CytoFLEX流式细胞分析仪快速入门
CytoFLEX流式细胞分析仪快速入门
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3. 验证 USB 配置密钥已连接至 USB 端口。
注意
可能会出现仪器损坏。从流体容器托架取下鞘液容器，并且远离仪器进行充 注，以防止鞘液溢出损坏仪器电路。
4. 从流体容器托架取下鞘液容器，并用提供的鞘液填充鞘液容器。 5. 如有必要，拆下右侧盖子，并填充带有 1 部分 Contrad 70 和 1 部分 DI 水混合的深度清
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 启动
2. 请确保所有管线和电缆根据颜色代码连接至仪器。
b
c
d 1. 废液液位传感。与废液传感器电 缆相连。 2. 流动室废液排出。与流动室废液 导管相连。 3. 鞘液液位传感。与鞘液传感器电 缆相连。 4. 废液排出。与废液导管相连。 5. 鞘液回流。与鞘液导管相连。 6. 鞘液流入。与鞘液导管相连。
洁溶液。
警告
漂白剂具有化学伤害危险。为避免接触漂白剂，请使用包括防护眼镜、手套和 适当的实验室服装在内的屏障保护。使用化学药品前，请参阅有关化学品暴露 的安全数据表以了解详细信息。
6. 如有必要，清空废液容器。将 400 mL 5% 至 6% 的漂白剂添加至废液容器。
仪器启动
1. 打开仪器后盖上的电源开关，它位于电源电缆正上方。
8. 使用“阈值”工具 ，或选择
9. 使用“标尺”和“增益”工具 至所需位置。
设置辨别以消除图上不需要的细胞群。
，或选择
以将图上显示的细胞群移动
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 调节设置和补偿
调节设置和补偿
“图表”、“门控”和“统计资料”管理
1. 若要修改图表、门控、统计表或细胞群层级属性，请选择该图表并右击以选择属性 选项。参见以下示例。 • 图表属性 （右击门控）
beckman cytoflex流式细胞仪基本原理
beckman cytoflex流式细胞仪基本原理
Beckman Coulter CytoFLEX流式细胞仪是一种基于流式细胞术原理的仪器，用于分析和计数细胞悬浮液中的细胞。
其基本原理包括以下几个步骤：
1. 流体流动：细胞悬浮液被注入到仪器中，并通过液体系统被送入流动腔室。
流体的流动会使细胞在一个个单独的微小流速中依次通过腔室。
2. 光源激发：流过流动腔室的细胞会经过一束高能、单色的激光光束的照射。
光束能够激发细胞中存在的特定荧光分子或染料。
3. 荧光检测：被激发后，细胞会发射特定波长的荧光信号。
仪器会使用一套光学元件来收集并分离不同波长的荧光光子，然后传送到光电增强器中进行放大。
4. 光电转换：光电增强器将收到的荧光信号转化为电信号，并经过调制和放大。
5. 数据采集：经过光电转换后的信号会通过数据采集系统，数字化并存储。
这些数据会被分析软件解读并生成相关的结果和图形。
通过以上步骤，CytoFLEX流式细胞仪可以提供细胞的计数、表型分析、蛋白质表达分析以及细胞周期等信息。
同时，它还
可以通过设定门控条件来筛选出特定的细胞亚群，实现更精确的细胞分析。
FACAria流式细胞仪操作程序
、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml 注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3, 喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1, 启动电脑，密码BDIS,点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3, 液流启动：Cytometer --- FiuidSetup1 ）气路（透明管）、液路（蓝色管） ,从乙醇桶上拔下,插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置,旋转至12 点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4, 喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup --- 70um （选择当前使用的喷嘴大小）5, 液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl,数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg ，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10, 、11 、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击StreamSpot ，锁死数值，保持液流稳定。
Dropl :实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
流式细胞仪的使用程序
流式细胞仪的使用程序------血液病实验诊断中心一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。
2.打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。
打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS 或FACSFlow),合上压力阀。
确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。
3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。
排出过滤器内的气泡。
4.如果需要打印,打开打印机电源。
5.打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6.执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。
7.分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。
待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。
二.预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1.从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2.选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。
从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x 轴和y轴参数。
3.选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。
4.将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuestFolder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
. 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测, EXP用于细胞表面标志分析。
流式细胞仪操作方法
一、样品制备1、取样（大约1×106 cells），离心弃上清，以PBS洗两遍，逐滴加入1ml 70%的冷乙醇固定细胞，﹣20℃冻存过夜。
分析时，离心弃上清，以PBS洗两遍，加入100μl的Rnase（GenScript试剂A），37℃水浴30min，然后再加入400μl的PI染液（GenScript试剂B），在4℃避光条件下孵育30min后即可上FCM检测。
每个样品至少获取2×104cells，二、上流式测细胞1.1、打开液流抽屉，确认气压阀处于减压状态；打开金属挡板；取出鞘液桶，倒掉废液，将鞘液桶加至2/3满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFLow），拧紧鞘液桶盖，安上金属挡板，保证管路畅通无扭曲。
检查废液桶，将废液桶的气路和液路的快速连接阀打开，倒掉废液（加鞘液一定要倒废液）向废液桶中倒入400ml浓度为10%的次氯酸钠溶液，合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
1.2、依此接通电源、打开稳压器电源（指示灯由bypass变Ac putput）、变压器电源，稳定5分钟。
将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY。
如果需要打印，打开打印机电源。
打开电脑（密码：BDIS），等待屏幕显示出标准的苹果标志（先开仪器，后开电脑主机）。
1.3、将压力阀置于加压位置，轻拍过滤器，使气泡位于滤器的上方，打开管路开关，将过滤器中的气泡排除，关闭管路开关。
若滤器管路中有气泡，打开连接头，挤出鞘液，以排除气泡。
关闭液流抽屉。
执行仪器PRIME功能一次，以排除Flowcell中的气泡（反向压力使鞘液从进样针中流出）。
结束后自动STANDBY，5分钟后即可进行试验。
2.1、从苹果画面中选取CELLQuest，最大化，选散点图标，打开，Plot type选择Acq-analysis，X参数和Y参数分别取FSC-H、SSC-H（选择散点图主要是确定所需细胞的细胞群）。
cytoflex操作规程
cytoflex操作规程CytoFLEX流式细胞分析仪是一种高性能、多参数流式细胞仪，广泛应用于细胞分析、免疫学研究、荧光染色等领域。
为了保证操作安全和数据准确性，以下是CytoFLEX 操作规程。
1. 开机准备a. 检查仪器电源是否插入正确，打开电源开关。
b. 检查电脑是否连接到CytoFLEX流式细胞分析仪。
c. 启动分析软件，如CytExpert。
d. 检查流式细胞分析仪的滤光片配置是否正确。
2. 设定仪器参数a. 在主界面上选择“Acquisition”进行实验参数设置。
b. 选择合适的波长和功率来激发和检测样品中的荧光染料。
c. 根据样品类型和实验要求，设置正确的流速和取样量。
3. 样品制备a. 根据实验要求，选择合适的细胞悬液和染色方法。
b. 遵循标准的样品制备过程，包括细胞计数、离心和悬浮液的制备。
c. 样品处理过程中要保持无菌条件，避免污染和细胞损伤。
4. 样品加载a. 在样品管中加入合适的染料和细胞悬液。
注意避免气泡的产生。
b. 将样品管放入样品架中，确保样品管与固定夹密封紧密。
5. 调节仪器设置a. 使用设置好的仪器参数进行样品调试。
b. 如有需要，调整观察点、光强和阈值，以获得最佳的数据。
6. 开始实验a. 点击软件界面上的“Acquisition”按钮，开始采集样品数据。
b. 实时监控样品流速和染料发光情况，如有异常情况要及时停止实验检查。
7. 数据保存和分析a. 实验完成后，保存数据文件到指定的位置。
b. 使用分析软件对采集到的数据进行后续分析和图表绘制。
8. 清洁和关机a. 关闭采集软件和电脑。
b. 使用清洁剂和纸巾擦拭仪器外壳、玻璃仪器件和样品台面。
c. 关闭CytoFLEX流式细胞分析仪的电源开关。
以上是CytoFLEX操作的基本规程，用户在使用时要按照操作要求仔细操作，确保数据的准确性和仪器的正常运行，同时在实验过程中遵循实验安全规范，确保操作的安全性。
流式细胞仪操作流程(单标)
流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。
（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。
3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。
以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。
4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。
三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。
2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。
3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。
4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。
Partec CyFlow Space标准化操作规程
CyFlow Space流式细胞仪操作规程一、开机前检查1.确认所有线缆连接正常。
2.确认废液瓶已被清空，鞘液瓶装入2/3鞘液。
3.确认废液瓶内已加入消毒剂。
二、开机顺序1.按住UPS开关按钮2秒钟，至绿色指示灯亮起。
2.打开流式细胞仪主机电源开关及激光开关。
3.打开计算机主机及显示器开关。
4.打开打印机开关。
三、软件使用步骤1.双击计算机桌面上的“FloMax” 图标，显示欢迎使用界面，点击“确定”（如下图）进入软件，仪器自动初始化。
2.点击软件界面中底部按钮行中的“仪器设臵”按钮，随后软件将弹出仪器设臵相关的菜单。
3.选择“读取”按钮，在“C:\ FloMax”文件夹中选择“*.ist”4.在软件界面中的右上角有两个“关闭”按钮，点击下方的灰色“关闭”按钮，并确认软件初次打开时的默认模板被关闭。
5.读取模板：在软件界面中的左上角“文件”菜单中点击“打开”，选择“C：\FloMax”文件夹中的“*.fcs”。
6.此时仪器处于待机状态，可以上样检测标本。
四、样本处理及检测操作步骤1.标本处理：取约0.5cm2样品放于平面塑料培养皿内，加500ul DNA 1 Step试剂，使用尖锐的刀片切割样品，之后再加入1500ul的DNA 1 Step试剂，将样本及液体用滤网过滤到样品管中，避光染色1min。
2.将样品管插入仪器后，自动开始样品测试，采集的数据达到实验要求后，可以直接拔下样品管，终止测试。
仪器会执行一次自动清洗，结束之后，可以进行下一个测试。
五、保存检测结果1.待每个测试结束并自动清洗完成后，可对检测结果进行保存。
点击“FloMax”软件中“文件”菜单中的“保存”按钮,选择“本地磁盘(D:)”并将检测结果保存在“检测结果”文件夹中，名称可按需输入。
六、生成并打印中文报告1.所有检测结束后需要关闭所有结果或模板。
2.将已经保存并需要生成报告的结果调入FloMax软件，调入方式和“读取模板”的方式相同。
FACAria流式细胞仪操作程序
一、准备工作1，清洗偏转板，防止盐离子影响电荷加载，电流偏转。
1）用超纯水沾湿医用棉签，擦拭偏转板所有金属物件。
再用干棉签擦干。
2）5ml注射器吸超纯水，清洗缝隙。
用滤纸先吸水，再用干棉签擦干。
2，鞘液桶加液3，喷嘴超声，喷嘴放入超纯水中，超声2min。
用滤纸吸干水分，晾干。
二、开机启动1，启动电脑，密码BDIS，点开软件，无密码2，机箱侧面依次打开总机开关，蓝色、红色激光。
3，液流启动：Cytometer----FiuidSetup1）气路（透明管）、液路（蓝色管），从乙醇桶上拔下，插到鞘液桶2）闭合喷嘴从侧面放入到喷嘴位置，旋转至12点方向3）取下闭合喷嘴4）将超声过的喷嘴放入喷嘴位置。
4，喷嘴压力切换：菜单栏中Sort---SortSetup----70um（选择当前使用的喷嘴大小）5，液流调整：点开电脑界面中70um图标栏里的Stream，从打叉状态变为打勾。
查看是否都处于正常状态：1）打开仪器机箱，查看液流是否流到废液槽。
如果偏离，拧开两边的螺丝，左右推动使液流到达槽内，拧好螺丝。
2）查看电脑界面，液流图像是否稳定，如果有黑白灰图片变化，用棉签擦拭偏转板上方3）查看电脑界面，液流是否在中央，如果不是，可以手动调整仪器摄像头，或者重新插好喷嘴。
4）机箱中查看激光束是否完好通过，用干棉签挡住通过位置，如果看到激光射出，则正常。
然后关闭主机箱外盖。
调整液流：通过调整振幅来实现。
1）振幅Ampl，数值调大，使液流断滴在上1/3处，即2滴连续液流。
2）频率Freg，一般不动。
3）Gap：当喷嘴为70um时，数值一般为7、8、9。
100um时，为10,、11、12。
4）当Ampl和Gap都稳定时，把实际值（后面）手动输入到确定值的框内（前面）。
5）点击StreamSpot，锁死数值，保持液流稳定。
Drop1：实际值和确定值，变化幅度保持在10以内。
Gap：实际值和确定值，变化幅度保持3以内。
此视为稳定液流。
CytoFLEX常规操作流程
CytoFLEX常规操作流程CytoFLEX常规操作流程开机流程1.检查鞘液和废液容器。
验证并确认鞘液容器中有足够的鞘液且废液容器已排空。
2.打开细胞分析仪背面的电源总开关，等待细胞分析仪完成启动，再打开电脑。
3.登入Windows 操作系统并选择CytExpert 桌面图标，以打开软件。
4.检查屏幕下方的仪器状态栏，无异常提示即可点击采集栏中的初始化按钮，初始化仪器。
5.在菜单栏中点击细胞仪，在下拉菜单中选择开机流程，按提示完成开机操作：将装有约2ml去离子水放置于上样器中，点击开始。
仪器质控流程1.取质控微球，摇匀后滴一滴微球至装有500μl PBS的样品试管中，混匀，上样。
2.点击菜单栏中的质控，进入质控流程。
3.在批号栏中选择与质控微球对应的靶值文件，点击开始，等待仪器自动完成质控。
注：如果没有对应的靶值文件，或者QC不通过，请联系仪器工程师。
关机流程1.准备好一管有效氯浓度为0.5～1%的次氯酸洗液及一管去离子水。
2.点击菜单栏中的细胞仪，在下拉菜单中点击每日清洗。
3.根据提示，先上次氯酸清洗液，选择清洗时间(常规检测洗3-5min，样本粘性比较大的实验比如周期凋亡等适当延长到6-8min)，然后再选择等时间的去离子水清洗即可。
仪器维护1.每天关机前请参照关机流程完成每日清洗操作。
2.每周一次对于样品台进行清洁。
用有效氯浓度为0.5%左右的漂白水擦拭样品台表面，以及半自动进样器底部。
3.至少每月执行一次深度清洗，或者仪器超过两周未使用时也建议进行深度清洗。
将仪器置于待机模式后，在菜单栏中的细胞仪选项下选择深度清洗，按照提示完成深度清洗即可。
允许清洁溶液留在流动室中约30 分钟。
如果您需要延长清洁时间，请勿超过24 小时。
在深度清洁循环期间，该装置的电源可关闭。
仪器清洗瓶中所用的Contrad 70清洗液使用十次或半年一换。
实验流程1.准备好实验样本，了解实验所用的染料特性，选择正确的通道检测。
快速掌握使用流式细胞仪进行细胞分析的方法
快速掌握使用流式细胞仪进行细胞分析的方法细胞分析是生命科学中的重要研究手段之一，而流式细胞仪作为一种高效、准确的细胞分析工具，被广泛应用于细胞学、免疫学、生物医学等领域。
本文将介绍如何快速掌握使用流式细胞仪进行细胞分析的方法，以帮助读者更好地利用这一技术进行科研工作。
一、流式细胞仪的基本原理流式细胞仪是一种能够实现细胞的快速、高通量分析的仪器。
其基本原理是将细胞悬浮液通过细管引入流式细胞仪中，然后通过激光照射细胞，测量细胞在不同参数上的散射和荧光信号，从而获取细胞的相关信息。
二、准备实验样本在使用流式细胞仪进行细胞分析之前，首先需要准备好实验样本。
样本可以是细胞悬浮液，也可以是组织细胞的单细胞悬浮液。
为了保证实验的准确性，样本的制备应遵循一定的操作规范，如细胞的处理、染色等。
三、设置流式细胞仪参数在进行细胞分析之前，需要根据实验的需要设置流式细胞仪的参数。
主要包括激光的选择和功率、滤光片的选择、检测通道的设置等。
不同的实验目的和细胞类型可能需要不同的参数设置，因此在设置参数时应根据实际情况进行调整。
四、样本的注射和分析在样本准备和参数设置完成后，可以开始进行样本的注射和分析。
首先将样本注入流式细胞仪的样本室中，然后启动仪器进行分析。
在分析过程中，需要确保样本的流速适中，以避免细胞堵塞或过度稀释。
同时，还需要注意细胞在仪器中的稳定性，避免因仪器震动等原因导致数据的不准确。
五、数据分析与结果解读流式细胞仪在分析过程中会生成大量的数据，因此需要进行相应的数据分析与结果解读。
常见的数据分析方法包括细胞计数、细胞分类、细胞周期分析、蛋白质表达水平分析等。
通过对数据的分析与解读，可以得出相应的结论，并进一步指导后续的研究工作。
六、常见问题及解决方法在使用流式细胞仪进行细胞分析的过程中，可能会遇到一些常见问题，如细胞堵塞、信号干扰等。
针对这些问题，可以采取相应的解决方法，如调整样本的稀释倍数、优化参数设置等。
CytoFLEX常规操作流程
CytoFLEX常规操作流程开机流程1.检查鞘液和废液容器。
验证并确认鞘液容器中有足够的鞘液且废液容器已排空。
2.打开细胞分析仪背面的电源总开关，等待细胞分析仪完成启动，再打开电脑。
3.登入 Windows 操作系统并选择 CytExpert 桌面图标，以打开软件。
4.检查屏幕下方的仪器状态栏，无异常提示即可点击采集栏中的初始化按钮，初始化仪器。
5.在菜单栏中点击细胞仪，在下拉菜单中选择开机流程，按提示完成开机操作：将装有约2ml去离子水放置于上样器中，点击开始。
仪器质控流程1.取质控微球，摇匀后滴一滴微球至装有500μl PBS的样品试管中，混匀，上样。
2.点击菜单栏中的质控，进入质控流程。
3.在批号栏中选择与质控微球对应的靶值文件，点击开始，等待仪器自动完成质控。
注：如果没有对应的靶值文件，或者QC不通过，请联系仪器工程师。
关机流程1.准备好一管有效氯浓度为0.5～1%的次氯酸洗液及一管去离子水。
2.点击菜单栏中的细胞仪，在下拉菜单中点击每日清洗。
3.根据提示，先上次氯酸清洗液，选择清洗时间(常规检测洗3-5min，样本粘性比较大的实验比如周期凋亡等适当延长到6-8min)，然后再选择等时间的去离子水清洗即可。
仪器维护1.每天关机前请参照关机流程完成每日清洗操作。
2.每周一次对于样品台进行清洁。
用有效氯浓度为0.5%左右的漂白水擦拭样品台表面，以及半自动进样器底部。
3.至少每月执行一次深度清洗，或者仪器超过两周未使用时也建议进行深度清洗。
将仪器置于待机模式后，在菜单栏中的细胞仪选项下选择深度清洗，按照提示完成深度清洗即可。
允许清洁溶液留在流动室中约 30 分钟。
如果您需要延长清洁时间，请勿超过 24 小时。
在深度清洁循环期间，该装置的电源可关闭。
仪器清洗瓶中所用的Contrad 70清洗液使用十次或半年一换。
实验流程1.准备好实验样本，了解实验所用的染料特性，选择正确的通道检测。
2.如果之前已经建有相应的实验方案，在导航窗口中点击打开实验，然后打开之前建好的xit格式的实验文件，接着在试管栏中添加新的实验管，上样即可。
流式细胞仪操作规程
流式细胞仪操作规程一、开机程序1、检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。
2、打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。
打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用超纯水，特殊情况需要用PBS），合上压力阀。
确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。
3、将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热 5－10 分钟。
排出过滤器内的气泡。
4、如果需要打印，打开打印机电源。
5、打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
6、执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。
7、分析样品时，先用 FACAFlow 或 PBS 进行 HIGH RUN 约 2 分钟，以去除可能的管路残片。
二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1、从苹果标志中选择 CELLQuest，建一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
2、选取屏幕左列绘图工具中的 Dot plot，绘出一个或多个 Dot Plots（点图）。
从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和 y 轴参数。
3、选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram（直方图）。
4、将此视窗命名后储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder\EXP 文件夹中（也可以自己取名，但每个实验人员只能建立一个文件夹），下次进行相同实验时可直接调用。
三．用 CELLQuest 进行仪器的设定和调整1、从苹果画面中选取 CELLQuest，进入 CELLQuest 后在 File 指令栏中打开合适的获取模式文件。
2、从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取 Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。
CytoFLEX简易操作指南
CytoFLEX简易操作一、检查鞘液桶、废液桶鞘液桶：废液桶：鞘液桶补充足够的鞘液，保证鞘液桶和废液桶，盖子连接完好。
鞘液：仪器运行时电脑右下角图标会显示是否完好：绿色即完好，否则会呈红色，并发出刺耳的警报声。
二、开机（建议最长两周开机一次）1.打开仪器开关（开关按键在仪器左后方）2.打开工作站开关3.打开显示屏开关三、开软件：双击打开“Cy tExpert”软件。
打开后界面如下图所示：四、做液路清洗1、上超纯水2 mL离心管装2/3的超纯水即可，装在上样器上即可。
离心管盖子一定要呈打开状态。
2、执行细胞仪3、开机流程4.确认已将超纯水装进上样器点击“初始化”点击“开始”显示“液路自检”开机流程完成，点击“关闭”。
五、做质控（QC），建议一到两周做一次1、配制QC液1滴beads(用前混匀)+250 微升纯水，涡旋混匀。
（4摄氏度最多保存一周，最好现配现用），配好的QC液，转移到2 mL离心管，装到上样器上，切记保持离心管盖子打开状态。
Beads：不用的时候4摄氏度保存。
2、质控/标准化——启动质控/标准化——设置——靶值库——选择咱们所购买的QC beads批号（新批号导入）。
注：工程师装机时已经导入现有的这瓶QC beads批号，可省略这一步骤。
等买了新的QC beads，需执行此操作。
质控/标准化：启动质控/标准化：靶值库：导入QC批号：左上角为现有的质控微球的批号。
3、待机——初始化——选择批号——开始待机：选择批号：开始：仪器自动按照流程显示进行数据图：4、完成后出现质控报告质控通过，完成。
绿色对勾，即质控通过。
红色叉叉，则质控不通过。
5、质控完成后，执行清洗（利用鞘液清洗进样器口，不用外加鞘液）清洗：清洗位置：六、清洗质控微球质控微球残留在液路中，有可能会影响实验结果，因此需要进行质控微球清洗。
可做FSC*SSC，FITC-A*count，Time*FITC-A的清洗方案，建立一个名为cleanse的方案保存在桌面，方案包含FSC*SSC散点图和直方图，依次（1）蓝色清洗液跑2分钟，需手动停止；（2）超纯水4分钟（一般比蓝色清洗液多两分钟），需手动停止；直到直方图105信号强度左右无信号峰为止，若有峰，继续重复清洗过程。
流式细胞仪教程共80页文档
流式细胞仪教程
16、人民应该为法律而战斗，就像为 了城墙 而战斗 一样。 ——赫 拉克利 特 17、人类对于不公正的行为加以指责 ，并非 因为他 们愿意 做出这 种行为 ，而是 惟恐自 己会成 为这种 行为的 牺牲者 。—— 柏拉图 18、制定法律法令，就是为了不让强 者做什 么事都 横行霸 道。— —奥维 德 19、法律是社会的习惯和思想的结晶 。—— 托·伍·威尔逊 20、人们嘴上挂着的法律，其真实含 义是财 富。— —爱献 生
流式细胞仪上机培训手册
流式细胞仪上机操作培训手册一、样本处理以PBMC表面抗原的流式检测步骤为例1)取样。
取新鲜提取或冻存后复苏的PBMC；2)编号。
根据实验设计，标记好流式管，如每份PBMC设两管：a)1号管：相应同型对照；b)2号管：CD3,CD4,CD8,CD56四标管；3)加样。
用移液器取100ul细胞/管（约1×106个细胞/管），分别加到已经标记好的流式管底部；4)洗涤。
加入1ml PBS/管，涡旋1600rpm/min，离心6min；5)染色。
弃上清，加入100 μl PBS/管涡旋混匀细胞，并根据实验设计，向各流式管中加入相应的荧光素标记抗体，混匀，室温避光孵育30min（操作尽量保持在避光条件下进行。
）6)洗涤。
加入1ml PBS/管，涡旋1600rpm/min，离心6min；7)重悬。
弃上清，加入0.5ml PBS/管，混匀，上机检测(可选择BD FACSCantoII或BD Accuri C6)。
（注：若不能及时上机，应加入4%多聚甲醛固定，并于4℃避光保存。
）8）试验结果分析。
（注：实验过程中如果进行多色标记，需要调节荧光补偿）。
参考值：二、上机检测BD FACSCanto II简要操作流程启动流式细胞仪1 打开流式细胞仪电源2 启动计算机，打开软件登录3 确保软件连接到流式细胞仪必要时，点击Cytometer > connect检查液体水平1 启动流式细胞仪后，检查液体水平低液面水平或者废液桶满都用红色指示。
2 如果液流车未自动开启，选择Cytometer > Fluidics Startup。
3 当液流启动完成后，点击OK关闭对话框。
检查气泡1 在检查完液体水平后，开启流动室门，检查流动室中是否有气泡。
2 如果没有看到气泡，进行第5步。
如果看到气泡，点击Cytometer > Cleaning Modes >De-gas Flow Cell.3 当完成信息出现后，点击OK。
BDFACSAriaIII的简明操作规程
BD FACS AriaIII的简明操作规程一、开机（一）准备液路1. 将流式细胞仪的上盖打开。
2. 开启计算机，等待所有程序载入。
3. 开主机电源Mainpower，从电脑桌面上双击打开。
FACSDiva 软件，输入密码BDIS。
如果仪器刚关机，等压力完全降下来后再开启。
打开激光开关laser power；开启实验所需激光器电源。
4. 确认液流车中各种液体的液面水平，倒空废液或加满其他液体。
5. 从软件的Cytometer 菜单上选择Fluidic Startup，点击OK 确认。
将出现如下窗口：6．确认将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点Done；7．确认Closed-loop Nozzle 插入流动室；完成后点Done；会出现右侧窗口，提示液流开启进行中；8．移去Closed-loop 喷嘴，完成后点Done；9．按照实验要求，插入直径合适的喷嘴（喷嘴直径应该是分选颗粒直径的3-6 倍）；10．然后点OK，完成整个过程；11．从菜单上选择Sort>sort setup,确认setup 模式与喷嘴大小匹配。
（二）开液流1．打开液流窗口的液流；点击软件界面上的按钮打开分选液流窗口点击分选液流窗口的按钮，开启液流2．打开分选仓前的门，检查液流。
液流应为一条细线落入废液槽中；如果液流不稳，检查流动室中是否有气泡，将液流关闭，10 秒钟后再开，排除气泡。
3．关上分选仓前的门。
（三）设定液流断点1. 调整液流震幅（Ampl），使断滴位于窗口上方1/3 处。
Ampl 不要超过70，如果超过，检查流动室是否有气泡；确认鞘液压力和震动频率是否合适；2. 确认卫星液滴与大液滴融合，如果没有融合，重新安装喷嘴；应该在断滴的6 滴之内融合；二、关机1.Cytometer>cleaning modes>sample line backflush 冲洗样本管路2min；2.准备一管洗液（0.5% 的次氯酸钠溶液），load，高速5min；3.准备一管DI Water，load，高速10min；4.打开sort blocker，在waste drawer两边加满水，清洗drawer；5.在断点窗口关闭液流；6.将喷嘴换成闭环喷嘴；7.准备一管DI water，Cytometer>Cleaning modes>Clean flow cell，清洗流动室两次；8.关软件，关机，关电脑。
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1. 每隔一个月清洁一次流动室。 a. 机器待机时，选择“细胞分析仪”菜单中的深度 清洁，然后等待至过程结束。
注意
可能会出现仪器损坏。请勿将清洁溶液放置在流动室中超过 24 个小时。 b. 等待半个小时，然后选择充注以清除剩余清洁溶液。 c. 等待至充注循环完成，然后运行“日常清洁”。
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显示并保存。
• 结果部分的绿色图标 • 结果部分的红色图标
表明通过。 表明失败。
6. 若 QC 失败，请充注仪器、初始化并重复操作 QC。
注释 若 QC 同一天连续失败两次，请联络 Beckman Coulter 代表。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 数据采集
数据采集
创建实验
重要 对于每个新批次编号，下载对应的目标值文件，并参考步骤 2.
4. 使用屏幕左侧的批次编号-下拉列表 球对应的批次编号。
，选择与 QC 荧光微
5. 选择 始 QC。
，将已准备的 QC 样品试管插入样品试管托架，然后选择
以开
注释 QC 可能需要数分钟。QC 荧光微球的最低流速为 100 事件/秒。一旦完成，结果就会自动
4. 请熟悉工具栏。
图形 统计资
料 层级
5. 利用“图表”工具
门 缩放 标尺
增益 阈值 撤消/恢复
新建所需直方图或点状图。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 数据采集
6. 设置所需样品流速，然后选择“采集”面板上的
，以起动激光器和流体。
7. 将样品管装入样品端口，然后选择
以开始采集和显示数据。
关闭
1. 从“文件”菜单打开任一实验，并初始化仪器。 2. 在“细胞分析仪”菜单中选择日常清洁。
3. 遵循以下“日常清洁”步骤，包含： a. 运行 FlowClean 清洁液 3 分钟。 b. 运行 DI 水 5 分钟。
4. 如有必要，清空废液容器。 5. 根据您的实验室操作步骤将样品试管拆下并储存。 6. 关闭 CytExpert 软件。 7. 关闭工作站。 8. 关闭细胞分析仪上的主电源。
e
f
g
3. 验证 USB 配置密钥已连接至 USB 端口。
注意
可能会出现仪器损坏。从流体容器托架取下鞘液容器，并且远离仪器进行充 注，以防止鞘液溢出损坏仪器电路。
4. 从流体容器托架取下鞘液容器，并用提供的鞘液填充鞘液容器。 5. 如有必要，拆下右侧盖子，并填充带有 1 部分 Contrad 70 和 1 部分 DI 水混合的深度清
1. 选择 CytExpert 桌面图标
以打开软件。
2. 在“开始”页面，选择新实验或模板中的新实验以开始新实验，或选择打开实验以继续现 有实验。
注释 模板包含有关硬件和软件设置 （包括使用的通道、增益设置、流速和停止标准）的信
息。
或者，从“文件”菜单选择新实验，模板中的新实验或打开实验。
3. 若未新建试管，请利用“试管工具栏”按钮创建新试管。若要修改试管属性，请高亮试 管名称，然后选择位于“采集”屏幕底部左侧的 。
Beckman Coulter, Inc. 250 S. Kraemer Blvd. Brea, CA 92821 U.S.A.
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2. 登录计算机，双-击 以启动 CytExpert。 a. 确保靠近显示器左下方的状态栏上的连接图标为绿色。
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b. 若图标不是绿色，确保仪器 USB 牢固地连接至计算机，并重新启动计算机。 3. 从“细胞分析仪”菜单中选择系统启动程序，并遵循软件提示。
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 仪器 QC
洁溶液。
警告
漂白剂具有化学伤害危险。为避免接触漂白剂，请使用包括防护眼镜、手套和 适当的实验室服装在内的屏障保护。使用化学药品前，请参阅有关化学品暴露 的安全数据表以了解详细信息。
6. 如有必要，清空废液容器。将 400 mL 5% 至 6% 的漂白剂添加至废液容器。
仪器启动
1. 打开仪器后盖上的电源开关，它位于电源电缆正上方。
来向当前实验的试管列表添加新试管。除非
另行修改，新试管与当前试管的设置相符。
数据分析
1. 如有必要，打开工作站。 2. 打开 CytExpert 软件。 3. 若要打开保存过的实验 （.xit 文件），请选择“开始”页面或“文件”菜单中的打开。
4. 若要导入 FCS 数据，从“文件”菜单中选择导入 FCS 文件。
B49009AC 2015 年 2 月
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门
有关详细说明，请参阅 CytoFLEX 流式细胞分析仪使用说明。 仅限研究用。不用于诊断程序。
工作流程
启动
Ô
QC
Ô
创建实验
Ô
调节仪器设置和 补偿
Ô
记录数据 Ô
关闭
启动
仪器准备
1. 确保所有系统连接正确连接。
b
c
d
e
f
CLASS 1 LASER PRODUCT COMPLIES WITH 21 CFR 1040.10 AND 1040.11 EXCEPT FOR DEVIATIONS PURSUANT TO LASER NOTICE NO. 50 DATED JUNE 24, 2007 MANUFACTURED
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 启动
2. 请确保所有管线和电缆根据颜色代码连接至仪器。
b
c
d 1. 废液液位传感。与废液传感器电 缆相连。 2. 流动室废液排出。与流动室废液 导管相连。 3. 鞘液液位传感。与鞘液传感器电 缆相连。 4. 废液排出。与废液导管相连。 5. 鞘液回流。与鞘液导管相连。 6. 鞘液流入。与鞘液导管相连。
CytExpert 自动在“试管”面板新建一系列配套空试管以及所有所需的图表以设门区 分阳性和阴性细胞群。
d. 装入相应的无染色或单色样品荧光微球或细胞，并在采集面板内选择
。
e. 如必要，请调节散射光门控，或是在相应的直方图中调节阳性及阴性细胞群门 控。
f. 一旦门处于恰当位置，请选择
。
g. 对每个试管重复步骤 d-f。
2. 确保可在“批次编号”下拉菜单中选择“QC 荧光微球批次编号”。如果批次编号不可选， 输入特定批次的目标值文件。参见第 4 章“CytoFLEX 流式细胞分析仪使用说明”中的“导 入特定批次-的目标值”。
3. 在 75-mm 的试管中添加 3 滴 Beckman Coulter 公司提供的 QC 荧光微球和 1 mL DI 水以制 备 QC 样品。
若要导出统计表，右击该统计表，并选择导出至文件或将所有样品导出至文件。 注释 导出至文件将单份试管统计资料导出到单个 CSV 文件。将所有样品导出至文件将所有试
管统计资料导出至 CSV 格式的文件。
7. 分析完成后，请关闭软件、工作站和主电源。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 关闭
荧光补偿
1. 选择“设置”菜单中的补偿矩阵，打开“补偿矩阵”窗口，以补偿荧光溢出。
补偿矩阵可以手动修改，可以从之前的补偿矩阵文件导入，也可以导出以用于其他 实验。 注释 “补偿库”包含之前从特定增益设置产生的补偿矩阵。但是，补偿计算独立于增益-。
CytExpert 从基于新增益设置的“补偿库”中生成一个新的调节补偿矩阵。这可以通过选择从 补偿库导入实现。
• 门控属性 （右击门控）
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• 统计表 （右击统计表）
CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 调节设置和补偿
• 细胞群层级
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 调节设置和补偿
2. 若要修改图表上的标尺范围，请利用“放大/缩小”工具或平移工具以确定图表上显示 细胞群的区域，或在图表轴附近双-击以查看“图表属性”对话框。
仪器 QC
重要 验证检测仪配置。确保已为 QC 实验进行正确的仪器设置。若选择了错误设置，则 QC 实验
不能完成或会出现错误结果。Beckman Coulter 建议您使用出厂配置，并确保滤光片放在适当 位置。
1. 选择 QC 菜单中的启动 QC。“采集”屏幕现在换成了 QC 屏幕。
注意
可能会出现错误的 QC 结果。不同的批次编号对应不同的目标值信息。选择错 误的批次编号会导致错误的 QC 结果。
8. 使用“阈值”工具 ，或选择
9. 使用“标尺”和“增益”工具 至所需位置。
设置辨别以消除图上不需要的细胞群。
，或选择
以将图上显示的细胞群移动
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 调节设置和补偿
调节设置和补偿
“图表”、“门控”和“统计资料”管理
1. 若要修改图表、门控、统计表或细胞群层级属性，请选择该图表并右击以选择属性 选项。参见以下示例。 • 图表属性 （右击门控）
)XVH$WLPHGHOD\7$/9$&3RZHU9$ SN
1. 显示器 2. 鼠标 3. 键盘 4. 计算机 5. 细胞分析仪 6. 流体容器托架
S W haesatteh
g
Sheath
© 2015 Beckman Coulter, Inc.
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 关闭
2. 每 6 个月更换一次蠕动泵软管，并且重置维护提示。 3. 每 6 个月更换一次鞘液过滤器，并且重置维护提示。如有必要，使用带有 1 部分
Contrad 70 和 1 部分 DI 水的混合液重新充注深度清洁溶液，并且重置维护提示。
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CytoFLEX 流式细胞分析仪快速入门 关闭
h. 对每个必要补偿样品采集好数据后，选择补偿菜单中的补偿计算以生成补偿矩阵。