细菌培养操作

合集下载
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

细菌培养

灭菌物品:试管、枪头、平皿、ep管、涂布棒、培养基。

无菌室灭菌:桌子、凳子用质量分数为2%-3%的来苏水擦洗,再用紫外灯照射15分钟。LB培养基的配制:(用于肺炎克雷伯杆菌)

(1)称取NaCl 1g/100ML

胰蛋白胨(Tryptone)1g/100ML

酵母提取物(Yeast Extract)0.5g/100ML

琼脂1.5-2g/100ML (只在配固体培养基时加)

(2)加热溶解

(3)调PH 7.2-7.4 (用NaOH)

(4)分装,加塞,包扎

(5)灭菌0.1Mpa 121.3摄氏度20分钟

(6)无菌观察:将已灭好菌的培养基放入37摄氏度的温箱中培养1-2天,

若无菌生长放入冰箱储存备用。

肉汤培养基的配置:(用于金葡菌)

(1)营养肉汤18g/100ML

(2)其余步骤同上,但不用调PH

玻璃器皿须用干热灭菌法灭菌:

(1)试管:每个管口用铝铂纸包好,2个一组用报纸包好。

平皿:每组5个,用报纸包好

(2)将待灭菌的物品放入烘箱中,但摆放不要太挤,不要接触内壁的铁

板,以防止报纸着火。

(3)升温至160摄氏度,2小时

(4)降温,切断电源自然降温,70摄氏度以下打开箱门,取出物品,防

止温度骤降导致玻璃器皿炸裂。

镜检:

(1)涂片:左手拿试管,右手拿接种环,将接种环在酒精灯上烧红灭菌,烧至伸入试管的部位。用右手的小手指及手边缘部位拔出试管的塞子,将试管口在火焰

上烧一圈,然后将接种环伸入试管内取出一环,迅速将试管口在火焰上烧一圈,

塞上塞子(此过程塞子一直在手中)。将接种环上的菌液轻轻涂在平板上,均匀

涂成直径为1 cm的圆。(若在涂的过程中出现回缩现象说明载波片没有洗干净)(2)干燥:涂片在室温下自然干燥,有时为了加快干燥,可将标本面朝上,手持载波片的一端,在酒精灯的火焰上方微微加热,切勿靠近火焰,热度以不宜烫手

为宜。

(3)固定:加热法:标本面朝上,在酒精灯火焰外层来回通过3-4次,共约2-3秒,并不时以载波片反面触皮肤,以热而不烫为度,放置待冷后,进行染色。

(4)染色:标本固定后采用合适的染料进行染色,一般1-3分钟。我们用沙红(也叫番红)safranine 染色2分钟。

(5)水洗:一般用自来水,将载波片倾斜,沿着上侧使水流缓缓冲下染液,一般以冲下来的水基本无色为度,(不要对者标本直接冲,以免冲去被检标本)(6)干燥:室温中自然干燥或用吸水纸轻轻敷在标本上吸干,干透后镜检(不可在标本上擦拭,以免损伤标本)。

显微镜观察:

(1)先用低倍镜观察,将载物台升至最高,然后再用粗准焦螺旋慢慢下降,当

看到有物象一闪而过时,用细准焦螺旋,找出标本的范围,再换用高倍镜

观察,找到最适宜观察部位后换用油镜观察:1.粗调将载物台下降2㎝,

将油镜镜头转至正下方,在载波片标本上的镜检部位滴上一滴香柏油。2.

从侧面观察,慢慢升高载物台,使油镜镜头与标本相连(油镜镜头不能压

到标本)3.从目镜观察,先调节光线,再用细准焦螺旋将载物台慢慢下降,

直至物象清晰为止。

(2)观察完毕,先用搽镜纸拭去镜头上的香柏油,再用搽镜纸醮取少许二甲苯檫去镜头上的油迹,然后用搽镜纸搽去残留在镜头上的二甲苯。

(3)样本片的清洁:有盖玻片的用沾有少量二甲苯的擦镜纸把油檫干净,无盖玻片的可用拉纸方檫油(先将檫镜纸盖在油滴上,再滴上二甲苯,平拉试

纸,反复几次)

(4)把带菌的搽镜纸、玻片放入肥皂水中煮沸,灭菌,清洗。

(5)细菌的镜下形态描述:

第二代:

肺炎克雷伯(Kp):被染成粉红色,油镜下是分散的小杆状,边缘

整齐

金葡菌(S A):粉红色的小圆点,有的是单个存在的有的是以小葡

萄形存在的

第三代:

肺炎克雷伯(Kp):与第二代相比形状稍大些,菌的长度增加,宽

度略增,有的多个在一起

金葡菌(S A):与第二代相比,葡萄串增多

(6)通过镜检,选取细菌生长较好的一组,即生长相对较大,较丰满的一组,以备复苏下一代

观察细菌在平板上的生长状况:

(1)配置固体培养基

(2)倒平皿:将灭菌后的培养基冷却至50摄氏度左右

倒入平皿中。酒精灯火焰旁拔出塞子;手拿锥形瓶,

瓶口通过火焰灼烧灭菌;左手持培养皿,打开盖子,

右手将锥形瓶中的液体倒入约15ML,盖上盖子,

冷却备用(在涂布前4-5小时制作好,倒放于恒温

箱中,除水)

(3)接种:制备稀释液(最好10倍稀释一次),如取菌

液100uL加到900uL培养基中则稀释了10倍。吸

取每一个稀释浓度的菌液100uL,用无菌涂布棒涂

布,涂布时可转动平皿使涂布均匀,室温放置

20-30min使菌液充分吸入培养基中。

(4)培养:接种好的平皿倒置,放入恒温箱中,培养18-24

小时,观察生长菌落。

相关文档
最新文档