灭菌与无菌操作
实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！
实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！实验室如何灭菌，灭菌方法汇总！食品论坛昨天消毒和灭菌是微生物实验技术中最基本的操作技术，因此从事药品生产、检验的人员均应了解消毒和灭菌的基本概念、两者的关系，各自的应用方法及其意义，操作时应严格执行相关的操作规程，一方面确保生产与检验工作的效果，另一方面也是对自身安全的保护。
消毒和灭菌的概念：1、消毒：指对病原微生物的繁殖体的致死作用，但不能杀死芽孢等全部微生物，因此消毒是不彻底的，不能代替灭菌。
凡用于消毒的化学药品称为消毒剂，因此人们也常称消毒剂为化学消毒剂。
2、灭菌：杀灭物体中所有活的微生物（含芽孢）的作用，灭菌是采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。
通常用物理方法来达到灭菌的目的。
二、消毒和灭菌的关系1、共性：杀灭微生物以控制其污染和防止传播。
2、区别：消毒灭菌方法目前常用的消毒灭菌方法多采用物理方法(如干热灭菌法、湿热灭菌法、过滤除菌法、射线杀菌法等)和化学方法(消毒剂、抗生素)两大类。
1.干热灭菌法干热灭菌法是利用恒温干燥箱内120ºC~150ºC的高热，并保持90~120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的的一种方法。
主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。
用此方法灭菌的物品干燥，易于贮存。
酒精灯火焰烧灼灭菌法也是属于干热灭菌的方法之一。
在进行动物细胞体外培养工作时，常须利用工作台面上的酒精灯火焰对金属器具及玻璃器皿口缘进行补充灭菌。
2.湿热灭菌法压力蒸汽湿热灭菌法是目前最常用的一种灭菌方法。
它利用高压蒸汽以及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。
适合于布类工作衣、各种器皿、金属器械、胶塞、蒸馏水、棉塞、纸和某些培养液的灭菌。
高压蒸汽灭菌器的蒸汽压力一般调整为1.0～1.1kg/cm2，维持20～30min即可达到灭菌效果。
清洁消毒灭菌技术及无菌技术操作
面特性进行针对性清洁。
清洁效果的评估与监测
清洁效果评估
通过观察、触摸、使用试纸等 方法，对清洁后的物体表面进 行检测，评估清洁效果是否达
到标准。
监测频率
医院应定期对清洁效果进行监 测，一般建议每月至少进行一 次监测。
监测范围
监测范围应覆盖医院的所有区 域，包括病房、手术室、治疗 室、卫生间等。
监测标准
物理消毒法
包括热力消毒、紫外线消毒、等离子 体消毒等。
化学消毒法
消毒技巧
根据不同物品和环境选择合适的消毒 方法，注意消毒剂的配制和使用浓度， 控制消毒时间和温度，保持环境通风 等。
利用化学药物杀灭病原微生物的方法， 如含氯消毒剂、酒精等。
消毒效果的评估与监测
消毒效果的评估
通过实验室检测和现场检测等方法，对消毒效果进行评估，确保消毒效果符合 标准要求。
实验室环境
微生物实验室
微生物实验室在进行微生物培养 和实验时，需要保持高度无菌的 环境，对实验器材和操作台面进
行严格的清洁和消毒。
分子生物学实验室
分子生物学实验室在进行基因测 序、PCR等实验时，需要保持无 菌环境，对实验器材和操作台面
进行严格的清洁和消毒。
化学实验室
化学实验室在进行化学实验时， 需要保持通风良好、防止化学品 残留的环境，对实验器材和操作
清洁消毒灭菌技术及 无菌技术操作
目 录
• 清洁技术 • 消毒技术 • 灭菌技术 • 无菌技术操作 • 清洁消毒灭菌及无菌技术操作的应用场景
01
清洁技术
清洁的定义与重要性
清洁的定义
清洁是指去除物体表面污垢、尘 埃、有机物残留的过程，以达到 清洁卫生的目的。
清洁的重要性
无菌操作的定义和注意事项
无菌操作的定义和注意事项1. 无菌操作的定义无菌操作是指在无菌条件下进行的一系列操作，以防止微生物的污染和传播。
它是实验室、医疗机构和生物制药等领域中必不可少的技术，用于保证实验结果的准确性和产品的质量安全。
无菌操作主要包括以下几个方面：1.1 空气质量控制空气中存在大量的微生物，因此在无菌操作中需要对空气进行控制。
通常采用层流洁净工作台、无尘车间或无菌室来提供洁净环境。
这些设备能够过滤空气中的微生物，并保持洁净区域内的正压，防止外界空气进入。
1.2 消毒与灭菌在进行无菌操作之前，需要对实验器具、工作表面和人员手部进行消毒或灭菌处理。
常用的消毒方法包括酒精擦拭、紫外线照射和高温蒸汽灭菌等。
消毒处理能够有效地杀灭细菌、真菌和病毒等微生物。
1.3 无菌操作技术无菌操作技术包括接种、传递和分离微生物等操作。
在进行这些操作时，需要采取一系列的预防措施，以防止微生物的污染。
使用无菌培养皿和试管、穿戴无菌手套、避免开启培养皿或试管的口部接触空气等。
2. 注意事项在进行无菌操作时，需要注意以下几个方面：2.1 个人卫生在进入洁净区域之前，必须进行充分的个人卫生措施。
这包括洗手、穿戴干净的工作服和佩戴无菌手套等。
还应注意避免打喷嚏、咳嗽或触摸脸部等可能导致微生物传播的行为。
2.2 工作区域清洁工作区域应保持干净整洁，并定期进行清洁和消毒处理。
工作表面应经常擦拭，并使用消毒剂进行处理。
还要定期更换工作台面上的纸巾或吸水垫，以避免积累过多的细菌。
2.3 器具消毒在使用实验器具之前，必须进行消毒处理。
常用的方法包括高温蒸汽灭菌、紫外线照射和化学消毒等。
消毒处理后，要确保器具表面干燥，并在无菌环境下存放，以防止再次受到污染。
2.4 避免交叉污染在进行无菌操作时，要避免不同微生物之间的交叉污染。
这可以通过合理安排实验步骤、使用专用工具和设备等方式来实现。
还要定期更换培养基和试剂的批号，以避免批次间的差异导致的结果误差。
2.5 注意操作技巧在进行无菌操作时，要注意正确的操作技巧。
微生物无菌的操作流程
微生物无菌的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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无菌室消毒灭菌操作规程
文件制修订记录1、目的：规范无菌室中检验工作的质量控制，确保检测结果准确可靠。
2、适用范围：无菌室3、操作规范：3.1 无菌室日常消毒灭菌无菌室无固定程序，但按一般操作应遵循如下规程：3.1.1 操作间和缓冲室使用打开紫外线灯，照射杀菌。
3.1.2 穿上工作服及无菌工作帽、鞋，然后用消毒液洗手。
3.1.3每次无菌操作前，均用用75％的酒精棉球擦拭操作台及可能污染的死角，每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，开启净化台，用紫外灯照射30分钟以上。
3.1.4如有菌液洒在桌上或地上，立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再进行高压蒸汽灭菌。
工作衣帽等受到菌液污染时，立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。
3.1.5每次工作完毕，生物安全柜或超净台内用75%酒精擦拭台面后，开启紫外线灯照射30min。
对用过的污染物品进行高压灭菌。
然后逐一关闭实验室送风和通风设备。
3.2无菌室定期消毒灭菌3.2.1每两周用经过0.1%新洁尔灭或84消毒液（1:50）浸泡的纱布擦拭工作台、门、窗、桌、椅及地面等，两种消毒剂相互交替使用，然后用5%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后用紫外灯杀菌半小时。
3.2.2如果无菌室长期不用，再使用前需用乳酸熏蒸1～2小时消毒，最后紫外灯杀菌半小时。
3.3无菌室的消毒灭菌，可采取以下几种方法：3. 3.1用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸：一般每平方米需40％甲醛10毫升、高锰酸钾8毫升，进行熏蒸。
使用时，先密闭门窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开无菌室，关紧房门，熏蒸20—30分钟即可。
3. 3.2 乳酸熏蒸：乳酸4～5ml加等量水，使用酒精灯加热蒸发，密闭2～3h。
消毒时最适相对湿度60～80%，低于60%效果下降。
3.3.3 0.1％升汞水消毒：用0.1％升汞水浸过的纱布或海绵进行擦拭，或用喷雾器喷雾灭菌，使箱内的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起来。
灭菌方法与无菌操作
4.影响湿热灭菌的因素
药物与介质的性质 饱和蒸气 湿饱和蒸气 过热蒸气 不饱和蒸气 蒸气的性质 湿热灭菌 灭菌时间 微生物的种类和数量
第三节 灭菌方法与无菌操作
二、物理灭菌法
（三）紫外线灭菌法
紫外线的穿透能力弱，但能穿透清洁的空气和纯净的水，因而广泛
用于空气灭菌与表面灭菌。
F值：是为了比较不同灭菌温度的灭菌效果而
设计的一个指标。在一定灭菌温度T，给定Z
值所产生的灭菌效果，与设计的参比温度To 给定Z值所产生的灭菌效果相同时所相当的时 间，单位为min。 F 0 值：是将被灭菌物品在灭菌过程中不同的 受热温度与时间折算到与热压121℃灭菌时热 效力相当的灭菌时间。
蒸气灭菌
六、无菌检查法（自学）
1.无菌检查法 2.中成药的微生物学检查与活螨检查
二、物理灭菌法
（五）辐射灭菌法
辐射灭菌法的原理 射线可直接破坏细菌
DNA，导致微生物死亡。 辐射灭菌法的特点 不升高灭菌产品的温度，穿透性强，适合于维生素、抗
生素、激素、医疗器械、高分子材料等的灭菌。 辐射灭菌法的缺点 设备费用高，有些药物灭菌后疗效可能降低，对液体药
剂的稳定性也有影响，同时还要注意安全防护问题。
灭菌指示剂
第三节 灭菌方法与无菌操作
四、化学灭菌法
理想的化学灭菌剂应具备下列条件：
①杀菌谱广；
②有效杀菌浓度低；
③作用速度快； ④性质稳定，不易受有机物、酸、碱及其他物理、化学因素的影响；
第三节 灭菌方法与无菌操作
四、化学灭菌法
理想的化学灭菌剂应具备下列条件：
⑤易溶于水，可在低温下使用； ⑥毒性低，对物品无腐蚀性，不易燃烧爆炸； ⑦无色，无味，无臭，灭菌后易于从被灭菌物品上除去，无残留； ⑧价格低廉，来源丰富，便于运输。
无菌实验室操作规程
无菌实验室操作规程引言概述：无菌实验室是进行微生物学研究和实验的重要场所，其操作规程对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将详细介绍无菌实验室操作规程的五个部分。
一、实验室准备1.1 清洁与消毒：无菌实验室应定期进行清洁和消毒，确保实验环境的无菌状态。
清洁应使用无菌纱布和无菌溶液，消毒则应选择适当的消毒剂，如酒精或过氧化氢。
1.2 实验器材准备：在进行实验前，必须确保实验器材的无菌状态。
实验器材应经过高温高压灭菌或使用无菌过滤器过滤，确保无菌操作的可靠性。
1.3 个人防护：进入无菌实验室前，实验人员应穿戴适当的个人防护装备，包括无菌手套、口罩和实验服。
这些装备能有效减少外界微生物的污染，保证实验的无菌性。
二、无菌技术操作2.1 消毒操作：在进行无菌实验前，必须进行适当的消毒操作。
这包括用酒精或火焰对实验台面、实验器材和手术刀进行消毒处理，以杀灭表面的微生物。
2.2 灭菌操作：在进行培养基、培养皿等实验材料的制备时，必须进行灭菌操作。
常见的灭菌方法包括高温高压灭菌、紫外线辐射灭菌等，确保实验材料的无菌性。
2.3 采样操作：在进行微生物采样时，必须采取严格的无菌操作。
这包括用无菌棉签或无菌吸管进行采样，避免外界微生物的污染。
三、培养基制备与使用3.1 培养基配制：在制备培养基时，必须按照一定比例将培养基粉末与无菌蒸馏水混合，并进行高温高压灭菌，以确保培养基的无菌性。
3.2 培养基使用：使用培养基时，必须采取无菌技术进行操作。
这包括使用无菌吸管或无菌移液器取出适量的培养基，并将其均匀涂布在培养皿上。
3.3 培养基保存：未使用完的培养基应保存在冰箱或低温冷藏室中，避免细菌的生长和污染。
同时，应定期检查培养基的无菌性，确保其质量。
四、细胞培养操作4.1 细胞传代：在进行细胞培养时，必须进行细胞传代操作。
这包括将细胞从旧培养皿中取出，用无菌吸管或无菌移液器转移到新的培养皿中，以保持细胞的健康和纯度。
4.2 细胞培养液更换：细胞培养液应定期更换，以保持培养液的无菌性和营养成分的充足。
消毒灭菌和无菌技术操作原则
1.2 化学消毒法
⑦碘伏：它是碘与表面活性剂的不定型 结合物，在溶液中逐渐释放，能较长时间杀 菌。适用于施术者手、病员皮肤和器具消毒。 浸泡物常用浓度3~10%，1~2小时。使用碘 伏时应注意颜色的变化，当颜色褪到无色或 微黄时，杀菌力显著下降。
1.1 物理消毒法
②压力蒸气灭菌法：是利用水和水蒸汽传 导的热能，在高压、高温、温度大、穿透力 强的作用下杀灭一切细菌和芽胞。适用于耐 湿、耐高温的物品。
压力蒸气灭菌法以3M指示胶带和嗜热脂 肪杆菌芽胞化学指示片和生物指示菌片为生 物指示剂。
1.1 物理消毒法
③辐射消毒：钴一60*射线，它干扰微生 物代谢，破坏细胞膜，引起酶系统紊乱。适 用于一次性包装物品，如口罩、帽子、纱布、 纱垫等。以短小杆菌芽胞E601(ATCC27142) 为生物指示剂。
1.1 物理消毒法
⑤微波消毒：利用热效应。适用于包装厚 或导热差的物品，如药品消毒，微波内外同 时加热，杀灭策生物速度较快。
手术室常用消毒灭菌术
1.2 化学消毒法 ①戊二醛：能与细菌体内酶的氨基起反应， 阻碍细菌的新陈代谢。常用于医疗器械消毒。 2%中性戊二醛消毒内窥镜需10~30分钟，肝 炎病毒需1小时，各种物品灭菌时间隔需10 小时。经戊醛溶液浸泡的物品取出时需用无 菌水冲净。
手术室常用消毒灭菌术
2. 室内消毒 ⑴通风：打开门窗，使空气流通。 ⑵福尔马林薰蒸法：详见上述。 ⑶乳酸薰蒸法：12ml/m3加热蒸气封闭30分钟。 ⑷紫外线消毒法：1W/m3消毒1小时 ⑸生物洁净法：主要采用空气净化技术，除掉 空气中的微粒尘埃。达到空气洁净的目的。初级过 滤用泡沫海绵，过滤率在50%以下，中级过滤用无 纺布，过滤率50~90%之间，高效过滤用超细下班 滤纸，过滤率99.95%左右。
医院清洁消毒与灭菌管理制度内容
医院清洁消毒与灭菌管理制度内容为了确保医院环境的安全与卫生，预防医院感染的发生，保障患者和医务人员的健康与安全，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《医疗机构管理条例》等相关法律法规，结合我院实际情况，特制定本制度。
一、清洁与消毒1. 清洁与消毒是医院感染管理的重要组成部分，各科室应严格执行清洁与消毒管理制度。
2. 各科室应建立清洁与消毒工作责任制，明确清洁与消毒工作的责任人，并定期对责任人进行培训和考核。
3. 清洁与消毒工作应按照规定的程序和标准进行，包括地面、墙壁、家具、医疗设备等的清洁与消毒。
4. 清洁与消毒工作应采用合格的清洁剂和消毒剂，并按照说明书使用，确保消毒效果。
5. 清洁与消毒工作应定期进行，并做好记录，包括清洁与消毒的时间、地点、责任人等。
6. 清洁与消毒工作应遵循安全原则，避免对患者和医务人员造成伤害。
二、灭菌与无菌操作1. 灭菌与无菌操作是医院感染管理的关键环节，各科室应严格执行灭菌与无菌操作制度。
2. 灭菌与无菌操作应由经过专业培训的医务人员执行，并定期对医务人员进行培训和考核。
3. 灭菌与无菌操作应按照规定的程序和标准进行，包括器械的清洗、消毒、灭菌、包装、储存等。
4. 灭菌与无菌操作应使用合格的灭菌设备和方法，并按照说明书使用，确保灭菌效果。
5. 灭菌与无菌操作应定期进行监测，并做好记录，包括灭菌设备的校准、灭菌效果的监测等。
6. 灭菌与无菌操作应遵循安全原则，避免对患者和医务人员造成伤害。
三、清洁与消毒的监督与检查1. 医院感染管理部门应定期对各科室的清洁与消毒工作进行监督与检查。
2. 监督与检查应包括对清洁与消毒工作的程序、标准、记录等的检查，以及对清洁与消毒效果的评估。
3. 监督与检查应做好记录，包括检查的时间、地点、责任人、检查结果等。
4. 对于检查中发现的问题，应及时通知相关科室进行整改，并跟踪整改情况。
5. 医院感染管理部门应定期对灭菌与无菌操作进行监督与检查，确保灭菌与无菌操作的质量和安全。
灭菌及无菌操作PPT
• 保证制剂的临床疗效
物理灭菌法 灭菌法 化学灭菌法
无菌操作法
（一）物理灭菌技术
• 利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不 稳定的特性，采用加热、射线和过滤 方法，杀灭或除去微生物的技术称为 物理灭菌法，亦称物理灭菌技术。
1. 2. 3. 4. 干热灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法 滤过除菌法
能杀灭所有细菌繁殖体和芽孢，适用于耐高温和
耐高压蒸汽的所有药物制剂 、玻璃容器、金属容
器、瓷器、橡胶塞、滤膜过滤器等。
• 灭菌温度（蒸气表压）和时间：
115℃(68kPa)、30min；
121℃(98kPa)、20min；
126℃(137kPa)、15min
影响湿热灭菌因素
• 蒸气性质
热含量 热穿透力 灭菌效率
25%氨水
气体发生装置 （蒸气加热夹层锅）
鼓 风 机 甲醛蒸气
除 气
2. 无菌操作
• 无菌操作的场所
无菌操作室、层流洁净工作台、无菌操
作柜。
• 无菌操作的所用物品、器具、环境 • 操作人员
（四）灭菌参数（F值和F0值）
1.D值
在一定温度下，杀灭90%微生物（或残 存率为10%）所需的灭菌时间。
微生物死亡的速度: lgN0-lgNt=kt/2.303
械除菌方法，该机械称为除菌过滤器。该法适用 于对热不稳定的药液、气体、水等物品的灭菌。 • 对灭菌用过滤器应有较高要求。 • 常用的除菌过滤器：0.22µm的微孔滤膜器和0.3 µmG6垂熔玻璃滤器。
（二）化学灭菌法
• 系指用化学药品直接作用于微生物而将其杀灭的方
法。 • 杀菌剂是指对微生物具有触杀作用的化学药品。分 为气体杀菌剂和液体杀菌剂。 • 杀菌剂只对微生物繁殖体有效，不能杀灭芽孢。 • 杀菌效能决定于微生物的种类与数量、物体表面光 洁度或多孔性以及杀菌剂的性质等。
无菌制剂的灭菌无菌操作及除菌过滤等关键生产步骤被
随着药品(特别是无菌制剂)的安全性受到越来越广泛的关注，无菌制剂的生产过程也受到药品监管机构越来越严格的管理，无菌制剂的灭菌、无菌操作及除菌过滤等关键生产步骤被逐渐放大置于最大强度和频度的监管中，而这确实也是无菌制剂的关键控制点。
笔者所在单位有一条小容量注射剂流水线，生产产品为非最终灭菌无菌制剂，主要以除菌过滤和无菌操作保证再辅之以最终100 ℃水浴灭菌相结合的方式来达到无菌控制要求。
本文通过对除菌过滤器的选择和相关关键控制环节的无菌质量风险分析，做出了较大的技术和管理改进，降低了小容量注射剂的无菌质量风险。
1除菌过滤材料的概述目前，用于过滤器常用的主要过滤材料大致有：(1)混合纤维素酯，常用来制成圆形的单片平板滤膜，用于液体和气体的精过滤；(2)聚丙烯(PP)，做成折叠式，常用于筒式过滤器，有较大的孔径，其具有亲水性，属粗过滤材料；(3)聚偏二氟乙烯(PVDF)，属精过滤材料，耐热和耐化学稳定，蒸汽灭菌承受性良好，可制成亲水性滤膜，较广泛应用于制药工业无菌制剂用水及注射用水的过滤；(4)聚醚砜(PES)，做成折叠式，常用于筒式过滤器，耐温耐水解性能好，亲水性材料，用于精度较高的溶液的精过滤；(5)尼龙，做成折叠式，常用于筒式过滤器，亲水性材料，常用作液体的精过滤；(6)聚四氟乙烯(PTFE)，做成折叠式，常用于筒式过滤器，疏水性材料，其是使用相当广泛的一种材料，耐热耐化学稳定，常用于水、无机溶剂及空气的精过滤。
另外，过滤材料按与水的关系分为亲水性（水可浸润的）和疏水性（水不浸润）两种。
亲水性的过滤材料主要应用在水或水/有机溶液混合的过滤和除菌过滤；疏水性过滤材料是通过水被截流或“引导”进入滤膜，主要应用在溶剂、酸、碱和化学品过滤，罐/设备呼吸器,工艺用气,发酵进气/排气过滤。
2除菌过滤器的选择在小容量注射剂的生产中，利用细菌不能通过致密小孔滤材的原理，过滤除去工艺过程中使用的气体或液体中的微生物。
灭菌和接种的操作方法
灭菌和接种的操作方法灭菌和接种是微生物学实验中非常重要的操作，它们用于确保实验中的培养基或试剂不受外部微生物的污染，并能够有选择性地生长特定的细菌、真菌或其他微生物。
下面将分别介绍灭菌和接种的操作方法。
一、灭菌操作方法：1. 压力蒸汽灭菌：将培养基或试剂装入耐压蒸汽灭菌器，根据要求设定加热温度和时间，通常为121摄氏度、15分钟。
等待蒸汽灭菌器升温至设定温度后开始计时，加热时间结束后关闭蒸汽灭菌器，等待冷却后取出灭菌好的培养基或试剂。
2. 过滤灭菌：将培养基或试剂通过0.22微米孔径的滤器，在无菌条件下将其过滤到无菌烧瓶中，然后用高压蒸汽或紫外线进行灭菌。
3. 高压蒸汽灭菌：将培养基或试剂装入高压蒸汽灭菌器，根据要求设定加热温度和时间，通常为121摄氏度、15分钟。
等待蒸汽灭菌器升温至设定温度后开始计时，加热时间结束后关闭蒸汽灭菌器，等待冷却后取出灭菌好的培养基或试剂。
4. 紫外线灭菌：将培养基或试剂置于无菌条件下，使用紫外线照射20-30分钟，使其中的微生物死亡，然后可以使用。
二、接种操作方法：1. 无菌操作台：在无菌条件下进行接种操作，要求操作台、器皿、培养基等均经过灭菌处理。
2. 消毒工具：将需要使用的接种环或注射器等工具用95%乙醇或高压蒸汽进行消毒。
3. 接种环接种：先在无菌条件下取出需要接种的细菌培养基，然后用灭菌的接种环在培养基表面划一道规则的线，再取出需要接种的细菌涂抹在接种环划过的线上，最后封闭培养基培养好。
4. 注射器接种：使用消毒的注射器吸取需要接种的细菌培养基，然后将其滴在培养基表面，用消毒的玻璃棒将其均匀涂抹开来，封闭培养基培养好。
5. 霉菌接种：用无菌技术在无菌条件下取用液态或固态的霉菌培养基，然后取出一定量的霉菌悬液均匀地涂抹在培养基表面，封闭培养基培养好。
6. 快速接种：适用于需要快速扩培的情况，可以使用特殊的接种器具，将需要接种的微生物悬液迅速均匀地接种在培养基表面。
一、清洁、消毒、灭菌与手术中无菌技术操作规范
术中无菌技术操作的重要性
❖1、手术感染 ❖2、手术失败 ❖3、增加病人痛苦 ❖4、增加病人经济负担 ❖5、延长住院时间
术中无菌要求应遵循的原则
❖1、无菌台的铺设尽可能接近手术开始时 间，无菌台一旦建立，必须有人看管，防 止污染。
❖2、无菌桌的无菌范围 无菌桌仅桌缘平面 以上是无菌，桌缘平面以下应视为有菌。凡 坠落于手术台边或无菌桌缘平面以下的物品 应视为有菌。已坠落下去的皮管、电线、锋 线不应再向上提拉或再用。
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清洁、消毒、灭菌 与手术中无菌技术操作规范
新院手术室
基本概念 常用的消毒灭菌方法其特点
术中无菌技术的重要性 术中无菌技术应遵循的原则
清洁：
是指用物理或化学方法清除污染 物体表面的有机物和污迹，尘埃。
常用的清洁方法
水洗
机械 去污
去污剂 去污
清洁方法主要用于
××
12.手术人员在手术中必 须更换位置时，应
稍离手术台，向后 退一步或背靠背地实
行互换，并注意自 己的手臂、手套和手
术衣未被污染。
13.处理空腔脏器残端时，应用盐水垫保护周 围组织，并用碘伏消毒切口部位，已污染的刀 剪、敷料等，必须另放于大碗中，不得再用。 污染在手套应重新更换。
14.术中因故暂停如 进行c臂照射时，应用 无菌单将切口及手术 区遮盖，防止污染。
●灭菌后的物品须通风处理， 清除环氧乙烷残留量后方 可使用
等离子体灭菌法 （低温灭菌法）
❖ 适用于内镜、不耐热 器材、金属器械、玻 璃等物 品
❖ 作用迅速、杀菌可靠、 清洁而无毒性残留
❖ 管径小于3mm的器械、 物品不能用于此法灭 菌
戊二醛浸泡灭菌法
❖ 杀菌力强，对金属无腐蚀 ❖ 作用时间长（2 %的戊二醛浸泡30分钟为一般消
药物制剂-灭菌与无菌操作技术
灭菌与无菌操作技术概述采用灭菌与无菌操作技术的主要目的是：杀灭或除去所有微生物繁殖体和芽孢，最大限度地提高药物制剂的安全性，保护药物制剂的稳定性，保证制剂的临床疗效。
因此，有效的灭菌方法和正确的操作方式对药品的质量至关重要。
灭菌与无菌操作技术是注射剂、输液剂、滴眼剂、创面用制剂、手术用制剂等灭菌与无菌制剂质量控制的重要保证，也是制备这些制剂必不可少的单元操作。
根据各种制剂或生产环境对微生物的限定要求不同，可采取不同措施，如灭菌、无菌操作、消毒、防腐等。
1）灭菌和灭菌法①灭菌。
是指用适当物理或化学等方法杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽孢的手段。
②灭菌法。
是指杀灭或除去所有致病和非致病微生物繁殖体和芽孢的方法或技术。
2）无菌和无菌操作技术①无菌。
是指在指定物体、介质或环境中，不得存在任何活的微生物。
②无菌操作技术。
是指在整个操作过程中利用或控制制剂避免被微生物污染的操作方法或技术。
3）灭菌制剂、无菌制剂和非无菌制剂（限菌制剂）根据人体对环境微生物的耐受程度，《中国药典》（2015版）将制剂分为无菌制剂、灭菌制剂和非无菌制剂（限菌制剂）。
灭菌制剂与无菌制剂主要用于注射给药、手术时使用或外伤患部的局部给药，因此在生产过程中需要采用一系列的特殊技术对工艺过程进行严格控制，最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。
目前主要应用的技术有：生产用水的处理技术、液体过滤技术、微生物和热原去除技术、生产环境的洁净度控制技术等。
①无菌制剂。
是指在无菌环境中采用无菌操作法或无菌技术制备的不含任何活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂。
②灭菌制剂。
是指采用某一物理、化学方法杀灭或除去所有活的微生物繁殖体和芽孢的一类药物制剂。
③非无菌制剂。
（限菌制剂）是指允许一定限度的微生物存在，但不得有规定控制菌存在的一类药物制剂。
药剂学中灭菌法可分为物理灭菌法、化学灭菌法。
物理灭菌法利用蛋白质与核酸具有遇热、射线不稳定的特性，采用加热、射线和过滤方法，杀灭或除去微生物的技术称为物理灭菌法，也称物理灭菌技术。
无菌操作概念
无菌操作概念
一、无菌操作的概念
无菌操作是指利用医学灭菌学所发展出来的无菌化（sterilization）技术，将环境或物体经过灭菌后，具有卫生保证的作业方法。
它将环境或物体的灭菌卫生分为不同等级，实施这一等级及其保证的行为概念，主要用于医疗保健领域。
无菌操作的目的是为了防止室内细菌的污染。
一般而言，人们在完成无菌操作之前，都要进行室内除菌处理，消毒过程的重要环节是杀菌过程。
杀菌需要采用特定物质破坏微生物体内的结构，使之难以进行繁殖，从而彻底杀灭室内的细菌，使其病原体率下降，以达到能被人体安全接受的状态。
二、无菌操作的原则
1、实施正确的消毒操作：俗称“不要太消毒也不要太疏忽”。
消毒本质上是一种重要的抗生素治疗手段，要在同等条件下选择安全有效的消毒剂，一定要遵循消毒的正确方法，达到最佳的消毒效果。
2、穿戴严格的无菌服：为了防止细菌的传播，作业者必须穿戴严格的无菌服，以免污染工作环境，破坏无菌状态。
3、遵循“先消毒后操作”的原则：若作业工程在室内，应当先将手机、桌子等物体表面消毒，再进行操作；若在室外，应首先将台面、椅子等物体消毒，再开始进行无菌操作。
4、注意操作及拆卸时消毒：在操作期间，应根据操作要求，定期进行消毒，以保证有效的防护；在拆卸时，也要进行消毒处理，以
确保拆卸后，不留下污染源。
5、消毒设备保持完好：消毒设备不仅要安装在室内，且要定期检查，以保证其正常工作，达到预期的结果。
手术室无菌技术和灭菌方式课件
未来手术室无菌技术和灭菌方式的发展趋势 析未来手术室无菌技术和灭菌方式的发展趋势， 包括技术发展方向、市场需求和政策法规等方面的情况，为医疗领域的发展提供参考。
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分析未来手术室无菌技术和灭菌方式的发展趋势，包括技术发展方向、市场需求
和政策法规等方面的情况，为医疗领域的发展提供参考。
空气净化：采用层流技术，将空气中的细 菌和病毒过滤掉
手术区域划分：严格区分有菌区和无菌区， 避免交叉感染
物品消毒：使用高压蒸汽灭菌器对手术器 械、敷料等进行消毒
操作规范：严格遵守无菌操作规程，确保 手术过程无菌
手术室灭菌方式
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物理灭菌方式
紫外线灭菌：利用紫外线照射杀灭细菌，具有广谱杀菌作用 臭氧灭菌：利用臭氧的强氧化性杀灭细菌，具有广谱杀菌作用 干热灭菌：通过高温使细菌体内的蛋白质凝固而杀灭细菌，适用于耐高温的物品 湿热灭菌：利用高温高压蒸汽杀灭细菌，具有广谱杀菌作用，效果可靠
手术室无菌技术和灭菌方式的新技术研发 介绍新的无菌技术和灭菌方式的研发情况，包括新技 术的研究进展、实验验证和应用前景等。
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介绍新的无菌技术和灭菌方式的研发情况，包括新技术的研究进展、实验验证和
应用前景等。
手术室无菌技术和灭菌方式在医疗领域的应用前景 分析手术室无菌技术和灭菌方式在医疗领域
的应用前景，包括其在不同手术类型、不同治疗方式中的应用和推广情况。
菌效果 • 灭菌物品监测不当：如未定期对灭菌物品进行监测，无法及时发现灭菌效果不佳
的情况 • 处理措施：针对以上原因采取相应的处理措施，如调整灭菌器参数、规范物品摆
放、清洗物品、更换包装材料、及时干燥物品、定期监测等，确保灭菌效果达标。
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教研室：药剂教研室 教 师：罗国平 2012.09
第九章 灭菌法
▪ 灭菌法：（Sterilization）指杀死或除去所有微生物 的方法。微生物包括：细菌、真菌、病毒等。细菌 的芽胞具有较强的抗热能力，因此灭菌效果，常以 杀灭芽胞为准。
▪ 消毒（Disinfection）：是指用物理和化学方法将病 原微生物杀死。
▪ 特点：温度低，时间短，可靠，最常用。 ▪ 蒸气性质：饱和蒸气>湿饱和蒸气、过热蒸气、不饱
和蒸气
▪ （2）使用热压灭菌器注意事项 ▪ ①必须采用饱和蒸气，在灭菌前加入足量的水，
以防产生过热蒸气； ▪ ②必须将灭菌器内的空气排尽； ▪ ③灭菌时间必须从全部内容物均已达到规定温度
时开始计算；
▪ ④避免压力骤然下降或遇冷，防止容器炸裂；如： 放气时不能过快；放完气后先将锅门打开10cm， 使冷空气逐渐进入冷却，再逐渐开大；灭菌后喷 淋冷却水快速降温也会有危险；
▪ 此法适用于耐高温的玻璃制品、金属制品以及不 允许湿气穿透的油脂类和耐高温的粉末化学药品 等。粉针剂用无菌瓶的干燥就采用干热灭菌法。
▪ 缺点：穿透力弱，温度不易均匀，而且灭菌温度 较高，灭菌时间较长，不适于橡胶、塑料及大部 分药品。
▪ （二）湿热灭菌法——是在饱和蒸气或沸水或流通 蒸气中进行灭菌的方法。由于蒸气潜热大，穿透力 强，容易使蛋白质变性或凝固，所以灭菌效率比干 热灭菌法高。
▪ 防腐（Antisepsis）：是指低温或化学药品防止和抑 制微生物生长繁殖。
▪ 一、物理灭菌法 ▪ （一）干热灭菌法 ▪ 1、火焰灭菌法——火焰上加热20秒以上。 ▪ 灼烧是最迅速、可靠、简便的灭菌方法，适用耐
火焰材质的物品、金属制品（药刀）、玻璃器皿 （玻璃棒）以及瓷器等用具的灭菌。
▪ 2、干热空气灭菌——在高温干热空气中灭菌的 方法。
▪ ⑤压力表和温度表应灵敏、准确，两表数值应相 互对应；不同海拔高度，不应使用同一表压；
▪ ⑥及时清扫异物，防止疏水器和排水管堵塞。
▪ 3、流通蒸气灭菌常压100℃流通蒸气，加热3060min。
▪ 缺点：不能保证杀灭所有的芽胞。 ▪ 适用情况：消毒及不耐高热的制剂的灭菌。 ▪ 4、煮沸灭菌法：100℃沸水，加热30-60min。本
➢三、无菌操作法：整个制备过程控制在无 菌条件下进行的一种操作方法。
▪ 无菌检查：参照《中国药典》，对所有注射剂均要 做此项目
▪ 方法： ▪ 1、直接接种法：取一定量供试品，以无菌操作将
该供试品分别接种于需气菌、厌气菌培养基培养数 日，在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
▪ 2、薄膜滤过接种法：将药液用0.45μm的微孔滤膜 过滤器过滤，然后加入需气菌、厌气菌培养基培养 数日，在培养期间应逐日观察并记录是否பைடு நூலகம்菌生长。
等）、气体、水等的灭菌。
▪ （五）辐射灭菌 ▪ γ射线（60Co）——不升温，穿透性强，特别适
于已经包装好的产品。缺点：设备费用高，对某 些药品可能产生药效降低、产生毒性物质或发热 物质，同时还要注意安全防护。 ▪ 中药材以及中成药中的应用。 ▪ （六）微波灭菌，高速热风灭菌
▪ 二、化学灭菌法 ▪ （一）气体灭菌法 ▪ 1、环氧乙烷 ▪ 机理：为烷化剂 ，与菌体蛋白质中的 -COOH，-
▪ 适用于：室内空气或表面灭菌。 ▪ 注：紫外线对人体照射过久，能产生结合膜炎、红
斑及皮肤灼伤等。所以应对工作者的皮肤及眼睛作 适当防护。
▪ （四）滤过除菌法：用滤过的方法除去活的或死 的微生物的方法，是一种机械除菌的方法。
▪ 除菌滤过器：微孔滤膜0.22-0.45μm（0.22，0.3） ▪ 适用于：不耐热药液（如：生物制品，抗生素
NH2，-SH，-OH基结合，使之产生不可逆性破坏。 ▪ 适用于：一次性注射器、输液器、注射针头、敷料，
对热敏感固体药物等。
▪ 2、臭氧：空间清毒，原水消毒。 ▪ 3、甲醛、丙二醇、乳酸熏蒸——室内空间的灭菌。
▪ （二）化学杀菌剂——物体表面灭菌。 ▪ 1、0.1%-0.2%新洁尔灭 ▪ 2、2%苯酚或甲酚皂溶液 ▪ 3、75%乙醇 ▪ 4、2%碱性戊二醛
法灭菌效果差，常用于注射器、注射针等器皿的 消毒。必要时加入适当的抑菌剂，可杀死芽胞细 菌。
▪ 5、低温间歇灭菌法 ▪ 80℃加热1小时→20-25℃保持24小时（让芽胞变
为增殖体）→再加热，放置，反复三次，直至消 灭芽胞为止。 ▪ 本法适用于不耐高温的制剂的灭菌。
➢ （ 三 ） 紫 外 线 灭 菌 法 ——254nm 灭 菌 力 最 强 （200-300nm）