植物磷含量的测定(钼锑抗比色法)
土壤有效磷测定方法
称取429碳酸氢钠溶于约950mL水中，用10%氢氧化钠溶液调节pH至8.50佣酸度计测定），用水稀释至1L。贮存于聚乙烯或玻璃瓶中备用。如贮存期超过20d，使用时须重新校正pH值。
3.3 0.30%酒石酸锑钾溶液
称取0.30g酒石酸锑钾(kSbOC4-1406"1/2H20)溶于水中，稀释至100mL。
3.4钼锑贮备液
称取109钼酸铵[(NH4)6Mo7024.4H20]溶于300mL约60℃的水中，冷却。另取181mL浓硫酸（密度1.84），缓缓注入约800mL水中，搅匀，冷却。然后将稀硫酸注入钼酸铵溶液中，搅匀，冷却。再加入100mL0.30%酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至2L，盛于棕色瓶中备用。
2主要仪器设备
①紫外可见分光光度计；②恒温振荡机或往返式振荡机；③带盖塑料瓶；④酸度计；⑤具塞；⑥比色管25mL;⑦150mL试剂三角瓶。
3相关试剂的制定
3.1 无磷活性炭粉
将活性炭粉先用1:1盐酸浸泡24h，然后移至平板，抽气过滤，用水淋洗4-5次，再用浸提剂浸泡24h，在平板漏斗上抽气过滤，用水洗尽碳酸氢钠，并至无磷为止，烘干备用。
4.2标准曲线的绘制
分别吸取5ug/mL磷标准溶液0mL，0.50mL，lmL，1.50mL，2mL，2.50mL，3.00mL于25ml比色管中，加入浸提剂10mL，显色剂5mLJ慢慢摇动使C02逸出再以水稀释至刻度，充分摇动，逐尽C02，定容，既为含磷0.00，0.10,0.20,0.30,0.40，0.50，0.60ug/mL磷的标准系列溶液。在室温高于20%处放置30min后，进行比色，测量吸光度值和浓度值，绘制标准曲线或建立回归方程。
1 方法原理及适用范围
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定钼锑抗比色法
植株全磷含量测定是一种常用的分析方法，钼锑抗比色法是其中一种常用的测定方法。
该方法基于钼酸钠在酸性条件下与磷酸盐形成复合物，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物，通过比色法测定其吸光度来计算样品中磷的含量。
该方法的具体步骤如下：
1. 样品制备：将植株样品取适量，经过研磨、筛选等处理后，按照规定的方法进行矿酸或硝酸-过氧化氢消化。
2. 样品处理：取消化后的样品，加入硝酸、氯化钾等试剂，使磷酸盐转化为磷酸根离子。
3. 钼锑试剂的制备：将钼酸钠、醋酸和硫酸混合，加入氯化锑钠，制备钼锑试剂。
4. 反应：将处理后的样品加入钼锑试剂中，经过适当时间的反应后，被还原的钼酸钠被锑砷汞反应还原为蓝色化合物。
5. 吸光度测定：将反应产物在特定波长下进行比色测定，根据标准
曲线计算样品中磷的含量。
该方法的优点是简单、快速、精确，适用于大面积的植物磷素含量测定。
但是该方法也存在一些限制，例如样品中的其他化合物可能会影响测定结果，需要进行干扰消除等处理。
2种植物磷含量的检测方法比较研究
2种植物磷含量的检测方法比较研究李会娟【摘要】钼锑抗检测法和钒钼黄检测法2种比色法的比较研究结果表明，2种比色方法的检测结果完全一致，钼锑抗比色法适宜检测磷含量较低的样品，如小麦、玉米、花生秸秆及小麦、玉米籽粒；钒钼黄比色法适宜检测磷含量较高的样品，如花生籽粒。
%comparative study of 2 kind of colorimetric comparison method including molybdenum antimony resistance detecting method and vanadium molybdenum yellow detecting method showed that, the result of two colorimetric comparison method was consistent, molybdenum antimony resistance detecting method was suitable to detect the samples with low phosphorus content, such as wheat, corn ,peanuts, maize and wheat straw. Vanadium molybdenum yellow colorimetry method was suitable to detect the samples with higher phosphorus contain, such as peanut kernel.【期刊名称】《现代农业科技》【年(卷),期】2012(000)011【总页数】2页(P16-17)【关键词】植物磷含量;钼锑抗比色法;钒钼黄比色法;比较【作者】李会娟【作者单位】河南省南阳市农产品质量检测中心,河南南阳473000【正文语种】中文【中图分类】S132;Q946.912磷是生命体必需的大量元素，是蛋白质、核酸、辅酶、核苷酸、磷脂等一系列重要生物质的结构组分，在植物的许多主要功能中，担任储存和运输能量的功能、代谢的作用，对种子的形成不可或缺。
植物全磷的测定方法
二、植物全磷的测定（一）钒钼黄吸光光度法1、适用范围。
适合于含磷量较高的植物样品的测定(如籽粒样品)。
2、方法原理植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸,其吸光度与磷浓度成正比,可在波长400～490nm处用吸光光度法测定。
磷浓度较高时选用较长的波长,较低时选用较短波长。
此法的优点是操作简便,可在室温下显色,黄色稳定,在HNO3、HClO4和H2SO4等介质中都适用,对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格,干扰物少,在可见光范围内灵敏度较低,适测范围广(约为1～20mg/L P),故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。
3、试剂（1）钒钼酸铵溶液:25.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O2·4H2O,分析纯]溶于400mL水中,必要时可适当加热,但温度不得超过60℃。
另将1.25g 偏钒酸铵(NH4VO3,分析纯)溶于300mL沸水中,冷却后加入250mL浓HNO3(分析纯)。
将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵(溶液中,不断搅匀,最后加水稀释至1L,贮于棕色瓶中。
（2）NaOH溶液(c=6mol/L):24gNaOH溶于水, 稀释至100ml。
（3）二硝基酚指示剂(ρ=2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中。
（4）磷标准溶液ρ[(P)=50mg/L]:0.2195g(干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水,加入5ml浓HNO3,于1L容器瓶中定容。
4、主要仪器设备。
分光光度计。
5、分析步骤准确吸取定容,过滤或澄清后的消煮液5～20ml(V2,含P0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中,加2滴二硝基酚指示剂,滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色,加入10.00ml钒钼酸铵试剂,用水定容(V3)。
15min后,用1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定,以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步骤显色),调节仪器零点。
植物磷含量的测定(钼锑抗比色法)
植物磷含量的测定（钼锑抗比色法）一、实验目的?1．掌握钼锑抗比色法测定磷的方法。
2．练习实际测量以及定容的操作。
3．练习分光光度计的使用。
二、实验原理?植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸光光度法测定。
?三、实验试剂（1）2mol/L?NaOH溶液?（2）0.2%二硝基酚指示剂?（3）0.5mol/L?H2SO4硫酸溶液:28mL（4）钼锑贮存溶液：量取153ml不断搅拌，冷却。
（100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随（50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。
分析纯)，100ml水，加5ml 浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为100mg/L磷(P)，此溶液可以长期保存。
吸取上述溶液10ml 于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L磷(P)标准溶液，此溶液不宜久存。
四、实验步骤1、吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.00～5.00ml(V2,含P5～30ug)于50ml容量瓶中,?用水稀释至约20ml,加1～2滴二硝基酚指示剂,滴加2mol/L?NaOH溶液中和至刚呈黄色,再加入1滴0.5mol/L?H2SO4溶液,使溶液的黄色刚刚褪去呈淡黄色,然后加入钼锑抗显色剂5.00ml,摇匀,用水定容(V3)。
在室温高于15℃的条件下放置30min后,用1cm光径比色槽在波长700nm处测定吸光度,以空白溶液为参比调节仪器零点。
?2、校准曲线或直线回归方程:?准确吸取ρ(P)=?5mg/L标准工作溶液0,?1,?2,?4,?6,?8?ml,分别放入50mL容量瓶中,加水至20ml,同上步骤显色并定容,?即得0,0.1,?0.2,?0.4,?0.6,?0.8?mg/L?P标准系列溶液,?与待测液同时测定,读取吸光度,然后绘制校准曲线或直线回归方程。
五、结果计算?Wp =610m(V1/V2)V3c⨯⨯⨯×1000?式中:??Wp?——植物磷的质量分数,g/kg;?????c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度,?mg/L;? V1——消煮液定容体积,?ml;?V2——吸取测定的消煮液体积,?ml;?V3——显色液体积,?ml;?m——称样量,g;?六、注意事项1、室温低于15℃时，可在30～402、植物磷含量0.5g/kg为低量，3、。
植物样全磷测定方法
植物样全磷测定—钼锑抗比色法1、方法原理植物中的磷以有机态为主，用H2SO4-H2O2氧化剂消煮植物样品时，其中的有机物经脱水碳化、氧化分解，变成CO2和H2O,使磷素转化为磷酸盐，然后用钼锑抗比色法测定。
2、仪器设备（1）分光光度计（2）消煮管（3）半微量定氮蒸馏器（4）半微量滴定管3、试剂（1）H2O2[30%,分析纯]（2）浓硫酸[1.84g/cm3]（3）钼锑贮存溶液：浓硫酸153mL缓慢倒入约400mL蒸馏水中，同时搅拌。
放置冷却。
另称10g钼酸铵溶于60摄氏度的300mL蒸馏水中，冷却。
将配好的硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，同时搅拌。
随后加入酒石酸锑钾（5g/L）100mL。
避光贮存。
（4）钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸加入到100mL钼锑贮存液中。
随配随用，有效期一天。
（5）二硝基酚指示剂：0.2g二硝基酚溶于100mL水中（6）磷标准贮存溶液：0.4390g磷酸二氢钾（105摄氏度烘干2h）溶于200mL蒸馏水中，加入5mL浓硫酸，转入1L容量瓶中定容。
此为磷标准贮存液（100mg/L）,可以长期贮存。
（7）磷标准液：取磷标准贮存液准确稀释20倍，即磷标准溶液（5mg/L）不宜久存。
4、操作步骤（1）H2SO4-H2O2消煮称取烘干磨碎植物样品0.15g置于消煮管中，加入8mL浓硫酸，浸泡一晚上。
于360摄氏度消煮1h，稍冷后加入10滴H2O2，消煮20min，稍冷，重复加入H2O2，直至溶液无色或清亮。
将消煮液洗入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀，静置。
（2）吸取上一步消煮液10ml于50ml容量瓶中，加水稀释至30ml，加二硝基酚指示剂2滴，用氢氧化钠（2mol/L）和硫酸（0.5mol/L）调节pH至溶液刚成微黄色。
然后加入钼锑抗显色剂5ml，摇匀，用水定容。
放置30min后，在分光光度计用波长700nm比色，以空白溶液为参比液，读取吸收值，在工作曲线上查找出显色液的P值。
钼锑抗比色法测定磷细菌发酵液中有效磷含量测定值的影响因素分析
安徽农业科学 ， ｕｎｌ ｆ ｎｕ Ａ ｎ． ｃ． ０ ，６ １）４２ —４２ Ｊ ｒａｏ Ａ ｈｉ ｇ Ｓｉ ０ ８３ （２ ：８２ ８３ ｏ ２
责任编辑
罗芸
责任校对
李洪
钼 锑抗 比色法测定 磷细 菌发 酵液 中有效 磷 含量 测定值 的影 响 因素 分析
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张祥胜 长 大 生 科 学 ，北 州４０） （江 学 命 学 院湖 荆 ３２ ４５
摘要 ［ 目的］ 探讨影 响钼锑 抗比 色法进行磷 细菌发酵液 中有效磷含 量测定的 因素 。 方法］以 巨大 芽胞杆 菌为出发 菌株 ， 用摇瓶发 酵 ［ 采 法培养有机磷 细菌， 用钼锑抗比 色法测 定上 清液 中有效磷含量 ， 究超 声波处理 ， 酵体积 、 研 发 活性碳 、 液 ｐ 和发酵液 离心等 因素 反应 Ｈ值 对钼锑抗 比色法测 定有效磷 含量 的影响 。［ 结果］ 反应 液最大吸收波长在 ７ ，左右 ； ２ １１ ０３ １ １ 发酵体积 、 加入 活性碳 与否 、 反应液的 ｐ Ｈ值等 对 测定结果影响 不大， 筛选时可 大大提 高效率 ； 声波处理 ２ ｉ 效 果明显 ； 用 ５ ｌ 在 超 ０ ｒｎ ａ 在 ０ｍ 容量瓶 进行 定容 时， 取样 体积 以 ２ ５ ｌ 宜； ．ｍ 为 对 发酵液进行 离心 效果 更好 些 ， 在 必要 的情 况 下 ， 但 可静置 后取 上 清测 定。 ［ 结论 ］该研 究 为建 立有机 磷 细 菌诱 变 筛选 体 系提供 理 论
磷钼蓝比色法测定植物组织中磷的含量
磷钼蓝⽐⾊法测定植物组织中磷的含量检测原理在⼀定的酸度和钼酸铵浓度下，溶液中的磷与钼酸铵作⽤⽣成黄⾊的磷钼酸，其反应如下：(NH4)2MoO4+2HCl→H2MoO4+2NH4ClH3PO4+12H2MoO4→H3［P(Mo3O10)4］+12H2O⽣成的磷钼酸，在⼀定量的氯化亚锡作⽤下，使部分钼(六价钼)被还原，形成蓝⾊的复杂化合物—磷钼蓝。
在⼀定含磷浓度范围内，溶液蓝⾊的深浅与磷含量成正⽐。
根据蓝⾊的深浅与标准⾊阶相⽐较，即可求出磷的含量。
测定步骤制备标准⾊阶和供试液中磷含量的测定，可同时在⽐⾊盘中，按下表顺序进⾏。
磷测定步骤操作步骤⽤量单位标准⾊阶浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）0.5124812制备显⾊⽤准系列取混合标准液浓度2mg/L滴124000416mg/L滴000123滴3203211．加2.1%钼酸铵盐酸液滴11111112．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀3．加0.1%氯化亚锡溶液滴11111114．搅匀由低⾄⾼浓度逐⽳搅匀5．⽐⾊读数5～15分钟内与标准⾊阶⽐较记下读数6．计算结果⽆机磷(mg/L)=读数*稀释倍数注意事项0.1%氯化亚锡在临⽤前由2%氯化亚锡⽢油贮备液稀释制备当天有效，每次少配。
3—2.5植物组织中钾的测定(四苯硼钠⽐浊法)溶液中的钾离⼦与四苯硼钠Na［B(C6H5)4］作⽤，⽣成难溶的四苯硼钾⽩⾊沉淀，使溶液呈现浑浊、其反应如下：K++Na[B(C6H5)4]→K[B(C6H5)4]↓+Na+在⼀定含钾浓度范围内，其混浊度与钾含量成正⽐，根据混浊程度与标准钾的浊度相⽐较，即可求出钾的含量。
测定步骤制备标准⽐浊系列与供试液中钾的测定，可同时在⼩试管(19×70毫⽶)中，按下表顺序进⾏。
有效钾测定步骤操作步骤⽤量单位标准浊度系列浓度(mg/L)供试液⽤量（滴）510204060801．制备⽐浊⽤标准系列取混合标准液浓度20mg/L滴2480004160mg/L滴000234加蒸馏⽔滴6406542．加3％EDTA碱性溶液滴1111111 3．加37％甲醛滴1111111 4．搅匀逐管搅匀5．加2％四苯硼钠溶液滴22222226．搅匀逐管搅匀7．⽐浊读数5～15分钟内与标准浊度系列⽐浊8．计算结果有效钾(mg/L)=读数值*稀释倍数注意事项试液中产⽣⼲扰作⽤的离⼦，主要有铵离⼦及其它⼀些三价、⼆价⾦属离⼦(如钙、镁、铁、铝等)须加⼊EDTA⼆钠盐及甲醛来掩蔽，以消除⼲扰。
精确测定土壤磷的有效方法资料
精测土壤磷的有效方法摘要：本文通过工作实践，对有效磷的测定在具体操作中应注意的几个问题做了详细阐述，规范了土壤有效磷测定的操作规程。
关键词：土壤有效磷碳酸氢钠提取-钼锑抗比色法浸提显色磷在植物体内的含量仅次于氮和钾，是作物生长不可缺少的营养元素。
土壤有效磷是土壤磷素养分供应水平高低的指标, 土壤磷素含量高低在一定程度反映了土壤中磷素的贮量和供应能力。
了解土壤中速效磷供应状况，对于施肥有着直接的指导意义。
土壤中有效磷的测定方法很多。
有生物方法、化学速测方法、同位素方法、阴离子交换树脂法等【1】。
我们在实际工作中采用的是碳酸氢钠提取-钼锑抗比色法。
其原理是：利用碳酸氢钠溶液提取土壤水溶性的磷和磷酸钙、磷酸铁、磷酸铝中的磷，用钼锑抗试剂显色，进行比色测定。
为确保测定数据的精准需要注意以下的问题：1、分清适用范围：石灰性土壤由于大量游离碳酸钙存在，不能用酸溶液来提取有效磷。
而碳酸盐的碱溶液能降低碳酸钙的溶解度，抑制钙离子的活性，还能降低了铝离子和铁离子的活性，不会产生磷的再沉淀，浸出液中的磷就可以用钼锑抗显色测定了。
此外，碳酸氢钠碱溶液中存在着OH-、HCO3-、CO32-等阴离子，有利于吸附态磷的置换，因此碳酸氢钠提取-钼锑抗比色法主要用于石灰性土壤，也适应于中性土壤和酸性土壤中速效磷的测定。
另外酸性土壤还可以采用0.03mol/L 氟化铵—0.025mol/L 盐酸浸提，再用钼锑抗显色测定。
【2】2、正确采样，规范处理：采样要具有代表性，应考虑地形基本一致，近期施肥耕作措施、植物生长表现基本相同。
采样点15—20个，其分布应尽量照顾到土壤的全面情况，要避开田埂、路边、沟边、粪堆以及焚烧秸秆的灰堆等地方，在取土时要保证足够的取土深度和土样量，并保证采样均匀一致，土壤的上层与下层比例相同等；采回的土样要平摊均匀，薄薄的一层置于干净整洁的室内通风处自然风干，严禁暴晒，并注意防止酸、碱等气体、灰尘的污染。
风干过程中要经常翻动，并将大土块捏碎以加速干燥，同时剔除石块、瓦砾及植物根系土壤以外的侵入物。
磷的测定(钼锑抗分光光度法_)
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Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment
721分光 光度计
Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment
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实验原理
钼锑抗分光光度法的原理
植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸 盐。在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵 和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温 下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸 光光度法测定。
数据处理
Wp =
×1000
式中: Wp ——植物磷的质量分数,g/kg; c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质 量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml; V2——吸取测定的消煮液体积, ml; V3——显色液体积, ml; m——称样量,g;
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六、思考题
１、用分光光度计测吸光度时，如果比色皿中有气 泡对结果有什么影响？
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五、注意事项
１、室温低于13℃时，可在20～30℃水浴中，显色15min 2、操作所用的玻璃器皿，可用1+5的盐酸浸泡2h，或用不含 磷酸盐的洗涤剂刷洗 3、比色皿用后应以稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻，以除去吸附 的磷钼蓝显色物
植株全氮、全磷的测定
植株全氮、全磷的测定测N仪器操作一、测定方法:1、称样前过100目筛,然后将试管洗净,排号,烘干。
2、称样品0.5000g,并做好记录,称K2SO4 4.5g ,CuSO4*5H2O 0.5g ,或者将两种药品按比例混好过筛后,一次性加入 5 g 混合药品。
不论是先加药品还是称样,都必须在其后将两者摇匀,还要求称好的样全部送至试管底部,加了10 ml 硫酸后继续摇匀,在放到机子上去消煮,否则误差较大。
3、消煮:插上电源后按开关---执行---等40 min后420℃时放样---将水开到最大---打开风机和电动风阀(1 h)。
4、消煮后先放到架子上冷却,再将上面的盖子取下冷却至无白雾。
5、硼酸:1 %:50g溶于5000 ml 水,将配好的35ml甲基红试剂和50ml溴甲酚绿加入5000ml硼酸。
甲基红和溴甲酚绿都是称 1 g溶解到1000ml无水乙醇中。
6、NaOH:一瓶默认500g + 1250ml水。
7、0.1mol/L的标准酸:吸取15ml浓硫酸定容到5000ml,即约为0.0558mol/L的硫酸,换算为标准酸约为0.1116mol/L 的标准酸。
8、标准酸的标定:取少许无水碳酸钠于烧杯,在180--200℃下烘4—6小时,取出放干燥瓶冷却至室温,然后称取约0.22 g 于250毫升锥形瓶中,加50毫升水溶解,各加1--2滴甲基红和溴甲酚绿指示剂,用配好的标准酸滴定,在出现红色后加热一些、冷却,反复直至红色不退去为止,记录用量V。
滴定做三个重复还有一个空白。
标准酸浓度计算:C=0.22/(0.05299*V)标定好的标准酸浓度约为0.1115---0.1117mol/L的H+浓度,开机后可以按右上方的∟● 键,输入计算好的标准酸浓度即可。
二、仪器操作:1、开机按钮:按回车键等几分钟,机子自检完成---self-fest-按手型设置键----定到Receiver---回车键,等颜色(中间瓶)与硼酸颜色相同时将机子盖打开。
植物磷含量测定(艾老师)【范本模板】
植物有效磷含量的测定(游离态磷）1．试剂配制（1）配100 ml l0％(w/v)的高氯酸，取7。
874 ml 72%的高氯酸溶液。
(高氯酸：分子量100.46，相对密度1.764)。
配800 ml 5%(w/v）的高氯酸，取31.494 ml 72％的高氯酸溶液。
（2）配制硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）：即0.5N H2SO4中含有0。
4%(w/v）的钼酸铵。
①溶解0.8g钼酸铵(NH4)6Mo7O24·4H2O于100ml水中。
②然后徐徐加入5 ml的浓H2SO4（98％）.③充分混匀，冷却后加水至200 ml。
（3）配制10％（w/v）抗坏血酸溶液（溶液B）：溶解2 g抗坏血酸于水中，最后加水至20 ml中，贮于棕色瓶中,在4℃冰箱保存。
（4）工作溶液:按体积比6:1混合溶液A和溶液B.注：工作溶液需要每天配制，配好后放置2小时后再使用。
2。
操作步骤（1）取0。
5克鲜样用液氮研磨成粉末，在4℃放置（冰上或者冰箱）至样品冻融，加入1ml 10%(w/v)的高氯酸（PCA）研磨均匀。
（2）匀浆液用5%（w/v)的高氯酸（PCA）稀释10倍,于冰上放置30分钟。
（3）于4℃，10000 g离心10分钟,上清液用于有效磷含量的测定(钼蓝法）。
（4）取2 ml工作溶液与1 ml样品上清液混合，于40℃温育20分钟。
（5）反应液在冰上冷却后,于820 nm可见光波长下测定吸收值。
如样品浓度过高，应适当稀释,使其OD值落在标线的线性范围内。
3．磷标准曲线的制作（1）磷标准溶液配制（60 ppm P）：溶解0。
230 g磷酸二氢铵（NH4H2PO4)于100 ml蒸馏水中，即得600 ppm P的磷标准溶液，再将600 ppm P的磷标准溶液用提取剂稀释10倍，得60 ppm P的磷标准溶液.（2）标准曲线绘制:将60 ppm P的标准磷溶液用提取剂稀释，分别制成0。
6、1.2、2。
4、3.6、4。
植物全磷的测定方法
二、植物全磷的测定（一）钒钼黄吸光光度法1、适用范围。
适合于含磷量较高的植物样品的测定(如籽粒样品)。
2、方法原理植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸,其吸光度与磷浓度成正比,可在波长400～490nm处用吸光光度法测定。
磷浓度较高时选用较长的波长,较低时选用较短波长。
此法的优点是操作简便,可在室温下显色,黄色稳定,在HNO3、HClO4和H2SO4等介质中都适用,对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格,干扰物少,在可见光范围内灵敏度较低,适测范围广(约为1～20mg/L P),故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。
3、试剂（1）钒钼酸铵溶液:25.0g钼酸铵[(NH4)6Mo7O2·4H2O,分析纯]溶于400mL水中,必要时可适当加热,但温度不得超过60℃。
另将1.25g 偏钒酸铵(NH4VO3,分析纯)溶于300mL沸水中,冷却后加入250mL浓HNO3(分析纯)。
将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵(溶液中,不断搅匀,最后加水稀释至1L,贮于棕色瓶中。
（2）NaOH溶液(c=6mol/L):24gNaOH溶于水, 稀释至100ml。
（3）二硝基酚指示剂(ρ=2g/L):0.2g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中。
（4）磷标准溶液ρ[(P)=50mg/L]:0.2195g(干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水,加入5ml浓HNO3,于1L容器瓶中定容。
4、主要仪器设备。
分光光度计。
5、分析步骤准确吸取定容,过滤或澄清后的消煮液5～20ml(V2,含P0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中,加2滴二硝基酚指示剂,滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色,加入10.00ml钒钼酸铵试剂,用水定容(V3)。
15min后,用1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定,以空白溶液(空白溶液消煮液按上述步骤显色),调节仪器零点。
(完整word版)钼锑抗比色法测定土壤全磷
(完整word版)钼锑抗比色法测定土壤全磷钼锑抗比色法测定土壤全磷1、称取通过0。
149mm孔径筛的风干土样0.25g，小心放入镍坩埚底部，切勿黏在壁上。
加入无水乙醇3～4滴，润湿样品，在样品上平铺2.0g氢氧化钠。
将坩埚放入高温电炉,升温。
当温度升至400℃左右时切断电源，暂停15分钟。
然后继续升温至720℃，并保持15分钟，取出稍冷。
2、在坩埚中加入80℃的水10ml，待熔块溶解后无损转入100ml容量瓶中,同时用3mol/L的硫酸溶液l0ml和水多次洗坩埚，洗涤液也一并移入容量瓶。
冷却，定容。
用无磷滤纸干过滤或离心澄清.同时做两个空白试验。
3、吸取待测样品溶液5~10mL于50mL容量瓶中，用水稀释至约30mL。
加入2～3滴二硝基酚指示剂，并用100g/L的碳酸钠溶液或5％硫酸溶液调节溶液至刚呈微黄色。
加入5.00mL钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容.在室温20℃以上条件下，放置30分钟后待测。
4、分别吸取5ug/mL的磷标准溶液0、1。
00、2。
00、3。
00、4.00、5。
00、6.00ml于50ml容量瓶中，同时加入与显色测定所用的样品溶液等体积的空白试液，用水稀释至约30ml，同样品测定调节酸度,显色，定容。
用水稀释至约30ml，加入5.00ml钼锑抗显色剂，定容，即得含磷量分别为0。
0、0.1、0.2、0。
3、0.4、0.5、0.6ug/mL的系列溶液.于20℃以上温度放置30分钟后，以磷含量为零的系列溶液调节仪器零点，于波长700nm处,在分光光度计上用1cm光径比色皿进行比色测定。
记录下样品浓度数值。
5、把样品浓度数值代入公式，计算土壤样品的全磷含量（g/kg），计算结果保留小数点后两位。
磷的测定(钼锑抗分光光度法_)汇总
721分光 光度计
数据处理
Wp=
×1000
式中: Wp ——植物磷的质量分数,g/kg; c——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质
量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml; V2——吸取测定的消煮液体积, ml; V3——显色液体积, ml; m——称样量,g;
Sino-Dutch Demonstration Researcher and Training Centre for Water Treatment
植物磷的测定
（钼锑抗分光光度法 ）
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实验目的
１、了解磷测定方法 ２、掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计
算方法 3、熟悉钼锑抗分光光度法测定磷的原理和过程
H+
PO43- + 钼酸盐 + 抗坏血酸
蓝色络合物（磷钼蓝）
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实验步骤
１、预处理
（１）样品消煮 HNO3-HClO4消煮法
（２）植物磷的测定
1~2滴指示剂
消煮液2~5ml
20ml水
NaOH至 刚呈黄色
1滴 H2SO4 褪色
5ml钼锑抗 显色剂
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30min显色，700nm 测OD值
两种测定湿地植物总磷方法的比较研究_卢超
江西农业学报 2009,21(8):142~144A cta A gr i culturae Jiangx i两种测定湿地植物总磷方法的比较研究卢超收稿日期:2009-03-19基金项目:国家基础科学人才培养基金(J0830521)资助。
作者简介:卢超(1989-),男,福建南平人,主要从事湿地生态及土地覆被变化研究。
(福建师范大学地理科学学院,福建福州350108)摘 要:利用钼锑抗比色法和磷钒钼黄比色法测定湿地植物不同器官的全磷含量,比较两种测定方法存在的差异。
结果表明:两种测定方法测定结果存在显著性差异:磷钒钼黄比色法测定的全磷含量要高于钼锑抗比色法;两种测定方法误差均在允许的范围内;测定湿地植物全磷,钼锑抗比色法比磷钒钼黄比色法更加准确。
关键词:钼锑抗比色法;磷钒钼黄比色法;全磷中图分类号:O655.2 文献标识码:A 文章编号:1001-8581(2009)08-0142-03Co mparative Study on Two M ethods for Deter m inationof Total Phosphorus inW etland P lantsLU Chao(Co lleg e o f G eographica l Sc i ences ,Fu jian No r ma lU n i versity ,Fuzhou 350108,Ch i na)Abstract :M o -Sb color i m e tric method and P -V -M o yell ow color i m etric m et hod w ere used to deter m i ne t he content of to tal phosphorus i n different parts of wetland plants ,and t he d ifference i n deter m i nati on results ob tai ned by t wo m ethods w as co m pared .The resu lts sho w ed that t he total phosphorus content obtained by t w o me t hods ex i sted d i sti nct difference and the determ i nati on result o f P-V -M o yell ow co lori m etr ic m et hod w as h i gher than t hat ofM o-Sb co lori m etric me t hod ;the scope of erro r marg i ns o f t wo m ethodsw as all a llo w ab l e ;the deter m i na tion of tota l phosphorus con tent i n we tland p l ants by M o-Sb co lori m etr ic m et hod w as more accurate t han by P -V -M o yell ow co l o ri m etr ic m et hod .K ey words :M o-Sb co l o ri m etr i c me t hod ;P-V -M o ye llo w co l or i m e tric m ethod ;T ota l Phosphorus磷是生命体必须的大量元素,是蛋白质、核酸以及骨骼的重要组成成分。
钼锑抗比色法
钼锑抗比色法
抗比色法是一种通过颜色变换来检测物质含量的基本实验性分析方法，是最常用的一
种定量分析方法。
它充分利用了某些化合物的光谱性质，利用机械化的方法来测定它们的
含量。
抗比色法的原理是：在不同的溶液中，当亮度和波长相同时，某种特定的吸光度与与
它有关性质（如浓度、溶解度等）相关。
例如，大多数以离子态存在的有机物质可以被某
一波长的外部光源激发，且会吸收一定的光，而多少程度的光谱平衡则取决于物质的浓度。
于是，可以通过将含有某种物质和不含该物质的溶液混合后，比较它们的光谱对比度来测
定物质的含量。
用抗比色法测定钼锑的实验需要先选择恰当的吸光度计，吸光度计的工作波长应当比
较精确，以便精确地测量溶液中含有物质的吸光度变化。
之后，应准备用于测试的样品，
通常采用真空滤液后的溶液。
然后，将含（Mn）和不含（Mn）的样品各自加入到不同的容
器中，用不同波长的光照射它们，这样就可以测量出它们吸光度差异（ΔA）。
最后，用
ΔA/A（）=ΔA/A（Mn）的公式来计算溶液中Mn的含量。
抗比色法的优势在于相比于常规实验，其成本低廉，而且完成测定需要的时间较短。
此外，分析结果准确精密，容易操作，而且不会污染样品，使用寿命长，维护和保养也方便。
但是，抗比色法也有缺陷，比较突出的限制是，在低浓度范围内难以得到准确的结果，而且需要采用精确的标样以外，还要求在溶液环境下，波长不能变化，因此，抗比色法被
认为是不太灵敏的方法。
钼锑钪比色法
微量磷的测定一般采用磷钼蓝或钼锑钪光度法。
磷钼蓝是将磷酸与钼酸铵在酸性条件下生成黄色磷钼杂多酸，然后用还原剂将黄色的磷钼杂多酸还原成磷钼杂多蓝，进行测定。
常用的还原剂有氯化亚锡、硫酸联氨、抗坏血酸等。
用硫酸联氨和抗坏血酸作还原剂时，反应速度慢，且需沸水浴加热，操作较麻烦；用氯化亚锡作还原剂，灵敏度高，显色快，但蓝色的稳定性稍差，对酸度和钼酸铵浓度的控制要求严格；若用抗坏血酸加酒石酸锑钾作还原剂，也可以使磷钼杂多酸转化成稳定的蓝色溶液，此法称为钼锑钪法。
钼锑钪法操作实例：森林土壤有效磷的测定1 0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4浸提法本方法适用于质地较轻的酸性森林土壤中有效磷测定.1.1 方法要点以0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4溶液浸提酸性森林土壤样品，使这类土壤中比较具有活性的磷酸铁、铝盐陆续被溶解释放。
1.2 试剂①双酸浸提剂（0.05mol/L HCl-0.025mol/L 1/2H2So4）：吸取4.0ml浓盐酸（分析纯）及0.7ml浓硫酸（分析纯）于有水的1L容量瓶中，用水稀释至标度。
②1%高锰酸钾溶液：1g高锰酸钾（KMnO4，分析纯）加100ml水。
③0.5％草酸溶液：0.5g草酸（H2C2O4，分析纯）加水100ml。
④2,4－二硝基酚（或2,6－二硝基酚）指示剂：溶解0.20g2,4－二硝基酚于100ml 95％乙醇中。
⑤2mol/L氢氧化钠溶液：80.0g氢氧化钠溶于水，用水定容到1L。
⑥0.5mol/L硫酸溶液：吸取28.0ml浓硫酸，缓缓注入于水中，用水定容至1L。
⑦钼锑贮存液：153ml浓硫酸，缓慢地到入约400ml水中，搅拌，冷却。
另取10g钼酸铵，溶解于约60℃的300ml水中，冷却。
然后将硫酸溶液缓缓到入钼酸铵溶液中，再加入100ml10.5％酒石酸锑钾溶液，最后用水稀释至1L，避光保存。
此贮存液含1％钼酸铵、2.75mol/L硫酸。
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植物磷含量的测定（钼锑抗比色法）
一、实验目的
1．掌握钼锑抗比色法测定磷的方法。
2．练习实际测量以及定容的操作。
3．练习分光光度计的使用。
二、实验原理
植物样品经消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。
在一定酸度下,待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸,后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络合物,可用吸光光度法测定。
三、实验试剂
（1）2mol/L NaOH溶液
（2）0.2%二硝基酚指示剂
（3）0.5mol/L H2SO4硫酸溶液:28mL浓H2SO4加水稀释至1L。
（4）钼锑贮存溶液：量取153ml浓硫酸(分析纯，密度1.84g/ml)，缓缓加入到400ml蒸馏水中，不断搅拌，冷却。
另称取经磨细的钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·H2O，分析纯]10g溶于温度约60℃300ml水中，冷却。
然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。
再加入0.5％酒石酸锑钾[KSbOC4H4O6·1/2H2O，分析纯]溶液100ml，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色试剂瓶中，此贮备液含钼酸铵1％，硫酸2.75mol/L。
（5）钼锑抗显色剂：称取1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随配随用。
（6）5mg/L磷标准溶液：0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。
分析纯)，100ml水，加5ml浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为100mg/L磷(P)，此溶液可以长期保存。
吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L磷(P)标准溶液，此溶液不宜久存。
四、实验步骤
1、吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.00～5.00ml(V2,含P5～30ug)于50ml 容量瓶中, 用水稀释至约20ml,加1～2滴二硝基酚指示剂,滴加2mol/L NaOH溶液中和至刚呈黄色,再加入1滴0.5mol/L H2SO4溶液,使溶液的黄色刚刚褪去呈
淡黄色,然后加入钼锑抗显色剂5.00ml,摇匀,用水定容(V3)。
在室温高于15℃的条件下放置30min 后,用1cm 光径比色槽在波长700nm 处测定吸光度,以空白溶液为参比调节仪器零点。
2、校准曲线或直线回归方程: 准确吸取ρ(P)= 5mg/L 标准工作溶液
0, 1, 2, 4, 6, 8 ml,分别放入50mL 容量瓶中,加水至20ml,同上步骤显色并定容, 即得0,0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 mg/L P 标准系列溶液, 与待测液同时测定,读取吸光度,然后绘制校准曲线或直线回归方程。
五、结果计算
W p =6
10m (V1/V2)V3c ⨯⨯⨯×1000 式中: W p ——植物磷的质量分数,g/kg;
c ——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度, mg/L; V1——消煮液定容体积, ml;
V2——吸取测定的消煮液体积, ml;
V3——显色液体积, ml;
m ——称样量,g;
六、注意事项
1、室温低于15℃时，可在30～40℃水浴中，显色30min 。
2、植物磷含量0.5g/kg 为低量，1.0~2.0g/kg 为中量，大于2.0g/kg 为高量。