常用自动生化分析方法种类及临床应用和校准
自动生化分析仪的使用、校准和维护
自动生化分析仪的使用、校准和维护卫生部检验中心张传宝第一节概述临床实验室检验操作经历了手工操作、半自动分析和自动分析过程。
目前，自动生化分析仪以高新技术为基础，以高准确性、精密度、灵活性和高效率为特点，在现代临床实验室中承担大部分的常规工作，成为实验室特别是大、中型实验室必备的检验仪器。
一自动生化分析仪的基本结构及工作原理按照反映装臵的结构，自动生化分析仪主要分为流动式、分立式、袋式及干化学自动生化分析仪。
其中，分立式自动生化分析仪应用最广，参加卫生部临床检验中心全国临床化学室间质量评价的实验室，绝大多数都使用该类自动生化分析仪。
干化学自动生化分析仪由于其方便快捷的优点，目前多用于急诊生化项目的检测。
二典型分立式自动生化分析仪的基本结构（一）样品系统样本包括校准品、质控品和病人样品。
系统一般由样品装载、输送和分配等装臵组成。
样品装载和输送的常见类型有：1 品盘式进样样品放臵在圆形的样本盘中，样本盘为单圈或者多圈，在运行中与分配机械臂配合转动，完成样本分配。
样本盘可以是整体，如日立7170型自动生化分析仪的样本盘。
有的采用更换式样品盘，分工作和待命区，其中放臵多个弧形样本架座转载台，仪器在测定中自动纺织更换，如贝克曼CX9型自动生化分析仪。
有的样品盘与试剂转盘甚至反应转盘相套和，部分小型自动生化分析仪采用该模式。
2传动带式或轨道式进样样本架为单排，通常每个可以容纳10个样品。
通过传送带，将样本架依次送到取样位臵，再由样品分配臂采样。
如奥林帕斯Au 640型自动生化分析仪。
3链式进样试管固定排列在循环的传动链上，水平转动到采样位臵，有的仪器可随后清洗试管。
目前多数仪器对质控品和校准品设臵了独立冷藏舱，有助于保持它们的稳定。
分配加样装臵大都由注射器、步进马达或者传动泵、加样臂和样品探针等组成。
一般加样系统能准确到0.1ul的体积。
（二）试剂系统一般由试剂储放和分配加液装臵组成。
试剂舱常与试剂转盘结合在一起。
全自动生化分析仪校准规范
全自动生化分析仪校准规范全自动生化分析仪校准规范(湿式)全自动生化分析仪是临床诊断的重要手段之一 ,其检测结果是否准确对临床疾病的诊断和治疗监测有直接的影响。
在仪器检测结果精密度良好的前提下，仪器校准是保证检测结果准确的关键步骤，为此结合国内的相关标准的基础上，就全自动生化分析仪校准的基本要求提出如下建议。
1杂散光的试验方法1.1设定两个单试剂项目，波长设为340nm;1.2设定上述项目的试剂位，分别以蒸馏水和亚硝酸钠标称溶液(50g/L)为试剂和样本，每个项目重复测定5测试;1.3查看反应曲线或反应数据，以最后一点的吸光度作为所测定溶液的吸光度，共得到5个蒸馏水和5个亚硝酸钠标称溶液的吸光度;1.4计算最小的亚硝酸钠溶液吸光度与最大的蒸馏水溶液的吸光度的差值，为杂散光。
1.5应符合标准的要求;当测定波长为340nm时，杂散光应不大于0.5%(或吸光度不小于2.3)。
2吸光度线性范围的试验方法2.1以340nm吸光度不低于2.0(以蒸馏水为空白)的重铬酸钾溶液为原液，用蒸馏水稀释出相对浓度分别为1、2、3、4、5、6、7、8、9和10(原液)的系列溶液;2.2设定一个单试剂项目，波长为340nm，试剂和样本均为待测溶液;通过反应曲线或反应数据查找试剂空白段的吸光度;2.3按照浓度由低到高的顺序，每个浓度重复测定2次;2.4以相对浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，画出散点图;2.5用最小二乘法对所有数据进行线性拟合，按照公式(1)、(2)和(3)计算每一个点的相对偏倚;相对偏倚=100*(A-(a+b*C))/(a+b*C) (1)式中:A为实际测定的吸光度，a为线性拟合的截距，b为线性拟合的斜率。
22b=(nΣA*C-ΣAΣC)/( nΣC-(ΣC)) (2)a=(ΣA/n)-b*(ΣC)/n (3)式中:A为吸光度，C为相对浓度，n为总的测定点数。
2.6应符合标准的要求:线性范围不小于2.0，各测定值的相对偏移不大于?5,。
汇总：全自动生化分析仪的分析参数设置
汇总：全自动生化分析仪的分析参数设置自动生化分析仪是一种把生化分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、恒温反应、自动监测、数据处理以及实验后清洗等步骤进行自动化操作的仪器，它完全模仿并代替了手工操作，目前已经成为医疗机构进行临床诊断所必可不少的仪器之一。
它的应用大大提高了生化检验的准确性、精密度和工作效率，适应了临床医学发展对检验医学的要求，然而这一切不仅需要生化分析仪的技术基础，也需要仪器内每个项目都有一组最优化的分析参数。
并且目前大多数生化分析仪为开放式，封闭式的仪器一般也会另外留一些检测项目的空白通道由用户自己设定分析参数，因此我们有必要了解生化分析仪各个分析参数的基本含义以及设置方法。
1.试验名称常以项目的英文缩写来设置，如总蛋白设置为TP，白蛋白设置为AL等。
2.方法类型生化分析仪常用的方法有终点法、连续监测法、比浊法等，根据被检物质的检测原理等选择其中一种分析方法。
2.1终点法又称为平衡法，是基于反应达到平衡时反应产物的吸收光谱特征及其对光吸收强度的大小对物质进行定量分析的一类方法，有一点终点法和两点终点法两类。
一点终点法的特点是使用一种或两种试剂，当待测物与试剂反应达到终点时，测定混合溶液的吸光度来计算待测物的浓度，该法常用的有总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法、葡萄糖氧化酶法等，手工操作的大多数方法都是一点终点法。
两点终点法也称固定时间法，如果是单试剂分析，当测定波长同干扰物质的吸收光谱有重叠时，通过选用两点终点法可消除样品空白引起的干扰，其分析过程是在样品与试剂混合后经过一段延滞期读取一个点A1，一定时间后再读取A2，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
肌酐苦味酸法就是一个典型的单试剂两点法的例子。
如果是双试剂分析，选用二点终点分析法除了可消除样品空白引起的干扰外，还可消除内源性干扰物质的干扰，其分析过程是加入试剂1后读取A1，加入试剂2后读取A2，A1相当于读出样品空白值，A2才是实际呈色反应，然后比较标准和测定的ΔA（ΔA=A2-A1）值，求得待测物的浓度。
生化分析仪常用分析方法—课件
（二）固定时间法（fixed-time assay)
①概述 ②计算公式 ③临床应用
①概述
1）固定时间法（fixed-time assay):指在时间-吸光度曲线上选择两个 测光点，此两点既非反应初始吸光度，亦非终点吸光度，即样品和 试剂混合后读取延滞期后的吸光度A1和反应一定时间的吸光度A2， 这两点的吸光度差值用于计算结果。如图
样品处理系统
样品架和样品盘 试剂架和试剂盘 加液器：包括定量吸量器和加样针
搅拌器：由电机和搅拌棒组成
检测系统
光路系统：前分光光路、后分光光路 分光装置：滤光片和单色器
比色杯：反应杯 信号检测器：光电信号转换 恒温装置：保持恒温，25℃、30℃、37℃
清洗装置：吸液针、吐液针、擦拭刷经化学 反应后随着被测物的消耗吸光度下降。
②分类
分类
一点终点法 两点终点法
一点终点法（one point end assay)
1）定义：在反应达到平衡时选择一个测光点的吸光度计算待测物 浓度，主要用于单试剂的测定。如图
2）计算公式
Cu=Au×Cs/As=Au×K
2）快速反应干扰物：在样本中含有明显干扰待测物反应的物质时， 固定时间法能有效去除这些干扰，提高特异性。某些干扰物比待测 物更快与试剂发生反应。
3）慢反应干扰物：一些干扰物在待测物反应完全后才开始发生反 应。
②计算公式
C=（A2-A1）×K K为校准系数 K=Cs/As
③临床应用
主要应用于样本中有物 质明显干扰待测物反应 的情况，如苦味酸法测 定肌酐、溴甲酚氯法测 定血清白蛋白等
（三）自动生化分析仪检测项目
常包括肝功能、血糖、血脂、 肾功能、心肌酶谱、骨代谢、 尿蛋白等，例如AST、ALT、 GGT、LDH、TBA、TG、TC、 ALP、GLU、UREA、UA、LDL、 HDL、CK、TP等
常用生化检测项目分析方法与参数设置
常用生化检测项目分析方法及参数设置一、常用生化检测项目分析方法举例1．终点法检测常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白胆固醇（直接测定法）、钙（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、镁（二甲苯胺蓝法）等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2．固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3．连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4．透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数（analysisparamete）大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用；目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍（一）必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1．试验名称试验名称（testcode）是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2．方法类型（也称反应模式）方法类型（assay）有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
自动生化分析技术
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三、离心式分析仪
运行特点： 样品和试剂分别置于转盘中各自相应的凹槽内，
样品在外侧，试剂在内侧，离心使内侧试剂受离心力 甩向外侧凹槽内，与样品相互混合发生反应，最后流 入转盘外圈的比色凹槽内由比色计检测。
分析过程中，样品与试剂的混合、反应和检测等 每一步骤几乎都是同时完成，故又称“同步分析”。 缺点：同一个离心盘一般只能同时分析一个项目
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加
试加
吸 样
入 第 一
搅 拌
剂入 保第 温二
搅 拌
保 温
试
剂
析 比
色
分
数
打 杯清 白测
据印洗试
处结反杯
理果应空
全自动生化分析仪工作流程图
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17
分立式自动生化分析仪的结构包括：样品盘 （架）、取样装置、试剂室（瓶）、取液装置、 反应盘、混匀装置、温控装置、光学监测系统、 清洗系统和计算机控制系统等。
干片式：将测定一个项目所需的试剂固定在
固相载体上，加上定量血清后，干片的背面即产
生颜色反应，用反射光度计检测便可进行定量分
析。
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6
根据仪器的功能及复杂程度
小型自动生化分析仪
中型自动生化分析仪
大型自动生化分析仪
超大型自动生化分析仪
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7
单通道 多通道
根据同 时可测 定项目 数量
根据 开放 程度
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封闭系统
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3.试剂室：存储试剂，大多数试剂室具有冷藏装 置，条形码检测系统。 （1）试剂转盘式：放置一定形状试剂瓶，数量 不等，试剂盘转动可使某个试剂瓶到达特定的 试剂吸取位置。 （2）试剂架形式：放置大容量任意形状的试剂 瓶，由每个试剂瓶内引出一条试剂管路及其喷 嘴，不同试剂间无交叉污染
自动生化分析技术
主要分析内容
① 细胞参量分析 ② 细胞表型分析 ③ 细胞分选 ④ DNA含量分析以及细胞分化周期分析
（3）血液流变学分析
血液流变学基本概念 血液流变性质和检测方法 影响因素与质控 主要应用
血液流变学基本概念
血液流变学研究的内容十分广泛， 包括血液流动性、血细胞的流变性（包 括变性、聚集性和黏附性等）、血液凝 固性、血管壁的流变性、血细胞之间及 血液与血管壁之间相互作用以及它们在 不同疾病状态下的变化规律。
3、自动体液分析
自动干化学尿液分析的原理与方 法 干化学尿液分析的质控 主要应用
自动干化学尿液分析的原理
半自动、全自动尿液干化学分析仪常采用反射光度法原理， 即当一束光线照射到已发生化学反应的试带上，其反射光强度 与试带表面颜色深浅成正比，经光电管接受后转变成电信号， 通过微处理控制器处理得出各种化学成分的结果。即用尿干化 学分析试带与尿中相应化学成分反应，当该产生颜色变化的试 带，被波长不同的发光二极管照射后，产生反射光。反射光由 光电管接受，光信号转化成为电讯号，电讯号传送至模拟数字 转换器，转换成数值，经微处理控制器处理，自动显示结果。 试带颜色的深浅对光的吸收和反射是不一样的。颜色越深，吸 收光值越大，反射光值越小，反射率越小；颜色越浅，吸收光 值越小，反射光值越大，反射率越大。即颜色的深浅与尿液中 各种化学成分的浓度成正比。通常试带颜色深浅与被测尿中物 质在一定浓度范围内成正比，而与反射光的强度成反比。
2）自动生化分析仪的结构与全反应 过程的测光监控
分立式分析仪 连续流动式分析仪 离心式分析仪 干化学式自动生化分析仪
3）自动生化常用分析方法
终点分析法 连续检测法 投射比浊分析 均相酶免疫分析法
2、自动血液分析 （1）自动血细胞分析
全自动生化分析仪的操作指南和数据分析技巧
全自动生化分析仪的操作指南和数据分析技巧随着生物医学研究的不断深入，全自动生化分析仪作为一种重要的实验仪器，被广泛应用于临床医学和科学研究中。
全自动生化分析仪的操作和数据分析技巧对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将为您介绍全自动生化分析仪的操作指南和数据分析技巧，帮助您顺利完成实验和解读数据。
一、全自动生化分析仪的操作指南1. 样本准备：在进行实验前，首先要准备好样本。
样本来源可以是体液、血清、尿液等，需要根据实验目的来选择样本类型。
确保样本的保存和运输过程中无污染，并按照分析仪的要求进行相应稀释。
2. 系统校准：在操作生化分析仪之前，务必对仪器进行校准。
校准的目的是确保仪器的各种参数和测量范围的准确性。
根据仪器的说明书，按照要求进行校准操作。
3. 试剂配制：根据实验需要，准备好各种试剂。
确保试剂的质量，避免使用过期或变质的试剂。
根据仪器的要求，按照比例混合试剂，确保试剂的配制正确。
4. 样本处理：根据实验的要求，对样本进行相应处理。
例如，可以使用离心管将样本离心，去除其中的沉淀物或悬浮物，以获得纯净的样本液。
5. 仪器操作：按照仪器的操作流程，将样本和试剂分别加入到分析仪的样本槽和试剂槽中。
选择适当的分析方法和参数，然后启动仪器进行实验。
6. 数据记录：在仪器运行过程中，及时记录实验数据。
将数据准确地填写到记录表格中，包括样本编号、实验条件、测量结果等。
确保数据的完整性和可追溯性。
7. 仪器维护：实验结束后，及时对分析仪进行维护和清洁。
清洗各个部件，确保仪器的正常使用和长期稳定。
二、数据分析技巧1. 数据质量控制：在进行数据分析之前，首先要对实验数据进行质量控制。
检查数据的完整性和准确性，排除异常值和偏离常态的数据。
如发现数据异常，应及时进行排查和修正。
2. 数据分析方法选择：根据实验的目的和数据的特点，选择适当的数据分析方法。
常见的数据分析方法包括统计学方法、模型分析方法和生物信息学方法等。
常用自动生化分析方法种类及临床应用和校准
常用自动生化分析方法种类及临床应用和校准（一）分析方法的种类1．一点法又称为终点法。
指加入标本和试剂后，当反应达到一定阶段时（或终点）测定吸光度值计算待测物质浓度的方法。
主要用于总蛋白，白蛋白，血糖，甘油三酯和胆固醇等项目测定。
2．二点法在反应过程中测定两个时间点的吸光度（A1、A2），利用二者差值（A1—A2）计算待测物质浓度的方法。
二点法又称为二点终点法，使用双试剂进行分析时多彩二点法，加入标本和第一试剂测定一次吸光度，加入第二试剂（启动试剂）待反应完成时测定另一次吸光度，两者的差值可消除标本内源性物质的干扰。
主要用于总胆红素、直接胆红素、甘油三酯和胆固醇等项目的测定。
3．二点速率法在反应过程中选择适当两点测定其吸光度，计算出单位时间（常为分钟）内吸光度的变化量，通过吸光度的变化量计算待测物质浓度的方法。
二点速率分析法主要用于Jaffe法测定肌酐。
4．速率A法根据酶促反应的特点，当底物浓度足够大，当酶促反应达到最大时，单位时间内底物的消耗量和产物的生成量维持不变，即单位时间内吸光度变化值不变，在酶促反应的零级反应区内选取两个时间点，计算出每分钟吸光度变化，吸光度变化值同酶活性大小成正比。
速率A法常应用于酶活性的测定。
5．其它不常用的分析方法有三波长法和速率B法，主要用于在一个反应杯中进行两个物质测定。
以上各种分析可同时选用双波长法。
双波长法指在测定时选择主波长和副波长，主波长用于待测物质的测定，而副波长用于消除可能产生的干扰。
副波长选择原则为干扰物质在主波长和副波长的光吸收相等，而等测物质有最小的吸光度，两波长不能相隔太近，一般副波长大开主波长。
（二）自动生化分析仪的校准方法1．K因素法又称为标准化法或线性法，当物质的浓度和吸光度成比例变化时选用该法。
原理是用校准品进行反应，测定吸光度的大小或变化量，根据朗伯—比尔定理（浓度=因素*吸光度）计算出因素（K）的大小，测定待测物质吸光度，利用因素K可计算出待测物质浓度大小和活性大小。
生化自动化分析方法概要
生化自动化分析方法概要一、分析方法分类（一）终点法被测物质在反应过程中完全被转变为产物，即达到反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法（end essay）。
实际上被测物并没有完全被转变，而只是与产物达到一个动态的化学平衡，因此该法称为平衡法更为恰当。
从时间-吸光度曲线来看，到达反应终点或平衡点时，吸光度将不再变化。
分析仪通常在反应终点附近连续选择两个吸光度值，求出其平均值计算结果，并可根据两点的吸光度差来判断反应是否到达反应终点。
终点法参数设置简单，反应时间一般较长，精密度较好。
终点时间的确定：①根据时间-吸光度曲线来确定，如Trinder 反应测定尿酸，反应曲线上3～5min时其吸光度已趋向稳定，因而可将5min作为反应终点。
②根据被测物反应终点，结合干扰物的反应情况来确定，如在血清白蛋白的溴甲酚绿法测定中，白蛋白与溴甲酚绿在10s内很快完成反应，之后α球蛋白和β球蛋白与溴甲酚绿发生"慢反应"，使反应曲线上吸光度在10s后仍继续缓慢上升，持续约达10min，因此终点时间应采用10～30s，而不应选择10min。
（二）固定时间法指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算，称为固定时间法（fixed-time essay），反应曲线见图7-6。
其计算公式与两点终点法相同，为CU=（A2-A1）×K。
有时也称此法为两点法。
（三）连续监测法连续监测法（continuous monitoring essay）又称速率法（rate essay），是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期的吸光度值，并以此线性期的单位吸光度变化值（ΔA/min）计算结果，见图7-7A和B。
所谓线性期就是各点吸光度差值相等，如图7-7C所示，图中δ1及δ5值偏小，而δ2＝δ3＝δ4，故A1点至A4点属线性段。
生化校准方法分析
• 基蛋生物 • 潘石
K因子法
• 理论k值：根据摩尔系数（）来计算。一般 试剂生产降价给出旳k值都属于此。
• 实测k值：是根据仪器目前旳实际状态，试 剂旳稳定性等因子数测得旳值。
• 校准k值：经过高质量校准直接校准得到旳 k值
• K因数法合用旳分析措施有一点终点法，两 点终点法，两点速率法，多点速率法。
• 双波长旳选择常见： • 血红蛋白在340nm和380nm波长吸光度相同， • 以NADH和NADPH作为测定底物或产物旳试验常
用340nm、380nm 340、405 ALP和GGT常用405nm、476nm TRINDER反应多选用520nm、600nm或550nm、
660nm 免疫比浊常用340nm、700nm等。
• 同一种项目相同旳试剂也可用不同旳措施进行测 定，在血清葡萄糖测定措施中，己糖激酶HK法旳 特异性高，分析措施中有一点终点法，两点终点 法，速率A法，有研究表白，三种分析措施中只 有两点终点法能扣除其光谱干扰（溶血、脂浊、 黄疸）旳影响，到反应终点旳第二点间仍能保持 相正确与校准曲线基本一致旳曲线，其吸光度差 值乃能保持原百分比，因而检测成果较正确。误 差较小，能很好地克服（溶血、脂浊、黄疸）取 得较精确旳成果。
• K=SV/TV & .1*10>6
• 线性两点法
• 非线性法：又称非直线性校准法 非线性法涉及logit-log法、指数函数法、样条函数法等措施
• Logit-log3p对数函数法中旳一种，合用于浓度升高而吸光度体现为收束旳工作曲线。 • P表达参数之意，由3个参数（S1Abs、k、a）参加计算。S1Abs表达试剂空白，K表达校准所得
• 波长旳选择应根据吸收光谱曲线，选择特定反应 产物对吸光度吸收旳最高峰值时旳。波长为测定 波长及双单波长测定旳主波长。
生化分析仪常用分析方法共有三大类,分别为终点法、固定时间法和动力学法
生化分析仪常用分析方法共有三大类，分别为终点法、固定时间法和动力学法。
终点法：指经过一段时间的反应，反应达到平衡，由于反应的平衡常数很大，可认为全部底物(被测物)转变成产物，反应液的吸光度不再变化，只与被测物的浓度有关。
这类方法通常称为“终点”法，更确切地说应称“平衡”法。
单试剂单波长终点法：t1时刻加入试剂（体积为V），t2刻加入样本（体积为S），然后搅拌并反应，之后开始测量反应液的吸光度，在t3时刻反应达到终点，t3－t2为测定时间。
反应度R＝At3－At2-1×V/(V＋S)，或R＝At3－ARBLK。
其中：Ati为i时刻的吸光度，ARBLK为试剂空白吸光度。
单试剂双波长终点法：基本上同“单试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
双试剂单波长终点法：t1时刻加入第一试剂(体积为V1)，t2时刻加入样本(体积为S)之后立即搅拌，t3时刻加入第二试剂(体积为V2)并立即搅拌，t4时刻反应达到终点。
t3-t2为孵育时间,t4-t3为测定时间。
在项目参数中，如果反应起始时间设为0，则反应度R=A时刻吸光度-双试剂空白吸光度。
如果反应起始时间小于0，则反应度R=At4 -双试剂空白吸光度-t3到t2间设定点的吸光度×（V1＋S）/(V1＋S＋V2)。
双试剂双波长终点法：基本上同“双试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于Aλ1－Aλ2。
固定时间法：又称为一级动力学法、二点动力学法等，指在一定的反应时间内，反应速度与底物浓度的一次方成正比，即v=k[S]。
由于底物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的变化越来越小。
这类反应达到平衡的时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，必需经过一段延迟时间才能进入稳定反应期。
t1时刻加入试剂(体积为V)，之后测量试剂空白的吸光度，t2时刻加入样本(体积为S)，t3时刻反应稳定，t4时刻停止对反应进行监测；t2－t3为延迟时间，t3－t4为测定时间。
自动生化分析仪分析和校准
ADVIA LABCELL - 检验科全面自动化校准品、质控品、定标、质控
• 校准品：了克服纯标准品和病人样品间的基质差异，20年
前开始应用具有与病人样品基质效应相似的校准品替代标 准品，用于日常工作 。校准品大多来源为人样品的混合物， 如混合血清。校准品的校准值只能取决于分析方法和检测 系统 。 • 质控品：质控品的来源同校准品大致相同，厂商可能会更 具自己的要求添加了很多物质，此时有些物质的添加量常 常达到病理状态的高浓度
• 定标：定标就是要找出一个参考点，就是一个K值（或
F值）。它是由仪器与试剂状态确定下来的。 K值的真 面目：K值实际上代表了斜率，截距代表试剂空白，试 剂空白每天都在变化，所以K值的稳定性决定于仪器与 试剂，如果仪器与试剂都十分稳定，那K值也很稳定。 • 如何确定K值是正确的？一般我们用质控血清来检查， 最好是两种水平的质控来检查，如果质控结果很好， 可以说K值是准确的，用这个K值计算出来病人的结果 也是准确的，所以K值非常关键。 • 质控物是对仪器进行质量控制的 ，将仪器保养好后按 照提示向做标本一样进行操作 。定标是将仪器保养好 后，按照提示向标本测试一样操作，一般5次以上为好， 这样仪器就是自动计算出需要矫正的系数，从而对仪 器进行校正。
• 分析法: 一点终点、两点终点、两点速率法、速率A法。
• 标本量和试剂量：2～3μ l
(反应杯光径长 5mm, 减少 反应液体积);试剂量80～150μ l。
• 分析时间的设定：反应时间最长10 min, 33 个吸光度
读数点。 • 线性判断范围
四、检测系统性能的核实、确认与评价
• 1.对检测系统的性能核实 如果实验室采用的分析系统
• 其实用通俗一点的话来讲,定标就是用不同浓度的定标液作
常用生化检测项目分析方法举例及参数设置
常用生化检测项目分析方法举例及参数设置一、常用生化检测项目1.终点法检测常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。
以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。
2.固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。
3.连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。
一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。
4.透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。
二、分析参数设置分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。
各种测定项目的分析参数(analysis paramete)大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。
生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。
因此必须理解各参数的确切意义。
一、分析参数介绍(一)必选分析参数这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。
1.试验名称试验名称(test code)是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。
2.方法类型(也称反应模式) 方法类型(assay)有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。
临床化学自动分析校准方法
怎样理解校准报警(日立）
成功的校准:
校准报告无报警。 K 值和 S1 (试剂空白吸光度) 被自动更新。 质控在控
Calib. 报警
CALIB. 报警原因和解决：
K 值与校准前相比变化超过20%,并非校准失败。 如果参数和质控正常。常见原因： 新装参数（日立仪器默认K值10000）； 更新试剂或校准品； 如果质控异常。常见原因： 校准品用错或校准品值未更新； 试剂有气泡等。
浓度（ C ）
校准类型
Span calibration
吸光度（Abs)
An旧 An新
A1
C1
Cn
浓度（ C ）
校准类型
2 point calibration
吸光度（Abs)
An旧 An新
A1新 A1旧
C1
Cn
浓度（ C ）
校准类型
吸光度（Abs)
A5 A5’ A4 A4’ A3 A3’
A2’ A1’ A2
校准品溯源体系图
物质 校准定值 程序 实施
SI单位
一级校准物质
二级校准物质 计量学溯源 厂家工作校准物质 一级参考测量程序 二级参考测量程序 厂家选定测量程序
不确定度
厂家产品校准物质
厂家常规测量程序
用户常规测量程序
厂家和/或最终用户 最终用户
常按照试剂生产厂家提供的校 准周期进行各个项目的校准。没有明 确规定的项目在仪器状态正常、试剂 合格、质控再控的情况下每六个月进
Sample Volume
R1 Volume R2 Volume R3 Volume R3 Volume Calib. Type Calib. Point Span. Point Std.1（Position)
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常用自动生化分析方法种类及临床应用和校准
（一）分析方法的种类
1．一点法又称为终点法。
指加入标本和试剂后，当反应达到一定阶段时（或终点）测定吸光度值计算待测物质浓度的方法。
主要用于总蛋白，白蛋白，血糖，甘油三酯和胆固醇等项目测定。
2．二点法在反应过程中测定两个时间点的吸光度（A1、A2），利用二者差值（A1—A2）计算待测物质浓度的方法。
二点法又称为二点终点法，使用双试剂进行分析时多彩二点法，加入标本和第一试剂测定一次吸光度，加入第二试剂（启动试剂）待反应完成时测定另一次吸光度，两者的差值可消除标本内源性物质的干扰。
主要用于总胆红素、直接胆红素、甘油三酯和胆固醇等项目的测定。
3．二点速率法在反应过程中选择适当两点测定其吸光度，计算出单位时间（常为分钟）内吸光度的变化量，通过吸光度的变化量计算待测物质浓度的方法。
二点速率分析法主要用于Jaffe法测定肌酐。
4．速率A法根据酶促反应的特点，当底物浓度足够大，当酶促反应达到最大时，单位时间内底物的消耗量和产物的生成量维持不变，即单位时间内吸光度变化值不变，在酶促反应的零级反应区内选取两个时间点，计算出每分钟吸光度变化，吸光度变化值同酶活性大小成正比。
速率A法常应用于酶活性的测定。
5．其它不常用的分析方法有三波长法和速率B法，主要用于在一个反应杯中进行两个物质测定。
以上各种分析可同时选用双波长法。
双波长法指在测定时选择主波长和副波长，主波长用于待测物质的测定，而副波长用于消除可能产生的干扰。
副波长选择原则为干扰物质在主波长和副波长的光吸收相等，而等测物质有最小的吸光度，两波长不能相隔太近，一般副波长大开主波长。
（二）自动分析仪的校准方法
1．K因素法又称为标准化法或线性法，当物质的浓度和吸光度成比例变化时选用该法。
原理是用校准品进行反应，测定吸光度的大小或变化量，根据朗伯—比尔定理（浓度=因素*吸光度）计算出因素（K）的大小，测定待测物质吸光
度，利用因素K可计算出待测物质浓度大小和活性大小。
K因素法是应用最广泛的校准方法，用于常规生化检验项目的浓度或活性的分析。
2非线性法又称为曲线拟合法，当物质的浓度和吸光度不成比例变化时选用该法。
其原理是使用多个（3—6）浓度的校准品，在选定波长测定其吸光度值，利用浓度和吸光度之间的关系绘制非线性标准曲线。
生化分析仪多采用Logit-log等方法进行拟合计算出曲线各常数。
非线性法适用于分析方法，如C-反应蛋白、类风湿因子、抗“O”和酸性糖蛋白等的测定。