植物细胞工程综合大实验

植物细胞工程综合大实验（一）

——培养基配制和无菌操作

一、实验目的与要求

熟练掌握器皿的洗涤

MS培养基的配制分装

培养基和物品的高压灭菌

实验室的消毒灭菌

植物材料的取材及流水冲洗

无菌操作

材料的培养观察

二、实验原理

植物细胞的全能性。

三、仪器设备与器具

电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、

三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、

解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。

四、实验材料

彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）

茎节（用于诱导芽）

五、实验方法与步骤

（一）器皿的洗涤

一般器皿

有培养物但未污染的器皿

有培养物且污染的器皿

（二）MS培养基的配制分装

1、MS培养基母液的配制

母液A-F，每组配制A-E 100ml、F 50ml

0.1%升汞的配制

75%酒精的配制

6-BA

NAA

2、MS培养基的配制

按每人配制100ml，分5小瓶。

过程如下；每组按1L配制，先取容器内加70%的蒸馏水；

加入蔗糖30g/L；量取母液A-F；加入PGR（自己设计）；用容量瓶定容；用0.1-1N NAOH或HCl调整pH5.6-5.8；每人分100ml；加琼脂粉8g/L；分装到5个小三角瓶中、封口。

（三）培养基和物品的高压灭菌

培养基、无菌水（每组至少5瓶）、空瓶（每组至少2个）、烧杯（每组至少1个）、培养皿（每组至少一套）、接种工具（2套），包好或者分好以备高压灭菌。

高压锅的使用。

（四）实验室的消毒灭菌

75%的酒精擦拭超净工作台内表面，新洁尔灭水进行超净工作台外表面、培养架表面、墙壁及其他房间表面的擦拭。

（五）植物材料的取材及流水冲洗

选取适宜的彩云阁茎节及茎段，切割成适宜大小后放在流水下冲洗。

（六）无菌操作

演示。

（七）材料的培养观察

接种完的材料放在培养室的培养架上进行培养。培养初期每天观察一次，持续1周。之后每2-3天观察一次。

统计指标：

污染率（%）= （污染的外植体个数／接种外植体的总数）×100%。

愈伤组织诱导率（%）= （长愈伤外植体个数／接种外植体总数）×100%。

芽诱导率（%）= （长芽外植体个数／接种外植体的总数）×100%。（八）结果与分析

植物细胞工程综合大实验（二）

——继代、最佳PGR种类和浓度配比

一、实验目的与要求

确定外植体最佳消毒时间、掌握初次继代方法、茎段诱导愈伤组织和茎节诱导芽阶段PGR种类与浓度配比的筛选

二、实验原理

植物细胞的全能性。

三、仪器设备与器具

电子天平、移液枪、冰箱、高压锅、超净工作台、三角瓶、烧杯、容量瓶、培养皿、搪瓷缸、镊子、解剖刀、酒精灯、试剂瓶、玻璃棒、线绳、pH试纸、封口膜、试管刷、洗涤剂、打火机等。

四、实验材料

彩云阁茎段（用于诱导愈伤组织）茎节（用于诱导芽）

五、实验方法与步骤

（一）器皿的洗涤

（二）MS培养基的配制分装

1、彩云阁茎段诱导愈伤组织的培养基

每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比自己设计。

2、彩云阁茎节诱导芽的培养基

每人配制5瓶，PGR种类和浓度配比自己设计。

3、继代培养基

每人配制1瓶，PGR种类和浓度配比自己选择确定。

（三）培养基和物品的高压灭菌

请自己准备。

（四）实验室的消毒灭菌

（五）植物材料的取材及流水冲洗

（六）无菌操作

自己确定材料的消毒灭菌时间。

（七）材料的培养观察

每种处理，统计指标：

污染率（%）= （污染的种子个数／接种种子的总数）×100%。

愈伤组织诱导率（%）= （长愈伤组织个数／接种茎段外植体总数）×100%。

芽诱导率（%）= （长芽外植体个数／接种茎节外植体的总数）×100%。

（八）结果与分析