香菇多糖的提取纯化方法
香菇多糖的提取工艺
复合酶解、 酸处理结合热水浸提法提取香菇多糖的改进工艺 原料 → 复合酶解→酶解液→ 水浸提→ 酸浸提→ 浸提物→ 真空浓缩→ 浓缩 液→ 酒精沉淀→ 沉淀物→ sevage法脱蛋白→ 水相→ 丙酮洗涤→ 多 糖粗制品
操作要点
1、原料预处理 选取质量合格的干香菇若干,经植物高速磨碎机 磨成粉末, 称取相应香菇粉末 , 加入适量酒精使香菇粉末成糊状。
香菇多糖(1entinan，LNT) 香菇多糖是从优质香菇子 实体中提取的有效活性成分，是香菇的主要有效成分， 是一种宿主免疫增强剂(host defense potentiator， HDP)，临床与药理研究表明，香菇多糖具有抗病毒、抗 肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用。
香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成 分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的β— (1—3)— D—葡聚糖，主链由β—(1—3)连接的葡萄糖基组成，沿 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ链随机分布着由β—(1—6)连接的葡萄糖基，呈梳状 结构。
8 、 sevage法脱蛋白 将上述沉淀溶于适量的蒸馏水中,分别加 入 20 %体积的氯仿和 7 %体积的异戊醇生成絮状凝聚物, 用高速离 心机在 5000r pm离心 15min得沉淀。重复上述操作, 直至无凝聚物 生成。
9、丙酮洗涤脱水 将酒精沉淀物用丙酮洗涤脱水两次, 倒入放 有干燥滤纸的培养皿中 (滤纸重0.98g) ,然后将培养皿放在 50℃ 的 烘干箱中进行干燥 3h ,得到香菇多糖粗制品。
香菇多糖的提取方法及应用
香菇多糖的提取方法及应用香菇多糖是从香菇中提取的一种多糖类化合物，具有抗肿瘤、抗病毒、降血脂、降血糖等多种药理活性。
提取香菇多糖的方法主要包括水提法、酸提法、碱提法、酶解法等多种方法。
下面将对香菇多糖的提取方法及应用做详细介绍。
1. 水提法水提法是将香菇切碎后用水浸泡，通过水提取的方法获得香菇多糖的一种提取方法。
其优点是提取过程简单，设备要求低，且操作方便。
但缺点是提取率较低，且容易受到微生物污染。
2. 酸提法酸提法是将香菇切碎后用酸性溶液浸泡，通过酸的作用来提取多糖。
酸提取的优点是提取率高，但也会产生废液排放问题，同时酸性溶液容易对蛋白质产生影响。
3. 碱提法碱提法是将香菇切碎后用碱性溶液浸泡，通过碱的作用来提取多糖。
碱提取的优点是提取率高，同时对蛋白质影响较小。
但碱性溶液的使用需要注意对环境的影响，且碱性条件下易使多糖发生降解。
4. 酶解法酶解法是通过加入酶类来促进多糖的提取，能够有效地增加提取率。
但酶类的成本较高，同时酶解条件的控制较为严格。
提取得到的香菇多糖可以通过浓缩、絮凝、沉淀及净化等方法得到纯净的多糖产品。
香菇多糖的应用广泛，主要包括以下几个方面：1. 药品领域香菇多糖具有抗肿瘤、抗病毒的作用，被广泛应用于肿瘤治疗、免疫调节、抗病毒等方面。
临床研究表明，长期服用香菇多糖可以增强人体免疫力，减少感染病毒的风险。
2. 食品工业香菇多糖可作为功能性食品添加剂，提高食品的营养价值，增加食品的功能性。
例如可以将香菇多糖添加到饼干、饮料、果冻等食品中，以增强食品的健康功能。
3. 化妆品领域香菇多糖具有较好的保湿性，被应用于化妆品中具有很好的效果，如护肤乳液、面膜等产品中。
4. 其他领域香菇多糖还可以用于环保领域，例如用于废水处理，其能够起到絮凝剂的作用，帮助去除水中的杂质，达到净化水质的效果。
总而言之，香菇多糖的提取方法多样化，可以根据需要选择适合的提取方法，提取得到的多糖产品应用广泛，涉及药品、食品、化妆品等多个领域，具有很好的开发和利用前景。
香菇多糖的提取制备
三、操作要点 1.预处理：取干香菇，捣碎。 2.提取：将捣碎的干香菇置于不锈钢反应锅中，在搅拌 的条件下加6—7倍量水混匀，加热至90℃，搅拌保温60 min， 降温至40℃时转移到40℃水浴保温；并加入适量蛋白水解酶 液，pH值为自然(Ph6．4)，搅拌反应60 min，然后迅速升温 到90-100℃，灭活1min降温后纱布过滤，收集滤液。 3.浓缩：将以上滤液置于解压浓缩罐中，然后解压浓缩 至l/5体积时，停止浓缩。 4.沉淀：将浓缩液置于搪瓷缸中．在搅拌的条件下，加1 倍量乙醇，然后静置过夜。过滤得沉淀物，滤液再加3倍量 乙醇，得沉淀物。
5.二次沉淀：将沉淀物置于搪瓷缸中，加约70倍量 的水，搅拌均匀，在猛烈搅拌下，滴加0.2mol/l几氢氧 化十六烷基三甲基胺水溶液，逐步调PH至12．8时产生 大量沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，收集沉淀。 6.除蛋白：沉淀用氯仿、正丁醇洗涤去蛋白，水层 加3倍量乙醇沉淀，收集沉淀。 7.洗涤：沉淀依次用甲醇、乙醚洗涤，收集沉淀。 8.干燥：将沉淀置真空干燥器干燥，即为香菇多糖。
香菇多糖的提取制备
一、实验目的 掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和 方法。
二、实验原理 在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在 生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质 部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖 在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水 解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶 处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉 淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当 调pH和加热等。
四、思考题 1.有蛋白之前，加入酶液的目的是什么?
香菇多糖的提取方法
香菇多糖的提取方法
香菇多糖的提取方法如下：
1. 采购新鲜的香菇，清洗干净并切成小块。
2. 将香菇块放入大型锅中，加入足够的水，与香菇比例大约为10：1。
3. 将锅中的香菇块煮沸，然后改用中小火慢慢煮煮2-3小时。
这个过程中，可以不断搅拌，确保香菇均匀受热。
4. 使用细网过滤器或纱布等细密过滤器，将煮煮后得到的香菇汁滤掉固体部分。
滤液便是香菇多糖的提取物。
5. 将香菇多糖的提取物进行进一步处理，可以采用醇沉淀法。
将提取液中加入等体积的酒精，搅拌均匀，并置于低温环境下静置一段时间，使得多糖在酒精中沉淀。
6. 将酒精沉淀物通过离心机进行离心分离，得到固体沉淀。
7. 将固体沉淀经过冷冻干燥或真空干燥等方法使其干燥，得到香菇多糖粉末。
注：以上方法仅供参考，具体的提取方法可以根据实际情况和需要进行调整。
香菇 香菇多糖 提取 纯化 检测 含量测定及表征
09级应用化学
1
目录流程图
香菇简介 香菇多糖含量测定 香菇多糖组成的测 定 结束
营养成分及药用价 值
香菇多糖提取方法 及比较
香菇多糖结构的鉴 定
营养成分及药用价 值
香菇多糖的应用
香菇多糖的纯化
主要参考文献
地理分布
香菇多糖的生物活 性
香菇多糖纯度鉴定
市场分布
香菇多糖简介
香菇多糖的脱色
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5.7.2主要的仪器分析方法主要有
高分辨率的核磁共振技术[7] 快速原子轰击质谱技术 电喷雾质谱 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 串联质谱技术及各种色质联用技术[8] 紫外分光光度法 红外光谱法[9] 气相色谱法[10] 液相色谱法[11] 电泳法[12] 比旋光度法等
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4. 微波法提取香菇多糖
微波提取法是一种新型提取法，由于溶剂及细胞液吸收微波能， 微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁内部时，细胞内部温度升高压力 增大，当压力超过细胞的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部 的多糖就从细胞中释放出来； 5. 超声波提取法 香菇多糖的超声波(20KHz一50MHz)提取一利用超声波的空化作 用分散破坏植物组织，加速植物多糖成分的浸出提取；另外超声波 产生的机械振动、乳化和击碎效应 等也能加速多糖成分的扩散释放 并充分与溶剂混合，提高香菇多糖的得率； 6.深层发酵培养提取法 目前，香菇多糖主要从香菇子实体中提取。人工培养香菇子实体， 生产周期长达半年以上，而深层培养发酵法获得香菇菌丝体和香菇 多糖，生产周期将缩短至一周左右；一般从鲜香菇中提取多糖，得 率为6.9％左右，从干香菇中提取多糖，得率是6.72％左右，差异不 大；而香菇菌丝体的多糖得率却明显高于香菇子实体，达7.3％左右。 因此在工业生产中，此法很具竞争优势；
香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究_张欣
香菇多糖的提取纯化及其理化性质的研究3张 欣 吕作舟(华中农业大学 武汉 430070) 摘要 本研究以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。
并且,从香菇菌盖中提取纯化得到两种新多糖:香菇多糖A(水浸物)和香菇多糖B(碱浸物)。
关键词 香菇 菌盖 多糖 提取 纯化 理化性质香菇(Lentinula edodes)不仅是一种美味佳肴,也是一种著名的药用菌。
我国历代的医药学家对香菇的药性及功能均有著述,如《日用本草》认为香菇“益气、不饥、治风、破血”〔1〕。
现代研究结果表明,香菇中含有能降低血浆胆固醇的香菇嘌呤〔2〕,含有诱生干扰素的双链核糖核酸〔3〕,且含有抗肿瘤活性物质———香菇多糖及香菇糖肽〔4,5〕。
1970年G oro Chihara首先从香菇子实体中浸提出6种香菇多糖,并证明其中一种具有明显的抗肿瘤作用,定名为Lentinan〔5〕。
自此,世界各地掀起了一股从大型真菌中寻找抗肿瘤药物的热潮。
有关香菇多糖的研究尤其活跃,包括提取工艺及分离纯化研究,香菇多糖理化性质及药用价值研究〔6,7,8〕。
但对多糖理化性质、结构、药效、药理等方面仍无定论,仍须继续深入研究。
本研究以香菇的菌盖、菌柄、菌丝体为试材,分别采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖,检测分析了粗多糖、多糖、蛋白质与原材料之间量的关系,并且,从香菇菌盖中提纯了两种新多糖,对其理化性质和结构进行了初步研究,为进一步对香菇多糖的结构分析、药效、药理实验提供参考。
本研究主要结果如下:11以香菇菌盖、菌柄、菌丝体为试材,采用水浸法、碱浸法提取香菇多糖。
粗多糖、多糖得率都以菌盖的水浸物为最高,而以菌丝体的碱浸物为最低。
蛋白质得率以菌柄水浸物为最高,以菌丝体的碱浸物为最低。
21氨基酸自动分析仪的分析结果表明:香菇菌盖水浸物、碱浸物中氨基酸含量丰富,其中包括人体必需氨基酸。
水浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸;碱浸物主要含天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸。
香菇多糖的提取实验报告
香菇多糖的提取实验报告一、实验目的本实验旨在探索从香菇中提取多糖的有效方法，并对提取得到的香菇多糖进行初步的定性和定量分析。
二、实验原理香菇多糖是一种水溶性的大分子化合物，其在热水中具有一定的溶解性。
通过热水浸提的方法，可以使香菇中的多糖溶解到水中，然后经过离心、过滤等操作去除杂质，再通过醇沉的方法使多糖沉淀出来，最后经过干燥得到香菇多糖的粗品。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜香菇（市售）、无水乙醇（分析纯）、丙酮（分析纯）、石油醚（分析纯）、葡萄糖标准品、浓硫酸（分析纯）、苯酚（分析纯）等。
2、实验仪器电子天平、恒温水浴锅、离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、分光光度计、容量瓶、移液管、具塞刻度试管等。
四、实验步骤1、原料预处理将新鲜香菇洗净，去除杂质和根部，切成小块，置于通风处晾干。
然后用石油醚回流脱脂2 次，每次2 小时，以去除香菇中的脂类物质。
脱脂后的香菇用丙酮回流脱色 2 次，每次 2 小时，以去除香菇中的色素。
2、热水浸提将预处理后的香菇放入圆底烧瓶中，按料液比 1:20 加入蒸馏水，在90℃的恒温水浴锅中浸提 3 小时。
期间每隔 30 分钟搅拌一次，以提高提取效率。
3、离心分离浸提结束后，将提取液冷却至室温，然后在 4000 r/min 的转速下离心 15 分钟，取上清液。
4、过滤将上清液用滤纸过滤，去除其中的不溶性杂质。
5、醇沉向过滤后的上清液中缓慢加入 3 倍体积的无水乙醇，边加边搅拌，使多糖沉淀出来。
然后将溶液置于 4℃冰箱中静置过夜。
6、离心收集将醇沉后的溶液在 4000 r/min 的转速下离心 15 分钟，收集沉淀。
7、洗涤用无水乙醇和丙酮依次洗涤沉淀，以去除其中的杂质。
8、干燥将洗涤后的沉淀置于真空干燥箱中，在 60℃下干燥至恒重，得到香菇多糖的粗品。
9、多糖的定性分析（1）苯酚硫酸法：取适量的香菇多糖粗品，用蒸馏水溶解，制成一定浓度的溶液。
然后取 1 mL 溶液，加入 1 mL 5%的苯酚溶液和 5mL 浓硫酸，摇匀后在沸水浴中加热 15 分钟，冷却至室温后，在 490 nm 处测定吸光度。
香菇多糖的分离提取
香菇多糖的分离提取一、实验目的掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。
二、实验原理在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。
碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。
现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。
提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。
苯酚试剂可与香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起显色反应，生成橙黄色化舍橱，于49Ohm处比色，定量。
三、实验材料1.实验器材循环水式真空泵；旋转蒸发仪；粉碎机；恒温水浴锅；纱布；搪瓷缸；真空干燥器；721型分光光度计；15ml具塞试管。
2．实验试剂（1）95%乙醇；甲醇（化学纯）；乙醚（化学纯）；木瓜蛋白酶（中性）；纤维素酶；0.2 mol/L十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液；10 mol/L 氢氧化钠溶液；葡萄糖标准溶液(1mg/ml，10m/m])；苯酚试液。
（2）复合酶液：以PBS缓冲液做溶剂，其中蛋白水解酶浓度为8 %，纤维素酶浓度为4%；（3）苯酚溶液：称取苯酚(AR级)10 g加水190 g溶解后，置于棕色瓶，备用。
四、实验方法步骤（一）香菇多糖的分离1、预处理：取干香菇4 g，用粉碎机粉碎或捣碎。
2、提取：将捣碎的干香菇置于250 ml三角瓶中，在搅拌的条件下加7倍量水混匀, 加热至90℃，搅拌保温60 min，降温至40℃时转移到40℃水浴保温；并加入适量0.45 ml 复合酶（蛋白水解酶浓度为8 %，纤维素酶浓度为4%），pH值为自然(pH 6.4)，搅拌反应60 min，然后迅速升温到90-100 ℃，灭活1min，降温后纱布过滤，收集滤液。
3、浓缩：将以上滤液置于旋转蒸发仪中，然后减压浓缩至l/5体积时，停止浓缩。
4、沉淀：将浓缩液置于搪瓷缸中，在搅拌的条件下，加1 倍量乙醇，然后静置过夜。
多糖提取分离实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖提取分离的基本原理和方法。
2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能。
3. 通过实验，了解不同多糖的提取分离效果。
二、实验原理多糖是一类天然高分子化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等。
本实验采用水提醇沉法提取分离多糖，利用多糖在水中的溶解度与醇溶液中的溶解度差异，实现多糖的分离纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：香菇粉末、蒸馏水、95%乙醇、NaOH、HCl、无水硫酸钠、苯酚、硫酸等。
2. 实验仪器：电热恒温水浴锅、电子天平、离心机、超声波清洗器、旋转蒸发仪、层析缸、薄层层析板、显色剂等。
四、实验步骤1. 香菇多糖提取（1）称取4g香菇粉末，加入200mL蒸馏水，加热至80℃，保持2h。
（2）冷却至室温，加入适量的95%乙醇，静置过夜。
（3）离心分离，取上清液。
（4）将上清液加入适量的无水硫酸钠，静置过夜。
（5）离心分离，取沉淀。
2. 香菇多糖分离纯化（1）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的NaOH溶液，调节pH至7.0。
（2）加入适量的HCl溶液，调节pH至4.5。
（3）静置过夜，离心分离，取沉淀。
（4）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的95%乙醇，静置过夜。
（5）离心分离，取沉淀。
（6）将沉淀溶解于适量蒸馏水中，加入适量的苯酚，显色后进行薄层层析。
3. 香菇多糖鉴定（1）根据薄层层析结果，鉴定香菇多糖的纯度。
（2）根据苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 香菇多糖提取实验中，香菇多糖的提取率为8.50%，表明水提醇沉法能够有效提取香菇中的多糖。
2. 香菇多糖分离纯化通过调节pH和醇沉，成功分离纯化了香菇多糖，纯度达到90%以上。
3. 香菇多糖鉴定根据薄层层析结果，香菇多糖主要成分为β-葡聚糖。
苯酚-硫酸法测定香菇多糖的浓度为1.20mg/mL。
六、实验结论1. 本实验采用水提醇沉法成功提取分离了香菇多糖，提取率为8.50%，纯度达到90%以上。
香菇多糖提取工艺
多糖纯化
凝胶柱层析原理：所谓层析，就是利用样品中各组成成分的理化性质的差异，使各组分
以不同程度分布在固定相和流动相两相中，由于各组分随流动相前进的速率不同，从而把 它们分离开来的技术。
操作步骤： Sephadex G-100凝胶充分溶胀后装柱，用蒸馏水平衡48h。取上述香菇 多糖提取物溶于蒸馏水中，离心除去不溶物，上清液上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗脱速度 5mL/20min，200nm波长紫外检测，收集主要峰部分，冷冻干燥的白色香菇多糖，并称 重。
称重。
(5) 主要生产设备：
烧杯（若干），玻璃棒，温度计，锥形瓶（若干），漏斗，水浴锅，称量天平，台式恒
温振荡器,台式离心机，紫外线分光光度计
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(6) 关键过程与关键技术
多糖的提取
取香菇10g，于组织捣碎机内粉碎，加入20倍量水，90 ℃水浴加热30min，抽滤，得 滤液，加活性炭（1mg/mL），搅拌吸附1h，抽滤，得滤液，用氯仿萃取（3次）以除尽 蛋白质，萃余液中加无水乙醇，使其乙醇最终浓度为80%，沉淀12h后，于离心机中离心 （4000r/min）30min,沉淀物分别用无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤三次，既得香菇多糖提取 物。
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(3) 现在常用的生产方法
以上几种方法均有优点和缺点，而现如今也都在被使用！
3 、生产技术
(1)生产原理:
多糖溶于热水,不溶于60%以上乙醇,也不溶于氯仿正丁 醇.热水浸提时，香菇组织膨胀破裂，多糖成分浸出，所以 用热水提取,乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质;因为热水也可 以将蛋白类物质提取出来,所以用氯仿正丁醇萃取除去提取 液中的蛋白。
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(4) 工艺流程说明及主要工艺参数：
提取香菇多糖的详细方案
原料：香菇。
NaHCO固体，浓硫酸，95%乙醇稀盐酸，PH试纸，复试剂：蒸馏水，葡萄糖，苯酚，铝片，3合酶（木瓜蛋白酶：纤维素酶=2：1），设备和仪器：100ml容量瓶，6个50ml容量瓶，玻璃棒，蒸馏装置（温度计、沸石、三口烧瓶、冷凝管），烧杯若干，锥形瓶若干，棕色瓶一个，抽滤瓶，1、2、5、10ml吸液管，电子天平，真空干燥箱，恒温水浴锅，紫外分光光度计，粉碎机，40、60、80、100目的筛子，DL700-0.55×1.5超高压等静压机（上海大隆高压设备厂），真空泵，THZ-82A台式恒温振荡器，台式离心机。
1、标准葡萄糖溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100.0mg，加蒸馏水溶解并定容于100ml容量瓶中，摇匀，配成浓度为1mg/ml标准葡萄糖溶液备用。
2、5%苯酚试剂的配制。
苯酚水浴加热溶解后称取100g，加铝片0.1g(先用1：6的盐酸除去铝片表面氧化铝后，再称量使用)，加入碳酸氢钠30g，蒸馏，收集178-182℃的馏分，取馏出液7.5g，加入蒸馏水150mL，得5.0％的苯酚溶液，置于棕色瓶中备用。
3、标准曲线绘制以葡萄糖作为标准品，采用苯酚—硫酸比色法，用紫外分光光度计测定多糖含量。
精密吸取已配制的葡萄糖标准品溶液0.5，1，1.5，2，2.5，3ml置于6个50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度线，摇匀。
精密吸取2ml，分别加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入5ml浓硫酸，振摇5min，置沸水浴上加热15min，然后置冷水浴中冷却30min，以溶剂蒸馏水为空白作对照，在400～600nm内扫描，最大吸收波长为490nm。
在490nm处，测吸光值，以浓度为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线，得出葡萄糖标准品浓度Y（ug/ml）与吸光值X的回归方程：Y=15.336X-0.0298，R2=0.9997。
在2.5～15.0 ug/ml 范围内呈线性关系。
预处理：将新鲜清洗干净，除去其根部，将剩下的菌伞挤压，切小块放入真空干燥箱干燥，待香菇恒质量，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的香菇粉依次通过40，60，80，100目的筛子，得到40目以下、40～60目、60～80目、80～100目、100目粒度以上的样品，过筛之后把各级香菇粉分别装到清洁干燥的烧杯中，编号贴上标签，置于真空干燥箱中待用。
香菇多糖的分离纯化(水提醇沉法)
香菇多糖的提取、纯化（水提醇沉法）一、实验目的了解并掌握水提醇沉法提取香菇多糖的原理和方法。
二、实验原理提取香菇多糖的方法有：水提醇沉法（热水浸提法）、碱浸提法和酶解法。
水提醇沉法是最常见的方法。
香菇多糖溶于水。
热水浸提时，香菇的组织细胞破裂，多糖成分浸出，再用乙醇沉淀香菇多糖。
料液比、温度、时间、PH值、乙醇浓度、提取次数都是影响提取效果的重要因素。
最佳提取条件为：料液比1:40（30~40倍均可），提取温度为80~95℃，提取时间2h，提取时的乙醇浓度为75%，PH值6.0~8.0，提取次数为2次。
三、材料和仪器材料：香菇（取子实体）、蒸馏水、无水乙醇、Sevage试剂、（Sevage试剂配制：取三氯甲烷和正丁醇，按照5﹕1进行混合，放置在棕色瓶中备用。
）仪器：分析天平、高速离心机、离心试管、冷冻干燥机、磁力搅拌器、恒温水浴锅、烧杯等。
四、实验步骤1、提取：将干燥的香菇子实体粉碎后，加入30倍的蒸馏水，用沸水提取2h，过滤，滤渣再按第一次提取工艺提取1次，将上清液合并后于80℃下浓缩。
在冷却后的浓缩液中加入一定量95%的乙醇，使乙醇的浓度为75%，室温下放置过夜，离心，将收集到的沉淀用真空冷冻干燥机冻干，放到后4℃冰箱中保存、备用。
2、sevage法除蛋白：称取得到的样品10g（含水率9.7%）充分溶解于100mL蒸馏水中。
加入一定体积的Sevage试剂，用磁力搅拌器剧烈搅拌20 min 左右，离心，分离粗多糖中蛋白质杂质。
重复2次。
3、乙醇沉淀：往除过蛋白的多糖溶液（上清液）中缓慢加入95%的乙醇，至乙醇体积占溶液总体积的75%，边加边搅拌，使多糖均匀沉淀。
放在4℃冰箱中6h，6000r/min 离心10min，弃去上清液，将沉淀在溶解于蒸馏水中，重复以上过程3次，将最后得到的溶液放在-40℃的冷冻干燥机中冻干，制得香菇粗多糖。
五、含量测定（苯酚-硫酸法）1、标准曲线的绘制精确称取100 mg 葡萄糖，溶解定容于100 mL容量瓶中，得含1 mg/mL葡萄糖的对照品储备溶液，备用。
香菇多糖提取的方法
食用菌速冻工艺
工艺流程
离心得菌丝体 沸水浸提
沸水浸提 得粗多糖
醇提
香菇多糖提取的方法
方法1：将香菇发酵液过滤，洗涤滤渣（菌 丝体），再将香菇菌丝体于95~100℃下烘 干，然后粉碎成小块。称取菌丝体（干） 30g ，加 600mL 水，于 96~100℃水浴 2.5H ， 离心（4000r/min，10min钟），收集上清 夜；
四节 食用菌多糖提取的原理和方法
多糖提取的原理 香菇多糖提取的方法
食用菌多糖提取的原理
利用深层液体发酵培养香菇菌丝体后，从 发酵液中提取菌丝体，从而得到胞内香菇菌 丝体，再从菌丝体中，利用它在酒精和水， 及酶液的不同溶解度来提取胞内多糖。将菌 丝体抽提、浓缩、离心，取上清液脱色透析， 透析液再浓缩、离心，最后用溶液沉淀、洗 涤干燥而成。
香菇多糖提取的方法
沉淀物加水600mL，于96~100℃再次 水浴浸提2.5H，离心收集上清夜，合 并2次的离心上清夜，真空浓缩至 4~5mL，加20mL无水酒精混匀，静置 过夜，弃上清夜后，用85%酒精洗涤2 次，再弃上清夜，晾干沉淀物即为香 菇多糖。30g菌丝体经法
方法2：香菇发酵液经离心（3000r/min， 10~15min钟），弃上清夜得菌丝体。 取菌丝体2Kg（湿重），用沸水 （90~100℃）浸提3次，合并3次的热 水提取液，加入3倍体积的96%酒精， 充分混合，置于4℃下静置沉淀，弃 上清夜，沉淀晾干后为棕色无定形粉 末，即KS-2粗品。
香菇多糖的复合酶法提取
环保性
复合酶法提取过程不需要使用强酸、强碱或 有机溶剂，对环境友好。
可重复性
复合酶法提取工艺稳定，可重复性强，适合 大规模生产。
复合酶法提取的局限性
成本高
对某些物质提取效果不佳
复合酶的生产成本较高，导致整个提 取过程的成本增加。
对于某些结构特殊的物质，复合酶法 提取效果可能不佳。
酶的来源有限
用于提取香菇多糖的酶主要来源于微 生物发酵，来源有限制。
参考文献
参考文献1
香菇多糖的复合酶法提取工艺研究，探讨了不同酶种类和浓度 对提取效果的影响，为优化提取工艺提供了理论依据。
参考文献2
香菇多糖的生物活性研究，分析了香菇多糖在免疫调节、抗肿 瘤、降血糖等方面的生物活性，为多糖的应用提供了科学依据
。
参考文献3
香菇多糖的化学结构与功能关系，探讨了多糖的分子量、单糖 组成等因素与其生物活性的关系，为多糖的结构改造和功能优
抗肿瘤
香菇多糖对多种肿瘤细胞具有 抑制作用，能够诱导肿瘤细胞 凋亡，抑制肿瘤生长和扩散。
降血糖
香菇多糖能够降低血糖水平， 对糖尿病具有一定的辅助治疗 作用。
抗氧化
香菇多糖具有抗氧化活性，能 够清除自由基，延缓衰老。
香菇多糖的来源和分布
来源
香菇多糖主要来源于香菇的子实体和菌丝体。
分布
香菇多糖主要分布于香菇的细胞壁中，其中子实体和菌丝体中含量较高。
香菇多糖的提取方法
传统提取方法
包括热水提取、酸碱提取等，但提取 效率较低，且容易造成环境污染。
复合酶法提取
利用多种酶分解香菇细胞壁，释放出 香菇多糖，具有提取效率高、环保等 优点。
02 复合酶法提取原理
酶法提取的原理
香菇多糖的提取
香菇多糖的提取香菇多糖是从香菇中提取的一种重要活性成分，具有多种保健功效和药用价值。
香菇，又称冬菇、草菇，是一种常见的食用菌类食材，被广泛用于烹饪和药用。
香菇多糖是香菇中的一种多糖类物质，具有多种生物活性，包括抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等作用。
香菇多糖的提取过程通常包括以下几个步骤：首先是将香菇进行清洗和切碎，然后用适当的溶剂（如水、乙醇等）浸泡，使多糖从香菇中溶解出来。
接着通过过滤、浓缩、沉淀等工艺步骤，将多糖提取出来并进行纯化。
最终得到的香菇多糖产品可以用于制备保健品、药品或化妆品等产品。
香菇多糖具有多种保健功效。
首先，香菇多糖具有显著的抗氧化作用，可以清除体内的自由基，延缓衰老，预防疾病。
其次，香菇多糖还具有抗肿瘤作用，可以抑制肿瘤细胞的生长和扩散，对预防和辅助治疗肿瘤具有重要作用。
此外，香菇多糖还可以调节免疫系统，增强机体免疫功能，提高抵抗力，预防感染和疾病。
除了以上几种主要功效外，香菇多糖还具有降血糖、降血脂、抗炎、抗菌等多种生物活性。
因此，香菇多糖被广泛应用于保健品、药品、化妆品等领域。
在现代社会，人们对健康和美容的需求越来越高，香菇多糖作为一种天然的功能性成分，受到了越来越多消费者的青睐。
需要注意的是，香菇多糖作为一种天然产物，虽然具有多种保健功效，但并非万能药物。
在使用香菇多糖时，应根据个人体质和健康状况适量使用，避免过量或长期大量食用，以免引起不良反应。
此外，购买香菇多糖产品时应选择正规渠道，避免购买劣质或掺假产品，以保障健康。
香菇多糖是一种具有多种保健功效和药用价值的活性成分，其提取和应用具有重要意义。
随着人们对健康的重视和需求的增加，香菇多糖作为一种天然的功能性成分，将在保健品、药品、化妆品等领域发挥越来越重要的作用。
我们期待未来在科研和生产上能够进一步挖掘香菇多糖的潜力，为人类健康和美容提供更多选择和帮助。
香菇多糖的复合酶法提取
香菇的复合酶法提取
主要实验试剂及仪器 真空干燥箱，离心机，恒温振 荡器，紫外可见分光光度计，傅里 叶变换红外光谱仪，纤维素酶，木 瓜蛋白酶
香菇的复合酶法提取
1 2 3 4 5
称取80目的香菇粉2g，放入到250mL的三角瓶中， 加蒸馏水35mL混合均匀后置于40℃水浴锅中，水浴 30min，调节pH值。 称取木瓜蛋白酶和纤维素酶按一定比例混 合，加入5mL蒸馏水溶解。 香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度，将酶液加入 到香菇溶液中，在恒温振荡器上提取。 反应结束，将三角瓶放到沸水锅中， 10min沸水浴灭酶。 灭酶结束，冷却至室温，将酶提取液放入到离心 管中，调至4000 r/min离心，取上清液，即得到 酶提取多糖清液。
复合酶提取香菇多糖：
复合酶 纤维素酶+木 纤维素酶+中 木瓜蛋白酶+ 中性蛋白酶+
瓜蛋白酶
多糖得率（%）12.90
性蛋白酶
7.02
纤维素酶
9.46
纤维素酶
6.34
香菇多糖的制备工艺
一.原料准备 二.提取 三.分离纯化
香菇的复合酶法提取
原料的准备和处理 香菇→烘干( 50℃) →粉碎→过筛→多 糖提取原材料。
实 验 方 法 与 步 骤
香菇的复合酶法提取
分离纯化 1.分离提取
用0.5%NaOH初步提取，之后取清液，用透析袋透去 除杂离子，透析后去除杂蛋白，用活性炭脱色1 h，加 入95%乙醇，使溶液中乙醇的浓度达到75%进行醇沉．醇 沉过程中要将其保存在4℃冰箱中，保持24 h，离心15 min，取沉淀，置于真空干燥箱中干燥，即可得到香菇 粗多糖。
香菇多糖的提取方法：
热水浸提法
稀酸(碱)浸提法 微波法提取香菇多糖
香菇多糖的分离纯化流程
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香菇多糖的提取纯化方法吕红常秀莲*（烟台大学生命科学院，烟台264005）摘要：香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质，具有抗病毒、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种功能，在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景。
概括介绍当前常用的热水浸提法、酶解法、微波提取法和深层发酵培养法等6种香菇多糖的提取方法。
并简单比较香菇多糖提取的这几种方法并介绍了超滤-渗滤法和活性炭联合陶瓷膜超滤法这两种香菇多糖的纯化方法。
关键词：香菇多糖; 提取; 纯化; 抗癌;抗病毒Extraction and purification of LentinanLvhong changxiulian*(Yantai university life academy of sciences, Yantai 26005)Abstract: Lentinan was isolated from mushrooms with an important physiological activity of substances with anti-virus, anti-cancer, enhance immunity and other functions. It has broad application prospect s in health food and drug’s development. Give overview of the current formulation used in hot water, enzymatic method, microwave extraction and deep fermentation method 6 kinds of mushroom polysaccharides method, And Introduced theUltrafiltration-filtration method and the Activated carbon ceramic membrane joint ultrafiltration method of Lentinan purification.Keywords: Mushroom polysaccharide ; Separation ; cancer ; antiviral1引言香菇多糖(Lentinan) 是一种β-1,3-葡聚糖, 是从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖，能治疗癌症, 抗恶性肿瘤, 抗病毒, 抗感染, 提高人体免疫力等多种生理功能。
目前国内对香菇多糖的分离有了很大发展，主要采用的方法有传统热水提取法、酸提取法、碱提取法、这些方法都有其优点，也有其难以克服的不足之处。
与传统方法相比微波辅助提取法具有设备简单，快速，高效，安全等特点。
2香菇多糖的提取方法2.1 热水浸提法这是最早采用的一种传统方法：香菇多糖溶于水，热水浸提时，香菇组织细胞膨胀破裂，多糖成分浸出。
热水浸提香菇多糖，浸提时的料液比、温度、时间、pH、醇析时的乙醇添加倍数及提取次数是影响多糖得率的主要因素。
对料液比而言，若加水太少，提取不彻底；加水太多，容易降低提取液的固形物含量，不利于以后的分离，且加重了工业生产中的后续工艺，一般为1：20左右。
对温度来说，随着提取温度的升高，粗多糖得率逐渐升高，在80%一95%时达到高峰，再提高温度时，粗多糖得率升高趋势趋于平缓，考虑到高温会破坏多糖的结构，影响其生物活性，同时高温提取对工业化生产的设备要求更严格。
所以，提取温度一般以80 ℃一95 ℃为宜。
随着提取时间的延长，粗多糖得率逐渐增加，0.5 h一3 h之间趋势明显，继续延长提取时间，多糖得率加趋势逐渐趋于平缓，一般浸提时间为8 h一12 h。
热水浸提时的pH为自然pH值，大约在6-8之间。
而对醇析时提取液的乙醇浓度来说，随着其逐渐升高，多糖得率亦逐渐增加，但乙醇浓度达到75%后再继续添加乙醇，对粗多糖得率的影响不大，所以提取液的乙醇浓度最好不超过75% 。
当然，提取次数对多糖得率也有一定的影响，多糖得率随着提取次数的增加而增加，但提取次数超过2次后，多糖得率增加缓慢，趋于平缓。
我们通常可以确定2次提取为比较适宜的提取次数[1]。
总的来说，热水浸提法的最佳提取条件由具体的实验环境而定，一般可根据正交实验确定。
应注意几点：(1)浸提过程必须充分，这是前提。
(2)浸提后过滤时应尽量趁热过滤，否则温度降低，物质问的黏度增大，过滤时间增长。
(3)浓缩过程受仪器影响较大。
一般旋转蒸发仪是一种较好的浓缩装置。
2．2 稀酸(碱)浸提法从香菇中提取多糖的提取剂有：酸液、碱液、酶及热水等，提取剂为酸(碱)时，即所谓的酸(碱)提取法。
该法提取香菇多糖也受多方面因素的影响：酸(碱)溶液的浓度、作用时间等。
一般情况下，0.4 mol／L的HC1溶液在40 ℃一60 ℃范围内，多糖得率较高[2]。
需注意，香菇多糖的提取应避免在强酸、强碱溶液中进行，否则极易造成香菇多糖中糖苷键断裂及构象变化而形成较多单糖，影响多糖得率，因此香菇多糖较少采用此法提取。
2.3 酶解法香菇细胞壁主要由纤维素、果胶等组成，细胞膜主要由蛋白质和磷脂组成，因此我们可以用具有专一性和高效性的酶，如纤维素酶、果胶酶、蛋白酶等来提取香菇多糖。
近年来有报道用链霉菌蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶及胰蛋白酶等处理后，再经透析能得到基本无蛋白质及小分子杂质的香菇多糖。
酶解法就是指在浸提的过程中加入相应的酶来水解纤维素、果胶、蛋白质分子等，以使多糖从细胞中分离出来。
此环节影响多糖得率的主要因素有：酶用量、酶作用时间、作用温度和pH。
酶的用量太少，不能彻底水解香菇细胞壁中的纤维素、果胶和细胞膜中的蛋白质，从而不能使多糖从细胞里更好的分离出来，降低多糖得率；酶太多，多糖量增加趋势趋于平缓，而造成原料的浪费酶制剂的作用时间也要适宜，过短，酶不能充分水解纤维素、果胶、蛋白质等，使得多糖得率降低；过长，多糖的量不会继续增加，同时浪费时间，造成生产上的不必要浪费。
当单因素考虑时，一般我们认为，纤维素酶的最适反应浓度为0.5％，最适反应时间为80 min，最适反应温度为50 ℃一60 ℃，最适pH为5.0；果胶酶的最适反应浓度为0.5% ，最适反应时问为80 min，最适反应温度为35 ℃一45 ℃，最适pH为4.5；木瓜蛋白酶的最适反应浓度为1.0% ，最适反应时间为60 min，最适反应温度为50 ℃一60 ℃，最适pH为4.5。
众所周知，温度和pH值会极大的影响酶的活性，高温、过酸、过碱，都会使酶失去活性，这些都不利于酶活性的发挥。
因此，具体的环境，我们应该通过实验找出最适酶用量，作用时间，温度和pH值，这样不仅能达到香菇多糖的最大得率，而且省时，经济。
除以上因素外，酶的类别和向预处理液加入不同酶的先后顺序也会影响香菇多糖的得率。
香菇细胞壁具有全透性，小分子物质如水、乙醇等及大分子物质如多糖、蛋白质等能自由出入；细胞膜具有半透性，只允许小分子物质通过。
当细胞壁被水解后，细胞膜在一定条件下通过渗透吸水破裂，细胞内多糖等物质流出。
同时，环境因素如pH、温度等也可使细胞膜破裂。
当用蛋白酶提取香菇多糖时，蛋白酶透过细胞壁，与细胞膜接触，水解膜蛋白从而破坏膜结构，香菇多糖得以析出；当用纤维素酶处理时，在适宜条件下，细胞壁被水解，同时细胞膜由于吸水或外环境因素的影响而破裂，多糖类物质流出。
一般情况下，用复合酶提取效果明显高于单酶的提取，这是因为香菇细胞壁主要由蛋白质、几丁质和纤维素等构成，很坚固；使用纤维素酶，果胶酶和蛋白酶先后水解，共同作用于香菇的细胞壁，使其破裂，多糖易于从胞内释放，比单一酶作用提高了香菇多糖的得率。
但是，若蛋白酶和纤维酶同时使用，由于各自的最适条件不同，不能达到最佳水解效果，同时蛋白酶对纤维素酶具有水解作用，所以有些文献报道双酶水解与用纤维素酶单酶水解相比，效果没有明显提高。
刘宁和李健(3)纤维素酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分别两两组合成复合酶，研究其提取效果，结果如表1：表1 复合酶提取香菇多糖复合酶纤维素酶+木瓜蛋白酶纤维素酶+中性蛋白酶木瓜蛋白酶+纤维素酶中性蛋白酶+纤维素酶多糖得率（%）12.90 7.02 9.46 6.34由此可知，木瓜蛋白酶的提取得率明显高于纤维素酶和中性蛋白酶的得率，其中尤以纤维素酶+木瓜蛋白酶处理效果最佳。
木瓜蛋白酶也是目前所知道的一种十分适合香菇多糖提取的酶，这是因为它有特殊结构：它是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力。
因此，复合酶解法是一种较好的提取法，很有发展前景。
在具体提取多糖时，应注意不同酶的选择及组合，同时结合相关环境条件，筛选制定出最佳提取方案。
2.4 微波法提取香菇多糖微波提取法是一种新型提取法，由于溶剂及细胞液吸收微波能，微波射线辐射于溶剂并透过细胞壁内部时，细胞内部温度升高压力增大，当压力超过细胞的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的多糖就从细胞中释放出来[4]。
在微波法提取多糖的实验中，影响多糖提取率的主要因素有：微波功率、提取时间以及提取次数等。
随着微波功率的提高，加热速度增大，分子运动速度加快，渗透、扩散及溶解速度加快；同时，高功率的微波引起细胞内部的结构变化，加速香姑多糖由外层细胞转移到溶液中。
所以，随着提取功率的升高香菇多糖的得率升高，当功率超过40%时，多糖增加趋势趋于平缓；当功率达到60% 左右时，多糖部分会被碳化。
所以，微波功率一般为700 W 至900 W。
对微波作用时间而言，随着时间的延长，多糖得率先上升，而后又下降。
这可能是因为微波辐射时间加长，香菇多糖慢慢分解，逐渐被氧化而造成多糖的损失。
因此，微波作用时间也很重要，应根据所用微波功率和处理的样品量来决定适当的作用时间。
而微波提取的次数也会对其产率有一定的影响。
随着次数的增多，多糖得率增加，但到了一定程度后，变化不大，考虑到提取次数增多，工艺操作复杂，水溶剂用量增加，过滤和浓缩困难，因此，提取次数不宜过多，通常为2至3次[5] 。
2.5 超声波提取法香菇多糖的超声波(20KHz-50MHz)提取—利用超声波的空化作用分散破坏植物组织，加速植物多糖成分的浸出提取；另外超声波产生的机械振动、乳化和击碎效应等也能加速多糖成分的扩散释放并充分与溶剂混合，提高香菇多糖的得率[6]。
另外，超声波破碎过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应发生，浸提的多糖的结构和性质不会发生变化。
所以用超声波提取香菇多糖可大大地缩短提取时间，减少料液比和降低提取液的粘度，而提取液粘度的降低有利于超滤分离时降低浓差极化的影响，从而提高多糖得率。