G试验介绍、影响因素和用药指南
G试验检测：侵袭性真菌感染(IFI)快速定量检测
G试验检测：侵袭性真菌感染(IFI)快速定量检测一、IFI的诱因：1、广谱抗生素的长期使用（2周以上，IFI的感染几率达80%以上）；2、抗肿瘤药物和免疫抑制药物的使用；3、AIDS等基础疾病比较严重、免疫力低下的病人；4、插管等介入性治疗；5、实体器官和骨髓移植治疗；6、使用激素治疗的病人；二、G试验检测1、G试验检测原理：通过检测真菌细胞壁特有成分1-3-β-D葡聚糖，可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。
2、G试验检测临床意义：（1）早期诊断IFI无创检测手段之一；（2）快速诊断，1小时为临床诊断IFI提供实验依据；（3）根据检测结果有针对性使用抗真菌药物早期治疗；（4）应用抗真菌药物后，定期动态监测，评价药物治疗有效性；（5）监护IFI易感人群的病发状态，及时发现早期用药治疗；3、G试验检测标本采集要求：（1）可检标本：血液、脑脊液、胸腔积液、腹水、尿液等无菌体液；（2）标本采集要求：采集过程要求无菌操作，用指定的肝素类抗凝、无菌、无热原采血管；常规住院病人早上用药前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）；（3）标本的送检和保存要求：标本采集后应在半小时内离心，2小时内检测完，若当日不能及时检测应将离心后的血浆转移至无热原转移管内－30℃冷冻保存，一周内使用；4、G试验检测结果判断：检测值<10pg/ml，阴性结果；检测值介于10—20pg/ml之间，临床观察期，应做动态监测；检测值>20pg/ml，阳性；说明患者血液中可能存在真菌感染；需要临床根据临床症状用药综合治疗；建议再次采血检测以确诊5、G试验检测临床干扰因素：（1）血液透析、腹膜透析（应用纤维素膜会造成假阳性）（2）某些品牌的静脉制剂（如：白蛋白、免疫球蛋白等蛋白类制剂）（3）含葡聚糖或类似结构的纱布或其他医疗用品；注：针对可能出现的假阳性问题，建议动态监测得到真实的检测结果；6、G试验检测与传统真菌检测的优势：（1）快速提供检测结果：1--2小时出检测结果；（2）灵敏度高，定量检测，最小检测值5pg/ml；（3）阳性率高，达到87%；（4）检测不受抗生素影响；。
G试验和GM试验检测的方法及临床意义
G试验和GM试验检测的方法及临床意义G试验是一种测定其中一种生化物质在血液或尿液中的浓度的方法，
例如血糖、血脂、血尿酸等。
通过测定这些生化物质的浓度，可以评估机
体的代谢功能和疾病状态。
例如，血糖浓度的升高可能是糖尿病的一个指标，血脂浓度的升高可能是高血脂症的一个指标，血尿酸浓度的升高可能
是痛风的一个指标。
通过对这些生化物质的测定，可以及时发现患者的疾
病状态，并指导临床治疗。
GM试验是一种测定其中一种生化物质在细胞或组织中的活性的方法，例如酶活性、氧化应激指标等。
通过测定这些生化物质的活性，可以评估
机体的代谢功能和细胞状态。
例如，一些酶活性的升高可能是其中一种疾
病的指标，氧化应激指标的升高可能是细胞氧化损伤的一个指标。
通过对
这些生化物质的测定，可以评估患者的疾病状态和治疗效果，指导临床治疗。
在临床应用中，G试验和GM试验可以帮助医生做出准确的诊断和治
疗方案。
通过对一些生化物质的测定，可以及时发现患者的疾病状态，指
导临床治疗，评估治疗效果，预测疾病的预后。
例如，通过血糖浓度的测
定可以及时发现患者是否患有糖尿病，通过酶活性的测定可以评估患者的
肝功能是否受损，通过氧化应激指标的测定可以评估患者的氧化应激水平，从而评估治疗效果和预测疾病的预后。
总之，G试验和GM试验是一种重要的生物化学实验方法，对于评估
机体的代谢功能和疾病状态具有重要的意义。
在临床应用中，这两种试验
方法可以帮助医生做出准确的诊断和治疗方案，评估治疗效果，预测疾病
的预后，对于提高患者的生活质量和延长生命具有重要的意义。
G试验和GM试验检测的方法及临床意义
G试验和GM试验检测的方法及临床意义G试验和GM试验检测的方法及临床意义侵袭性真菌病即是以往所说的深部真菌病，是指致病性真菌侵犯皮下组织、粘膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病。
引起侵袭性真菌病的病原菌有270余种，常见病原菌有念珠菌（占70%-90% ）和曲霉菌（占10%-20%）。
常引起侵袭性真菌病的高危因素有严重粒细胞缺乏、免疫功能低下、移植、糖尿病、肾衰、血透、慢阻肺、实体器官移植、长期激素治疗以及入住ICU 等。
侵袭性真菌感染病早期诊断和治疗面临着巨大挑战，临床表现缺乏特征性，发病率高、死亡率高、漏诊率高且诊断困难，特异性诊断指标有限，继发性真菌感染常被基础疾病和治疗药物所掩盖。
和检验科相关的辅助诊断方法有培养法和非培养法。
血培养作用有限，阳性率较低（念珠菌感染患者血培养阳性率只有38%）。
相对而言，非培养技术就突显出其优越性。
真菌的检测的非培养技术常见的有G实验和GM试验。
此实验敏感性高，阳性检出率高，能早期快速诊断，为临床用药提供帮助。
G试验是检测1,3-β-D-葡聚糖的试验，采用的方法是动态显色法。
1,3-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的一种成分，广泛存在与各种真菌，只有当真菌进入体内被吞噬细胞吞噬，细胞壁被破坏,1,3-β-D-葡聚才能释放入血，定植情况该实验为阴性，所以G试验可区分定植和感染。
G试验可检测除隐球菌和接合菌外的多种真菌感染，对于念珠菌血症而言, G试验检测是首选检查方法。
G试验检测一般先于临床症状平均4天，平均早于发热5天，是早期检测的重要手段。
G试验检测值<70pg/ml定义为阴性，此时不建议抗真菌治疗，当检测值在70-95pg/ml 时定义为灰区，此为观察期，应连续监测，当检测值>95pg/ml定义为阳性, 建议结合临床症状诊断治疗。
GM试验是检测半乳甘露聚糖抗原的试验，采用的方法是酶免法。
半乳甘露聚糖（GM）是曲霉细胞壁的一种成分，GM从薄弱的菌丝顶端释放，曲霉菌感染的患者血液内存在GM。
G试验
7.O. Albert, Eur J Clin Microbiol Infect Dis ,2011,30:1453– 1460.
假阳性影响因素
3. 2细菌感染-革兰氏阴性菌
43个菌血症患者，16个BG阳性，分布如下。
菌血症
人数
BG阳性人数
假阳性率
革兰氏阴性杆菌
22
13
59.1%*
革兰氏阴性球菌
17
推荐级别
美国指南
传染病信息 2014 年 02 月 28 日第 27 卷第 1 期 Infect Dis Info, Vol. 27, No. 1, February 28, 2014
2013年美国《感染性疾病微生物学实验室 诊断应用指南》简介 —病原及标本处理部分
表6医疗相关和医院获得性肺炎及呼吸机相关性肺炎实验室诊断
肺真菌病诊断和治疗专家共识
中华医学会呼吸病 学分会感染 学组
中华结核和呼吸杂 志编辑委 员会
共识中声明，G试验(1，3-β-D葡聚糖)、GM试验阳性是肺部真菌病的 临床诊断中微生物学证据之一
G试验作为诊断标准已纳入肺部真菌感染患者诊断 标准与治疗原则中。
1.血液制品：
输注白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子或血液制品；
假阳性影响因素
2. 1 药物-克拉维
酸
采取6个患者10份血清检测G试验水平，克拉维酸治疗组BG水平
1339-1798 pg/ml，头孢他啶治疗组BG水平17.7-26.5 pg/ml，健康
对照组BG水平8.0±13.8 pg/ml。
提示：克拉维酸显著提高血清BG水平。并且克拉维酸治疗前BG水 平为阴性，注射结束20min血清BG水平可升至800pg/ml以上水 平。
G试验和GM实验的区别及其临床意义
G试验和GM实验的区别及其临床意义嘿，伙计们！今天我们要聊聊一个很有趣的话题：G试验和GM实验的区别及其临床意义。
你们知道吗，这两个实验在医学界可是非常有名的，它们可是用来诊断很多疾病的哦！那我们就来一起了解一下吧！我们来说说G试验。
G试验是一种免疫学检测方法，它的主要作用是检测人体是否感染了某种特定的病原体。
这个病原体就是我们常说的细菌毒素。
G试验的原理很简单，就是把一种叫做伽玛链球菌(Group A streptococcus)的细菌毒素注射到人体内，然后观察人体的反应。
如果人体产生了抗体，那么说明这个人已经感染了这种细菌毒素。
这个过程就像是我们在打疫苗时一样，只是这次不是为了让我们变得更强壮，而是为了帮助我们找到病原体，从而进行治疗。
接下来，我们再来说说GM实验。
GM实验是一种细胞学检测方法，它的主要作用是检测人体是否患有某种特定的肿瘤。
这个肿瘤就是我们常说的骨髓瘤(multiple myeloma)。
GM实验的原理也很简单，就是把一种叫做吉姆萨小体(Glycoprotein GM1)的物质提取出来，然后通过显微镜观察这些物质在细胞内的分布情况。
如果这些物质在细胞内大量聚集，那么说明这个人可能患有骨髓瘤。
这个过程就像是我们在做蛋糕时一样，只是这次不是为了让蛋糕变得更美味，而是为了帮助我们找到肿瘤细胞，从而进行治疗。
那么，G试验和GM实验有什么临床意义呢？其实，它们的临床意义主要体现在以下几个方面：1. 帮助医生确诊疾病。
通过G试验和GM实验，医生可以准确地判断出患者是否感染了某种细菌毒素或者是否患有骨髓瘤。
这样一来，医生就可以根据患者的具体情况制定出合适的治疗方案。
2. 指导药物治疗。
G试验和GM实验的结果可以帮助医生判断出哪种抗生素或者化疗药物对患者最有效。
这样一来，医生就可以根据患者的具体情况选择最合适的药物进行治疗，提高治疗效果。
3. 评估治疗效果。
在治疗过程中，医生可以通过定期进行G试验和GM实验来观察患者的病情变化。
2017-07-04 临床角度看G试验
问题
血培养作用有限，阳性率较低 全身使用抗真菌治疗或其它原因易导致假阴性 非无菌部位标本阳性结果，难以判定是真菌定植或感染。 有创性检查，病人的依从性差 阳性率低，对仪器及检验人员的技术要求较高 全身使用抗真菌治疗或其它原因易导致假阴性 影像学检查特异性不强 IFI影像学检查相对来说对IFI的诊断时间较晚 影像学检查对侵袭性真菌血流感染无诊断价值 影像学检查不能对真菌的种属进行确定 目前方法尚未标准化，尚在研究阶段
Sci TransI Med 2012:4:165rv13
ICU中的IFI
Tortorano AM et al. Mycoses. 2011, 55: 73–79.
2006-2008年，意大利27家医院、38家ICU的IFI流行病学、 前瞻性、调查研究。
诊断标准： 念珠菌血症 • 由外周静脉血或正常无菌部位念珠菌培养阳性；
G试验与PCP及念珠菌病、曲霉病
G试验对于诊断PCP的敏感性高于IFI
Clin. Microbiol. 2012, 50(1):7.
G试验与预后判断
尚未广泛开展关于G试验预测IA结局的研究 单中心、回顾性研究：初始的G试验数值和早期血流动力 学不能预测6周或12周IA患者临床结局和死亡率
细胞学检查组织病理学检查全身使用抗真菌治疗或其它原因易导致假阴性ct检查影像学检查不能对真菌的种属进行确定pcr检测目前方法尚未标准化尚在研究阶段ifi某些检测方法的缺陷21真菌抗原抗体酶代谢产物标本类型真菌除外接合菌和新型隐球菌13d葡聚糖g试验血清血浆balcsf曲霉半乳甘露聚糖gm试验及相应抗体iggigmige血清balcsf新型隐球菌荚膜多糖抗原gxm试验血清csf念珠菌甘露聚糖m试验甘露聚糖抗体iggigm血清csf22取材方便
G试验假阳性因素
G试验假阳性因素：1、污染2、应用纤维素膜进行透析3、纱布以及其他医疗物品中含有葡聚糖；4、败血症患者（尤其是链球菌血症）；5、某些抗肿瘤药物（香菇多糖，裂殖菌多糖）；6、某些静脉制剂（白蛋白，免疫球蛋白，凝血因子）的使用；7、磺胺类药物；8、个人饮食（某些患者喜欢吃蘑菇类食物）。
G试验假阴性因素1、G试验不能检测隐球菌和接合菌；2、使用某些抗真菌药物（卡泊芬净：可非竞争性抑制1-3-β-D葡聚糖的合成）；3、标本放置时间过长。
解决策略：建议进行动态观测，同时可对用药疗效进行监控，帮助合理用药。
G M试验检测的是半乳甘露聚糖，主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断。
曲霉菌特有的细胞壁多糖成分是β（1-5）呋喃半乳糖残基，菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。
GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度。
连续检测GM可作为治疗疗效的监测。
在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高。
值得注意的是，以下情况可出现假阳性：（1）使用使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦；（2）新生儿和儿童；（3）血液透析；（4）自身免疫性肝炎等；（5）食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物和污染的大米等。
以下情况可出现假阴性：（1）释放入血循环中的曲霉GM（包括甘露聚糖）并不持续存在而是会很快清除；（2）以前使用了抗真菌药物；（3）病情不严重；（4）非粒细胞缺乏的患者。
儿童闭塞性细支气管炎发表时间：2009-05-16 发表者：苏苗赏(访问人次：3112)闭塞性细支气管炎(bronchiolitis obliterans,BO)是与小气道炎症性损伤相关的慢性气流阻塞综合征，在儿童中是一种相对少见而严重的慢性阻塞性肺病。
根据组织学特点将BO分为两大类型：（1）狭窄性细支气管炎，为不同程度的慢性炎症或纤维化的阻塞；（2）增生性细支气管炎，即管腔内纤维化。
感染后的BO通常为狭窄性细支气管炎。
一、病因BO的起病是由多种原因引起的小气道上皮的损伤,这些因素包括感染、异体骨髓移植、肺移植、吸入有毒气体、自身免疫性疾病和药物不良反应等。
(医学课件)G试验-侵袭性真菌病的辅助诊断方法
内容目录
一、真菌感染概述 二、真菌与葡聚糖
• 一三四、、、真G鲎试试菌验验感—与—染G临试概床验意义
五、“生物探针”介绍 六、“生物探针”操作流程 七、“生物探针”的临床比对 八、G试验的影响因素
2
一、真菌感染概述
• 真菌感染 ：
• 真菌感染在通常情况下我们最常见的是表皮的感染，例 如头癣、体癣、甲癣等，由于侵犯的部位大都表浅，不 会导致严重问题，因而叫浅部真菌感染；
肿瘤类： 胃癌，肝癌，肝内胆管癌， 肺癌，多发性骨髓瘤，白
血病，恶性淋巴瘤
8
二、真菌与葡聚糖
1. 某些真菌的细胞壁结构
2019/8/23
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2. 细胞壁含有葡聚糖组分的真菌： （1）是导致侵袭性真菌病(IFD)的常见真菌。 （2）细胞壁有葡聚糖组分
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这类真菌有： 念珠菌 曲霉菌 耶氏肺孢菌 镰刀酶 隐球菌
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研究发现，革兰氏阴性细菌的细胞壁都含有一 种叫内毒素(Endotoxin)的组分。
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内毒素是能够引起哺乳动物原反应 的主要热原物质。
革兰氏阴性细菌在新陈代谢过程不 断地向环境释放内毒素，污染药品和医疗 器械。因此注射药品和医疗器械都要求必 须作细菌内毒素检查（BET）。
可检测标本 ： 血浆、血清、尿液、腹水、脑脊液等
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六、“生物探针”操作流程
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“生物探针”操作流程
40
“生物探针”操作流程
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“生物探针”操作流程
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“生物探针”操作流程
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“生物探针”操作流程
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“生物探针”操作流程
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G试验影响因素解析
经证实铜绿假单胞菌是继肺炎链球菌血症和粪产碱杆菌血症之后，可 以引起G试验假阳性的细菌血症。
铜绿假单胞菌可引起BG水平的升高，是G试验的假阳性影响因素。
5 . Mennink-Kersten MA. Infect Dis Clin North Am 2006, 20:711–727. 6. Monique A. CORRESPONDENCE, 2008,6:1930-1931.
提示：多粘菌素，厄他培南，头孢唑啉，复方磺胺甲恶唑，头 孢噻肟，头孢吡肟、氨苄西林/舒巴坦，可不同程度引起血浆BG水 平升高，顺序递减。
4 .Francisco M. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY,2006,10:3450–3453.
一、假阳性影响因素
100.0 0.0 75.0 (IQR 0.0–261.3) (IQR 0.0–400.3) (IQR 0.0–341.3)
0.0 0.0 0.0 0.0 (IQR 0.0–140.0) (IQR 0.0–140.4) (IQR 0.0–140.0) (IQR 0.0–140.0)
IQR：四分位距
结论：白蛋白剂量超过30g，治疗后两天依旧明显提高血清BG的水平； 提示白蛋白为G试验的干扰因素，干扰时间不少于两天（ P<0.05 ）。 对确诊念珠菌血症患者最佳诊断阈值为95.9 pg/mL。
有2/3的患者在其他方法诊断侵袭性曲霉病前6～14d 即可检测到GM抗原 。
• • •
快速诊断：2-3h可出报告 定量检测：病程监测，药效评价 联合检测：提高阳性预测值和特异度。
5 Clin Microbiol，2005，43(1):299—305 4 6 Munoz P, Guinea J, Bouza E. Clinical Microbiology and Infection, 2006, 12(s7): 24-39. 7 Singh N，Paterson DL. Clin Microbiol Rev.2005．18：44-69．
G试验GM试验
.
21
实验原理
• 试验检测（1-3）-β-D-葡聚糖基于鲎试验的基 本原理，即（1-3）-β-D-葡聚糖激活鲎变形细胞中 的G因子亚基，产生丝氨酸蛋白酶，后者可将试剂 中带有寡核苷酸的发色底物（Boc-Leu-Gly-PNA） 中的发色基团对硝基苯胺（PNA）游离出来，并产 生颜色，在405nm进行比色，待测样本溶液吸光度 与溶液中（1-3）-β-D-葡聚糖浓度成正比。
酵母菌 曲霉菌
主要菌种
流行病学
主要危险因素
烟曲霉 黄曲霉 土曲霉 黑曲霉
• 引起感染，导致白血病、造 血干细胞移植患者死亡的主 要原因
• 通常吸入孢子引发感染
• 对抗真菌药物的耐药性增加
.
29
侵袭性曲霉病(Invasive Aspergillosis, IA )
➢ 侵袭性曲霉病是一种严重的机会性感染性疾病。是指致病性曲霉 菌侵犯皮下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾 病，危害性较大。
➢ 曲霉是条件致病菌，当机体免疫力下降时，如：粒细胞缺乏或HIV 感染，可侵犯肺、甚至全身各系统；呼吸系统曲霉病主要有三种， 即过敏性、曲霉球（即继发性非侵袭性肺曲霉病）和肺炎型；曲霉 引起的败血症在粒细胞缺乏患者中较常见。
.
22
G试验被列入真菌诊断和治疗的指南
▪ 欧洲癌症治疗研究组织(EORTC) ▪ 美国国家过敏症与传染病研究所霉菌病研究组(MSG)批准 用于真菌诊断(J Antimicrobial Chemotherapy 2008,61:S1, i3)。 ▪ 中国血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准与 治疗原则( 第3次修改版本)
gm真菌fungus是一类具有典型细胞核有核膜和核仁胞浆内有完整的细胞器无根茎叶不含叶绿素无光合色素细胞壁含几丁质和葡聚糖的单细胞或多细胞异皮肤或软组织感染真菌浅部真菌侵袭性感染真菌皮肤毛发寄生或腐生与表皮毛发和甲板的角质组织中表面感染真菌皮肤皮下组织感染真菌表皮癣属小孢子菌念珠菌属隐球菌属曲霉属毛霉属双相型真菌侵袭深部组织内脏引起全身感染的病原菌或条件致病一侵袭性真菌病诊断治疗现状二g实验原理以及临床应用三侵袭性曲霉菌病感染现状四侵袭性曲霉菌病的临床诊断治疗现状五gm试验原理以及临床应用六g试验gm试验联合检测优势logo一侵袭性真菌病诊断治疗现状侵袭性真菌病invasivefungaldiseaseifd即以往所说的深部真菌病是指致病性真菌侵犯皮下组织黏膜肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病
G试验过去与现在
诊断阈值20ng/L（Fungitec-G试剂盒），敏感性84%，特异性91% 不能区分曲霉与念珠菌感染
吕沛华，赵蓓蕾， 等． 中华医院感染杂志，2007；17 (11)：1328-31 吕沛华，赵蓓蕾，等．中华结核和呼吸杂志，2007；30 (1)：31-34
G试验
④干燥管，在5d，4 度保 存送检;>5d， -70度保存送检;无菌杯或管，RT，
2h; 2-24h，4度保存送检
G试验已作为微生物学证据列入美国IFI的诊断指南。
相关指南
中国指南
中华结核和呼吸杂志 2007 年 11月第30卷第 11期 Chin J Tuberc Respir Dis，Novembert 2007 , Vol.30, No. 11
G试验
BDG检测原理
能特异性激活自鲎变形细胞溶解产物提取的G因子，因此 一般用G试验方法检测
常用的检测试剂盒有Fungitec-G和Glucatell
主要试剂G因子来自于不同种的鲎 诊断IFI的推荐阈值
• Fungitec-G：20ng/L • Glucatell：60ng/L
G试验
临床意义
➢ 血浆BDG检测是筛选IFI的有用方法
• 诊断IFI的敏感性、特异性约80%～90% • 浅表真菌感染或真菌定植：BDG极少释放入血液中
➢ 有效的抗真菌治疗能降低血浆BDG水平，连续检测有助 于判断病情变化和治疗反应
➢ 不能区分曲霉与酵母菌感染 ➢ 不能用于新生隐球菌感染和曲霉球的诊断
• 肺曲霉球：曲霉呈寄居状态而非侵袭性感染 • 新生隐球菌为α葡聚糖，且具有厚荚膜
G试验
——过去与现在
南京军区南京总医院呼吸与重症医学科 赵蓓蕾 2015年7月
G试验与GM试验..
G试验原理----反应特异性
G试验----国产检测方法
. .
. .
国产：MB-80（金山川） 动态浊度法 cut-off：阴性＜10ug/ml，中介10-20ug/ml， 阳性＞20ug/ml，儿童阳性＞50ug/ml 国产：湛江安度斯生物有限公司 动态比色法 cut-off：阴性＜100.5pg/ml，中介100.5-151. 5pg/ml，阳性＞151.5pg/ml 标本：血浆
G试验
（1-3）-β-D葡聚糖 占真菌细胞壁成分50 %以上 与鲎试剂中的G因子发 生级联凝固反应
G试验检测范围
检测底物：（1-3）-β-D葡聚糖 诊断：侵袭性真菌感染（IFD） 检测频率：每周一至周五 真菌细胞壁成分：念珠菌、曲霉、镰刀霉、毛孢 子菌、卡氏肺孢子菌、支顶孢、组织胞浆菌等 不能检测：结合菌（毛霉、根霉）、隐球菌
G试验----试剂盒
鲎试剂来源：东方鲎、美洲鲎 检测方法：动态比浊法、动态比色法 试剂反应性不同，检测结果不同，cut-off值不同
30名AML、MDS念珠菌血症患者 连续>2次G试验阳性，可提高特异性、PPV（阳 性预测值） 确诊或拟诊IFD，平均比临床症状出现早10d
G试验----影响因素
体温的变化情况
WBC（×109/L）的变化情况
G+GM
G试验与GM试验，为临床增加了侵袭性真菌感染 的诊断手段，但不能完全依赖 结合患者临床情况综合分析 注意分析假阳性、假阴性影响因素 注重动态监测，一次检测并不绝对 涂片、培养、药敏仍是最基本的真菌学监测手段， 实验室和临床均不可忽视
G试验与GM试验
今日技能G试验、GM试验需要掌握的要点
今日技能G 试验、GM 试验需要掌握的要点01G 试验检测成分1,3-β-D-葡聚糖，为医学上大部分重要真菌的细胞壁组成成分，人体吞噬细胞吞噬真菌后能持续释放该物质。
02G 试验的假阳性因素及规避方法G 试验的假阳性因素和规避方法干扰因素 规避方法 一过性假阳性 应用含有葡聚糖的纤维膜进行血液或腹膜透析者 动态监测 医用辅料、纱布等操作过程中的污染通过食物摄入脂肪乳、牛奶、海带、蘑菇 空腹采血 血液制品白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等 输注前采血 临床用药 抗肿瘤药物（香菇多糖、裂殖菌多糖） 用药前采血 磺胺类、阿莫西林克拉维酸、多黏菌素、厄他培南、复方新诺明、头孢吡肟、头孢唑林特殊样本 脂血症、溶血、黄疸 稀释（结果仅供参考，无诊断意义）03G 试验的假阴性因素及规避方法（1）接合菌不含1,3-β-D-葡聚糖，隐球菌的1,3-β-D-葡聚糖因菌体厚外荚膜较难释放。
（2）某些抗菌药物（如卡泊芬净、米卡芬净等）抑制1,3-β-D-葡聚糖合成。
（3）1,3-β-D-葡聚糖在常温下易降解，建议在标本采集后2h 内送检（一般不超过6小时），否则易出现假阴性。
（4）免疫复合物形成。
（5）目前仅适合血清标本。
（6）连续两次G 试验阳性可使G 试验的特异性显著增高。
（7）G 试验在器官移植或其他免疫功能低下患者中的敏感性和阳性预测值等指标明显降低，患者巨噬细胞功能减低，真菌不能被吞噬破坏，不能释放或少释1,3-β-D-葡聚糖，检测结果就可能呈阴性或者检测值偏低，而此时患者的病情可能较重，因此在诊断侵袭性真菌病（IFD ）时还应考虑宿主因素，避免误诊。
04GM试验检测成分半乳甘露聚糖抗原，为曲霉菌细胞壁成分，曲霉菌特异性标志物，随菌丝生长释放入血。
05GM试验欧洲指南推荐（1）GM试验诊断侵袭性曲霉菌感染，不仅可以用于血清和BALF，也可以用于血浆和脑脊液的检测。
（2）不同临床标本需要采用不同的GM阈值，但是不需要根据患者类型不同区分不同的阈值。
G试验和GM试验检测的方法及临床意义
G试验和GM试验检测的方法及临床意义侵袭性真菌病即是以往所说的深部真菌病，是指致病性真菌侵犯皮下组织、粘膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病。
引起侵袭性真菌病的病原菌有270余种，常见病原菌有念珠菌（占70%-90% ）和曲霉菌（占 10%-20%）。
常引起侵袭性真菌病的高危因素有严重粒细胞缺乏、免疫功能低下、移植、糖尿病、肾衰、血透、慢阻肺、实体器官移植、长期激素治疗以及入住ICU 等。
侵袭性真菌感染病早期诊断和治疗面临着巨大挑战，临床表现缺乏特征性，发病率高、死亡率高、漏诊率高且诊断困难，特异性诊断指标有限，继发性真菌感染常被基础疾病和治疗药物所掩盖。
和检验科相关的辅助诊断方法有培养法和非培养法。
血培养作用有限，阳性率较低（念珠菌感染患者血培养阳性率只有38%）。
相对而言，非培养技术就突显出其优越性。
真菌的检测的非培养技术常见的有G实验和GM试验。
此实验敏感性高，阳性检出率高，能早期快速诊断，为临床用药提供帮助。
G试验是检测1,3-β-D-葡聚糖的试验，采用的方法是动态显色法。
1,3-β-D-葡聚糖是真菌细胞壁的一种成分，广泛存在与各种真菌，只有当真菌进入体内被吞噬细胞吞噬，细胞壁被破坏,1,3-β-D-葡聚才能释放入血，定植情况该实验为阴性，所以G试验可区分定植和感染。
G试验可检测除隐球菌和接合菌外的多种真菌感染，对于念珠菌血症而言, G试验检测是首选检查方法。
G试验检测一般先于临床症状平均4天，平均早于发热5天，是早期检测的重要手段。
G试验检测值<70pg/ml定义为阴性，此时不建议抗真菌治疗，当检测值在70-95pg/ml 时定义为灰区，此为观察期，应连续监测，当检测值>95pg/ml定义为阳性, 建议结合临床症状诊断治疗。
GM试验是检测半乳甘露聚糖抗原的试验，采用的方法是酶免法。
半乳甘露聚糖（GM）是曲霉细胞壁的一种成分，GM从薄弱的菌丝顶端释放，曲霉菌感染的患者血液内存在GM。
G试验和GM试验-医学课件
1.5 血清G试验假阴性的情况
隐球菌具有厚壁包膜，生长缓慢，导致假阴性； 局灶性曲菌病，BG很少释放入血； 抗真菌药物的使用。
1.6 血清G试验的优势和局限
优势： 鉴别侵袭性感染与定植； 不受机体免疫状态影响，早于临床诊断平均4天；是早期真 菌感染的敏感生物标志。
局限： 不能区分真菌的种类。
2.4GM试验假阴性的情况
释放入血循环中的曲霉GM并不持续存在而是会很快清除； 以前使用了抗真菌药物； 病情不严重； 非粒细胞缺乏的患者。
2.5 血清GM试验的优势和局限
优势： 鉴别曲霉菌侵袭性感染与定植； 早于临床症状和影像学异常1周； GM诊断侵袭性曲霉感染的敏感度高于G试验； 血清中存在时间较短，可作为疗效监测。
3.1 文献一
Bronchoalveolar lavage fluid galactomannan for the diagnosis of invasive pulmonary aspergillosis in patients with hematologic diseases
回顾性分析99名血液病患者，其中58名确诊或临床诊断IPA者。所有患者 的BALF样本均用Platelia（双夹心酶联免疫吸附的方法检测GM水平的试 剂盒）检测。
1.4 血清G试验假阳性的情况
使用纤维素膜进行血透，标本接触过纱布或其他含有葡聚糖 的材料；
静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品； 标本中存在脂多糖； 操作者处理标本时存在污染； 使用多糖类抗癌药物； 放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌
经胃肠道进入血液； 服用多粘菌素,厄他培能,头孢噻肟、吡肟, 磺胺也会不同程
G实验培训课件
• 取处理液的上层清液。 • 平底试管要一次插到底，插入后不要再碰触。 • 先将冷却后的样品加入平底试管，再溶解主剂，溶解后， 加入平底试管，顺序不要颠倒。
结果判断
真菌1,3-b-D 葡聚糖检测 • 检测值﹤60pg/mL,阴性。 • 检测值介于60-100pg/mL之间，临床观察期，建议动态 采血检测。 • 检测值﹥100pg/mL，阳性，结合临床症状综合诊断。
5.干热结束后，转移至冷却区冷却5min。
6.取上述前处理液100µL加入无热原平底试管中，取主 剂溶解液0.6mL溶解反应主剂，混匀，然后再加入0.1mL 反应主剂溶液到无热原平底试管中，混匀，插入MB-80 检测系统。
7.反应结束后仪器自动计算结果并保存。
检测流程图-5M
注意事项-1M
1.预热采集 • 在进行试验之前，仪器一定要提前预热 30min ，达到工 作温度后，按要求填写表头信息，完毕后点击采集，使 仪器处于采集状态后再进行试验。 2.样本预处理 • 血液标本3000r/min离心10min。 • 离心后取血清上层样本。 • 70℃加热时间严格控制在10min。 • 样本处理液加热冷却后，不要震荡以免将处理过的下层 干扰物质悬浮上来。
7.反应结束，仪器自动计算结果并保存。
检测流程图-1M
操作步骤-5M
1.打开MB-80检测系统主机、恒温仪预热30min。
2.打开MB-80系统软件，录入病人信息、样品种类及检测 项目等信息。
3.点击采集,使系统处于采集状态。
4.取血清标本100µL，加入样品处理液中，摇匀，放入恒 温仪加热区70℃干热10min。
G实验培训课件
市场部
主要内容
一 简介
二
三 四
实验操作
G试验、GM试验定义、临床意义、监测结果影响因素及其区别
G试验、GM试验定义、临床意义、监测结果影响因素及其区别G 试验和 GM 试验作为检测真菌抗原的非培养技术，已经成为侵袭性真菌感染的诊断指标之一，近年来，这两种标志物受到较大关注，是国内外侵袭性真菌病诊断研究的热点，并且得到广泛的临床应用。
本文就目前关于 G 试验和 GM 试验的临床应用区别总结如下。
定义G 试验：又称 1,3-β-D 葡聚糖试验，是检测真菌的细胞壁成分 1,3-β-D 葡聚糖，人体的吞噬细胞吞噬真菌后，能持续释放该物质，使血液及体液中含量增高。
1,3-β-D 葡聚糖可特异性激活鲎变形细胞裂解物中的 G 因子，活化的 G 因子又可使凝固酶原转化为凝固酶，通过旁路途径激活鲎试验，从而产生凝集反应，故称 G 试验。
GM 试验：是检测曲霉菌细胞壁上的一种多聚糖抗原（即半乳甘露聚糖抗原，glactomannan，GM），半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，在曲霉菌侵袭组织早期，曲霉菌细胞壁外层的 GM 可被释放入血，是最早释放的抗原，可以通过酶联免疫吸附试验法进行检测。
GM 试验主要适用于侵袭性曲霉引起的感染。
临床意义G 试验方法具有快速、操作方法简单等特点，适用于隐球菌、接合菌（毛霉菌）以外的所有深部真菌感染的早期诊断，尤其是念珠菌和曲霉菌引起的感染；G 试验虽能测得包括曲霉和念珠菌在内的更多致病性真菌，且初步的临床研究显示有较好的敏感性和特异性，假阳性率较低，但它只能提示有无真菌侵袭性感染，并不能确定为何种真菌感染，这是此方法的缺陷。
GM 试验主要针对于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断。
可对血清、脑脊液、肺泡或支气管灌洗液进行检测。
据报道，有 2/3 的患者在其他诊断方法阳性之前 6 ~ 14d 即可检测到 GM。
另一方面，GM 的释放量与菌量成正比，可以反映感染的严重程度，连续检测 GM 也可作为治疗疗效的监测；根据侵袭性肺真菌病诊断指南，其中 G 试验、GM 试验连续 2 次阳性为有意义的检查结果。
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趋向性诊断，早期筛查真菌感染——临床医生的诊断帮手1-3-β-D葡聚糖本质及特点(1-3)-β-D葡聚糖特性G试验的特点耗时短，１小时左右；灵敏度高，特异性强，定量检测；对于念珠菌血症，Ｇ试验是首选；葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中。
研究表明，（1-3）-β-D葡聚糖是占真菌壁50%以上的成分。
血液葡萄糖检测可在拟诊早期为临床医生提供机体是否感染真菌的可靠信息，1,3-β-D葡聚糖可用于真菌感染的早期诊断。
对热极为稳定，高压１２１℃并不能使其灭活。
在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对Ｇ试验灵敏。
有效早期筛查，可检测多种致病真菌感染，如念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，毛孢子菌等； 当真菌进入人体血液或深部组织中后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，（１－３）－β－Ｄ葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。
当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。
在浅部真菌感染中（痰液、皮肤、粘膜等属于浅部真菌感染的范畴），（１－３）－β－Ｄ葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。
［１］［２］［３］［４］［５］Ｇ试验检测的临床意义——抢先治疗G试验和GM试验的比较易感因素广谱抗生素治疗；骨髓和实体器官移植；长期激素治疗；AIDS等免疫缺陷症；抗肿瘤药物和免疫抑制剂治疗；插管等侵袭性治疗；基础类疾病：糖尿病、肝硬化等；是早期诊断IFI 无创检测手段之一；快速诊断：在1-2小时内为临床诊断侵袭性真菌感染症提供试验依据；指导用药：根据结果有针对性使用抗真菌类药物立即治疗；评价效果：应用抗真菌药物后，定期检测，评价药物的有效性；监护病程：监护侵袭性真菌感染易感人群的病发状态；［６］Ｇ试验检测结果判读１、趋向性诊断儿童阈值比成人偏高，建议用50pg/m l 为阈值趋向性诊断——G 试验阴、阳性意义早期有效抗真菌治疗可极大改善患者预后美国四大医疗中心做的关于IF I 的一项回顾性研究*IFI: Intensive Fungal Infection 侵袭性真菌感染对于IFI 的患者，如不及时治疗会造成很高的死亡率（如图），因此早期有效抗真菌治疗至关重要。
G 试验作为一项早期诊断IFI 的有效手段，可以帮助临床医生明确诊治方向，改善IFI 患者预后。
针对IFI*提供早期有效筛查，为临床诊断及对症治疗指导方向。
G试验检测一般先于临床症状平均四天建议G试验可作为入院筛查的诊断手段,为临床医生提供治疗方向，及时治疗。
［６］［８］［７］２、阳性意义３、阴性意义４、干扰因素据报道可能产生假阳性的原因有：不能检测：接合菌和隐球菌1)可以检测多种致病真菌感染,如念珠菌、曲霉、肺孢子菌、镰刀菌、地霉、组织胞浆菌、毛孢子菌等，但是不能区分真菌种类； 2)阳性结果指示有IFI的可能，可以区分定植和感染； 3)指导临床科学合理的使用抗真菌药物； 4)动态监测可以有效评价抗真菌药物的疗效；1)据研究资料显示，G试验对侵蚀性真菌感染检测性预测值为97.73％，建议作为入院筛查的有效手段，可以快速排除IFI的可能； 2）指导临床科学合理的用药；1）污染；2）应用纤维素膜进行血液透析患者；3）某些纱布或其他医疗物品含有葡聚糖；4）某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）含有葡聚糖；5）某些细菌败血病患者（尤其是链球菌败血症）；6）抗肿瘤类药物（香菇多糖、裂殖菌多糖）；7）磺胺类药物；8）蘑菇类食物；注：G试验尽管有一定的局限性，但仍是目前临床上侵袭性真菌感染早期诊断、疗效观察、预后评估有价值的实验诊断方法。
［４］［９］［１０］［１１］［１１－１４］［６］ （３）我国肺部真菌感染的病原体以白色念珠菌和曲霉菌最常见。
其次为新隐球菌、放线菌、奴卡菌、毛霉菌、青霉菌，而芽生菌、孢子丝菌及组织胞浆菌偶见报道。
肺孢子菌肺炎是由感染。
多见于器官移植、恶性肿瘤及ＡＩＤＳ的患者，是免疫功能低下患者最常见、最严重的机会感染性疾病。
（1）近5年．肺部真菌感染的发病率有逐年上升趋势。
根据美国国家医院内感染监测中心(NNIS )资料统计，20世纪90年代住院患者深部真菌感染率为80年代的1.9倍，而肺部真菌感染占深部真菌感染的60％以上。
（2）北京协和医院通过回顾性调查对本院1986-1998年期间痰、血、支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺部组织学检查真菌阳性者进行分析，结果显示95%（120/127）的病例患有基础疾病，其中主要是呼吸系统疾病（44%）、结缔组织病（23%）、血液系统疾病（13%）和慢性肾脏病（8%），而呼吸系统疾病中以慢性阻塞性肺疾病（COPD）最常见。
（1）侵袭性真菌感染(IFI)是血液恶性肿瘤患者化疗或造血干细胞移植后的常见并发症 随着近年来发病率的不断增高。
IFI已经成为严重影响患者长期生存的重要病因之一。
［１１］［１５］［１６］［１７］（2）不同血液病患者IFI的发生率＊ＡＭＬ＝ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ急性髓性白血病； ＡＬＬ＝ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ急性淋巴细胞白血病； ＣＭＬ＝ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ慢性髓性白血病； ＣＬＬ＝ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ急性淋巴细胞白血病； ＮＨＬ＝ｎｏｄｕｌａｒ ｈｉｓｔｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ结节状组织细胞淋巴瘤； ＨＤ＝Ｈｏｄｇｋｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ霍奇金病； ＭＭ＝ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｍｙｅｌｏｍａ多发性骨髓瘤；（3）血液科患者更应关注侵袭性曲霉感染所有的侵袭性曲霉感染中,大部分都是和血液科恶性肿瘤相关。
异基因骨髓移植7%,自体骨髓移植25%,血液肿瘤29%,总共就超过半数了。
（1）在ICU中，IFI除了可发生于存在免疫抑制基础疾病或接受免疫抑制治疗的患者外，更多的则是发生于之前无免疫抑制基础疾病的重症患者。
与其他科室的患者相比，ICU患者最突出的特点是其解剖生理屏障完整性的破坏，带有多种体腔和血管内的插管，消化道难以正常利用，故使得正常定植于体表皮肤和体腔黏膜表面的条件致病真菌以及环境中的真菌易于侵人原本无菌的深部组织与血液。
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