比活力137.4U/mg。
对绿豆凝集素粗提液进行硫酸铵双重盐析，收集50%~60%饱和度沉淀，凝集素比活力达到805.9U/mg。
采用PEG600-硫酸铵双水相体系，PEG600质量分数15%，硫酸铵质量分数25%，绿豆凝集素样品浓度8mg/mL，萃取后绿豆凝集素凝血活性达到1307.8U/mg。
经过葡聚糖凝胶过滤后凝集活性为1961.9U/mg。
绿豆凝集素具有较强的抗热处理能力，对酸有一定的耐受性，在低pH下依然能保持凝集活性，但是碱性条件下耐受性较差，在pH为8.11的条件下很快失活，在pH6.5~7.5之间具有最大凝集活性。
绿豆凝集素SDS-PAGE电泳显示两条带，凝集素分子量约156.33KDa。
紫外吸收光谱显示具有特征吸收峰为234nm和275nm。
绿豆凝集素的纯化及性质研究的开题报告
绿豆凝集素的纯化及性质研究的开题报告一、选题背景绿豆凝集素（Phytohemagglutinin，PHA）是一种从天然植物中提取的蛋白质凝集素，在免疫反应和癌症治疗中具有很大的潜力。
绿豆凝集素通过选择性结合细胞表面的糖基化蛋白，使得细胞发生凝集，从而对人体免疫系统相关的细胞和病理性细胞进行研究和治疗。
现有文献中对绿豆凝集素的纯化及其生物学特性研究较少，因此本研究将从绿豆中提取绿豆凝集素并对其进行纯化和性质的研究，为其在临床医学中的应用提供理论基础。
二、研究目的1. 通过对绿豆进行提取和分离，纯化绿豆凝集素，分析绿豆凝集素的生物学性质和纯度。
2. 研究绿豆凝集素在不同条件下的凝集作用及其对血管内皮细胞的作用，探讨其在生物医学领域中的应用前景。
三、研究内容1. 绿豆凝集素的提取和分离：采用醋酸提取法、盐析、凝胶层析等方法对绿豆凝集素进行提取和纯化。
2. 绿豆凝集素的生物学性质分析：采用SDS-PAGE、UV-Vis光谱、免疫印迹、比色法等方法对纯化后的绿豆凝集素进行分析，评估其纯度和生物学活性。
3. 绿豆凝集素的凝集作用和对血管内皮细胞影响的研究：采用细胞实验、体外实验等方法研究绿豆凝集素的作用机制和应用前景。
四、研究意义1. 为绿豆凝集素在临床医学中的应用提供理论基础。
2. 深入探讨绿豆凝集素的生物学性质及其与肿瘤、自身免疫性疾病等疾病的关系，为其开发新药提供依据。
3. 对于理解绿豆的生物学特性，尤其是其对细胞的凝集作用机制，具有一定的学术价值。
五、研究方法与技术路线1. 绿豆凝集素的提取和分离（1）醋酸提取法：将绿豆粉末用生理盐水混合，过滤得到绿豆提取液，再用醋酸沉淀法进行提取与分离。
（2）盐析：将绿豆提取液采用逆流法与硫酸铵逐渐递增加盐，使绿豆凝集素逐渐析出。
（3）凝胶层析：将分离得到的绿豆凝集素溶液与聚丙烯酰胺凝胶混合，在特定的pH值下进行层析。
2. 绿豆凝集素的生物学性质分析（1）SDS-PAGE：对分离纯化后的绿豆凝集素进行SDS-PAGE电泳检测，确定其分子量和纯度。
植物凝集素的分离纯化及部分性质测定
第11周 2011-5-3/4植物凝集素的分离纯化及部分性质测定分离纯化工艺策略：主要是根据物质的结构和性质来选用各种纯化技术。
工艺次序的选择策略包括：1.应选择不同机理的分离单元组成一套工艺；2.应将含量多的杂质先分离出去；3.尽早采用高效分离手段；4.将最昂贵、最费时间的分离单元放在最后阶段。
也就是说，通常先运用非特异、低分辨的操作单元，如沉淀、超滤和吸附等，这一阶段主要目的是尽量缩小样本体积，提高目的物浓度，去除最主要的杂质（包括非蛋白质类杂质）；5.随后是高分辩率的操作单元，如具有选择性的离子交换色谱和亲和色谱，而将凝胶过滤色谱这类分离规模小、分离速度慢的操作单元放在最后，这样可以使分离效益大大提高。
色谱分离的次序。
一个合理组合的色谱次序能够克服某些方面的缺点，同时很少改变条件即可进行各步骤之间的过渡。
如：◇在离子交换色谱之后进行疏水作用色谱，不必经过缓冲液的交换，因为多数蛋白质在高离子强度下与疏水介质结合能力较强。
◇凝胶过滤色谱放在最后一步又可以直接过渡到适当的缓冲体系中以利产品成形保存。
总之，蛋白质的纯化大至步骤为：样品经初步提取筛除部分杂质后，选择不同的层析手段相互配合进一步提纯。
第一部分离子交换层析1. 原理：离子交换层析（Ion-exchange chromatography，IEC）是以离子交换剂为固定相，以特定的含离子的溶液为流动相，利用离子交换剂对各类化学物质或生物大分子因电荷差异而产生不同的结合力，从而将混合物中不同组分进行分离的层析技术。
Cation exchanger（阳离子交换）: 层析介质本身带负电荷,交换带正电荷物质Anion exchanger （阴离子交换）:层析介质本身带正电荷,交换带负电荷物质–当缓冲环境 pH > pI, 蛋白质带负电–当 pH < pI, 蛋白质带正电–当pH = pI, 蛋白质不带电–以阳离子交换树脂交换分离蛋白质的原理和方法为例: 将阳离子交换树脂（本身带负电荷）颗粒填充在层析管内，带正电荷的蛋白质(pH<pI)就被吸引，但由于各种蛋白质所带电荷的种类和数量不同，它们被吸引的程度也不同。
苍耳子凝集素的分离纯化和某些性质研究
苍耳子凝集素的分离纯化和某些性质研究
王先酉;李明
【期刊名称】《衡阳医学院学报》
【年(卷),期】1998(026)001
【摘要】苍耳子仁粉碎后用０．１５ｍｏｌ·Ｌ＾－１ＮａＣｌ、０．００１ｍｏｌ·＾－１ｐＨ７．０磷酸缓冲液抽提，硫到铵沉淀及乳糖－淀粉凝胶柱亲和层析，分离纯化得到苍耳子凝集素。
经聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马斯亮蓝Ｒ２５０染色，显示一条蛋白带，其溶液用苯酚－硫酸显色证明是糖蛋白。
苍耳子凝集素使新鲜兔红细胞产生血凝作用所城最低浓度为６．８μｇ·ｍｌ＾－１。
苍耳子凝集素的专一结合的糖为２－乙酰氨基２－２脱氧－Ｄ－半乳糖
【总页数】3页(P37-38,40)
【作者】王先酉;李明
【作者单位】湖北医学高等专科学校;湖北医学高等专科学校
【正文语种】中文
【中图分类】R977.6
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晓雪;罗琴
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4.泥蚶(Tegillarca granosa Linnaeus)血淋巴液凝集素的分离纯化及其性质研究
[J], 陈寅山;柯佳颖;饶小珍
5.中华绒螯蟹血清凝集素的分离纯化与性质研究 [J], 徐海圣;徐步进
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阿魏菇凝集素分离纯化及理化性质的研究
阿魏菇凝集素分离纯化及理化性质的研究
杨爱霞;李应彪;许程剑
【期刊名称】《食品与生物技术学报》
【年(卷),期】2014(033)001
【摘要】通过对新疆阿魏菇凝集素的提纯及分析,了解凝集素的基本理化特性,为深入探究阿魏菇凝集素的免疫调节活性在理论上奠定了基础.对阿魏菇组织实体打浆、PBS浸提、硫酸铵沉淀、冷冻干燥,DEAE-cellulose、Sepharose-4B等层析柱法
分离纯化得到较为纯净的凝集素.采用小鼠血液测定凝集素凝集效价的方法初步研
究凝集素的理化性质.分离纯化得到较为纯净的凝集素,此凝集素在温度升高至70℃时,凝血活性全部丧失;pH 4～9条件下,凝集素活性较为稳定,在pH 2以下及pH
10以上凝集素活性逐渐消失.盐度升高,凝集素活性降低;D-半乳糖是其良好的抑制剂;金属离子对凝集素活性的影响各不相同.
【总页数】7页(P34-40)
【作者】杨爱霞;李应彪;许程剑
【作者单位】石河子大学食品学院,新疆石河子832000;石河子大学食品学院,新疆
石河子832000;石河子大学食品学院,新疆石河子832000
【正文语种】中文
【中图分类】Q949.3
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1.阿魏菇菌丝体多糖的分离纯化研究 [J], 陈恒雷;林增祥;吕长武
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饲料中大豆凝集素的分离纯化与生物活性测定
现泪滴状（ 不倾斜时红细胞沉于孔底 ，似水 中沙粒 沉 入水 底 ，边缘光 滑 ） ，为不凝 集 （ ） 一 ；以出现 ＋” ＋ 的大豆凝集素最高稀释倍数作为凝集效价 。 ２ 结果 与分析
“
大 、血细胞凝集等 ，在一定程度上限制 了大豆蛋 白
收 稿 日期 ：２ １－ ２ ０ ０ １１—７
基金项 目：天津市科技攻关项 目（５ Ｆ Ｐ ｃ １ｏ Ｏ Ｙ Ｇ Ｎ ０ ９ ０） 作者简介 ：王立红 （９ ２ ） １７ 一 ，女 ，天津人 ，博士研究生 ，研究方向为功能性微生物应用。 ．
ｐ ｅ ａ ａｉ ｎ ｏ ｏ ｂｅ ｎ ａ ｇｕｔｎ ｎ． ｒ ｐ ｒ ｔｏ ｆｓ ｙ ａ ｇ ｌ ｉ ｉ Ｋｅ ｒ ：ｓ ｙ ａ ｇ ｌ ｔｎ ｎ； ｉ ｌｇ ｃ ｌａ ｔｖ ｔ ｆｅ ｙ ｗｏ ｄｓ ｏ ｂｅ ｎ ａ ｇ ｕ ｉ ｉ ｂ ｏ ｏ ｉ ａ ｃｉ ｉ ｙ； ｅ ｄ
ｍ ｌＬ ） ｏ・ ，装入透析袋 ，透析过夜 ，用 １ ａ １ ％Ｂ Ｃ： 溶 液检测 外透液中 Ｓ ４的剩余量 ，直 至无 白色沉淀 ０２ － 析 出 ，离 心除 杂 ，得 到 约粗提 取液 ２０ｍＬ ０ 。
１２ ．． 亲和层 析 ２
２１ 大豆凝 集素提 纯曲线 ． Ｎ 乙 酰基 一 一 乳 糖胺 一ｐｘ—ｅｈｒｓ Ｂ亲 一 Ｄ半 ｅｏｙ ｓｐ ａｏｅ ６
１ 材 料 与方法
１１ 主 要 试 剂 和 仪 器 ．
物蛋 白源 ，但大豆中含有多种抗营养因子（ 例如大 豆抗原蛋 白、胰蛋白酶抑制因子 、单宁 、植物凝集 素 、皂苷 ） ，其 中大豆凝集素 （Ｂ ） 大豆中的主 ＳＡ是 要抗营养因子之一¨。大豆凝集素胰蛋 白酶抑制剂 １
大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究
大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究为了进行大豆凝集素的分离纯化，在实验室中首先需要获取大豆种子。
然后，将大豆种子研磨成粉末，并用缓冲液进行悬浮。
接下来，需要使用凝胶过滤层析和离心法等技术将混合悬浮液提取和富集大豆凝集素。
这些方法旨在通过在混合悬浮液中对大豆凝集素进行特异性结合来实现其分离纯化。
此后，可以使用离子交换层析、凝胶过滤层析、逆流层析等分离纯化技术进一步纯化大豆凝集素，以去除杂质。
分离纯化大豆凝集素后，可以进行血凝活性研究。
大豆凝集素与红细胞表面糖链结合后，可以通过形成凝集物来实现血凝活性。
在血凝活性研究中，可以使用凝血时间实验、红细胞沉降实验和红细胞凝集实验等方法来评估大豆凝集素的血凝活性。
这些实验可以通过观察血液样本的变化来研究大豆凝集素与红细胞之间的相互作用。
此外，还可以通过测量血小板聚集、凝集物质形成和血小板激活等指标来评估大豆凝集素对血小板功能的影响。
大豆凝集素不仅在血凝活性研究中具有重要应用，还可以用于研究细胞表面糖链的检测。
通过与细胞表面糖链的特异性结合，大豆凝集素可以用作一种生化试剂，用于检测和分析细胞膜上的糖链分布和结构。
例如，可以使用大豆凝集素与荧光染料结合来研究细胞表面糖链的分布情况，并通过显微镜等技术观察细胞的凝集情况。
此外，大豆凝集素还可以与细胞表面糖链结合后，进一步用于分离和富集细胞种群，以进行后续的研究。
总之，大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究对于深入了解该蛋白质的功能和应用具有重要意义。
通过探索大豆凝集素与细胞和血液成分之间的相互作用，可以为血液疾病的诊断和治疗提供新的思路和方法。
此外，还可以通过研究大豆凝集素与细胞表面糖链的相互作用，来探索细胞表面糖链在生物学过程中的重要作用。
红藻凝集素的分离纯化及特性研究
红藻凝集素的分离纯化及特性研究1、6种红藻粗提物的血凝集活性检测用兔、鸡、鸭和鸽子血红细胞检测真江蓠、细基江蓠、菊花心江蓠、龙须菜、芋根江蓠和带形蜈蚣藻6种红藻粗提物对血红细胞的凝集作用,发现只有带形蜈蚣藻粗提物对供试的4种血红细胞都没有凝集作用,其它5种海藻的粗提物至少能凝集1种供试的血红细胞。
2、真江蓠和细基江蓠凝集素粗品的抑藻、抗菌作用真江蓠和细基江蓠凝集素粗品都只对塔玛亚历山大藻有细胞凝集作用,而对其他7种单细胞藻都没有凝集；但两种海藻凝集素粗品都能抑制球形棕囊藻的生长,当凝集素浓度为45μg／mL,细基江蓠凝集素粗品对棕囊藻的生长抑制率为75%,而真江蓠凝集素粗品对棕囊藻的生长抑制率为85.29%。
两种凝集素粗品都能抑制玉米大斑病菌、黑曲霉及圆弧青霉菌丝的生长。
细基江蓠凝集素粗品还能抑制枇杷炭疽病菌菌丝的生长。
在3种供试细菌中,两种凝集素粗品都只对枯草芽孢杆菌有抑制作用。
3、菊花心江蓠凝集素的分离及特性研究菊花心江蓠凝集素粗品经过DEAE和Sephadex G-100两步分离纯化,得到分子量为69.7kDa的凝集素纯品。
该纯品凝集素含有12.7%的中性糖。
在80℃处理10min就全部失活,但在pH4.0-10.0之间都具有血凝活性。
它的凝集活性会被葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖抑制,但不会被其它供试单糖抑制。
菊花心江蓠凝集素纯品具有抑制球形棕囊藻的生长、抑制黑曲霉、枇杷炭疽病菌和玉米大斑病菌菌丝的生长及抑制枇杷炭疽病菌孢子萌发的作用。
4、龙须菜凝集素的分离纯化及特性研究龙须菜凝集素粗品经过DEAE和Sephadex G-100两步分离纯化,得到分子量为31.8-34.8kDa左右的单亚基凝集素。
该纯品经测定含有18.7%的中性糖。
龙须菜凝集素纯品在90℃下处理70min仍具有25%的活性,在pH4.0-9.0下都还具有凝集活性。
但其凝集活性会被D-木糖、D-果糖、D-甘露糖、L-阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖及乳糖抑制。
红芸豆红细胞凝集素单体的分离纯化和性质研究
红芸豆红细胞凝集素单体的分离纯化和性质研究【摘要】目的研究一种从红芸豆中提取红细胞凝集素单体(PHA-E)的新方法。
方法红芸豆经过浸提，离子交换树脂分离，分子筛层析纯化后得到PHA-E样品。
采用电泳法测定其纯度、分子量和等电点。
用2%人细胞悬液测定样品凝集红细胞的能力和影响凝血的因素，使用硫酸苯酚法测定其糖含量。
结果经PAGE分析PHA-E样品为单带电泳纯，SDS-PAGE上显示亚基分子量为32 kD，等电点为6.5.样品使人红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4 μg/ml左右。
单糖不影响PHA-E凝血活力，EDTA抑制其凝血活力，Zn2+促进其凝血。
糖含量为8.1%.【关键词】红细胞凝集素分离纯化凝血性质研究Purification and Partial Characterization of Erythrohemagglutinin from Phaseolus VulgarisHE Tao1，ZHANG Tao2*，WU Chang-ying1，WANG Liang1，SHAN Xiao-xue1，LUO Qin1(School of Preclinical Medicine，Chengdu Medical College，1.2006s Biotechnology，2.Biotechnology laboratory，Chengdu，610083，China)Abstract：Objective To study a new method for Erythrohemagglutinin（PHA-E）production from Phaseolus vulgaris.Methods PHA-E was purified from the excellent seeds of Phaseolus vulgaris by extraction，ion exchange chromatography and final gel filtration chromatography.The purity，the molecular weight and the isoelectric point of purified PHA-E were determined by electrophoresis.The ability and the influencing factor of agglutination were determined by 2% erythrocytes of human.Conclusion The purified PHA-E was single PAGE outline and had apparent subunit molecular weights of 32 kD by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis.Isoelectric point of the PHA-E was 6.5.PHA-E can promote agglutination of human erythrocytes at 4 μg/ml，but its activity was not inhibited by any monosaccharide.EDTA caninhibit the ability of agglutination，and Zn2+ can accelerate it.The sugar content of PHA-E was 8.1%.Key words:erythrohemagglutinin；separation and purification；haemagglutination；characterization植物凝集素(Phytohemagglutinin PHA)是从豆科植物种子中提取的一种含糖蛋白质［1］。
大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究
大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究
大豆凝集素是植物世界中最常见的蛋白质，它含有大量的氨基酸，熔点高，能够形成
稳定的结构，广泛用于食品、医药和农业行业。
大豆凝集素具有特殊的血凝活性，能够在
人体血液中形成凝聚体，帮助血液聚集。
当血液分子在受损或破裂时，该凝集素可以能快
速形成凝聚体，从而阻止血液外渗，维护封闭性血流。
由于其独特的特性，大豆凝集素已
成为了药物治疗血液凝聚性疾病的热门研究课题。
大豆凝集素的分离纯化及其血凝活性的研究，是了解大豆凝集素的性质和其生物学效
应的重要步骤。
目前，大豆凝集素的纯化常采用溶解凝胶电泳技术，包括蛋白质电泳、亚
硫酸钠硅胶柱电泳、静水硅胶柱电泳以及DEAE柱电泳，结果分别可提纯1~15％和20~60％的纯化该蛋白质，可用于耐受性实验，以及探究大豆凝集素的血凝活性。
研究大豆凝集素的血凝活性，需要对它的家族成员进行系统分析，其中羧基末端及残
基特异性氨基酸的构象，是该蛋白质的血凝活性的重要影响因素。
为了准确测定大豆凝集
素的血凝活性，通常采用Clot Detection Assay（Clot发现试剂盒），以凝血时间和凝
血程度两个指标，考核这种蛋白质在血液血凝中的作用。
大豆凝集素具有特殊的血凝活性，能够有效防止血液损失。
研究它的分离纯化及血凝
活性，对临床上的药物治疗具有重要意义。
但由于其结构复杂，究竟是哪些家族成员更具
血凝活性，仍需要深入的研究才能明确。
红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质
红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质常丽青;吴传芳;吕鸿周;刘超;顾莹;陈放;吴洽庆;鲍锦库【期刊名称】《应用与环境生物学报》【年(卷),期】2005(11)2【摘要】石蒜科植物红花石蒜(Lycoris radiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L.radiata agglutinin,LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr 为12×103,Sephacryl S-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0.95μg/mL和1.9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低Ⅱ型人类单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50)=5～10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性.【总页数】4页(P164-167)【关键词】石蒜凝集素(LRA);纯化;凝集活性;促淋巴细胞有丝分裂活性;抗病毒活性【作者】常丽青;吴传芳;吕鸿周;刘超;顾莹;陈放;吴洽庆;鲍锦库【作者单位】四川大学生命科学学院;中国科学院成都生物研究所【正文语种】中文【中图分类】Q946.1【相关文献】1.泥蚶肌肉凝集素的分离纯化及部分性质 [J], 柯佳颖;陈寅山;戴聪杰2.黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质 [J], 鲍小敏;卢帮敏;鲍锦库3.蛋白核小球藻凝集素的分离纯化及部分性质研究 [J], 郑怡;余萍;刘艳如4.香灰菌凝集素的纯化及其部分性质 [J], 侣国涵;周玮婧;马爱民5.柱状田头菇凝集素的分离纯化及其部分性质 [J], 刘艳如;余萍;郑怡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
合欢种子凝集素分离、部分功能鉴定和基因克隆的开题报告
合欢种子凝集素分离、部分功能鉴定和基因克隆的开题报告1. 研究背景合欢是一种常见的药用植物，其种子富含蛋白质和多种营养物质，具有滋补强壮、降血脂、抗癌等多种药用价值。
其中，合欢种子凝集素是一种具有生物活性的蛋白质，在细胞凝集、免疫调节、抗病毒和抗癌等方面具有重要作用。
因此，对合欢种子凝集素的分离、部分功能鉴定和基因克隆进行研究，具有重要的理论和应用价值。
2. 研究内容本次研究的主要内容包括：（1）合欢种子凝集素的提取和纯化。
采用盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等技术，从合欢种子中提取纯化合欢种子凝集素。
（2）合欢种子凝集素的部分功能鉴定。
通过体外实验，研究合欢种子凝集素在细胞凝集、免疫调节、抗病毒和抗癌等方面的部分功能。
（3）合欢种子凝集素基因的克隆和表达。
根据合欢种子凝集素氨基酸序列，设计引物，进行PCR扩增和克隆，构建表达载体，表达获得重组蛋白质。
3. 研究意义本研究旨在深入探讨合欢种子凝集素的生物学特性，为深入开发其药用价值提供理论依据和技术手段。
同时，对于解析合欢种子凝集素的分子机制和研究其在疾病治疗方面的应用，具有重要的科学和实际意义。
4. 研究方法本研究采用的主要方法为蛋白质化学、生物化学、分子生物学和细胞生物学等，具体包括：（1）合欢种子凝集素的提取和纯化：采用盐析、凝胶过滤层析和离子交换层析等技术，从合欢种子中提取纯化合欢种子凝集素。
（2）合欢种子凝集素的部分功能鉴定：通过体外实验，研究合欢种子凝集素在细胞凝集、免疫调节、抗病毒和抗癌等方面的部分功能。
（3）合欢种子凝集素基因的克隆和表达：根据合欢种子凝集素氨基酸序列，设计引物，进行PCR扩增和克隆，构建表达载体，表达获得重组蛋白质。
5. 预期结果预计可以成功提取纯化合欢种子凝集素，并初步鉴定其在细胞凝集、免疫调节、抗病毒和抗癌等方面的部分功能。
同时，预计可以克隆合欢种子凝集素基因，并成功表达获得重组蛋白质。
通过本研究可以进一步深入探讨合欢种子凝集素的分子机制和生物学特性，为其药用价值的开发提供理论和技术支持。
长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质
长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质作者：林勇刘俊锋唐小峦张月芬戴推彬来源：《福建农业学报》2019年第11期摘要：【目的】凝集素是竹荪的一类生理活性物质，为进一步明确其药用功效，开展了长裙竹荪凝集素理化性质研究。
【方法】长裙竹荪菌丝体通过生理盐水抽提、20%～75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose和SephadexG-100柱层析纯化得到长裙竹荪菌丝体凝集素（DIL）;并通过血细胞凝集活性、糖抑制试验、酸碱稳定性、热稳定性分析以及金属离子等因素来测定长裙竹荪菌丝体凝集素的理化性质。
【结果】经PAGE显示单一条带，测得其亚基相对分子质量为43.6kDa。
该凝集素对供试的鸽、兔、鸭和鸡血红细胞具有凝集作用，对兔红细胞的凝集作用可被D-半乳糖和N-乙酰胺基-葡萄糖所抑制。
长裙竹荪凝集素对热不稳定，经50℃处理10min，活性明显降低;该凝集素在pH 4.0-8.0都保持着较高的凝集活性，其凝血活性依赖于Ca2+和Mg2+二价金属离子，Mn2+和Zn2+则无影响。
[结论]长裙竹荪菌丝体凝集素对动物血红细胞具有较好的凝集活性，而且凝集活性需要在一定浓度的Ca2+和Mg2+才会起作用。
關键词：凝集素;长裙竹荪;分离纯化;理化性质中图分类号：S646 文献标志码：A 文章编号：1008-0384（2019）11-1342-050 引言【研究意义】竹荪，亦称竹参、竹菌、竹笙，是一类大型真菌。
长裙竹荪Dictyophora indusiata为竹荪属模式种，在真菌分类学上，属担子菌亚门，腹菌纲，鬼笔菌目，鬼笔菌科[1]，具有较好的食用、保健兼药用价值。
凝集素是一种可以从植物、动物或微生物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，在信号转导、细胞凝集、免疫功能、抑制肿瘤细胞生长、血型鉴定和高分子化合物的筛选、纯化等方面都发挥着重要的作用[2]，而凝集素也是竹荪中所含的一类重要的生理活性物质，具有重要的研究和开发价值。
大葱中凝集素的分离纯化与鉴定
PAN Xiaomei (Baiyin Food Inspection and Testing Center, Baiyin 730900, China)
摘 要：植物凝集素是来源于植物的一类能凝集细胞和沉淀单糖或多糖复合物的非免疫来源的非酶蛋白质， 具有细胞凝集、抗病毒、抗真菌及诱导细胞凋亡或自噬等多种功能。本实验选用大葱为实验原料，经提取、硫 酸铵分级沉淀、DEAE 离子交换层析和 SDS-PAGE 电泳等方法对大葱凝集素进行分离纯化和分子量鉴定。实验 结果表明，大葱中凝集素的表观分子质量为 41 kDa。
分析检测 Analysis and Testing
doi:10.16736/41-1434/ts.2021.03.058
大葱中凝集素的分离纯化与鉴定
Separation, Purification and Identification of Lectin from Welsh Onion
大葱（产源地山东）、氢氧化钠、磷酸氢二钠、 磷 酸 二 氢 钠、 氯 化 钠、 硫 酸 铵、 盐 酸、95% 乙 醇、 考马斯亮蓝 G250、葡萄糖、柠檬酸钠、柠檬酸、氨 水，冰醋酸、甲醇、甘油、巯基乙醇、溴酚蓝、甘氨 酸、DEAE 纤维素（52）、十二烷基硫酸钠（SDS， ≥ 99.0%）及三羟甲基氨基甲烷（Tris，≥ 99.9%），所 用试剂均为分析纯。
作者简介：潘晓梅（1992—）女，本科，助理工程师；研究方向为食品质量与安全。 198 / 现代食品 XIANDAISHIPIN
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Analysis and Testing 分析检测
草菇凝集素 VL －2的分离纯化及其凝血活性研究
草菇凝集素 VL －2的分离纯化及其凝血活性研究刘主;肖仔君;何智丹;黄绍明【摘要】以草菇子实体为材料，通过PBS浸提、硫酸铵沉淀、DEAE－52纤维素离子交换层析、Sephadex G－75凝胶过滤层析等步骤，分离获得草菇凝集素单一成分VL－2。
在此基础上，开展了VL－2对仓鼠、小白鼠、猪、狗、猫、驴、鸭、鸽子、兔、蛙、蛇、鸡等12种动物血红细胞的凝血活性试验，结果发现VL－2对上述前11种动物凝血活性的效价分别为1024、1024、512、4096、4096、1024、64、64、128、64、2048 U／mg，而对鸡血红细胞没有凝血活性。
【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2015(000)005【总页数】3页(P273-274,275)【关键词】草菇;凝集素;分离纯化;凝血活性【作者】刘主;肖仔君;何智丹;黄绍明【作者单位】韶关学院英东生命科学学院，广东韶关 512005;韶关学院英东食品科学与工程学院，广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院，广东韶关512005;韶关学院英东生命科学学院，广东韶关 512005【正文语种】中文【中图分类】Q946.1凝集素(lectin)是一种非免疫起源、不具有酶活性、可凝集细胞或沉淀糖复合物的蛋白质或糖蛋白，该蛋白可专一识别糖并与之非共价、可逆地结合［1 －2］。
它对血细胞、淋巴细胞、恶性细胞均有凝集作用，具有鉴定血型及微生物、抗感染、抗炎症、抗血栓，促进细胞分裂、免疫调节等功效，已成为相关领域的特效工具［3 －4］。
食用菌凝集素是食用菌中重要的药理成分之一，研究显示:食用菌凝集素在大多数食用菌子实体的杀虫活性方面起重要作用，且不受蛋白酶及热的影响，是一种良好的杀虫剂候选材料，有可能成为一种抵抗害虫的基因源［5］。
食用菌凝集素除了具有与植物凝集素相似的功能外，它还在促进菌丝分化、子实体形成等方面具有活性［6 －7］。
近几年来，国内外对食用菌凝集素的研究不断升温，食用菌凝集素已成为继食用菌多糖之后的另一活性物质而成为研究热点［8］。
海萝凝集素的分离纯化及性质
海萝凝集素的分离纯化及性质宋玉娟;崔铁军;李丹彤;刘扬【期刊名称】《中国水产科学》【年(卷),期】2005(012)002【摘要】海萝(Gloiopeltis furcata)经PBS缓冲液抽提、硫酸铵分级、DEAE-52纤维素离子交换层析和SephadexG-200分子筛层析,从中纯化出海萝凝集素(GFL),在PAGE和等电聚焦电泳上各显示单一蛋白染色带,其等电点为9.0.用SephadexG-200分子筛层析测得其相对分子质量为8318.海萝凝集素除对人血型红细胞无凝集活性外,对单胞藻及兔、鲤、鲫的红细胞均表现出一定程度的凝集活性,对兔红细胞的凝集活性最强,且不被已测试的D-果糖、D-半乳糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖所抑制,而被D-甘露糖、牛甲状腺球蛋白、鸡卵白蛋白、γ-球蛋抑制.该凝集素在pH 4.0～10.2均有活性,而在pH 6.5～9.1时活性较高.该凝集素在90℃加热1h,活力并未减弱,说明这种凝集素具有很强的耐热性.【总页数】6页(P167-172)【作者】宋玉娟;崔铁军;李丹彤;刘扬【作者单位】中国药品生物制品检定所,生化药室,北京,100050;大连水产学院,养殖系,辽宁,大连,116023;大连水产学院,养殖系,辽宁,大连,116023;大连水产学院,养殖系,辽宁,大连,116023【正文语种】中文【中图分类】Q946.1【相关文献】1.阿魏菇凝集素分离纯化及理化性质的研究 [J], 杨爱霞;李应彪;许程剑2.小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究 [J], 李锋;王竞;赵晓军3.鳙鳃凝集素的分离纯化及理化性质的研究 [J], 盘赛昆;汤坚;顾小红;杨超4.长裙竹荪菌丝体凝集素的分离纯化及其理化性质 [J], 林勇; 刘俊锋; 唐小峦; 张月芬; 戴雅彬5.姬松茸凝集素的分离纯化及性质 [J], 王文君;王璐瑶;周华;韦萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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第11周 2011-5-3/4
植物凝集素的分离纯化及部分性质测定
分离纯化工艺策略：
主要是根据物质的结构和性质来选用各种纯化技术。
工艺次序的选择策略包括：
1.应选择不同机理的分离单元组成一套工艺；
2.应将含量多的杂质先分离出去；
3.尽早采用高效分离手段；
4.将最昂贵、最费时间的分离单元放在最后阶段。
也就是说，通常先运用非特异、低分辨的操作单元，如沉淀、超滤和吸附等，这一阶段主要目的是尽量缩小样本体积，提高目的物浓度，去除最主要的杂质（包括非蛋白质类杂质）；
5.随后是高分辩率的操作单元，如具有选择性的离子交换色谱和亲和色谱，而将凝胶过滤色谱这类分离规模小、分离速度慢的操作单元放在最后，这样可以使分离效益大大提高。
色谱分离的次序。
一个合理组合的色谱次序能够克服某些方面的缺点，同时很少改变条件即可进行各步骤之间的过渡。
如：
◇在离子交换色谱之后进行疏水作用色谱，不必经过缓冲液的交换，因为多数蛋白质在高离子强度下与疏水介质结合能力较强。
◇凝胶过滤色谱放在最后一步又可以直接过渡到适当的缓冲体系中以利产品成形保存。
总之，蛋白质的纯化大至步骤为：样品经初步提取筛除部分杂质后，选择不同的层析手段相互配合进一步提纯。
第一部分离子交换层析
1. 原理：
离子交换层析（Ion-exchange chromatography，IEC）是以离子交换剂为固定相，以特定的含离子的溶液为流动相，利用离子交换剂对各类化学物质或生物大分子因电荷差异而产生不同的结合力，从而将混合物中不同组分进行分离的层析技术。
Cation exchanger（阳离子交换）: 层析介质本身带负电荷,交换带正电荷物质
Anion exchanger （阴离子交换）:层析介质本身带正电荷,交换带负电荷物质–当缓冲环境 pH > pI, 蛋白质带负电
–当 pH < pI, 蛋白质带正电
–当pH = pI, 蛋白质不带电
–以阳离子交换树脂交换分离蛋白质的原理和方法为例: 将阳离子交换树脂（本身带负电荷）颗粒填充在层析管内，带正电荷的蛋白质(pH<pI)就被吸
引，但由于各种蛋白质所带电荷的种类和数量不同，它们被吸引的程度也
不同。
然后再用含阳离子（如Na+)的溶液洗柱，含电荷少的蛋白质首先被洗
脱下来，增加Na+浓度，含电荷多的蛋白质也被洗脱下来，于是两种蛋白质
被分开。
2.实验室常用介质：
离子交换介质：适用于分离蛋白质等生物大分子与水的亲和力较大，载体孔径大
弱阳离子交换剂弱阴离子交换剂
CM-Cellulose DEAE-Cellulose
羧甲基-纤维素二乙基氨基乙基-纤维素
CM-Sephadex DEAE--Sephadex
羧甲基- 葡聚糖凝胶二乙基氨基乙基- 葡聚糖凝胶
CM-Sepharose DEAE-Sepharose
羧甲基- 琼脂糖凝胶二乙基氨基乙基- 琼脂糖凝胶
CM-Sepharose 和 DEAE-Sepharose由于性价比最高，因此作为实验室最常用的离子交换树脂
3.实验操作：
在这一部分中，本实验分别选用CM-Sepharose阳离子柱和 DEAE-Sepharose阴离子柱对学生的生物化学知识实践能力进行考查及训练。
待纯化样品已经过初步提纯，具体操作步骤如下：
（1）用缓冲液平衡，经过至少5-6个柱体积的缓冲液平衡，使整个层析体系（包括层析柱里的凝胶和各仪器之间连接的管道）达到目标pH和离子强度，为下一步上样做准备。
CM-Sepharose阳离子柱使用pH5.0,20mM的NaAc-HAc缓冲液；DEAE- Sepharose阴离子柱使用pH9.0,50mM的Tris-HCl缓冲液
（2）蛋白粗提液上样，缓冲液平衡后，使之前用缓冲液透析过（pH和离子强度和缓冲液相同）的蛋白样品通过层析柱；根据前面所述的层析介质结合原理，在这一过程中在pH9.0条件下带负电荷（蛋白PI<9.0）的蛋白结合在阴离子交换树脂上；在pH5.0条件下带正电荷（PI>5.0）的蛋白则结合在阳离子交换树脂上。
为满足上述条件的蛋白随缓冲液流出层析柱。
（3）洗脱，选择适当盐（NaCl）浓度的缓冲液上柱，由于Na+或H-可以蛋白竞争性的结合在阳离子或阴离子交换树脂上，从而使之前结合在树脂上的带电蛋白质脱离下来。
盐离子浓度越高这种效应就越明显，因此随盐离子浓度的变化收集不同时期的洗脱蛋白，从而达到对不同蛋白组分的分离效果。
（4）层析柱再生，收集完相应的蛋白溶液后，可对层析柱进行清洁再生，一般使用0.5M NaOH +1M NaCl的洗柱液再生柱子，操作方法如前，横流过3-4个柱体积，使残留于柱上的蛋白迅速脱离。
（5）高水清洗，经过洗柱液清洗的层析柱不能在高碱和高盐环境中长期保存，因此需用纯水清洗，使柱内环境恢复到pH电中性
（6）从上述第2步开始实时检测样品的凝血活性，以判断目的蛋白的分离效果和所在的组分。
从上样起就可以紫外检测仪检测蛋白样品的过柱情况。
4.注意：
（1）选择适宜的交换剂
阳离子交换剂：DEAE-、 Q-
阴离子交换剂：SP-、CM-
（2）选择短而粗柱子，交换剂量根据上样量确定
（3）Buffer的确定、平衡与流速
阳离子交换剂对应Anion Buffer
阴离子交换剂对应阳离子Cation Buffer
样品体系要与上样Buffer一致
（4）对样品的体积没有严格限制，但在体积较大时应考虑样品浓度是否会超出层析柱中填料的载量
（5）上样Buffer的离子强度通常不大于0.1M
（6）洗脱方式通常采用盐浓度连续梯度或阶段梯度洗脱
（7）柱子可再生重新利用
（8）通常用20% 乙醇+ 0.03%NaN3保护长期不用的柱子，避免柱内滋生细菌等微生物（9）层析过程中避免层析柱中进入气泡，使柱压增大并且影响样品分离效果。