免疫学实验-凝集试验
免疫学课件——第八章 凝聚性试验
凝聚性试验
一.凝集试验
细菌,红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合 后,在有电解质存在时,抗原颗粒互相凝聚成肉 眼可见的凝集小块,称为凝集反应. 参与反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集 素. 1.直接凝集试验 颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集 现象的试验称作直接凝集试验.
免疫学原理与技术
波片法:定性试验 试管法:定量试验,可以检测血清中是否含有相 应的抗体及抗体的含量,以其两个加号以上 的血清最大稀释度为该血清的凝集价. 生长凝集试验:正在生长繁殖的菌体,由于抗体 的存在,可以凝集生长成团,借助显微镜可 以观测到.
免疫学原理与技术
二.沉淀试验
可溶性抗原(如细菌的内毒素,外毒素,菌体 裂解液病毒的可溶性抗原,血清,组织浸出液等) 与相应的抗体结合,在适量电解质存在下,形成 肉眼可见的白色沉淀,称为沉淀试验.
参加沉淀试验的抗原称为沉淀原,,抗体称为沉淀素,因为沉 淀试验抗原分子小,单位体积含量多,容易过量,所以经常稀释抗原, 并以抗原稀释度作为沉淀试验的效价.
免疫学原理与技术
乳胶凝集试验 致敏乳胶免疫浊度法试验,诊断卡,玻片法 试验. ▲正向间接血凝试验: 用抗原致敏红细胞,以检测血清中抗体. 出现++以上凝集的血清最大稀释倍数既该 血清的血凝价. ▲反向间接血凝试验: 用抗原致敏红细胞以检测抗原称为反向间 接血凝试验.
免疫学原理与技术
▲正向间接血凝抑制试验: 用抗原致敏的红细胞和已知的抗体来检测 未知抗原. ▲反向间接血凝抑制试验: 用抗原致敏的红细胞和已知的抗体来检测 未知抗体.
免疫学原理与技术
单向单扩散
单向双扩散
免疫学原理与技术
双向单扩散
双向双扩散
免疫学原理与技术
临床免疫学：凝集试验
凝胶内沉淀 反应
凝胶免疫电 泳技术
絮状沉淀试验 免疫浊度测定
单向免疫扩散试验 双向免疫扩散试验
对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫电泳 免疫固定电泳
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一、单向免疫扩散试验
原理：将一定量的抗体混入琼脂糖凝胶中， 让待测抗原在凝胶中自由扩散,在两者比例合 适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原 的浓度成正相关。
3
1896年Widal反应诊断伤寒病。 1900年Landsteriner在血凝现象的基础上发现人类
ABO血型系统,并于1930年获得诺贝尔奖。
反应阶段：
• 抗原抗体的特异性结合 • 出现肉眼可见的凝集现象
4
临床应用：定性或半定量检测
根据凝集现象的出现与否定性判断抗原抗体 是否对应。
将血清标本倍比稀释后再进行反应，以出现 凝集反应的最高稀释度作为抗体的滴度（效 价）。
【熟悉】 1、对流免疫电泳、免疫电泳的原理。 2、免疫固定电泳的临床应用和双向免疫扩散的实 际应用。
【了解】单向免疫扩散、对流电泳和免疫电泳的应用。
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沉淀反应的概念 沉淀反应（precipitation）是指可溶 性抗原与相应抗体在适当条件下发生
特异性结合产生可见沉淀物的现象。
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沉淀反应
液相沉淀反 应
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技术要点
先将患者血清或血浆在醋纤膜或琼脂 上作区带电泳，根据血清蛋白质的电荷 、分子量等不同将其分开。 为了精确识别单克隆区带，样品同时 在六条泳道上进行测试。 然后将IgG、IgA、IgM、κ轻链和λ 轻链的抗血清加于分离的蛋白质泳道； 参考泳道则加蛋白质固定剂，用于区带 对照，作用一定时间后洗去游离蛋白质 ，染色后观察结果，对样品中所含成分 及其性质进行分析、鉴定。
直接凝集试验实验报告
一、实验目的1. 理解直接凝集试验的原理和应用。
2. 掌握直接凝集试验的操作步骤。
3. 通过实验验证不同抗原与抗体之间的凝集反应。
二、实验原理直接凝集试验是一种免疫学检测方法，主要用于检测血清或血浆中的抗体含量。
其基本原理是：颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）与相应的抗体结合，在适量电解质（通常是0.85%NaCl）存在的条件下出现凝集现象。
直接凝集试验分为玻片凝集试验和试管凝集试验两种，本实验采用玻片凝集试验。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 抗原：细菌、红细胞等3. 抗体：相应的抗体4. 生理盐水5. 玻片6. 移液器7. 显微镜四、实验步骤1. 准备样品：取小鼠血液，分离血清，并按实验设计要求加入相应的抗体。
2. 滴加抗原：在玻片上滴加适量抗原，并用移液器将血清与抗原充分混合。
3. 观察凝集现象：静置一段时间后，用显微镜观察玻片上的凝集现象。
4. 记录结果：根据凝集程度记录实验结果。
五、实验结果1. A组实验：小鼠血清中加入A抗原，观察到的凝集现象为阳性。
2. B组实验：小鼠血清中加入B抗原，观察到的凝集现象为阴性。
3. C组实验：小鼠血清中加入C抗原，观察到的凝集现象为阳性。
六、实验讨论1. 直接凝集试验是一种简单、快速、灵敏的免疫学检测方法，广泛应用于病原微生物、红细胞血型鉴定等领域。
2. 本实验结果表明，小鼠血清中存在针对A抗原和C抗原的抗体，但不存在针对B抗原的抗体。
3. 在进行直接凝集试验时，应注意抗原与抗体的比例、电解质浓度等因素，以确保实验结果的准确性。
七、实验结论1. 直接凝集试验是一种有效的免疫学检测方法，可用于检测血清或血浆中的抗体含量。
2. 本实验成功验证了小鼠血清中存在针对A抗原和C抗原的抗体，但不存在针对B抗原的抗体。
八、实验拓展1. 研究不同抗原与抗体之间的凝集反应动力学。
2. 探讨直接凝集试验在病原微生物检测、血型鉴定等领域的应用前景。
3. 优化直接凝集试验的操作步骤，提高实验结果的准确性和灵敏度。
免疫凝集实验
生物检测作业免疫凝集试验免疫凝集试验颗粒性抗原与相应抗体特异性结合后，在适量电解质存在的条件下，可逐渐聚集，出现肉眼可见的凝集现象，成为凝集反应。
直接凝集试验病原菌（如细菌、螺旋体等）颗粒性抗原与相应抗体特异性混合后，在适量电解质存在的条件下，经过一定的反应时间后，出现肉眼可见的凝集现象，称为直接凝集反应。
试验中的抗原称为凝集原；抗体称为凝集素常用的实验方法有玻片法和试管法。
1、玻片法：——细菌薄片凝集试验将已知的抗体滴加于洁净的载玻片或凹玻片孔内，自加入待检病原体悬液混合均匀，同时做生理盐水或正常血清对照。
放置室温内数分钟后即可观察实验结果，出现颗粒状凝集者为阳性反应。
优点：其操作简便、迅速，适用于血型鉴定及微生物的菌种鉴定和分型等。
特别是诊断肠道传染病时用于鉴定病人标本中肠道杆菌的感染。
细菌薄片凝集试验：（1）实验目的：该试验用于菌种的鉴定及分型.（2）实验材料：待测菌培养物、已知菌培养物和已知诊断血清（3）实验过程:1.取洁净玻片一张，用蜡笔画为四格。
2.用接种环无菌去诊断血清各两环分别置于第1、3格中。
3.用接种环取生理盐水各两环分别放于第2、4格中。
4.用接种环取已知菌少许放入第2格生理盐水中混匀，随即转移1环于第1格中混匀。
5.同样用灭菌的接种环取待测菌少许放入第4格生理盐水中混匀，然后移一环菌液于第3格中混匀。
灼烧灭菌。
6.结果：已知菌在诊断血清中应出现颗粒状凝集，若待测菌在诊断血清中也出现颗粒状凝集，表明两种菌为同一种或属。
2、试管法：——肥达试验（试管凝集实验）将已知的抗原与系列等比稀释的待检血清在小试管内混合，39℃温育2~24h后观察结果。
生理盐水加抗原作为对照，应用非特异性自凝现象。
以出现明显的颗粒状或絮片状凝集现象的待检血清最高稀释度作为抗体的效价。
试管凝集实验为半定量试验，常用于某病原微生物感染的免疫学诊断，亦可用已知抗体鉴定未知的抗原。
（1）材料：病人血清、肥达实验诊断抗原、生理盐水、试管、吸管、试管架等。
医学免疫学 免疫凝集实验
4
血细胞状沉 淀，边 缘凝集 呈颗粒 状
67
无凝集， 无凝集， 血细胞 血细胞 沉于管 沉于管 底呈圆 底呈圆 盘状 盘状
实验结果
试管号 1
2
3
4
5
67
现象
凝集强度 ？ ++++ ++++ +++ ++ — —
结果分析
以血清最高稀释度仍能出现“++”凝集 现象者，作为该免疫血清的效价（滴度） 本次实验中，第5管（1：640）呈“++” 凝集，第6管（1：1280）呈“+”凝集， 对照管为“-”，则该血清效价为1： 640
中央呈较小圆盘状沉淀 稍浑浊 ，边缘凝集呈颗粒状
血细胞呈较大的圆盘状 较浑浊 沉淀，边缘有少量凝集 颗粒
无凝集，血细胞沉于管 浑浊 底呈圆盘状
对1号试管是否凝集的判断——改良
试管号 1
2
3
4
5
6
7
现象
凝集强 度 管底血 细胞
上层液 体
++++
血细胞 呈厚膜 状铺于 管底， 边缘略 不平滑
澄清
++++
浑浊
对1号试管是否凝集的判断——改良
• 用新标准算得的血清效价与之前相 同，仍为1：640
影响因素讨论——前后带现象
前后带现象
凝集反应，是 抗原抗体结合 反应中的一种 。在抗原抗体 特异性反应时 ，生成结合物 的量与反应物 的浓度有关， 只有在抗原抗 体分子比例合 适时才出生现 最强的反应
.
影响因素讨论——前后带现象
免疫学实验 凝集反应-ABO血型测定
思考题
• 凝集试验有哪些？可用于检测的原理是什 么？
精棉球等
实验方法与步骤
1、标记玻片：取玻片一张，一分为二， 分别标记为抗A，抗B。
2、采血：用酒精棉球消毒被检者左手无 名指或中指内侧，用采血针刺破皮肤， 用干棉球擦去第一滴血，稍加挤压，使 其流出第二滴血，装入盐水试管，摇匀， 即成血细胞悬液。
3、加抗血清：滴加抗A，抗B血清于玻片 标记处
4、加RBC：在抗A，抗B血清中滴加RBC 各一滴。
实验十一 ABO血型鉴定
目的与要求
• 掌握凝集反应的原理与类型 • 掌握玻片凝集法操作与结果判断 • 熟悉ABO血型鉴定的原理与操作
玻片凝集法-ABO血型鉴定
• 试验目的 通过标准血清抗体鉴定红细胞上ABO血型 系统抗原，掌握盐水介质法进行ABO血型 系统正定型的基本操作方法和结果判断。
实验原理
• 根据IgM类特异性血型抗体与红细胞上特 异性抗原结合能够出现凝集反应的原理， 用已知IgM类特异性标准抗血清与被检红 细胞在盐水介质中反应（室温），若出现 凝集想象，表明被检红细胞膜上有与血型 抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检 者的血型。
实验材料与方法
• 试剂：抗A血清，抗B血清 • 材料：玻片，采血针，消毒干棉球，酒
5、混匀：前后左右摇动，观察有无血细 胞凝集出现。
6、结果：记录பைடு நூலகம்检者红细胞凝集情况及 血型鉴定结果
ABO血型结果判断
抗B
抗A
血型
-
+
+
-
+
+
-
-
试管凝集试验
• 多用于半定量试验，原则上是用定量抗原 悬液与一系列倍比稀释的受检血清混合， 在保温静置后观察结果，以判定受检血清 中有无相应抗体及其效价。
免疫学实验
免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
免疫学实验-凝集试验
实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。
4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检血清有多份，对照只需做1份。
2. 被检血清稀释：第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
免疫学实验课件：实验二直接凝集试验
一、目的要求
理解凝集反应的基本原理； 掌握玻片凝集反应的操作技术与结果
判定； 掌握试管凝集反应的操作技术与结果
判定。
二、凝集反应的原理
通常，细菌和红细胞等颗粒性抗原在悬液中带弱负电荷, 在悬 液中相互排斥而呈均匀的分散状态。 凝集试验的发生分两阶段,当特异抗体与相应抗原颗粒相遇时， 发生特异性的结合形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的 静电排斥力。第二步在电解质的参与下进一步中和复合物外层 的电荷，从而聚集成较大的凝集块。
凝集反应的类型
两大类
玻片法：定性 直接凝集试验
试管法：定量
间接凝集试验
乳胶凝集试验 碳素凝集试验 间接血凝试验
三、实验材料
1. 玻板凝集试验
（1）玻片、移液枪、牙签等； （2）布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清和阴性血清 （3）待被检血清
2. 试管凝集试验
（1）试管（1 ㎝×8 ㎝ ）、试管架、恒温箱、各规格移液枪等； （2）布氏杆菌试管凝集抗原及布氏杆菌阳性血清、阴性血清； （3）待被检血清； （4）灭菌0.5%石碳酸生理盐水。
四、操作方法
1. 玻板凝集试验
（1）在洁净玻片上，各加15-20ul布氏杆菌阳性血清、阴性 血清、待检血清与生理盐水。
（2）加入布氏杆菌平板抗原15-20ul，滴在血清附近，不 与血清接触。用牙签将血清与抗原混匀，轻轻摇动玻板使 液滴呈旋状运动。
阴性血清（ຫໍສະໝຸດ ）结果判定：待检 阳性 血清 血清
• 出现颗粒状或块状凝集者为阳性反应；
• 未出现凝集者为阴性反应。
生理盐水
2. 试管凝集试验
（1）取试管八支，按下表加入生理盐水； （2）取布氏杆菌血清进行梯度稀释； （3）加入布氏杆菌检测抗原； （4）充分20.35混匀，置37℃ 温箱24小时。
凝集试验实训报告
一、实训目的通过本次凝集试验实训，使学生掌握凝集试验的基本原理、操作方法及注意事项，提高学生的实验操作技能，加深对免疫学理论知识的理解。
二、实训背景凝集试验是一种利用抗原与抗体特异性结合，形成可见的凝集现象，从而检测抗体或抗原的方法。
该方法广泛应用于病原微生物、自身抗体、肿瘤标志物等检测中。
本次实训旨在让学生了解凝集试验的基本原理和操作步骤，提高学生的实验技能。
三、实训内容1. 凝集试验原理凝集试验是利用抗原与抗体特异性结合，形成可见的凝集现象。
当抗原与抗体在适当条件下结合，形成抗原抗体复合物，这些复合物在电解质的作用下，可发生凝集现象。
凝集试验分为直接凝集试验和间接凝集试验两种。
2. 实验材料抗原、抗体、生理盐水、离心机、显微镜、试管、吸管、试管架等。
3. 实验步骤（1）准备抗原和抗体将抗原和抗体分别用生理盐水稀释至适当浓度。
（2）加样取两支试管，分别标记为A、B。
在A管中加入抗原，B管中加入抗体。
各加入等量生理盐水。
（3）混匀用吸管轻轻混匀两管，使抗原和抗体充分混合。
（4）观察凝集现象将两管放入离心机中，以1000r/min的速度离心5分钟。
取出后，用显微镜观察凝集现象。
（5）结果判定根据凝集程度判定结果。
凝集程度越高，说明抗体与抗原结合越充分，试验结果越为阳性。
四、实训结果通过本次实训，学生掌握了凝集试验的基本原理和操作步骤。
实验过程中，大部分学生能够按照要求进行操作，观察到了明显的凝集现象，实验结果符合预期。
五、实训总结1. 凝集试验是一种简单、快速、灵敏的检测方法，广泛应用于临床和科研领域。
2. 在进行凝集试验时，要注意抗原和抗体的质量，以及实验操作过程中的无菌操作。
3. 实验过程中，要熟练掌握操作步骤，观察凝集现象，以便准确判断结果。
4. 本次实训提高了学生的实验操作技能，加深了对免疫学理论知识的理解。
六、改进意见1. 增加实验次数，让学生有更多机会练习操作。
2. 在实验过程中，教师应加强对学生的指导，及时纠正操作错误。
玻片凝集试验的原理
玻片凝集试验的原理玻片凝集试验是一种常见的免疫学实验，用于检测抗体与抗原之间的相互作用。
它的原理是利用抗体与抗原的特异性结合能力，使得玻片上的抗原被抗体识别并凝聚形成可见的凝集物。
玻片凝集试验通常分为两个步骤：制备玻片和实施凝集反应。
首先，需要制备玻片，这包括涂覆玻璃表面、添加抗原和加入适当的缓冲液。
为了确保凝集反应的准确性，玻片上要均匀涂布一层抗原物质，这样能够确保抗体与抗原充分接触。
其次，为了保持试验的稳定性，缓冲液的添加起到了重要作用。
缓冲液不仅可以调节pH值，还可以稀释玻片上的样本，以便观察和解读凝结的结果。
接下来，实施凝聚反应。
准备好的玻片与稀释的抗原样本（通常来自待测血清）先行混合，接着加入抗体。
这样，在抗原与抗体之间引起的特异性结合作用的作用下，便可观察到玻片上的凝聚现象。
如果待测血清中存在与玻片上抗原相匹配的抗体，那么在抗原和抗体发生结合之后，会出现可见的凝结反应。
而如果待测血清中没有相匹配的抗体，那么玻片上的抗原与抗体之间的结合将无法发生，凝聚反应也不会发生。
玻片凝集试验的优势是操作简单、成本低廉，且能够快速得到结果。
这使得玻片凝集试验在临床诊断中被广泛应用，特别是在感染性疾病的早期筛查和诊断中。
此外，它还常常用于检测某些自身免疫性疾病和过敏性疾病等。
然而，需要注意的是，玻片凝集试验虽然简单易行，但结果的解读仍需谨慎。
因为凝集的程度可能受到多种因素的影响，如抗原和抗体的浓度、pH值、温度等。
因此，正确的凝结结果需要在严格控制条件下进行，并进行合理的比较和分析。
总之，玻片凝集试验是一种可靠、快速、经济的免疫学实验，适用于许多医学领域，特别是在感染性疾病的早期筛查和诊断中。
合理的操作和准确的结果解读将为医生提供重要的参考依据，帮助他们做出正确的诊断和治疗决策。
凝集活性测试实验报告
一、实验目的1. 掌握凝集活性测试的基本原理和方法。
2. 学习利用凝集反应检测抗原或抗体的存在。
3. 了解凝集活性测试在临床诊断和科研中的应用。
二、实验原理凝集活性测试是一种基于抗原与抗体特异性结合的免疫学检测方法。
当抗原与相应抗体发生结合时，可形成肉眼可见的凝集现象。
凝集反应可分为试管凝集试验和玻片凝集试验两种。
三、实验材料1. 抗原：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
2. 抗体：针对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等抗原的特异性抗体。
3. 被检血清或血浆样本。
4. 试管、载玻片、移液器、显微镜等实验器材。
四、实验方法1. 试管凝集试验（1）取两支试管，分别标记为A和B。
（2）向A试管中加入被检血清或血浆样本0.5ml，向B试管中加入生理盐水0.5ml 作为对照。
（3）向A、B试管中分别加入金黄色葡萄球菌抗原0.5ml。
（4）将A、B试管在室温下静置30分钟，观察并记录结果。
2. 玻片凝集试验（1）取两块载玻片，分别标记为A和B。
（2）在A载玻片上滴加被检血清或血浆样本1滴，在B载玻片上滴加生理盐水1滴作为对照。
（3）向A、B载玻片上分别滴加金黄色葡萄球菌抗体1滴。
（4）用玻棒轻轻搅拌，使抗原与抗体充分混合。
（5）在室温下静置30分钟，观察并记录结果。
五、实验结果1. 试管凝集试验A试管中出现明显的凝集现象，B试管中无明显变化。
2. 玻片凝集试验A载玻片上出现明显的凝集现象，B载玻片上无明显变化。
六、实验分析1. 通过试管凝集试验和玻片凝集试验，发现被检血清或血浆样本中存在金黄色葡萄球菌抗体。
2. 凝集活性测试在临床诊断和科研中具有重要作用，可快速、简便地检测抗原或抗体的存在。
七、实验总结本次实验成功完成了凝集活性测试，掌握了试管凝集试验和玻片凝集试验的基本原理和方法。
通过观察凝集现象，可初步判断被检样本中是否存在特定抗原或抗体。
在实际应用中，凝集活性测试具有广泛的应用前景，如细菌感染、病毒感染、自身免疫性疾病等疾病的诊断。
免疫学实验凝集试验
+＋＋＋：１0０％抗原凝集，上清液完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底,振荡时,沉淀物呈片状、块状或颗粒状。
＋＋＋:75％抗原凝集,上清液略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡时情况如上。（管底凝集物与１00％凝集时相同,只是上清液稍浑浊)。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向,在电解质（如生理盐水)参与下，由于离子的作用,中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]
１. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
３． 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]
１. 玻板,载玻片,试管(1cｍx8cm）,试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
(二)布氏杆菌病平板凝集试验
1． 加血清:取洁净玻板一块,用蜡笔划成方格（4cｍ2)，并注明被检血清号码，以１00L微量可调加样器按下列量加被检血清于方格内,第l格8０Ｌ、第2格40Ｌ、第3格20L、第4格1０L。血清用前需放室温,使其温度达2０℃左右。每一份检样需换一个ｔiｐ头。
免疫试管凝集试验实验报告
免疫试管凝集试验实验报告实验目的：本实验旨在通过免疫试管凝集试验来检测和识别特定病原体的抗体或抗原，以评估个体的免疫状态或病原体的感染情况。
实验原理：免疫试管凝集试验是一种基于抗原-抗体反应的实验室检测方法。
在该试验中，当特异性抗体与相应的抗原结合时，会形成肉眼可见的凝集块。
这种凝集现象可用于定性或定量分析样本中的抗体或抗原水平。
实验材料：1. 待测样本：血清或血浆。
2. 已知抗原或抗体的标准品。
3. 凝集试剂。
4. 试管、移液枪、离心机等实验室常规设备。
实验步骤：1. 准备试管，标记不同浓度的抗原或抗体标准品。
2. 按照预定比例稀释待测样本。
3. 向每个试管中加入等量的稀释样本。
4. 向每个试管中加入凝集试剂，轻轻摇匀。
5. 将试管置于室温下孵育一定时间，观察凝集现象。
6. 孵育结束后，轻轻摇动试管，观察凝集块的形成情况。
7. 记录每个试管的凝集情况，并与标准品进行比较。
实验结果：通过观察，我们发现在不同浓度的抗原或抗体标准品中，随着浓度的增加，凝集现象逐渐明显。
待测样本在特定浓度下出现了明显的凝集块，表明样本中存在特异性抗体或抗原。
实验讨论：本实验中观察到的凝集现象与预期一致，说明免疫试管凝集试验是一种有效的检测方法。
然而，需要注意的是，凝集试验的敏感性和特异性可能会受到样本质量、试剂纯度和操作条件等因素的影响。
因此，在实际应用中，应严格控制实验条件，以确保结果的准确性。
结论：免疫试管凝集试验是一种简便、快速的检测方法，适用于大规模筛查和初步诊断。
通过本实验，我们成功地检测了样本中的特异性抗体或抗原，为进一步的免疫学研究和临床诊断提供了重要信息。
参考文献：[1] 免疫学基础与实验技术. 北京：科学出版社，2015.[2] 临床免疫学检验技术. 上海：上海科学技术出版社，2018.注：本实验报告为虚构内容，仅供参考。
实际实验操作应遵循相关规范和指南。
免疫凝集法
免疫凝集法免疫凝集法是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗原与抗体之间的相互作用。
通过免疫凝集反应，可以便捷、快速地检测出某种抗原或抗体的存在，从而有助于诊断疾病、深入了解分子相互作用和开发新药等方面的研究。
免疫凝集法的原理是基于抗体与抗原间的特异性结合作用，从而形成可见的凝集物。
凝集物的形成使得液体呈现不透明的状况，这是由于较大的凝集物散射光线而引起的。
因此，通过观察凝集的形成，可以了解到是否存在目标抗原或抗体。
免疫凝集法有多种类型，包括直接凝集法、间接凝集法和逆凝集法等。
其中，最常用的是直接凝集法和间接凝集法。
直接凝集法是指在试验系统中直接加入特定抗原和抗体，并观察是否出现凝集反应。
该方法适用于已知特定抗原和抗体之间的关系，并且抗体能够和抗原结合产生凝集。
间接凝集法是指首先在试验系统中加入与抗原相对应的抗体，并且抗体能和抗原结合。
然后，加入可与抗体结合的辅助抗体，形成大的凝集复合物。
该方法适用于抗原与抗体之间的结合较弱，不易形成直接凝集复合物的情况。
逆凝集法是指首先在试验系统中加入可与抗体结合的聚合物，形成大的凝集复合物。
然后加入与抗原相对应的抗体，使得凝集复合物解离。
该方法适用于抗原与抗体结合较弱，不易形成直接凝集复合物的情况。
免疫凝集法的操作相对简单、快速，并且可以同时测试多个样本。
因此，这种方法广泛应用于临床诊断、流行病学调查和生物研究等领域。
在临床诊断中，免疫凝集法可以用于检测病毒、细菌和真菌感染等。
例如，通过检测病毒相关的抗体，可以确定病毒感染的类型和程度。
另外，免疫凝集法还可以用于肿瘤标志物的检测，从而帮助早期诊断和治疗肿瘤。
在流行病学调查中，免疫凝集法可以用于检测人群中是否存在某种病原体的感染。
例如，通过检测到人体中的特定抗体，可以了解到某种传染病的流行情况，并采取相应的控制措施。
在生物研究中，免疫凝集法被广泛应用于研究蛋白质相互作用、疾病机制等方面。
例如，通过这种方法可以了解到某种蛋白质是否与特定抗体结合，从而推断出其可能的功能和作用途径。
协同免疫凝集试验名词解释
协同免疫凝集试验名词解释
协同免疫凝集试验（Coagglutination Test）是一种常用的免
疫学实验方法，用于检测和定量分析特定抗原与抗体之间的相互作用。
下面是对协同免疫凝集试验的名词解释：
1. 协同（Co-），协同指的是两个或多个物质之间的相互作用，这里指的是抗原和抗体之间的相互作用。
在协同免疫凝集试验中，
抗原和抗体相互作用会导致免疫凝集的形成。
2. 免疫（Immune），免疫是机体对抗外来物质（如细菌、病毒等）的防御反应。
在协同免疫凝集试验中，利用机体产生的特异性
抗体与特定抗原发生免疫反应，从而形成免疫凝集。
3. 凝集（Agglutination），凝集是指颗粒物质在液体中聚集
成团的过程。
在协同免疫凝集试验中，当特定抗原和抗体结合时，
会导致颗粒物质（如红细胞、细菌等）的凝集现象。
4. 试验（Test），试验是指为了验证某种假设或观察某种现象
而进行的科学实验。
协同免疫凝集试验是一种用于检测抗原和抗体
相互作用的实验方法。
综上所述，协同免疫凝集试验是一种通过观察特定抗原和抗体
之间的免疫凝集现象来检测和定量分析它们的相互作用的实验方法。
该方法在医学诊断、生物学研究和药物开发等领域有广泛的应用。
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实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。
4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检血清有多份，对照只需做1份。
2. 被检血清稀释：第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
该被检血清的稀释度分别是1:12.5、1:25、1:50、1:100。
3. 对照管制作：第5管中加0.5% 石炭酸生理盐水0.5ml，第6管加1:25稀释的布氏杆菌病阳性血清0.5ml，第7管加1:25稀释的布氏杆菌病阴性血清0.5 ml。
4. 加抗原：将布氏杆菌病试管凝集抗原用0.5% 石炭酸生理盐水作1:20稀释，每支试管加0.5 ml。
表1-1 布氏杆菌病试管凝集试验术式表（单位：ml）5. 感作（反应）：7支试管加完抗原后，充分混匀，置于37℃温箱中4-10h，取出后置室温18-24h（或37℃温箱12-14h，取出后置室温2-4h；或37℃温箱中22-24 h取出），然后观察并记录结果。
6. 结果判定：判定结果时用“+”表示反应的强度。
根据各管中上清液的透明度、抗原被凝集的程度及凝集块的形状，来判定凝集反应的程度。
＋＋＋＋：100％抗原凝集，上清液完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，振荡时，沉淀物呈片状、块状或颗粒状。
＋＋＋：75％抗原凝集，上清液略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，振荡时情况如上。
（管底凝集物与100%凝集时相同，只是上清液稍浑浊）。
＋＋：50％抗原凝集，上清液浑浊半透明，管底有中等量的凝集物（管底有明显的凝集）。
＋：25％抗原凝集，上清液完全浑浊不透明，管底有少量凝集物或凝集的痕迹。
－：抗原完全未凝集，上清液完全浑浊不透明，但由于菌体的自然下沉，在管底中央出现规则的菌体自沉圆点，振荡后立即散开呈均匀混浊。
7. 判定标准：能使50% 抗原凝集的血清最高稀释度称为该血清的凝集价（或称滴度）。
牛、马和骆驼的血清凝集价大于或等于1:100，判为阳性，1:50的凝集价判为疑似反应（可疑）；猪、绵羊、山羊和狗的血清凝集价大于或等于1:50，判为阳性，1:25的凝集价判为疑似反应（可疑）。
[注意事项]1. 实验时必须设抗原、阳性血清及阴性血清对照，以避免假阳性、假阴性的结果。
2. 结果判为可疑时，隔2-3周后采血重做。
阳性畜群，重检时仍为可疑，可判为阳性。
对同群中既无临床症状又无凝集反应阳性者，马、猪重检仍为可疑，判阴性；牛、羊重检仍为可疑者，可判为阳性，或以补体结合反应核对。
（二）布氏杆菌病平板凝集试验1. 加血清：取洁净玻板一块，用蜡笔划成方格（4cm2），并注明被检血清号码，以100μL微量可调加样器按下列量加被检血清于方格内，第l格80μL、第2格40μL、第3格20μL、第4格10μL。
血清用前需放室温，使其温度达20℃左右。
每一份检样需换一个tip头。
大规模检疫时，允许只用两个血清量作试验，牛、马、骆驼用40μL 和20μL ；猪、山羊、绵羊、狗用80μL和40μL。
2. 加抗原：每格加布氏杆菌病平板凝集抗原30μL，滴在血清附近，而不与血清接触。
从血清量最少的一格起，用牙签将血清与抗原混匀，一份血清用一根牙签。
抗原用前摇匀，并置室温使其温度达20℃左右。
3. 作用：混和完毕后，将玻板置恒温箱中或采用别的办法适当加温，使温度达到30℃左右，3-5min内记录反应结果。
4. 对照：每次试验须用标准阳性血清和阴性血清以及生理盐水作对照。
5. 结果判定：按下列标准记录反应结果。
＋＋＋＋：出现大的凝集块，液体完全透明，即100% 凝集。
＋＋＋：有明显凝集块，液体几乎完全透明，即75% 凝集。
＋＋：有可见凝集块，液体不甚透明，即50% 凝集。
＋：液体混浊，有小的颗粒状物，即25% 凝集。
－：液体均匀混浊，无凝集现象。
6. 平板凝集试验与试管凝集试验的关系见表1-2。
表1-2 平板凝集试验与试管凝集试验的关系平板凝集80μL 40μL 20μL 10μL相当于试管凝集1:25 1:50 1:100 1:2007. 判定标准：同试管凝集试验。
8. 注意：对于阳性及可疑的被检血清需用试管凝集试验进行验证。
（三）虎红平板凝集试验这种试验是快速平板凝集试验。
抗原是布氏杆菌加虎红制成。
虎红平板凝集试验可与试管凝集试验及补体结合试验效果相比，具有操作简单、快速、特异性强的优点。
1. 被检血清和布氏杆菌病虎红平板凝集抗原各30μL滴于玻璃板的方格内，每份血清各用一支牙签或火柴棒混合均匀。
在室温（20℃）4-10min内记录反应结果。
同时以阳、阴性血清作对照。
2. 结果判定：在阳性血清及阴性血清试验结果正确的前提下，被检血清出现任何程度的凝集现象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性，无可疑反应。
3. 注意：抗原用前充分摇匀，抗原和被检血清用前应放室温30-60min后再进行试验。
（四）鸡白痢平板凝集试验1. 被检鸡血清和鸡白痢平板凝集抗原各1滴（约30μL）滴于玻板或载玻片上，用牙签或火柴棒充分混合。
2. 结果判定：在室温（20℃）下，观察30-60s，凝集者为阳性，不凝集者为阴性。
[思考题]1. 凝集反应的原理是什么?2. 哪些因素影响细菌凝集试验?3. 凝集试验中为什么要设阳性、阴性血清及抗原对照？实验二病毒的血凝及血凝抑制试验有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。
通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。
[目的要求]掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。
[材料与试剂]1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50μL定量移液器，滴头，微型振荡器。
2. 生理盐水，0.5% 鸡红细胞悬液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）血球凝集(HA)试验1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50μL生理盐水。
2. 于左侧第1孔加50μL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50μL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50μL；第12孔为红细胞对照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 鸡红细胞悬液50μL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
表 4-1 病毒血凝试验的操作方法（单位：μL）弃504. 结果判定：从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。
红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。
从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。
(二) 血球凝集抑制(HI)试验1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。
2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加50μL生理盐水。
3. 第１孔加被检鸡血清50μL，吹吸混合均匀，吸50μL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50μL，稀释度分别为：1:２、1:4、1:8 ……；第12孔加新城疫阳性血清50μL，作为血清对照。
4. 自第1孔至12孔各加50μL 4个血凝单位的新城疫病毒液，其中第11孔为4单位新城疫病毒液对照，振荡混合均匀，置室温中作用10min 。
5. 自第l孔至12孔各加0.5% 鸡红细胞悬液50μL，振荡混合均匀，室温下静置后观察结果（表4-2）。
表4-2 病毒血凝抑制试验的操作方法（单位：μL）6. 结果判定：待病毒对照孔（第11孔）出现红细胞100%凝集（++++），而血清对照孔（第12孔）为完全不凝集（-）时，即可进行结果观察。
以100％抑制凝集（完全不凝集）的被检血清最大稀释度为该血清的血凝抑制效价，即HI效价。
凡被已知新城疫阳性血清抑制血凝者，该病毒为新城疫病毒。
从表4-2看出，该血清的HI效价为1:64，用以2为底的负对数(-log2)表示，即6log2。
附录1. 阿氏液（Alsever）：即红细胞保养液枸橼酸钠（5H2O） 0.80g枸橼酸（H2O） 0.055g葡萄糖 2.05g氯化钠 0.42g双蒸水加至 100 ml将以上试剂加热溶解于双蒸水中，调整pH至6.8，115℃灭菌10min,4℃保存备用。