常用实验试剂配制

1DEPC水(1‰) 1000ml 水

1ml DEPC

根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。

20.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris

1000ml DEPC水

用HCL调ph至7.5，高压备用。

3 4%PFA的配制(ph 7.0)40g PFA

1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压)

将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。

30.2% 甘油/0.1M tris

20ml 甘油

980ml 0.1Mtris

4 20XSSC Nacl 175.3g

（ph 7.0）柠檬酸钠88.2g

DEPC水1000ml

分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用

5 HEPES 溶液HEPES 23.8g

(ph6.8-8.0)DEPC H2O 100ml

6 50X Denhaldt′s 液

聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g

牛血清蛋白（BSA）0.2g

DEPC 水20ml

7 预杂交buffer

Deinoized formanmid 5ml

20X SSC 1.5ml

1M HEPES 0.5ml

50X Denhanldt′s液1ml

龟精DNA 0.6ml(4ug/ul)

DEPC水 1.4ml

龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。

8Washing buffer

(ph7.5) maleic acid 5.8g

NACL 4.4g

Tween（吐温） 1.5ml

定容至500ml溶质浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween

9Maleic acid buffer

(ph7.5) Maleic acid 5.8g

Nacl 4.4g

定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl

10Detection buffer

(ph 9.5)0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g)

0.1M Nacl 2.9g

定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl.

11blocking reagent（封闭液）(2-8℃保存)

(bottle 5) 5g

maleic acid buffer 50ml

12blocking solution

封闭液（新鲜配制）1ml

Maleic acid buffer 10ml

13抗体（AP）

10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再稀释。

LB培养基

胰化蛋白胨10g

酵母提取物5g

氯化钠10g

Amp（100ng/ml）1ml

加去离子水950ml搅拌使之完全溶解，用5mol/L的NaOH调PH值至7.0，定容至1L，高压蒸汽灭菌（15磅，1.034×105Pa）30min，4℃保存。

LB琼脂固体培养基

LB 500mL

琼脂粉7.5g

高压蒸汽灭菌(15磅，1.034×105 Pa) 30 min，冷却至60℃，加入500L 100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），分铺20个平板。

100 mg/mL氨苄青霉素（Amp）

Amp 100mg

ddH2O 1mL

用0.2um滤器过滤，-20℃储存。

1M 30 mg/mL卡那霉素（kana）

kana 30mg

ddH2O 1mL

用0.2um滤器过滤，-20℃储存。

琼脂糖凝胶电泳所用试剂

50×TAE(电泳缓冲液)

Tris碱242g

冰乙酸57.1 mL

0.5M EDTA（pH 8.0）100 mL

溶于终体积1000 mL去离子水中，使用时1：50稀释。

10×加样缓冲液

0.25% 溴酚兰

0.25% 二甲苯青

30% 甘油

保存于4℃。

10mg/mL EB 溶液

取溴化乙锭（EB）0.2g溶解于20mL去离子水中，混匀。4℃避光保存。使用时终浓度为

0.5μg/mL。

1%琼脂糖凝胶

琼脂糖1g

1×TAE 100 mL

微波炉加热至完全溶解，摇匀，当温度降至60℃时，即可铺制平板。

?0.1mol CaCl2溶液：

1.1g无水氯化钙，溶于90ml三蒸水中，定容至100ml，用0.22μm滤器过滤除菌置于灭

菌试剂瓶中，4℃保

?氨苄青霉素（Amp）选择性培养基

LB培养基中加入 1.5%的琼脂（15g/L），高压灭菌20min，取出，在无菌条件下，冷却至50℃左右时（烧手但尚可忍受）加入抗生素或其他必需成分，如为氨苄青霉素（Amp）选择性培养基，则以50mg/ml的氨苄青霉素贮存液按50μg/ml的量加入，即每ml培养基加入1μl氨基苄。

?氨苄贮存液

将氨苄青霉素钠溶于三蒸水，配成50mg/ml溶液，以0.22μm滤纸过滤，1ml一份分装，存于-20℃。

质粒的少量提取

【试剂及配制】

1．溶液Ⅰ

葡萄糖（C6H12O6·H2O） 1.982g

三蒸水160ml

0.5mol EDTA pH8.0 4ml

1mol Tris-Cl pH8.0 5ml

以三蒸水定容至200ml，高压灭菌，4℃保存

0.5 mol EDTA pH8.0 的配制：

Na2EDTA·H2O 186.1g （如无水，则为175g）

三蒸水700ml

边磁力搅拌边加入固体NaOH，缓慢少量加入，待充分溶解，pH接近8.0，用酸度计调节pH8.0 （HCl/NaOH）；

1mol Tris-Cl pH8.0 的配制：

Tris 碱121g

三蒸水800ml

充分搅拌，用浓盐酸将pH调节至8.0，酸度计测量；

2．溶液Ⅱ

配制50ml的量，现用现配。

10 mol NaOH 1ml

三蒸水40ml

10% SDS 5ml

用三蒸水定容至50ml

10mol NaOH 的配制：

40g NaOH晶体加三蒸水至100ml；

10% SDS 的配制：

戴口罩，称10g SDS，溶于80ml三蒸水中，68℃助溶，加数滴1mol HCl，调pH7.2，定