冰冻蚀刻技术
生物 电子显微镜 6.冷冻制样技术概述
冷冻点：当细胞内液开始凝固时的温度称为冷冻点。 此时为固、液共存状态。
再结晶点：细胞全部被冻结成为固态时的温度。
冷冻点
冰晶增大的过程 细胞损伤的阶段
细胞内开始形成冰晶
再结晶点
全部冻结
细胞浓度越高，冷冻点与再结晶点的温差越小。
植物越冬自我保护
二、冷冻固定方法：
1.冷冻固定的基本流程：
优点：能消除表面张力引起的变形，避免脱水剂对细胞 成分的抽提，较好地保存可溶性物质。
二、冷冻干燥方法：
1.新鲜样品直接冷冻干燥法：
预冷却-80 ℃
鲜样粘 冷
真空
回
在铜片 冻
干燥器 温
固 2.有机溶剂取代定的冷冻干燥法：
常规 包埋
导电 处理
TEM SEM
常规 100% 冷 真空 回
固定 脱水
乙醚
冻 干燥 温
进行
第四节 冷冻断裂复型技术
一、冷冻断裂复型技术及其特点：又叫冷冻蚀刻技术
1.冷冻断裂复型技术： 新鲜样品通过冷冻断裂，将断面制成可以反映样品 形态的复型膜，以便在透射电镜下观察的制样技术。
2.特点： •避免化学处理损伤，能更好地保存细胞生活状态； •能显示细胞劈裂面的超微结构，分辨率高； •图像立体感强； •由铂,碳制成的复型膜，耐受电子束轰击，易于长期保存； •操作简单、样品制备周期短（与超薄切片比较）
考试时间：5月15日（下周三）8：00~10：00 考试地点： 实验时间：
谢谢大家！
再见！
EF面：面向细胞质、核质、线粒体基质的疏水层劈裂面 （E膜的疏水表面）
EF面
外环境
ES面 E膜
PF面
内环境
中医大直属网院2020年7月《细胞生物学》正考-复习资料答案
科目：细胞生物学试卷名称：2020年7月细胞生物学正考满分：100满分100与以下各题总分100相等单选题1.具有细胞分选功能的实验技术是（本题：1分）[A.]电子显微镜技术[B.]层析技术[C.]电泳技术[D.]流式细胞术[E.]细胞融合技术参考解析答案：D2.能够观察肌动蛋白纤维外部形态的是（本题：1分）[A.]荧光显微镜技术[B.]冰冻断裂技术[C.]负染电镜技术[D.]冰冻蚀刻技术[E.]质谱技术参考解析答案：C3.在差速离心中最先沉降的细胞器是（本题：1分）[A.]细胞核[B.]溶酶体[C.]线粒体[D.]过氧化物酶体[E.]核糖体参考解析答案：A4.生物膜的特性是（本题：1分）[A.]流动性和不对称性[B.]不流动性和对称性[C.]流动性和对称性[D.]不流动性和不对称性[E.]不流动性参考解析答案：A5.下列哪一类型的生物膜流动性好（本题：1分）[A.]胆固醇含量高[B.]不饱和脂肪酸含量高[C.]脂肪酸链长[D.]鞘磷脂/卵磷脂比例高[E.]以上都不是参考解析答案：B6.RNA经核孔复合体输出至细胞质是一种（本题：1分）[A.]被动转运[B.]主动转运[C.]易化扩散[D.]简单扩散[E.]共同运输参考解析答案：B7.原核细胞不具备下列哪种结构（本题：1分）[A.]线粒体[B.]核糖体[C.]细胞壁[D.]DNA[E.]细胞膜参考解析答案：A8.内质网腔内能参与蛋白质折叠的是（本题：1分）[A.]过氧化氢酶[B.]葡萄糖-6-磷酸酶[C.]蛋白酶[D.]分子伴侣[E.]磷脂酶参考解析答案：D9.下列具有极性的细胞器是（本题：1分）[A.]高尔基体[B.]核糖体[C.]溶酶体[D.]过氧化物酶体[E.]内质网参考解析答案：A10.加速微管蛋白聚合的药物是（本题：1分）[A.]秋水仙素[B.]紫杉醇[C.]长春花碱[D.]Nocodazole[E.]以上都不是参考解析答案：B11.参与染色体高级结构形成的组蛋白是（本题：1分）[A.]H2A[B.]H2B[C.]H3[D.]H4[E.]H1参考解析答案：E12.在核仁以外区域合成的rRNA是（本题：1分）[A.]45SrRNA[B.]18SrRNA[C.]5.8SrRNA[D.]28SrRNA[E.]5SrRNA参考解析答案：E13.关于Ig-SFCAM结构的错误叙述是（本题：1分）[A.]不依赖于钙离子作用[B.]含有多个免疫球蛋白样结构域[C.]含有二硫键[D.]可介导同亲性及异亲性细胞粘着[E.]以上都正确参考解析答案：E14.胶原的氨基酸序列中，发生羟基化修饰的是（本题：1分）[A.]甘氨酸和赖氨酸[B.]甘氨酸和脯氨酸[C.]脯氨酸和赖氨酸[D.]赖氨酸和丝氨酸[E.]脯氨酸和丝氨酸参考解析答案：C15.有丝分裂与无丝分裂的主要区别在于后者（本题：1分）[A.]不经过染色体的变化，无纺锤体出现[B.]经过染色体的变化，有纺锤体出现[C.]遗传物质不能平均分配[D.]细胞核先分裂，核仁后分裂[E.]细胞核和核仁同时分裂参考解析答案：A16.下列不属于原癌基因的是（本题：1分）[A.]sis[B.]C-myc[C.]ras[D.]cyclinD[E.]myb参考解析答案：D17.细胞的分化方向决定于（本题：1分）[A.]受精卵[B.]8细胞时期[C.]卵裂期[D.]原肠期[E.]中、内、外胚层形成后参考解析答案：D18.细胞老化现象包括（本题：1分）[A.]细胞内环境稳定性降低[B.]DNA复制能力降低[C.]蛋白质合成能力下降[D.]细胞分裂减少甚至停止[E.]以上都正确参考解析答案：E19.细胞凋亡发生的生化改变不包括（本题：1分）[A.]细胞内Ca2+浓度降低[B.]胞浆PH值发生变化[C.]蛋白质合成增加[D.]与切冬酶（caspase）家族有关[E.]DNA发生规则片段化参考解析答案：A20.细胞凋亡时DNA片段大小的规律是（本题：1分）[A.]100bp的整数倍[B.]200bp的整数倍[C.]300bp的整数倍[D.]400bp的整数倍[E.]500bp的整数倍参考解析答案：B名词解释21.冰冻蚀刻电镜技术（分值：3分）参考解析答案：冰冻蚀刻电镜技术：将冰冻断裂的样品的温度稍微升高，让样品中的冰在真空中升华，在表面上浮雕出细胞膜的超微结构，对浮雕表面进行铂-碳复型，并除去生物材料，置于载网上作电镜观察。
医学生物学习题集
第一篇概论1.1 细胞生物学概述1.1.1 选择题1.1.1.1 A型题1．利用现代技术和手段从分子、亚细胞和整体水平等不同层次上研究细胞生命活动及其基本规律的科学称BA 细胞遗传学B 细胞生物学C 细胞病理学D 细胞生理学E 细胞形态学2．细胞学说的创始人是BA R．HookB Schleiden and SchwannC R．ＢrownD W．FlemmingE C．Darwin3．最早发现细胞并将其命名为“cell”的学者是AA R．HookB A．LeeuwenhookC R．ＢrownD W．FlemmingE C．Darwin4．最早观察到活细胞的学者是BA R．HookB A．LeeuwenhookC R．ＢrownD W．FlemmingE C．Darwin5．在1858年首先提出“细胞来自细胞”这一著名论断的学者是CA R．HookB A．LeeuwenhookC VirchowD W．FlemmingE C．Darwin6．最早自制显微镜并用于观察细胞的学者是BA Schleiden and SchwannB R．Hook and A．LeeuwenhookC VirchowD R．ＢrownE C．Darwin7．最早发现细胞的遗传物质DNA分子为双螺旋结构的学者是CA Schleiden and SchwannB R．Hook and A．LeeuwenhookC Watson and CrickD R．ＢrownE C．Darwin8．在1933年底设计制造了世界上第一台电子显微镜（投射式）的学者是AA．德国的鲁斯卡(Ruska) B．英国的马丁(Martin) C．比利时的马顿(Marton)D．德国的赫尔穆特(Helmut) E．德国的德里斯特(Driest)9．世界上第一台扫描电镜是由下列哪位科学家研制出来的A．英国的马丁 B．比利时的马顿 C．德国的鲁斯卡 D．德国的克诺尔(Knoll)E．德国的赫尔穆特10．在1944年首次证实 DNA分子为细胞的遗传物质的学者是A．沃森 B．克里克 C．埃弗里(Avery) D．福尔根(Feulgen) E．摩尔根11．在1975年有人将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合获得能分泌单克隆抗体的杂交瘤，这种单克隆抗体制备技术的发明者是A．柯勒(Kohler) B．奥林斯(Olins) C．罗伯逊(Roberson) D．桑格(Sanger) E．尼伦伯格(Nirenberg)1.1.1.2 X型题12．现代的细胞生物学在哪些层次上来研究细胞的生命活动A．分子水平 B．亚细胞水平 C．细胞整体水平 D．组织水平13．活细胞的基本生命活动有A．生长发育 B．分裂增殖 C．遗传变异 D．衰老与死亡14．19世纪自然科学的三大发现包括A．进化论 B．细胞学说 C．能量守恒定律 D．重演率1.1.2 填空题1．细胞生物学是从、和等3个水平上研究细胞生命活动的科学。
细胞生物学复习资料
第二章细胞生物学实验技术一、名词解释1．显微分辨率（microscopic resolution）---在一定条件下利用显微镜所能看到的精细程度。
2．放射自显影技术（autoradiography）---用于整个细胞时，可以确定放射性标记物在细胞内的定位。
用于凝胶或琼脂平板时，能鉴定出放射性的条带或菌落。
3．双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis）---根据分子质量及等电点的不同将复杂的蛋白质混合物分开。
这种高分辨率的技术能够分离同一混合物中的上千种蛋白质。
4．倒置显微镜（inverted microscope）---一种主要用于观察培养瓶或培养皿中的活细胞生长及分裂状态的特殊显微镜。
与普通光镜相比，其光源、聚光镜和物镜的位置是倒置的，即光源在上，物镜在载物台的下方。
另外，其聚光镜和物镜有较长的工作距离，以方便放置有一定厚度的培养瓶。
二、简答题1．电子显微镜为何不能观察活标本？因为电镜样品的观察室要求高度的真空条件。
2．简述冷冻蚀刻术的原理和方法。
冷冻蚀刻（freeze－etching）技术是在冷冻断裂技术的基础上发展起来的更复杂的复型技术。
如果将冷冻断裂的样品的温度稍微升高，让样品中的冰在真空中升华，而在表面上浮雕出细胞膜的超微结构。
当大量的冰升华之后，对浮雕表面进行铂一碳复型，并在腐蚀性溶液中除去生物材料，复型经重蒸水多次清洗后，捞在载网上作电镜观察。
3．比较投射电子显微镜和扫描电子显微镜。
答：都是用于放大与分辨微小结构，都是通过标本电子束的影响来探测标本结构。
TEM：电子束穿过标本，聚焦成像于屏幕或者显像屏上。
用于研究超薄切片标本，有极高的分辨率，可给出细微的胞内结构。
SEM：电子束在标本表面进行扫描，反射的电子聚焦成像于显像屏上。
可以反映未切片标本的的表面特征。
4．扫描隧道显微镜的工作原理及其优越性是什么？扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope，STM）由Binnig等1981年发明，是根据量子力学原理中的隧道效应而设计制造的。
冰冻蚀刻技术
4、冰冻蚀刻法。
所谓冰冻蚀刻，是把样品放在-196℃的液态氮中迅速冷冻，然后加温到-100℃，使样品变得非常脆弱易碎，再用预先也冷却到-196℃的非常锋利的玻璃断口切割经冷冻的样品，这样使样品在最容易断裂的部位断开（如果是微生物细胞，则多半是沿内膜中部），然后让样品放在真空条件下升华掉断口处的冰，最后用重金属喷镀该断口表面，即可用电子显微镜观察其结构。
用这种制备方法的优点是可以避免在固定、脱水和包埋过程中造成细胞结构的人为改变而形成的假象。
冰冻蚀刻（freeze-etching）亦称冰冻断裂（freeze-fracture）。
标本置于-100˚C的干冰或-196˚C的液氮中，进行冰冻。
然后用冷刀骤然将标本断开，升温后，冰在真空条件下迅即升华，暴露出断面结构，称为蚀刻（etching）。
蚀刻后，向断面以45度角喷涂一层蒸汽铂，再以90度角喷涂一层碳，加强反差和强度。
然后用次氯酸钠溶液消化样品，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜（replica）。
复膜显示出了标本蚀刻面的形态，在电镜下得到的影像即代表标本中细胞断裂面处的结构。
和投射电子显微镜是靠透过物体的电子成像不同，扫描电子显微镜的成像是靠观察物体表面发射的电子。
扫描电子显微镜是用聚焦得很细的电子束在样品表面扫描。
电子激发样品表面的原子放电，释放出微细的电子簇（二次电子），用灵敏的检测装置可以捕获它们，然后通过类似电视机的原理将样品图象呈现出来。
二次电子对检测器的作用取决于样品表面的性质，当电子激发样品表面突起部位时，会有大量二次电子进入检测器，而表面凹陷处则只有少量二次电子进入，所以可以显出反差突出、明暗清晰的三维图象。
而且它的成像焦深较长，图象的立体感强，和肉眼所见差别不大。
制备扫描电子显微镜的样品也先要经过固定、脱水等处理，以免在真空条件下变形失真，为了获得较多的二次电子，表面要喷涂重金属和碳原子。
1/ 1。
电镜冷冻蚀刻技术
电镜冷冻蚀刻技术嘿，朋友们！今天咱来聊聊电镜冷冻蚀刻技术，这可真是个厉害的玩意儿啊！你想啊，要是咱想看清一个东西细微到极致的样子，那普通的方法可就有点不够看啦。
就好比你想看清楚一只小蚂蚁身上的每一个细节，光靠肉眼那肯定不行呀。
这时候电镜冷冻蚀刻技术就像一把神奇的钥匙，能打开微观世界的大门。
它是怎么做到的呢？简单来说，就是先把样品快速冷冻起来，就像把一个东西瞬间冻在冰里一样。
然后呢，用特殊的方法把它蚀刻一下，这样就能把样品的表面结构清晰地显现出来啦。
这就好像是给微观世界来了一场“大揭秘”！想象一下，那些我们平时根本看不见的微小结构，通过这个技术就能展现在我们眼前，是不是特别神奇？这就好比我们突然有了一双超级厉害的眼睛，能看到别人看不到的东西。
这个技术在好多领域都大显身手呢！比如说在生物学里，科学家们用它来研究细胞的结构，看看细胞里面都有啥秘密。
那感觉就像是在探索一个神秘的微观宇宙，说不定还能发现一些前所未有的东西呢！在材料学领域也很有用呀，可以帮助研究材料的微观特性，让我们能造出更好的材料。
而且哦，这个技术还不断在发展呢！就像我们人类不断进步一样，它也越来越厉害。
以后说不定能让我们看到更加细微、更加神奇的微观世界。
那有人可能会问啦，这个技术难不难啊？其实啊，就和学任何新东西一样，一开始可能会觉得有点难，但只要你认真去学，去钻研，肯定能掌握它的。
就像学骑自行车一样，一开始可能会摔倒，但多练几次不就会了嘛。
电镜冷冻蚀刻技术真的是为我们打开了一扇通往微观奇妙世界的大门，让我们能看到那些隐藏在极小极小世界里的秘密。
它就像是一位无声的探索者，默默地为我们揭示着微观世界的精彩。
我们可真得好好珍惜这个厉害的技术，让它为我们带来更多的惊喜和发现呀！所以啊，可别小瞧了它，它的作用大着呢！。
细胞膜冷冻蚀刻技术
细胞膜冷冻蚀刻技术介绍细胞膜冷冻蚀刻技术是一种先进的高分辨率电子显微镜技术，它通过对细胞膜进行冷冻和蚀刻处理，能够观察细胞膜的微观结构和功能。
本文将对细胞膜冷冻蚀刻技术进行全面、详细、完整且深入地探讨。
背景细胞膜是细胞的重要组成部分，负责维持细胞内外环境的平衡和物质的运输。
细胞膜的结构和功能对于理解细胞活动和疾病发生发展具有重要意义。
传统的电子显微镜技术在观察细胞膜时存在一些局限性，例如样品的固定和处理过程可能会导致伪装或损坏细胞膜的结构。
原理细胞膜冷冻蚀刻技术利用冷冻技术将细胞膜固定在低温下，然后通过蚀刻的方式去除冷冻样品的表面物质。
这种冷冻蚀刻的过程使得细胞膜的结构能够被保留，并且在高分辨率电子显微镜下进行观察。
方法细胞膜冷冻蚀刻技术的方法如下： 1. 样品制备：将细胞样品放置在冷冻固定剂中，使其渗透固定在样品中。
2. 冷冻：将样品迅速冷冻至超低温，通常使用液氮或液氮混合物来冷冻样品。
3. 蚀刻：将冷冻样品放入蚀刻设备中，通过离子束或金属蚀刻剂去除样品的表面物质。
4. 去除蚀刻剂：用适当的方法去除样品中的蚀刻剂，例如洗涤或溶解。
5. 显微镜观察：将样品放入高分辨率电子显微镜中，观察细胞膜的微观结构和功能。
应用细胞膜冷冻蚀刻技术在许多领域中得到了广泛应用： 1. 细胞生物学研究：细胞膜冷冻蚀刻技术可以帮助科学家们观察细胞膜的微观结构和功能，从而揭示细胞内的生物学过程。
2. 药物研发：细胞膜冷冻蚀刻技术可以用于研究药物与细胞膜的相互作用，从而指导药物设计和开发新型药物。
3. 疾病诊断：细胞膜冷冻蚀刻技术可以用于观察病变细胞膜的改变，从而帮助医生们进行疾病诊断和治疗。
优势和挑战细胞膜冷冻蚀刻技术具有以下优势： - 高分辨率：细胞膜冷冻蚀刻技术能够观察到细胞膜的细节结构，具有很高的分辨率。
- 无伪装：由于样品在冷冻过程中没有被固定和处理，细胞膜的结构能够得到真实保留。
- 多样性：细胞膜冷冻蚀刻技术可以应用于不同类型的细胞和样品。
课堂讨论5用X线衍射，核磁共振（NMR）和电镜冷冻蚀刻技术（Cryo-EM）确定
课堂讨论5用X线衍射，核磁共振(NMR)和电镜冷冻蚀刻技术(Cryo-EM)确定大分子结构的方法。
这三种方法都很重要。
评价它们的标准有空间分辨率（能看到什么结构？单个C－C键？或只是蛋白质的总体外形？），时间分辨率（只是一个快照？还是蛋白随时间变化的动态信息？），天然状态的维持（分析可溶性蛋白是在37℃的水浴中吗？或样品需要冷冻或结晶吗？）以及样品的要求（包括纯度，量，复杂程度）。
X-线晶体学―概述：获得极纯的均一样品，并使之结晶。
用X线照射晶体，检测仪记录其衍射图，并用计算机重建分子的原子结构。
―原子分辨能力―能看到单个原子和化学键，最小分辨率可达到~1Å。
这是因为X线波长与化学键长相近（不同于可见光，可见光波长约5000Å），因此其结构可用X 线“看到”。
―没有时间信息：是蛋白质结构的静态快照，没有动态中间物等。
―操作流程：获得极纯的样品。
用常规法使之结晶（通常用悬滴法）；快速将晶体降到接近液氮的温度，以减少热力学振动（增加分辨率）；将晶体固定在一个针上，并置于X-线光路中；用X线照射，用检测仪记录衍射图；旋转晶体，收集更多的衍射图；将同一晶体浸在重金属离子中，并重复上述实验；通过电脑计算，将衍射图转换成二维电子密度图，显示原子的位置（注意：因为H仅有一个电子，因此很难确定H的位置）。
重金属晶体是用于定相，或确定衍射图上形成每一点的波的相位―这对获得电子密度图很重要。
结合多个二维图，得出三维图像；用已知的氨基酸序列及结构合理的相关知识，构建一个符合衍射图像的蛋白模型。
（“模型构建”和“模型精制”过程）R因子：金标准0.59 = 随机（0.35~0.55 = 典型的精制前的初始模型）＞0.25 = 可能是全面的折叠错误＞0.2 = 不错，可能有一些侧链错误＜0.2 = 很好，没有大的问题Rfree = 精制前对数据中的随机子集（5%）计算得出的R；应<0.3且在R因子的10%内。
第1讲细胞膜的结构和功能-备战2025年高考生物一轮复习考点帮(全国通用)
第1讲细胞膜的结构和功能一、单选题1．（2023秋·湖北荆州·高一沙市中学校考期末）通过冷冻技术，细胞膜通常从某个部位断裂分开，结构如图所示。
据图分析不能得出（）A．图中b侧为细胞质基质B．磷脂双分子层疏水端断裂C．细胞膜具有一定的流动性D．膜蛋白的分布存在不对称【答案】C【分析】分析题图：通过冷冻技术，细胞膜通常从磷脂双分子层疏水端断裂，a侧具有糖蛋白，为细胞膜的外侧，b侧为细胞质基质，图中看不出细胞膜具有一定的流动性，但是能看出膜蛋白的分布不对称。
【详解】A、由图可知，a侧有糖蛋白，为细胞膜的外侧，b侧为细胞质基质，A不符合题意；B、由图可知，是磷脂双分子层（脂双层）的疏水端发生了断裂，B不符合题意；C、据图不能得出细胞膜具有一定的流动性，C符合题意；D、由图可知，膜蛋白的分布存在不对称性，D不符合题意。
故选C。
2．（2022秋·安徽芜湖·高一安徽省无为襄安中学校考期中）下列关于细胞的信息分子以及细胞间信息交流的叙述，正确的是（)A．信息分子可直接参与靶器官和靶细胞内的多种生理过程B．精子和卵细胞之间的识别和结合是通过直接接触实现的C．细胞间信息交流都需要依赖细胞膜上的糖蛋白才能实现D．病毒能识别特定的宿主细胞并寄生在细胞中，该过程体现了细胞间的信息交流【答案】B【分析】细胞间信息交流的方式可归纳为三种主要方式：1、相邻细胞间直接接触，通过与细胞膜结合的信号分子影响其他细胞，即细胞←→细胞，如精子和卵细胞之间的识别和结合。
2、相邻细胞间形成通道使细胞相互沟通，通过携带信息的物质来交流信息。
即细胞←通道→细胞。
如高等植物细胞之间通过胞间连丝相互连接，进行细胞间的信息交流。
3、通过体液的作用来完成的间接交流。
如内分泌细胞分泌激素→激素进入体液→体液运输→靶细胞受体信息→靶细胞，即激素→靶细胞。
【详解】A、信息分子只对细胞的代谢起调节作用，不直接参与细胞内的多种生理过程，A错误；B、精子和卵细胞之间的识别和结合是通过细胞膜直接接触实现的，B正确；C、高等植物细胞间可以形成通道使细胞相互沟通，即形成胞间连丝，这种信息交流方式不需要糖蛋白参与，C错误；C、病毒没有细胞结构，病毒能识别特定的宿主细胞并寄生在细胞中，该过程不能体现细胞间的信息交流，D错误。
中国医科大学2020年7月考试《细胞生物学》考查课试题答卷满分标准答案
中国医科大学2020年7月考试《细胞生物学》考查课试题试卷总分:100 得分:20一、单选题 (共 20 道试题,共 20 分)1.具有细胞分选功能的实验技术是A.电子显微镜技术B.层析技术C.电泳技术D.流式细胞术E.细胞融合技术答案:D2.能够观察肌动蛋白纤维外部形态的是A.荧光显微镜技术B.冰冻断裂技术C.负染电镜技术D.冰冻蚀刻技术E.质谱技术答案:C3.在差速离心中最先沉降的细胞器是A.细胞核B.溶酶体C.线粒体D.过氧化物酶体E.核糖体答案:A4.生物膜的特性是A.流动性和不对称性B.不流动性和对称性C.流动性和对称性D.不流动性和不对称性E.不流动性答案:A5.下列哪一类型的生物膜流动性好A.胆固醇含量高B.不饱和脂肪酸含量高C.脂肪酸链长D.鞘磷脂/卵磷脂比例高E.以上都不是答案:B6.RNA经核孔复合体输出至细胞质是一种A.被动转运B.主动转运C.易化扩散D.简单扩散E.共同运输答案:B7.原核细胞不具备下列哪种结构A.线粒体B.核糖体C.细胞壁D.DNAE.细胞膜答案:A8.内质网腔内能参与蛋白质折叠的是A.过氧化氢酶B.葡萄糖-6-磷酸酶C.蛋白酶D.分子伴侣E.磷脂酶答案:D9.下列具有极性的细胞器是A.高尔基体B.核糖体C.溶酶体D.过氧化物酶体E.内质网答案:A10.加速微管蛋白聚合的药物是A.秋水仙素B.紫杉醇C.长春花碱D.NocodazoleE.以上都不是答案:B11.参与染色体高级结构形成的组蛋白是A.H2AB.H2BC.H3D.H4E.H1答案:E12.在核仁以外区域合成的rRNA是A.45SrRNAB.18SrRNAC.5.8SrRNAD.28SrRNAE.5SrRNA答案:E13.关于Ig-SF CAM结构的错误叙述是A.不依赖于钙离子作用B.含有多个免疫球蛋白样结构域C.含有二硫键D.可介导同亲性及异亲性细胞粘着E.以上都正确答案:E14.胶原的氨基酸序列中,发生羟基化修饰的是A.甘氨酸和赖氨酸B.甘氨酸和脯氨酸C.脯氨酸和赖氨酸D.赖氨酸和丝氨酸E.脯氨酸和丝氨酸答案:C15.有丝分裂与无丝分裂的主要区别在于后者A.不经过染色体的变化，无纺锤体出现B.经过染色体的变化，有纺锤体出现C.遗传物质不能平均分配D.细胞核先分裂，核仁后分裂E.细胞核和核仁同时分裂答案:A16.下列不属于原癌基因的是A.sisB.C-mycC.rasD.cyclinDE.myb答案:D17.细胞的分化方向决定于A.受精卵B.8细胞时期C.卵裂期D.原肠期E.中、内、外胚层形成后答案:D18.细胞老化现象包括A.细胞内环境稳定性降低B.DNA复制能力降低C.蛋白质合成能力下降D.细胞分裂减少甚至停止E.以上都正确答案:E19.细胞凋亡发生的生化改变不包括A.细胞内Ca2＋浓度降低B.胞浆PH值发生变化C.蛋白质合成增加D.与切冬酶（caspase）家族有关E.DNA发生规则片段化答案:A20.细胞凋亡时DNA片段大小的规律是A.100bp的整数倍B.200bp的整数倍C.300bp的整数倍D.400bp的整数倍E.500bp的整数倍答案:B二、名词解释 (共 10 道试题,共 30 分)21.冰冻蚀刻电镜技术答案:冰冻蚀刻电镜技术：将冰冻断裂的样品的温度稍微升高，让样品中的冰在真空中升华，在表面上浮雕出细胞膜的超微结构，对浮雕表面进行铂-碳复型，并除去生物材料，置于载网上作电镜观察。
细胞膜冷冻蚀刻技术
细胞膜冷冻蚀刻技术
细胞膜冷冻蚀刻技术是一种高分辨率的电子显微镜技术，它可以直接观察生物细胞内部结构，为生命科学研究提供了重要的工具。
该技术的原理是将细胞样品快速冷冻至极低温度（通常为-180℃），使其固化，并保持其原始形态。
然后使用电子束或离子束在样品表面进行蚀刻，去除样品表面上的一层物质。
这样就可以得到一个非常薄的细胞片段，可以通过透射电子显微镜观察到其中的结构。
细胞膜冷冻蚀刻技术有许多优点。
首先，它不需要使用化学固定剂或染色剂，因此可以避免这些化学物质对生物样品造成的伤害和变形。
其次，由于样品被快速冷冻并保持在原始状态下观察，因此可以提供非常高分辨率和准确性的图像。
第三，该技术可以用于任何类型的生物细胞和组织。
然而，该技术也存在一些局限性和挑战。
首先，由于细胞膜冷冻蚀刻技术需要使用非常高的电子能量或离子束，因此可能会对样品造成伤害。
其次，该技术需要使用昂贵的设备和专业知识，因此成本较高。
最后，由于样品需要在极低温度下保持固化状态，因此样品制备和操作过程相对较为复杂。
细胞膜冷冻蚀刻技术在生命科学研究中有广泛的应用。
例如，在神经
科学领域中，该技术可以用于观察神经元突触之间的结构和连接方式；在生物医学领域中，该技术可以用于观察病毒、细菌等微生物内部结构；在植物学领域中，该技术可以用于观察植物叶片、根系等组织结构。
总之，细胞膜冷冻蚀刻技术是一种非常有价值的电子显微镜技术，在
生命科学研究中具有重要作用。
随着科学技术的不断进步和发展，相
信这项技术将会得到更广泛的应用和发展。
河南省南阳市2021-2022学年高一上学期学情诊断考试生物试题
B.糖类、脂肪、蛋白质等物质可以为人体生命活动提供能量
C.脂肪中C、H相对含量低于糖类，慢跑和游泳等运动有利于脂肪的燃烧，达到减肥的目的
D.膳食纤维能够促进胃肠的蠕动和排空，有利于降低人体内过高的血脂和血糖
【答案】C
7.冰冻蚀刻技术是将在超低温下冻结的组织或细胞骤然断开，依照组织或细胞的断裂面制成复模，用于电镜观察的技术。科学家常用冰冻蚀刻技术观察细胞膜中蛋白质的分布和膜面结构。下图是正在进行冰冻蚀刻技术处理的细胞膜，有关分析错误的是（）
C.衰老的细胞代谢减弱，水分减少，细胞核变大
D.蝌蚪尾部细胞消失导致细胞凋亡
【答案】D
31.下列关于有机分子中的单体和多聚体的叙述，正确的是（ ）
A.多糖、脂肪、蛋白质、核酸等多聚体是构成细胞生命大厦的基本框架
B.葡萄糖形成的多糖纤维构成了细胞骨架
C.RNA的单体是核糖，DNA的单体是脱氧核糖
D.生物大分子都是以碳链为基本骨架的有机物
C.将橙色的重铬酸钾溶液滴入B瓶中，可证明有酒精产生
D.乙组中B瓶先封口放置一段时间的目的是消耗B瓶中的O2以形成无氧的环境
【答案】C
25.多细胞生物的生长，除了依靠细胞数目的增多，还依靠细胞体积的增大。下列关于细胞体积的说法正确的是（ ）
A.不同生物细胞体积大小相差很大
B.细胞体积越大相对表面积越大，物质运输效率越低
B.小肠绒毛上皮细胞可以主动吸收葡萄糖、氨基酸等营养物质，体现了细胞膜控制物质进出的功能
C.胰岛B细胞分泌的胰岛素随血液运输到全身各处，与靶细胞膜表面的受体结合，将信息传递给靶细胞体现了细胞膜信息交流的功能
D.利用台盼蓝染色时，活细胞不会被染色，死细胞被染成蓝色，体现了细胞膜的流动性
细胞生物学(第三版) 知识要点
第1章绪论一、填空1．细胞生物学是从显微水平、超微水平、分子水平等3个水平上研究细胞生命活动的科学。
2．细胞最初由胡克在1665年首先发现的。
4.1953年沃森和克里克共同提出了DNA分子的双螺旋结构模型。
5．细胞生物学是研究细胞基本生命活动规律的科学，它在不同层次上研究细胞结构与功能、细胞增殖、分化、衰老与凋亡、细胞信号传递等内容。
6．生命体是多层次、非线性、多侧面的复杂结构体系，而细胞是生命体的结构与生命活动的基本单位，有细胞才有完整的生命活动。
7．生命体的生长、发育、遗传等生命活动的研究都要以细胞为基础。
核心是将遗和发育在细胞水平上结合起来。
8．当前细胞生物学研究中的三大基本问题：基本表达，结构体系和细胞器的组装，生命活动的调节9.生物科学的发展阶段：以形态描述学位主的生物科学时期：实现生物学时期；精细定位与定量的生物学时期三、简答题1．简述细胞学说的主要内容。
①认为细胞是有机体，一切动植物都是由细胞发育而来，并由细胞和细胞产物所构成；②每个细胞作为一个相对独立的单位，既有它“自己的”生命，又对与其它细胞共同组成的整体的生命有所助益；③新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生。
第2章细胞概述一、填空题1.细胞中含量最多的4种化学元素是C、H、O、N。
2.细胞中的生物大分子一般包括蛋白质、核酸和酶等。
3.酶分子的主要特性有高效、特异和可调。
4.真核细胞的超微结构可分为生物膜系统和遗传信息表达体系、细胞骨架体系三大类。
5.无机盐在细胞中的主要功能有：调节渗透压和维持酸碱平衡。
6.构成细胞的最基本的要素是细胞膜、遗传信息载体DNA与RNA完整的代谢系统。
7.由于发现了类病毒，有理由推测RNA是最早形成的遗传信息的一级载体。
8.目前发现的最小最简单的原核细胞是支原体。
9.原核细胞的核是原始状态的核，主要表现在没有明显可见的细胞核，同时也没有核膜和核仁，只有拟核，进化地位较低10.细胞是由细胞膜包围着含有遗传物质的细胞核所组成。
冷冻蚀刻技术
在冷冻断裂技术的基础上发展的技术
01 技术优点
03 操作方法
目录02 技术缺点冷冻蚀刻（freeze－etching）技术是在冷冻断裂技术的基础上发展起来的更复杂的复型技术。如果将冷冻 断裂的样品的温度稍微升高，让样品中的冰在真空中升华，而在表面上浮雕出细胞膜的超微结构。当大量的冰升 华之后，对浮雕表面进行铂一碳复型，并在腐蚀性溶液中除去生物材料，复型经重蒸水多次清洗后，捞在载网上 作电镜观察。
技术优点
冷冻蚀刻(Freezeetching)技术是从50年代开始发展起来的一种将断裂和复型相结合的制备透射电镜样品技 术，故而亦称冷冻断裂(Freezefracture)或冷冻复型(Freezereplica)。
它的优点在于： ①样品通过冷冻，可使其微细结构接近于活体状态； ②样品经冷冻断裂蚀刻后，能够观察到不同劈裂面的微细结构，进而可研究细胞内的膜性结构及内含物结构； ③冷冻蚀刻的样品，经铂、碳喷镀而制备的复型膜，具有很强的立体感且能耐受电子束轰击和长期保存。
技术缺点
它的缺点是：冷冻也可造成样品的人为损伤；断裂面多产生在样品结构最脆弱的部位，无法有目的地选择。
操作方法
1.预处理取新鲜组织块，大小为1.5～3～5mm，用2.5%戊二醛固定1～3小时。为防止冰晶形成，用30%甘油 生理盐水浸泡8～12小时。 2.冷冻断裂是在冷冻条件下使样品变得又硬又脆，用刀劈裂样品，暴露观察面。因为 是用刀劈裂的样品，断裂往往发生在细胞被冻结后较脆弱的部位，多数是沿细胞及细胞器的膜裂开。由于断裂面 是凸凹不平的，所以图像立体感强。冷冻断裂时，刀的作用在于劈裂，而不是切割，所以刀刃不必锋利，但不能 有缺口、油污和水份，还需保持清洁干燥。冷冻复型的断裂操作要在真空中进行，是因为真空对热传导性差，能 使样品较长时间维持在较恒定温度下进行断裂操作，同时也便于进行下步的蚀刻处理。
《细胞生物学》名词解释
第二章细胞生物学的研究方法名词解释：免疫荧光技术：将免疫学方法与荧光标记技术相结合用于研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。
包括荧光抗体的制备、标本的处理、免疫染色和观察记录等。
冰冻蚀刻技术：将样品断裂面结构的形貌印在复型膜上，再用电镜观察复型膜的方法。
主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面结构，图形富有立体感，且能更好地保持样品的真实结构。
原位杂交技术：用标记的核酸探针通过分子杂交确定特异核苷酸序列在染色体上或细胞中位置的方法称为原位杂交。
放射自显影技术：是用放射性同位素标记生物大分子前体物，并掺入细胞或机体中。
利用放射性同位素所发射出来的带电离子(α或β离子)作用于感光乳胶的卤化银晶体,从而产生潜影。
再经显影、定影后于显微镜下观察。
细胞中银颗粒所在部位即代表放射性同位素的标记部位。
原代培养：直接从机体取下细胞、组织或器官后立即进行的培养。
但也有把第1代至第10代以内的细胞培养统称为原代培养。
传代培养：将原代培养物转移到新的培养基上进行的培养。
细胞拆合：把核与质分离，然后把不同来源的核与质相互配合，形成核质杂交细胞。
细胞融合：是指两个或多个细胞融合成一个双核或多核细胞的现象。
单克隆抗体技术：是将产生抗体的单个B淋巴细胞同肿瘤细胞杂交最终获得单克隆抗体的技术。
第三章细胞基本知识概要名词解释：原核细胞：结构简单的细胞，没有膜包被的细胞核，如细菌等。
真核细胞：细胞核具有核被膜，细胞质中含有一些膜性细胞器的细胞。
古核细胞：是一些生长在极端特殊环境中的细菌，其形态结构和遗传结构装置与原核细胞相似，但有些分子进化特征更接近真核细胞。
细胞体积的守恒定律：器官的大小主要决定于细胞的数量,与细胞的数量成正比,而与细胞的大小无关,把这种现象为“细胞体积的守恒定律”。
第四章细胞质膜名词解释：生物膜：细胞内的膜系统与细胞质膜统称为生物膜。
膜骨架：指细胞质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白组成的网架结构。
第十五章细胞社会的联系名词解释：细胞表面：是指包围在细胞质外层的一个复合的结构体系和多功能体系，是细胞与细胞、细胞与外界环境相互作用并产生复杂功能的部位。
细胞生物学名词解释
细胞生物学名词解释细胞生物学研究方法1.冰冻蚀刻技术：将样品快速低温冷冻，在低温下进行断裂，然后用金属和碳喷镀，再用消化液把样品本身消化掉，收集复型膜于载网上进行电镜观察，常用于研究生物膜。
2.荧光漂白恢复技术：用高能激光束照射，使特定区域的荧光发生不可逆的淬灭，经过一段时间后，光漂白区域的荧光逐渐恢复到初始状态。
3.负染色：用重金属盐对电镜样品进行染色的技术，使得重金属盐沉积在样品周围，而样品不被染色，从而衬托出样品的精细结构。
细胞质膜1.血影（blood ghost）：红细胞经低渗处理后质膜破裂，释放出血红蛋白和胞内其他可溶性蛋白，这时红细胞仍保持原来的形状和大小，这样的结构成为红细胞影，简称血影。
2.“成斑”“成帽”现象：是监测细胞膜流动性的一种技术。
当荧光抗体标记细胞的时间达到一定长度，已均匀分布在细胞表面的标记荧光会重新分布，聚集在细胞表面的某些部位，称为“成斑”现象，进而聚集在细胞的一端，称为“成帽”现象3.脂质体：是根据磷脂分子在水相中形成稳定的双层脂分子球的趋势而制备的人工膜。
4.流动镶嵌模型：细胞膜由流动的双脂层和嵌在其中的蛋白质组成。
磷脂分子以疏水性尾部相对，极性头部朝向水相组成生物膜骨架；蛋白质或嵌在双脂层表面，或嵌在其内部，或横跨整个双脂层，表现出分布的不对称性。
物质的跨膜运输1.主动运输：一种需要消耗能量的物质跨膜运输过程。
被运输的物质与跨膜载体蛋白结合，通过载体蛋白构象改变，从而将底物逆着电化学梯度转运到膜的另一侧。
2.钙泵：在肌细胞的肌质网膜上含量丰富的跨膜转运蛋白，属于P型离子泵，利用A TP水解释放的能量将Ca2+从细胞质基质泵到肌质网内。
每消耗1个A TP，从细胞质基质泵出2个Ca2+。
3.Na+-K+泵：即Na+-K+A TPase，是镶嵌在细胞膜中具有A TP酶活性的主动转运Na＋、K＋的蛋白质。
由2个α亚基和2个γ亚基组成，β亚基不能直接参与离子跨膜运动，但帮助新合成的α亚基进行折叠。
细胞生物学名词解释
原生质(Protoplasm)：指细胞内所含有的生活物质(构成细胞的生活物质)，真核细胞包括细胞膜、细胞质和细胞核。
冰冻蚀刻技术(freeze etching)：又称冷冻蚀刻，冷冻复型(freeze-replica)、冷冻断裂(freeze-fracture)是一种由冷冻断裂与复型相结合的样品制备技术。
功能：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面结构，深度蚀刻用于观察细胞质中细胞骨架及其结合蛋白。
步骤：样品固定→冷冻→断裂→蚀刻→复型→剥离→捞膜→观察。
优缺点：①样品不经过化学固定，脱水、包埋等有机试剂的影响，能更好地保持样品的真实结构和天然特性；②由于断面通常是沿生物膜的结构薄弱处(膜的脂质层中间)劈开，故对于显示各类膜结构特别使用；③分辨力强，反差较好；④显示图象富有立体感；⑤样品可长期保存。其缺点是极易产生冰晶损伤，技术难度大，操作必须敏捷，不易掌握。
细胞生物学(cell biology)：是研究细胞基本生命活动的科学，应用现代物理学与化学的成就和分子生物学的概念和方法，以细胞作为生命活动的基本单位为出发点，在显微、亚显微和分子水平等不同层次上，研究细胞结构与功能，细胞增殖、分化、衰老与凋亡，细胞信号传导，真核细胞基因表达与调控，细胞起源与进化等主要内容，探索生命活动规律的学科，其核心问题是将遗传与发育在细胞水平上结合起来。
微分干涉显微镜(differential interference contrast microscope, DIC)：利用平面偏振光。偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究活细胞中较大的细胞器和颗粒的运动。
冰冻蚀刻技术名词解释
冰冻蚀刻技术名词解释冰冻蚀刻技术是一种将断裂和复型相结合的制备透射电镜样品的技术。
其原理是将样品置于-100℃的干冰或-196℃的液氮中，进行冰冻。
然后用冷刀骤然将样品断开，升温后，冰在真空条件下迅即升华，暴露出断面结构。
之后向断面以45度角喷涂一层蒸汽铂，再以90度角喷涂一层碳，加强反差和强度。
然后用次氯酸钠溶液消化样品，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜。
冰冻蚀刻技术能较好地保持含水样品如生物组织的自然状态，特别适用于研究膜的结构。
冰冻蚀刻技术主要用于透射电子显微镜观察的试样制备，特别适用于研究膜的结构。
该技术能较好地保持含水样品如生物组织的自然状态，使观察更接近于活体状态。
同时，冰冻蚀刻技术还可以观察到不同劈裂面的微细结构，进而可研究细胞内的膜性结构及内含物结构。
此外，冰冻蚀刻技术也可用于其他领域，如电子显微镜、光学显微镜和原子力显微镜等。
在材料科学领域，冰冻蚀刻技术可用于研究材料的断裂和表面结构，以及材料在低温下的性质和行为等。
总的来说，冰冻蚀刻技术在多个领域都有应用，尤其在生物学和材料科学领域中具有重要作用。
冰冻蚀刻技术的优点有：1.蚀刻精度高，可以达到微米级的精度，超过传统蚀刻技术。
2.处理时间短，冰冻蚀刻只需要几秒钟，而传统蚀刻技术需要数分钟。
3.处理表面平整，冰冻蚀刻完成后，表面均匀性更好，由于冰冻的影响，表面的粗糙度也能得到改善。
4.应用范围广，冰冻蚀刻技术可以用于多种材料的蚀刻，如陶瓷、金属、塑料等。
然而，冰冻蚀刻技术也存在一些缺点：1.在冷冻或者断层时可能造成样品的损伤，且断裂面多产生在样品结构最脆弱的部位，无法有目的地选择。
2.装置型号方面，专用装置优点在于操作方便，能连续制样，效率高。
但缺点是价格贵；附件装置价格虽便宜，但不能连续操作，效率低。
以上信息仅供参考，建议咨询专业人士获取更准确的信息。
冷冻蚀刻技术名词解释
冷冻蚀刻技术名词解释
冷冻蚀刻技术是一种微电子制造工艺，主要用于制备微透镜、微透镜阵列等微光学元件，也可以用于微电子器件的表面处理，以实现器件表面的光学特性改善。
这种工艺通过对材料进行特定的冷冻处理，然后在精确控制的条件下进行蚀刻，
使得材料表面形成有规律的微米级纳米级结构。
在冷冻蚀刻技术中，首先需要选择适当的材料。
这些材料可以是金属、半导体、绝缘物质等，且需要具有良好的光学性能和蚀刻性能。
然后，将选定的材料在极低温条件下进行冷冻处理。
处理过程中，可以通过调整冷冻温度、冷冻时间等参数，来控制冷冻层的厚度和结构。
冷冻过后的材料将进行蚀刻处理。
蚀刻采用物理气相沉积或化学气相沉积等方法，这些方法可以实现精确控制的蚀刻过程。
蚀刻过程中，可以通过调整蚀刻剂的类型、浓度、蚀刻时间等参数，来实现对蚀刻深度和形状的精确控制。
经过冷冻和蚀刻的材料表面将形成有规律的微米级纳米级结构，这种结构可以有效改善材料的光学性能，如反射率、透过率、折射率等。
由此，冷冻蚀刻技术
可以在微光学、微电子等领域发挥重要作用。
将冷冻蚀刻技术应用于微光学元件制备，不仅可以提供高精度的微透镜、微透镜阵列等，还可以扩大元件的光线采集范围，提高光线利用率，降低能耗。
同时，冷冻蚀刻技术对光学元件的表面处理，可以有效改善元件的抗反射、抗眩光、抗
紫外线性能，进一步增强元件的应用价值。
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4、冰冻蚀刻法。
所谓冰冻蚀刻，是把样品放在-196℃的液态氮中迅速冷冻，然后加温到-100℃，使样品变得非常脆弱易碎，再用预先也冷却到-196℃的非常锋利的玻璃断口切割经冷冻的样品，这样使样品在最容易断裂的部位断开（如果是微生物细胞，则多半是沿内膜中部），然后让样品放在真空条件下升华掉断口处的冰，最后用重金属喷镀该断口表面，即可用电子显微镜观察其结构。
用这种制备方法的优点是可以避免在固定、脱水和包埋过程中造成细胞结构的人为改变而形成的假象。
冰冻蚀刻（freeze-etching）亦称冰冻断裂（freeze-fracture）。
标本置于-100˚C的干冰或-196˚C的液氮中，进行冰冻。
然后用冷刀骤然将标本断开，升温后，冰在真空条件下迅即升华，暴露出断面结构，称为蚀刻（etching）。
蚀刻后，向断面以45度角喷涂一层蒸汽铂，再以90度角喷涂一层碳，加强反差和强度。
然后用次氯酸钠溶液消化样品，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜（replica）。
复膜显示出了标本蚀刻面的形态，在电镜下得到的影像即代表标本中细胞断裂面处的结构。
和投射电子显微镜是靠透过物体的电子成像不同，扫描电子显微镜的成像是靠观察物体表面发射的电子。
扫描电子显微镜是用聚焦得很细的电子束在样品表面扫描。
电子激发样品表面的原子放电，释放出微细的电子簇（二次电子），用灵敏的检测装置可以捕获它们，然后通过类似电视机的原理将样品图象呈现出来。
二次电子对检测器的作用取决于样品表面的性质，当电子激发样品表面突起部位时，会有大量二次电子进入检测器，而表面凹陷处则只有少量二次电子进入，所以可以显出反差突出、明暗清晰的三维图象。
而且它的成像焦深较长，图象的立体感强，和肉眼所见差别不大。
制备扫描电子显微镜的样品也先要经过固定、脱水等处理，以免在真空条件下变形失真，为了获得较多的二次电子，表面要喷涂重金属和碳原子。