沙门菌常用生化试验
沙门菌检验技术和方法
沙门菌的增菌液
四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)：含有胆盐，抑 制革兰氏阳性球菌和部分大肠埃希氏菌的生 长，而伤寒与付伤寒沙门菌仍能生长。
亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）：可对伤寒及 其他沙门菌作选择性增菌，亚硒酸与蛋白胨 中的含硫氨基酸结合，形成亚硒酸和硫的复 合物，影响细菌硫代谢，从而抑制大肠埃希 氏菌、肠球菌和变形杆菌的增殖。
➢ 现修改为：在接种TSI琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培 养基的同时增加一项营养琼脂（NA），经TSI琼 脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的选择后，可筛掉 大部分非沙门氏菌株，大大减少了工作量，同时 也满足了API 20E或 Vitek GNI鉴定的需要。
➢ 为保持与原标准的一致性，新标准也保留 了可以同时直接接种蛋白胨水 (供做靛基质 试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、KCN 培养基的 内容。本部分还增加了对疑似菌落进行留 样确认的部分，以备必要时复查，这对生 化鉴定不确定的菌落进行进一步验证是非 常必要的。
沙门菌的菌落形态：产H2S的菌落为黑色 有金属光泽、棕褐色或灰色。菌落周围培 养基可呈黑色或棕色，有些不产H2S的菌 落，形成灰绿的菌落，周围培养基不变。
注：此培养基在制作过程中过分加热可使培 养基的选择性降低，与TTB或SC合用可获 得更高的检出率。
沙门菌的分离培养基
HE琼脂：在保证细菌所需营养的基础上，加 入了一些抑制剂，如：胆盐、柠檬酸盐、去 氧胆酸钠等，可抑制某些肠道致病菌和革兰 氏阳性菌的生长，但对革兰氏阴性的肠道致 病菌则无抑制作用。
样品液增加调整pH值。 选择性增菌：使用“TTB、SC”，取消“MM”。
分离培养基：使用BS、XLD、HE、科 玛嘉显色培养基。取消DHL、SS。
生化鉴定： 1.采纳API 20E或Vitek GNI为传统生化鉴定方法 的选择性替代方法。 2.生化鉴定项目进行调整：
沙门氏菌的检测
• 硫代硫酸钠和枸橼酸铁用于检测硫化氢的产生，使菌落中心呈黑色；
• 中性红为pH指示剂，可把分解乳糖和不分解乳糖的细菌鉴别开，前者为红色菌落，后者为无色菌落 • 发酵糖产酸的菌落呈红色，不发酵糖的菌落为无色； • 琼脂是培养基的凝固剂。
蛋白胨100g蒸馏水1000mlph7002牛肉膏50g氯化钠30g碳酸钙450g碳酸钙可以调节ph是培养基在养菌过程中维持一定ph否则ph过低影响菌株生长另外还有筛选产酸菌的作用除碳酸钙外将各成分加入蒸馏水中煮沸溶解再加入碳酸钙调节ph高压灭菌12120min
一、实验目的 • 1.掌握沙门氏菌属的检测方法
水中， • 琼脂加入600 mL 蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，煮沸溶解。冷至80 ℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入基
础液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入基础液中，再混匀。调节pH，随即倾入琼脂液中，混合均匀，冷 至50 ℃～55 ℃。加入煌绿溶液，充分混匀后立即倾注平皿。
第十三页，共40页。
XLD HE 科玛嘉显色培养基平板
第三十页，共40页。
（4）生化试验 • 选择性琼脂平板上符合沙门氏菌特征的菌落，只能称其疑为沙门氏菌，也可能是其他杂菌。 • 五项生化试验：
– 三糖铁(TSI)试验
– 赖氨酸脱羧酶试验
– 靛基质试验 – 尿素琼脂培养
– 氰化钾培养基
第三十一页，共40页。
• 1.三糖铁(TSI)试验
第十四页，共40页。
5.HE 琼脂 • 基础成分： • 蛋白胨 12.0g 牛肉膏 3.0g 乳糖 12.0g 蔗糖 12.0g • 水杨素 2 .0g 胆盐 20.0g 氯化钠 5.0g
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
摘要：
一、乙型副伤寒沙门菌的概述
二、乙型副伤寒沙门菌的生化鉴定方法
1.生化反应的特点
2.与其他菌种的鉴别
三、乙型副伤寒沙门菌的鉴定流程
1.预处理
2.鉴定试验
3.结果分析
四、乙型副伤寒沙门菌的鉴定意义
1.疾病的诊断
2.流行病学调查
3.食品安全监管
正文：
乙型副伤寒沙门菌（Salmonella para-typhi B）是一种常见的肠道病原菌，可以引起乙型副伤寒，对人类健康造成威胁。
因此，对乙型副伤寒沙门菌的生化鉴定具有重要的意义。
乙型副伤寒沙门菌的生化鉴定方法主要包括生化反应的特点和与其他菌种的鉴别。
在生化反应方面，乙型副伤寒沙门菌能够发酵葡萄糖、乳糖和麦芽糖，产酸不产气；在鉴别方面，乙型副伤寒沙门菌与其他沙门菌种的区别在于
它对乳糖的发酵能力和对亚碲酸盐的还原能力。
乙型副伤寒沙门菌的鉴定流程包括预处理、鉴定试验和结果分析。
预处理主要是采集样本，进行细菌分离培养；鉴定试验则是对菌落进行生化反应观察，进一步确定菌种；结果分析则是根据试验结果进行综合判断，给出鉴定结论。
乙型副伤寒沙门菌的鉴定意义主要体现在疾病的诊断、流行病学调查和食品安全监管方面。
通过鉴定，可以为临床诊断提供依据，帮助医生确定病情，制定治疗方案；在流行病学调查中，可以帮助研究者掌握疫情分布，分析传播途径，制定预防措施；在食品安全监管中，可以对食品中的病原菌进行检测，保障食品安全。
实训二十三 大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验
四、结果分析
1、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一套肠
编码
鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7+来自 该菌序号为32237
2、鸟氨酸、赖氨酸、氨基酸对照需要加石蜡
封口（氨基酸对照不能变色，如不变色，鸟 氨酸与氨对同色，为阴性；不同色，为阳 性）； 3、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一支 KIA； 4、放置温箱37度24h培养后观察结果。
实验十一、大肠杆菌、沙门菌属 生化反应试验
一、目的：
1、掌握肠道杆菌鉴定方法和原则； 2、掌握肠道杆菌生化反应（肠编码）名称、
试验原理。
二、内容：
1、观察记录上次试验结果－画图、描述菌落
特点、颜色； 2、挑取可疑单个菌落接种生化反应培养基； 3、记录生化培养基初始颜色。
三、操作：
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
沙门菌属（Salmonella）是一类革兰氏阴性杆菌，其中包括乙型副伤寒沙门菌（Salmonella typhi）。
生化鉴定是通过对菌株在特定条件下的生化反应进行观察和测定，来确定细菌属种的一种方法。
以下是乙型副伤寒沙门菌生化鉴定的一些常见步骤和反应：
1.肠杆菌科的鉴定：通过常规方法，首先将细菌鉴定为肠杆菌科
（Enterobacteriaceae）成员。
2.气体生成反应：乙型副伤寒沙门菌通常会在肠杆菌科的气体生
成反应中产生气体，例如在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养
基上，乙型副伤寒沙门菌产生气体的反应为气体产生、葡萄糖
发酵，而乳糖和蔗糖不发酵。
3.硫化物产生：乙型副伤寒沙门菌通常能够产生硫化物，这可以
在Kligler Iron Agar（KIA）培养基上观察到。
乙型副伤寒沙门菌
在KIA上的反应为气体产生、葡萄糖和乳糖发酵，并产生硫化
物，而蔗糖不发酵。
4.尿素分解：乙型副伤寒沙门菌通常不能分解尿素。
5.麦尔加亮蓝（Malachite Green）试验：这是一种用于检测沙
门菌的方法。
在该试验中，沙门菌产生麦尔加亮蓝的颜色反应。
请注意，生化鉴定方法可能因实验室和使用的培养基而有所不同。
此外，现代分子生物学技术，如基因测序，也成为鉴定细菌属种的重要工具。
因此，在进行细菌鉴定时，通常需要结合多种方法来确保准确性。
如果你有具体的实验室样品，建议向专业的微生物实验室寻求
帮助。
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定摘要：一、乙型副伤寒沙门菌的简介二、乙型副伤寒沙门菌的生化特性三、乙型副伤寒沙门菌的鉴定方法四、鉴定结果及应用正文：乙型副伤寒沙门菌（Salmonella para-typhi B）是一种常见的细菌，属于沙门氏菌属。
它可引起乙型副伤寒，是一种人畜共患的传染病。
下面将从乙型副伤寒沙门菌的生化特性、鉴定方法和鉴定结果及应用等方面进行详细阐述。
一、乙型副伤寒沙门菌的简介乙型副伤寒沙门菌，简称乙副沙门菌，是一种革兰氏阴性菌。
其菌落呈红色、湿润、光滑，无臭味。
乙型副伤寒沙门菌可以通过食物、水、接触等途径传播，人群普遍易感。
二、乙型副伤寒沙门菌的生化特性乙型副伤寒沙门菌在生化试验中，有以下特点：1.发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖，产酸，不产气。
2.发酵蔗糖、阿拉伯糖、木糖，产酸，不产气。
3.产氨，靛基质试验阳性。
4.甲基红试验阳性。
5.V-P 试验阴性。
6.柠檬酸盐利用试验阳性。
7.硝酸盐还原试验阴性。
三、乙型副伤寒沙门菌的鉴定方法乙型副伤寒沙门菌的鉴定方法主要包括生化试验和血清学试验。
其中，生化试验是最常用的方法。
如上所述，乙型副伤寒沙门菌在生化试验中具有独特的特点，通过观察这些特点，可以初步鉴定乙型副伤寒沙门菌。
血清学试验则可以进一步确认鉴定结果。
四、鉴定结果及应用乙型副伤寒沙门菌的鉴定结果对于临床诊断和防治具有重要意义。
通过鉴定，可以及时发现患者感染乙型副伤寒沙门菌，从而采取相应的治疗措施。
此外，对乙型副伤寒沙门菌的鉴定也有助于食品安全监测和动物疫病的诊断。
沙门氏菌鉴定流程
沙门氏菌的检测方式主要包括血常规检查、便常规检查、ELISA法检查等，能够判断疾病的严重程度。
1、血常规检查：感染沙门氏菌时，多数患者的白细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞计数出现偏低的情况，大儿童的白细胞计数通常出现升高的现象，该项结果可以辅助诊断沙门菌病。
2、便常规检查：感染沙门氏菌以后，部分患者可能会出现黏液样变或血便的情况，通过明确患者急性胃肠炎的症状来辅助诊断沙门菌病。
3、ELISA法检查：检测患者血清中沙门菌抗原、抗体是否出现异常的情况，有助于沙门菌感染的诊断。
除此之外，沙门氏菌的检测方式还包括B超检查、肥达试验等，如果自身的病情比较严重，建议应及时到正规医院的感染病科进行检查并治疗，以免延误病情。
沙门氏菌检测标准方法及实验关键点
沙门氏菌检测标准、方法及实验关键点．检验沙门氏菌的原因和意义：据统计我国细菌性食物中毒中70%～80%是由沙门氏菌引起的，人一旦摄入含有大量沙门氏菌(105～(106个/g)的动物性产品，就会引起细菌性感染，进而在毒素作用下发生食物中毒导致胃肠炎、伤寒和副伤寒且沙门氏菌的传播媒介众多，肉、蛋以及食品从加工到出售的过程中都十分容易发生污染。
因此对沙门氏菌的检验事关重大。
二、检测及鉴定：沙门氏菌的检测要在二级生物安全实验室及二级生物安全柜(在负压情况下防止致病微生物气溶胶飘离实验室对实验人员及环境造成污染)中进行。
沙门氏菌典型菌落形态：生化鉴定显示：API20E 生化鉴定是根据快速酶促反应及代谢产物的检测技术发展的一种细菌编码鉴定法，广泛应用于临床、食品中革兰氏阴性杆菌的快速鉴定。
限值要求：参考CAC、ICMSF、欧盟、澳大利亚和新西兰、美国、加拿大、香港、台湾等国际组织、国家和地区的即食食品中沙门氏菌限量标准及规定，《GB29921-2013食品中致病菌限量》按照二级采样方案对所有11类食品设置沙门氏菌限量规定，具体为n=5，c=0，m=0（即在被检的5份样品中，不允许任一样品检出沙门氏菌）。
三、沙门氏菌传统检测方法的关键控制点1、样品处理尽可能缩短解冻时间，使竟争菌群生长最少，并减小对沙门氏菌的损伤致病菌取样一定要均匀并具有代表性（蛋黄蛋清混匀取样）。
2、培养基及培养方面（1）没有一种培养基可疑准确无误的筛选出沙门氏菌，必须选择多种选择性培养基同时筛选，只能说显色培养基综合选择性更强。
（2）试剂和培养基的配置一定要严格按照说明书配置，是否需要高压灭菌，添加剂用量及培养基保存条件。
（3）有1%沙门氏菌乳糖发酵阳性，为了避免漏检乳糖阳性菌必须选择不依赖乳糖的培养基，目前BS培养基认为是最适合的。
（4）BS培养基是分离沙门氏菌的高效培养基，特别适用于伤寒类的沙门氏菌，不是所有的选择性培养基都能有效分离出伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，BS是分离伤寒类沙门氏菌的首选培养基。
沙门氏菌的检测
• 使溶解，再加无菌蒸馏水至100mL 即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍）。摇匀，调节pH。
SC增菌液各成分的作用
蛋白胨提供碳源满足细菌生长的需求， 乳糖是可发酵的糖类； 亚硒酸氢钠抑制革兰氏阳性菌和非沙门氏菌的大多数革兰氏阴性菌的生长， 磷酸盐是缓冲剂， L-胱氨酸为还原剂。
• 2 赖氨酸脱羧酶试验： 接种三糖铁琼脂的接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，
• 于36±1℃培养18～24h，必要时可延长至48h。
三糖铁（TSI）琼脂试验 • 培养基：乳糖：蔗糖：葡萄糖=10：10：1；加有酚红 • 本试验可同时观察糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。 • 原理：只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而
溶液1mL～2mL。
•
制法
• 将前面七种成分溶解于400mL 蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600 mL 蒸馏水内。然后分别搅拌 均匀，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基础液内，调节pH。再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷至 50 ℃～55 ℃倾注平皿。
• 注:①本培养基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避免降低其选择性。
BS ＋
XLD HE 科玛嘉显色培养基平板
（4）生化试验
• 选择性琼脂平板上符合沙门氏菌特征的菌落，只能称其疑为沙门氏菌，也可能是其他杂菌。 • 五项生化试验：
– 三糖铁(TSI)试验 – 赖氨酸脱羧酶试验 – 靛基质试验 – 尿素琼脂培养 – 氰化钾培养基
• 1.三糖铁(TSI)试验 自选择性琼脂平板上分别挑取两个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再底层穿刺， 用一空白培养基作对照试验。
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
乙型副伤寒沙门菌生化鉴定
【实用版】
目录
1.乙型副伤寒沙门菌的概述
2.乙型副伤寒沙门菌的生化鉴定方法
3.乙型副伤寒沙门菌的防治措施
正文
乙型副伤寒沙门菌是一种常见的病原菌，可以引发伤寒病，为患者带来极大的痛苦。
对于乙型副伤寒沙门菌的生化鉴定，是确诊该病的关键步骤，也是防治该病的重要手段。
乙型副伤寒沙门菌的生化鉴定方法主要包括以下几种：
1.菌株分离：采集患者的粪便或尿液等样本，通过培养基分离出乙型副伤寒沙门菌菌株。
2.菌株鉴定：通过生化试验，如氧化酶试验、醇发酵试验等，对分离出的菌株进行鉴定，确定其是否为乙型副伤寒沙门菌。
3.血清学试验：通过血清学试验，如凝集反应、ELISA 等，检测患者血清中乙型副伤寒沙门菌的特异性抗体，以辅助确诊。
4.分子生物学方法：通过 PCR、DNA 测序等分子生物学方法，对乙型副伤寒沙门菌的 DNA 进行检测，以快速、准确地鉴定该菌。
乙型副伤寒沙门菌的防治措施主要包括：
1.预防：加强食品卫生管理，避免食品污染；加强个人卫生习惯，如勤洗手、避免与患者接触等。
2.治疗：对于已感染乙型副伤寒沙门菌的患者，应及时进行抗感染治疗，如使用氯霉素、氨苄西林等抗生素；同时，对症治疗，如补充水分、
电解质，改善全身营养状况等。
3.监测：对乙型副伤寒沙门菌的感染情况进行监测，及时发现、隔离、治疗患者，防止疫情扩散。
总之，乙型副伤寒沙门菌的生化鉴定是确诊该病的关键步骤，对于防治该病具有重要意义。
沙门菌声贺菌两步生化筛选检验法
下 列 生 化 培 养 基 （ 表 １ 。 生 化 结 果 为 １２ ４的 菌 株 接 种 赖 见 ） 、、 氨 酸 培 养 基 、 化 钾 培 养 基 及 对 照 各 １ 。 生 化 结 果 为 ３的 菌 氰 支 株 接 种 赖 氨 酸 培 养 基 、 化 钾 培 养 基 及 对 照 和 山 梨 醇 培 养 基 氰 各 １支 。 生 化 结 果 为 ５ 的 菌 株 只 接 种 Ｏ Ｐ 培 养 基 和 山 梨 醇 ＮＧ 培 养 基 各 １支 。 生 化 结 果 为 ６的 菌 株 接 种 赖 氨 酸 、 丙 氨 酸 、 苯 水 杨 素 及 葡 萄 糖 铵 培 养 基 各 一 支 。 均 ３ ℃ １ ２ ｈ培 养 ， 要 ７ ８ ４ 必 时 到 ４ ｈ培 养 ， 察 生 化 结 果 。 分 别 具 备 表 ２的 生 化 结 果 的 菌 ８ 观
Ｏ Ｐ 山 梨 醇 ， 杨 素 ， 丙 氨 酸 脱 氨 酶 培 养 基 ， 萄 糖 铵 培 养 Ｎ Ｇ， 水 苯 葡 基 ， ． —０ ８ 半 固 体 琼 脂 ， 门 菌 属 诊 断 血 清 ， 贺 菌 属 诊 断 ０ ７ ．％ 沙 志
血清。
表 ２ 第 二 步筛选 用 生化 结 果 表
２ 操作 步骤
李 祥 艳 冯 玉 军 王金 瑞 ２ ， ，
（ １山 东 省 费 县 卫 生 防 疫 站 ， 东 ２ ３０ ； 山 东 省 费 县 上 治 中 心 卫 生 院 ） 山 ７４ ０ ２
［ 中图分类 号 ］ Ｒ ７ ． ２ ３８２ 【 献标 识码 ］ Ｂ 文
从业 人 员粪 便 中沙 门菌 、 贺 菌 检 验 鉴 定 是 一项 任 务 重 、 志 难 度大 的工 作 ， 实验 室 检 验鉴 定 方 法 不 一 ， 使 一 些 如 枸橼 各 致 杆 菌 和 不 活 动 不 产 气 的 大 肠 杆 菌 混 入 其 中 ， 沙 门 菌 、 贺 菌 给 志 的正 确鉴定 带 来 困难 。作 者 在 工 作 中 参 考 有 关 资料 ． 过计 通 算机 运用 概 率运 算 手 段 确定 了 沙 门 菌 、 贺 菌 的 快 速 准 确鉴 志
沙门氏菌检验详细流程
新的血清型名称的批准必须有巴斯德研究所、德国汉 堡卫生研究所及美国CDC 3个实验室的一致同意。
精品课件
沙门氏菌检验程序
精品课件
前增菌
目的：修复损伤的细菌细胞； 方法：25 g（mL）样品＋225 mL BPW的无菌均
57个O抗原 116个H抗原 Vi抗原
被分成2500多个血清型 。
Vi抗原 O抗原 H抗原
精品课件
沙门氏菌命名与书写方式
目前的命名方法规定：
肠道沙门菌肠道亚种（亚种Ⅰ）给予专用名，并采用 标本分离地址的地名。菌名的第一个字母需大写，且 亚种Ⅰ的所用菌名不能用斜体。例如：肠道沙门菌鼠 伤寒血清型应书写为Salmonella enterica subsp.enterica serotype Typhimurium，但在实际工 作中，可简写为S. Typhimurium。
精品课件
血清学鉴定时的注意要点：
做血清凝集时，同时应用生理盐水做对照。 O血清不凝集时，可将菌株转接于琼脂量较高(如
2.5%-3%)的斜面上，再做凝集。 如果由于Vi抗原的存在而阻止了O抗原的凝集反应
时，应挑取菌苔于1mL生理盐水中做成菌悬液。煮 沸后再检查。(常见于伤寒沙门菌)。 有极少数的二相沙门菌会同时出现2相H抗原，也 有一些沙门氏菌在培养过程中H抗原会出现第1项 和第2项之间的转变，所以血清诱导实验要用新鲜 的培养物进行诱导。
GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
精品课件
沙门菌概况
沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行 时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏 对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门 菌属。
伤寒沙门菌实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握伤寒沙门菌的分离与鉴定方法。
2. 培养实验室微生物检测技能，提高对传染病病原菌的识别能力。
3. 掌握微生物学实验的基本操作，提高实验技能。
二、实验原理伤寒沙门菌（Salmonella typhi）是一种革兰氏阴性菌，是引起伤寒的主要病原菌。
伤寒沙门菌具有特定的菌落特征和生化反应，通过这些特征可以对其进行鉴定。
本实验采用分离培养和生化鉴定相结合的方法，对疑似伤寒沙门菌样本进行检测。
三、实验材料1. 样本：疑似伤寒沙门菌感染患者粪便、血液等。
2. 培养基：SS琼脂、MAC琼脂、营养肉汤、胆盐乳糖发酵管、糖发酵管等。
3. 试剂：革兰氏染色液、吖啶橙染色液、酚红指示剂、氯化钠、葡萄糖、乳糖等。
4. 仪器：恒温培养箱、显微镜、无菌操作台、离心机、酒精灯等。
四、实验方法1. 样本处理：将疑似伤寒沙门菌样本进行稀释，取适量加入SS琼脂平板中，进行分离培养。
2. 观察菌落特征：将培养皿在37℃恒温培养箱中培养24小时，观察菌落生长情况，记录菌落形态、颜色、大小等特征。
3. 革兰氏染色：取少量分离得到的菌落进行革兰氏染色，观察细菌的革兰氏染色特征。
4. 生化鉴定：对分离得到的菌株进行生化反应，包括胆盐乳糖发酵试验、糖发酵试验等。
5. 结果分析：根据菌落特征、革兰氏染色和生化反应结果，对疑似伤寒沙门菌进行鉴定。
五、实验结果1. 菌落特征：分离得到的菌株在SS琼脂平板上生长良好，菌落呈圆形、光滑、湿润、无色，边缘整齐。
2. 革兰氏染色：革兰氏染色结果显示，分离得到的菌株为革兰氏阴性菌。
3. 生化鉴定：胆盐乳糖发酵试验结果为阳性，糖发酵试验结果显示，菌株能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等。
六、实验结论根据实验结果，分离得到的菌株符合伤寒沙门菌的菌落特征、革兰氏染色和生化反应，初步判断为伤寒沙门菌。
七、实验讨论1. 伤寒沙门菌是一种常见的传染病病原菌，其传播途径主要为粪-口途径。
本实验通过对疑似伤寒沙门菌样本的分离与鉴定，为临床诊断提供了有力依据。
沙门菌常用生化试验
测试时使用接种针先穿刺至底部，而后于斜面作划线 接种，经培养18-24小时后，依情况判断糖类发酵情形。
观察结果：有三种类型
丙二酸盐试验 阳性（兰） 阴性（不变）
沙门菌常用生化试验
ONPG试验 阳性（黄） 空白
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789.4-2003
微生物学检验 沙门氏菌检验
冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品
前增菌法 25g＋BPW225mL
36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h
非如左述的各种反应结果 非沙门氏菌
（一）前增菌 •前增菌：使食品加工过程中受伤的沙门菌细胞恢 复活力 •未经加工过的食品，检验前不需要前增菌
前增菌：25克（加工食品）+225毫升缓冲蛋白胨 水 37度培养4小时（干蛋品18—24小时）。
选择性增菌
含选择性抑制剂 1：1稀释液而不是1：10，提高检出率
无色半透明，产硫化氢 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与沙门氏菌Ⅰ、 菌株有的菌落中心带黑色， Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉 但不如以上培养基明显. 红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大
肠艾希氏菌不能区分.
肠道菌选择性培养基分离培养
SS平板
分离肠道致病菌的强选择培养基 SS平板组成
slant color/butt color/ gas production/hydrogen sulfide production
a. uninoculated b. little change/alkaline/-/c. alkaline/acid/-/+ d. acid/acid/+/+ e. acid/acid/+/-
2024版沙门氏菌检验实验解析PPT
增加“无菌量筒：容量50mL、无菌均质杯、无菌均质袋、无菌广口瓶：容量500mL、无菌试管15mm×150mm、18mm×180mm、无菌接种环：10μL（直径约3mm）、1μL以及接种针”
对检验用器具规格明确，方便实验室选用
增加“生物安全柜”
对于实验室开展活菌操作、样本检测实验室生物安全等级需“BSL-2”，因此，增加此设备是生物安全必须。
明确接种菌液浓度为“0.5麦氏浊度”，接种量“2滴~3滴”，避免接种量过大导致假阳性；还有增加"接种混匀后滴加一层无菌液体石蜡进行密封"由于氰化钾不稳定容易分解失效，因此，加石蜡密封避免造成假阳性反应。
“符合表3中A1者，为沙门氏菌典型的生化反应”后面补充“进行血清学鉴定后报告结果”
明确的指出符合沙门氏菌典型的生化反应需要进行血清学鉴定后报告结果
调整可疑菌落初筛流程
流程图更清晰易懂
TTB选择性增菌改为：低背景菌36 ℃±1 ℃，高背景菌42 ℃±1 ℃原因：验证试验发现，对于生鲜样品，TTB 42℃比 TTB 36℃的选择性好，所以继续沿用；对于深加工样品，TTB 36℃比 TTB 42℃生长好，所以低背景菌采用36℃±1℃培养。如有需要，可将预增菌的培养物在2 ℃~8 ℃冰箱保存不超过72h，再进行选择性增菌。
2016版“必要时按表5进行沙门氏菌生化群的鉴定”修改为2024版中“必要时,按表5进行沙门氏菌种和亚种的生化鉴定”
“生化群”用“种和亚种”替代，更易懂;
在表5沙门氏菌种和亚种的生化鉴定中增加“肠炎沙门氏菌、邦戈尔沙门菌种名”以及肠炎沙门氏菌种内对应的6个亚种和生化群分型”;生化反应项增加“明胶酶、L(+)-酒石酸盐、半乳糖醛等8项”
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主要沙门菌的生化反应和抗原构造
主要沙门菌的生化反应和抗原构造下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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沙门菌的凝集实验报告
一、实验目的1. 了解沙门菌的基本特性。
2. 掌握沙门菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 熟悉沙门菌的血清凝集试验原理及操作步骤。
二、实验原理沙门菌属于革兰氏阴性杆菌，广泛分布于自然界。
沙门菌血清凝集试验是利用沙门菌抗原与相应抗体特异性结合，形成可见的凝集现象，从而对沙门菌进行鉴定的一种方法。
本实验采用玻片凝集试验，通过观察菌体与抗体结合后的凝集情况，判断待测样品中是否含有沙门菌。
三、实验材料1. 待测样品：疑似沙门菌污染的食品、水等。
2. 沙门菌诊断血清：A～F组多价O诊断血清、单价因子血清。
3. 细菌培养箱、显微镜、载玻片、生理盐水、酒精灯、接种环等。
四、实验步骤1. 样品处理将待测样品按照实验要求进行处理，如增菌、稀释等，以便获得合适的样品浓度。
2. 菌液制备取适量处理后的样品，用接种环接种于生理盐水中，制成菌悬液。
3. 玻片凝集试验（1）取一片载玻片，分别滴加生理盐水和待测菌悬液。
（2）取A～F组多价O诊断血清，滴加于生理盐水滴中，与待测菌悬液滴混匀。
（3）轻轻振荡玻片，观察凝集现象。
（4）若出现凝集现象，说明样品中含有沙门菌。
4. 进一步鉴定若初步鉴定结果为阳性，需进一步进行鉴定，包括：（1）选择单价因子血清进行试验，确定沙门菌的血清型。
（2）进行生化试验，如氧化酶、脲酶等，进一步确认沙门菌。
五、实验结果1. 初步鉴定在玻片凝集试验中，待测菌悬液与A～F组多价O诊断血清发生凝集，说明样品中含有沙门菌。
2. 进一步鉴定通过单价因子血清试验，确定样品中的沙门菌为O抗原型，再通过生化试验进一步确认。
六、实验讨论1. 本实验采用玻片凝集试验对疑似沙门菌污染的样品进行初步鉴定，结果与进一步鉴定结果相符，说明该实验方法具有较高的准确性和可靠性。
2. 在实验过程中，应注意以下几点：（1）样品处理过程中要尽量避免污染。
（2）菌悬液浓度要适宜，过高或过低均会影响实验结果。
（3）玻片凝集试验操作要轻柔，避免气泡产生。
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鸡白痢
三、沙门氏菌检验
微生物学检验 中华人民共和国国家标准 GB/T 4789.4-2003
国内外沙门菌检测方法（传统方法）
国家标准 行业标准 FDA （Food & Drug Administration） AOAC (Association of Official Analytical Chemists) FSIS （FOOD SAFETY AND INSPECTION SERVICE） ISO 加拿大官方食品微生物分析方法
丙二酸盐试验 阳性（兰） 阴性（不变）
沙门菌常用生化试验
ONPG试验 阳性（黄） 空白
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789.4-2003
微生物学检验 沙门氏菌检验
冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品
鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品
前增菌法 25g＋BPW225mL
36 ℃ ± 1 ℃ 一般4h，干蛋品18h～24h
黑色有金属光泽
无色半透明，产硫化氢菌 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株与沙门氏菌Ⅰ、
落中心带黑色或几乎全黑 Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉
色。
红色，中心带黑色。
蓝绿色或蓝色，多数菌株 乳糖阳性的菌株为黄色，中心黑色或几乎全
产硫化氢，菌落中心黑色 黑色；乳糖迟缓阳性或阴性的菌株为蓝绿色
或几乎全黑色。
或蓝色，中心黑色或几乎全黑色。
无色半透明，产硫化氢 乳糖迟缓阳性或阴性的菌株，与沙门氏菌Ⅰ、 菌株有的菌落中心带黑色， Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ相同；乳糖阳性的菌株为粉 但不如以上培养基明显. 红色，中心黑色，但中心无黑色形成时与大
肠艾希氏菌不能区分.
BS
36 ℃ ± 1 ℃ 40h～48h
DHL（或HE、WS、SS）
36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h
TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸
沙门氏菌血清学试验
H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋
甘露醇 山梨醇 沙门氏菌血清学试验
H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－
ONPG － 沙门氏菌
流行病学
易感动物：各种年龄的动物均感染，幼畜最 易感
传播途径： 主要消化道、呼吸道、伤口等 子宫内感染（垂直传播） 内源性感染（带菌现象普遍)
沙门氏菌属——致病性
潜伏期一般6-72小时，主要症状为恶心、呕吐、腹 绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。病程一般1～2天或更 长。感染剂量为15～20个菌，死亡率达1～4%。最易 感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷 者等。
一、沙门氏菌生物学特性
是一大群寄生于动物肠道内生化反应和抗原构 造相似的革兰氏阴性杆菌
沙门菌生物学性状
大小0.6～1.0×2～3um，无芽 孢，一般有鞭毛(鸡沙门菌除 外)，无荚膜，多数有菌毛， 革兰氏阴性杆菌，需氧或兼性 厌氧，最适生长温度为35～ 37℃，最适pH值为6.8～7.8。
病 原学
沙门菌（Salmonella）
DANIEL ELMER SALMON, (1850-1914) 美国兽医微生物和病理学家。是美国授予的第 一位兽医学博士。1884年任美国农业部畜牧局 首任局长。他首次从病猪中分离出猪霍乱沙门 氏菌。在医学微生物中通用的沙门菌一词，就 是为纪念他而以 他的名字命名的。
食品中沙门氏菌检测的基本程序
标本采集
增菌培养
肠道选择性培养基分离培养 取可疑菌落
革兰染色 生化反应
血清学鉴定
沙门菌常用生化试验
三糖铁（TSI）
尿素酶试验 阴性（黄）阳性（红）
沙门菌常用生化试验
吲哚试验 阴性（液面黄）阳性（液面红）
VP试验 阳性（红色）阴性（不变）
沙门菌常用生化试验
赖氨酸脱羧酶试验 对照 阳性（紫） 阴性（黄）
BS最适合，但为提高检出率，需要使用一个BS培 养基，同时再用另一个DHL、HE、SS或 WS
选择 琼脂平板 亚硫酸琼脂 (BS琼脂)
DHL琼脂
HE琼脂 WS琼脂 SS琼脂
沙门氏菌 Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ
沙门氏菌Ⅲ （即亚利桑那菌）
产硫化氢菌落为黑色有金 属光泽、棕褐色或灰色， 菌落周围培养基可呈黑色 或棕色；有些菌株不产生 硫化氢，形成灰绿色的菌 落，周围培养基不变。
非如左述的各种反应结果 非沙门氏菌
（一）前增菌 •前增菌：使食品加工过程中受伤的沙门菌细胞恢 复活力 •未经加工过的食品，检验前不需要前增菌
前增菌：25克（加工食品）+225毫升缓冲蛋白胨 水 37度培养4小时（干蛋品18—24小时）。
选择性增菌
含选择性抑制剂 1：1稀释液而不是1：10，提高检出率
增菌：移取10毫升接种于100mL的增菌液中。氯 化镁孔雀绿（MM）或四硫酸钠煌绿（TTB）、亚 硒酸盐胱氨酸（SC）。 一种增菌剂不可能适合所有的沙门菌，所以，要 同时使用两种以上的培养基增菌
（二）分离培养
最适生长温度为35～37℃， 最适pH值为6.8～7.8。 选择性琼脂平板：BS培养基（亚硫酸铋琼脂）、 DHL琼脂、HE（海克顿肠内琼脂培养基）或WS 琼脂、SS琼脂。
形态大小
G-杆菌 0.6-1.0um×2-4um 周身鞭毛，有菌毛。
生化反应
•不分解乳糖（亚利桑那菌除外），分解葡 萄糖产酸产气（伤寒沙门菌产酸不产气）。
•多数产生H2S，不产生靛基质，不液化明胶， 不分解尿素，不产生乙酰甲基甲醇，多数能 利用枸橼酸盐，能还原硝酸盐为亚硝酸盐， 在氰化钾培养基上不生长。
污染源主要是人和家畜的粪便 可以存在于多类食品中
二、沙门菌病简介
目前至少有67种O抗原和2000个以上血清型，所 致疾病称沙门菌病。
肠热症----是伤寒病和副伤寒病的总称，主要由伤 寒杆菌和甲பைடு நூலகம்乙、丙型副伤寒杆菌引起。
急性肠炎（食物中毒）----是最常见的沙门杆菌感 染。多由鼠伤寒杆菌、猪霍乱杆菌、肠炎杆菌等 引起。
10mL＋MM （或TTB）100mL
42 ℃ 18h～24h
10mL＋SC100mL
36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h
直接增菌法 25g＋灭菌生理盐水25mL
检样匀液25mL ＋MM （或TTB）100mL
42 ℃ 18h～24h
检样匀液25mL
＋SC100mL
36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h