游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)
高效液相色谱法快速直接测定酪氨酸_苯丙氨酸和色氨酸
(3)A ccQ. T ag 法测定 172300 氨基酸样品 处理方法, 参见 A ccQ. T ag 法测定水解氨基酸 标准手册。
2. 3 色谱条件 流动相: 8. 5 mM N aA c- 5% 甲醇溶液, 用
4 讨论 4. 1 测定波长的选择 本方法在测定酪氨酸、 苯丙氨酸和色氨酸时, 选择了三种不同的波长, 即在 230 nm 处测定酪氨酸、在 210 nm 处测定 苯丙氨酸、在 278 nm 处测定色氨酸, 其根据是 这三种氨基酸的紫外吸收图谱 (见图 2)。
图 2 T yr, Phe, T rp 的紫外吸收光谱图
测定波长的选择本方法在测定酪氨酸苯丙氨酸和色氨酸时选择了三种不同的波长即在230nm处测定酪氨酸在210nm处测定苯丙氨酸在278nm处测定色氨酸其根据是这三种氨基酸的紫外吸收图谱见图氨基酸投料量5010的计算结果可以看出在测定172300氨基酸注射液时以稀释10倍最为合适测定结果与投料最为接近而稀释50和不稀释时测定的结果均偏低且与投料量相差较大
磷酸调节 pH = 4. 0; 流速: 1. 2 m l m in; 柱温: 36℃; AU FS: 2. 000; 波长开始设为 230 nm , 分 析至 2 m in 时自动变换为 210 nm , 4 m in 时变 换为 278 nm , 至 7 m in 分析结束。
3 结果分析 3. 1 各组分的分离效果
从表 2 的计算结果可以看出, 在测定 172 300 氨基酸注射液时, 以稀释 5 倍或 10 倍最为 合适, 测定结果与投料最为接近, 而稀释 50 倍 和不稀释时测定的结果均偏低, 且与投料量相 差较大。 通过计算可知: 将样品稀释 50 倍时,
液相色谱串联质谱法测定烟草中的游离氨基酸
Ｃ ｌ ８ （ ５ ０ ｍｍ ｘ ２ ． １ ｍｍ ｘ ２ ． ５ Ｉ ｘ ｍ） ，０ ． １ ％ ｆ ｏ ｒ ｍｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ ｗｅ ｒ ｅ ｔ ａ ｋ ｅ ｎ ａ ｓ ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ
ｉ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕｍｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ， ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｅ ｄ ｄ ｉ ｖ ｅ ｃ ｔ ｌ ｙ ．Ｔｈ ｅ ＬＣ ｓ ｅ ｐ ａ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗａ ｓ ｃ ａ ｒ ｒ ｉ ｅ ｄ ｏ ｎ ａ ｒ ｅ ｖ ｅ ｒ ｓ ｅ ｄ—ｐ ｈａ ｓ ｅ ＸＴｅ ｒ ｒ ａ ＭＳ
Ａｂｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ａ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｆ ｏ ｒ ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｏ ｆ ２ ０ ｆ ｒ ｅ ｅ ａ ｍｉ ｎｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｉ ｎ ｔ ｏ ｂａ ｃ ｃ ｏ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ ｌ ｉ ｑ ｕｉ ｄ ｃ ｈｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈｙ ｔ ａ ｎ ｄｅ ｍ ｍａ ｓ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ．Ｔｏ ｂ ａ ｃ ｃ ｏ ｓ ａ ｍｐ ｌ ｅ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｗｉ ｔ ｈ Ｏ ． １ ％ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｉ ｃ
５ ８ ８ ４
色谱 条件 ： 色谱 柱为 Ｘ Ｔ ｅ ｒ ｒ ａ Ｍ Ｓ Ｃ １ ８ （ ５ ０ ｍ ｍ ￣ ２ ． １ ｍ ｒ ｎ ￣ ２ ． ５ Ｉ ． ｚ ｍ） ； 进样 量 为 ５ ； 柱温为 ２ ５ ℃； 流 动 相 Ａ为０ ． １ ％甲酸溶液 ， 流动相 Ｂ为 乙腈 ； 洗脱条 件
ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｈ ｅ ｆ ｒ ｅ ｅ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｂ ａ ｃ ｃ ｏ ．
葡萄酒中游离氨基酸的测定 高效液相色谱法(编制说明)
《葡萄酒中游离氨基酸的测定高效液相色谱法》行业标准编制说明（征求意见稿）一、工作简况1、任务来源本项目是根据工业和信息化部2010年第二批行业标准制修订计划，《葡萄酒中氨基酸测定方法》(计划号：2010-2865T- QB)，列入轻工行业标准计划。
主要起草单位：中国食品发酵工业研究院等。
本标准由全国食品发酵标准化中心归口，计划应完成时间为2011年。
在标准起草阶段，起草工作组确定以高效液相色谱法作为葡萄酒中氨基酸的测定方法，且该方法适用于游离态的氨基酸。
根据相关起草专家建议，为更准确、完整的说明标准中所采用的标准方法以及方法的适用对象，将原标准计划名称进行调整。
标准名称由《葡萄酒中氨基酸测定方法》变更为《葡萄酒中游离氨基酸的测定高效液相色谱法》。
2、主要工作过程起草阶段：2011年1月-2013年12月计划下达后起草工作组查阅国内外上有关葡萄酒中氨基酸测定的文献的基础上，拟建立液相色谱测定葡萄酒氨基酸的方法的方案，该方法操作方便，仪器普及率高。
但是葡萄酒中氨基酸含量较低（脯氨酸除外），给方法的研究带来较大的困难。
起草组采用过异硫氰酸苯酯（PITC ）、6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸（AQC）和OPA 等不同的衍生剂开展了样品直接稀释，或氮吹浓缩、冷冻干燥等不同样品处理方法，以及比较外标、内标的等定量方法，测定方法的回收率或重复性都难以满足方法应用的要求。
2014年1月-2015年12月起草工作组重新考虑研究方案的思路通过查阅国际上有关葡萄酒中氨基酸测定的文献，结合葡萄酒中氨基酸含量较低的特点，决定采用柱前衍生-液相色谱-荧光检测器测定葡萄酒中氨基酸。
通过对不同衍生试剂的特点进行对比分析，结合葡萄酒中氨基酸的含量，选择丹黄酰氯-柱前衍生高效液相色谱法-荧光法进行葡萄酒中氨基酸测定。
对样品的处理方法、衍生反应条件、色谱分离条件等进行了优化，通过回收率、稳定性及精密度等一系列的研究，建立了高效液相色谱法-荧光法同时测定精氨酸(Arg)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、甘氨酸(Gly) 、丙氨酸(Ala)、酪氨酸(Tyr) 、脯氨酸(Pro)、γ-氨基丁酸（Gaba）、缬氨酸(Va1)、蛋氨酸(Met)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、色氨酸（Trp）、苯丙氨酸(Phe)等14种氨基酸分析方法, 2015年12月，起草工作组在前期工作基础上形成标准征求意见稿。
高效液相色谱法测定氨基酸
脑蛋白水解物溶液氨基酸含量分析方法研究方案1、仪器与试药1.1 仪器1525型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；Waters1525型泵，Waters2487型检测器，Waters5CH 型柱温箱，WatersBREEZE数据处理软件，水浴恒温器（精度±0.1℃），旋涡器，微量移液器，衍生专用管；CP225D型分析天平（德国）；4umNora-Pak TM C18（3.9mm×150mm，5μm）色谱柱（美国）1.2 药品与试剂16种氨基酸（门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸）由中国药品生物制品检定所提供。
脑蛋白水解物注射液，云南盟生药业有限公司生产，规格10ml/支。
批号：2013、2013、2013.乙腈（HPLC级）；EDTA（分析纯）；磷酸（分析纯）；二乙胺（分析纯）；三水合乙酸钠（分析纯）。
2、方法与结果2.1色谱条件流动相A为AccQTag醋酸—磷酸盐缓冲液；由AccQTagEluent A浓缩制备AccQTag洗脱液,用前稀释10倍（或按以下方法配制：称19.04g三水合乙酸钠，加1000ml纯化水，搅拌，溶解，用50%H3PO4将pH调至5.2，加入1ml 1mg/ml的EDTA溶液，加入2.37ml二乙胺，用50%H3PO4滴定至pH4.95，用水溶性过滤器过滤，超声，脱气，备用。
）；流动相B为60% HPLC级乙腈，按梯度表梯度洗脱；流速1.0ml/min；检测波长为254nm；进样量5μl；柱温38℃。
2.2对照品溶液、供试品溶液的制备分别精密称取16种氨基酸标准品，用纯化水配制成浓度如下表所示的混合溶液。
取上述溶液0.1ml，加纯化水0.9ml，旋涡器混匀，作为对照品溶液；取脑蛋白水解物注射液，加水稀释成含总氮为1mg/ml的溶液，取0.1ml，加纯化水0.9ml,旋涡器混匀，作为供试品溶液。
游离氨基酸测定（完整版）
游离氨基酸测定（完整版）总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与⽔合茚三酮作⽤，产⽣蓝紫⾊的化合物⼆酮茚－⼆酮茚胺，产物的颜⾊深浅与游离氨基酸含量成正⽐，⽤分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋⽩质中的游离氨基酸也会产⽣同样反应，在测定前必须⽤蛋⽩质沉淀剂将其除掉.仪器与⽤具：100ml容量瓶；漏⽃；三⾓瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸⽔浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.⼀、试剂1.⽔合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装⼊烧杯，加⼊正丙醇15ml，使其溶解加⼊正丁醇30 ml、⼄⼆醇60 ml、⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕⾊瓶冰箱保存，10天内有效。
2.⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯⼄酸钠54.4g，加⼊⽆氨蒸馏⽔100 ml，电炉加热⾄沸，使其体积减半，冷却后加冰⼄酸30 ml，加蒸馏⽔定容⾄100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘⼲⾄恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容⾄50ml。
取此液5ml蒸馏⽔稀释到50ml，即为5µg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏⾎酸：称取0.050g抗坏⾎酸，溶于50 ml蒸馏⽔中，即配即⽤。
5.10％⼄酸⼆、标准曲线制备加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。
以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加⼊5 ml10%⼄酸，研磨匀浆后⽤蒸馏⽔定容100 ml，⽤滤纸过滤到三⾓瓶中备⽤。
2.1ml滤液加⼊到20ml ⼲燥试管中，加1 ml蒸馏⽔，⽔合茚三铜3ml, 0.1%抗坏⾎酸0.1ml, 加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。
柱前衍生-高效液相色谱法测定新鲜烟叶中游离氨基酸
D0I：10.13822/ki.hxsj.2021007962化学试剂，2021,43(6),801〜805柱前衍生-高效液相色谱法测定新鲜烟叶中游离氨基酸许永「，黄丽佳一2，刘欣1,李晶「，宋春满"，杨光宇1,李雪梅1(1.云南中烟工业有限责任公司技术中心，云南昆明650106；2.昆明医科大学药学院，云南昆明650504)摘要:建立了柱前衍生-高效液相色谱检测新鲜烟叶中18种游离氨基酸的分析方法。
0.2g样品用5mL超纯水超声提取30min,过滤后取0.5mL滤液以异硫氰酸苯酯(PITC)衍生，以Waters SunFire C18色谱柱为分析柱，80%乙睛和0.1mol/L乙酸钠水溶液为流动相，梯度洗脱，在254nm处检测，外标法定量。
结果表明，18种氨基酸的线性范围为2~ 50wg/mL，定量限为0.03〜0.10mg/g,3个水平加标平均回收率在84.6%-105%之间，相对标准偏差为1.7%~5.5%-该方法简便快速，适用于新鲜烟叶中18种游离氨基酸的含量分析-关键词:柱前衍生;高效液相色谱;烟叶;游离氨基酸中图分类号：0652文献标识码：A文章编号：0258-3283(2021)06-0801-05Determination of Free Amino Acids in Fresh Tobacco Leaves by High Performance Liquid Chromatography with Precolumn Derivatization XU Yong1,HUANG Li-jia'，,LIU Xin,LI Jing',SONG Chun-man*1,YANG Guang-yu',LI Xue-mei (1.Technology Center of China Tobacco Yunnan Industrial Co.,Ltd.,Kunming650106,China；2.School of Pharmacy,Kunming Medical University,Kunming650504,China),Huaxue Shiji,2021,43(6),801〜805Abstract:A method was developed for the determination of18free amino acids in fresh tobacco leaves by pre-column derivatiza-tion-high performance liquid chromatography.0.2g Sample was extracted by ultrasonication with5mL ultrapure water for30min, filtrated and then0.5mL of the filtrate was derived with phenyl isothiocyanate(PITC)and analyzed on a Waters SunFire C18 column with80%acetonitrile and0.1moL/L aqueous sodium acetate solution as mobile phase.Derivatives were detected at the wavelength of254nm and quantified with external standard method.The results showed that the linear ranges of18free amino acids were2~50wg7mL,and the limits of quantitation were0.03〜0.10mg/g,and the average recoveries of18free amino acids were in the range of84.6%-105%with relative standard deviations of1.7%〜5.5%.The method is simple and suitable for the analysis of18free amino acids in fresh tobacco leaves.Key words:pre-column derivatization；high performance liquid chromatography；tobacco leaves；free amino acids氨基酸是烟草中一类重要化合物，在烟草生长、调制、醇化、加工直至成品卷烟抽吸过程中,氨基酸与烟草中的还原糖发生非酶棕化反应,生成多种香味前体物质,某些氨基酸如苯丙氨酸还可以自身分解成香味化合物,对形成芳香的烟草香气和吸味有重要贡献［1］-因此，分析烟草中氨基酸含量，对烟草品质评价及卷烟配方设计等均有重要意义-烟草氨基酸的分析方法有直接测定法和间接测定法，直接测定法有离子色谱-脉冲安培检测法［2,3］和液相色谱-串联质谱法［4-6］。
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
一、样品制备
1.采集样品：选择有代表性的饲料样品，用干净、干燥的容器采集，避免污染和变质。
2.粉碎样品：将采集的样品进行粉碎，使氨基酸分布更均匀。
3.称取样品：按照实验室规范，精确称取一定量的样品用于后续实验。
二、衍生化处理
1.确定衍生化试剂：根据待测氨基酸的化学性质和仪器检测需求，选择合适的衍生化试剂。
2.衍生化反应条件：确定衍生化反应的温度、时间、pH值等条件，确保反应完全、稳定。
3.衍生化产物纯化：对衍生化产物进行纯化，去除杂质，提高检测的准确性。
三、分离纯化
1.选择色谱柱：根据氨基酸的性质和分离要求，选择合适的色谱柱。
2.确定色谱条件：调整流动相的组成、pH值、流速等条件，达到最佳的分离效果。
3.检测器选择：根据需要选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器等。
4.分离纯化过程：将样品溶液进行分离纯化，得到纯化的氨基酸
溶液。
四、检测分析
1.仪器准备：根据选择的检测器类型，准备好相应的仪器设备。
2.进样分析：将纯化的氨基酸溶液进行进样分析，记录色谱图和峰信息。
3.数据处理：对色谱数据进行处理，计算各氨基酸的含量和相关参数。
4.结果分析：根据计算结果，对饲料中游离氨基酸的含量和分布进行分析。
以上是饲料中游离氨基酸的检测方法，包括样品制备、衍生化处理、分离纯化和检测分析等方面。
根据实际需求和实验室条件，可以选择合适的实验方法和仪器设备进行检测和分析。
游离氨基酸标准曲线
游离氨基酸标准曲线
游离氨基酸是生物体内重要的营养物质，对于生命活动具有重要的作用。
而测定游离氨基酸含量的方法之一，就是利用游离氨基酸标准曲线。
本文将介绍游离氨基酸标准曲线的制备方法及其应用。
首先，制备游离氨基酸标准曲线需要准备一系列浓度逐渐递增的游离氨基酸溶液。
可以选择常见的氨基酸，如赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸等，按照一定的比例将它们分别溶解在适量的溶剂中，得到不同浓度的游离氨基酸溶液。
接着，将这些溶液分别加入到已知浓度的氨基酸标准溶液中，使得标准溶液的浓度与待测溶液的浓度相近。
然后，利用氨基酸分析仪器，如高效液相色谱仪（HPLC）或气相色谱仪（GC），测定这些混合溶液的吸光度或荧光强度。
最后，利用已知浓度的标准溶液的吸光度或荧光强度与其浓度之间的关系，绘制游离氨基酸标准曲线。
游离氨基酸标准曲线的应用主要体现在游离氨基酸含量的测定上。
通过测定待测样品的吸光度或荧光强度，然后利用已绘制的标准曲线，可以准确地计算出样品中游离氨基酸的含量。
这对于食品工业、生物医药领域等具有重要意义。
比如，在食品工业中，可以通过测定食品中游离氨基酸的含量，来评价食品的营养价值和品质；在生物医药领域，可以利用游离氨基酸标准曲线来监测细胞培养基中游离氨基酸的含量，以保证细胞培养的质量。
总之，游离氨基酸标准曲线是一种重要的实验方法，它不仅可以用于游离氨基酸含量的测定，还可以在食品工业、生物医药领域等领域发挥重要作用。
因此，掌握游离氨基酸标准曲线的制备方法及其应用，对于相关领域的科研工作者和实验人员来说，具有重要的意义。
高效液相色谱-程序波长紫外检测法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物
是经 双加 氧酶 的作 用生 成 Ⅳ＿ 甲酰 犬尿 氨 酸 ， 然后
转 变为 犬 尿 氨 酸 （ ｙ ｕ ｅ ｉｅ ｙ 。研 究 表 明 ｋ ｎ ｒｎｎ ，Ｋ ｎ） Ｔ ｐ代谢 与 免疫性 疾 病 、 血管 性 疾病 、 经 性 疾病 ｒ 心 神
密 切相 关 。 目前 检 测 Ｔ ｐ及 其 代 谢 物 常 用 高 效 ｒ 液 相色 谱法 （ Ｐ Ｃ） Ｈ Ｌ ， 中 Ｔ ｐ及 ５Ｈ 其 ｒ － Ｔ检 测大 多 采用 荧光 检 测 器 ， Ｋ ｎ检 测 采 用 紫 外 检 测 器 ， 而 ｙ 但 同时分析 Ｔ ｐ两 条代 谢 途 径 的报 道较 少 ， 中有 ｒ 其
ＨＰ Ｃ 电 化 学 检 测 或 采 用 多 种 检 测 器 同 时 检 Ｌ 一
２ 结 果 与 讨 论
２１ Ｈ Ｌ ． Ｐ Ｃ条 件 的确 定 ２ １ １ 流 动相 中 乙腈 的 比例 对保 留时间 的影响 ． ． 本研 究选 择 乙腈 和 醋 酸 钠缓 冲液 作 为 流 动相 ， 并对 流 动相 比例进 行 了考察 。 以混 合标 准液 和混合 血浆 作 为 样 品 进 行 分 析 。在 乙腈 比例 为 ２ ～７ ％ ％ 时， 随着 乙腈 比例 的 增 大 ， 析 物 的 保 留时 间均 缩 分
・４ ６・ ３ 来自色 谱 １ ３ ＨＰ Ｃ 条件 ． Ｌ
第２ ９卷
色 氨 酸 （ｒｐｏ ｈ ｎ ｒ 是 人 体 必 需 氨 基 酸 ｔ ｔｐ ａ ，Ｔ ｐ） ｙ 之一 ， 其代谢 主要 通过 两 条途径 ： 是在 羟化 酶 的作 一 用 下生 成 ５羟 色胺 （ －ｙ ｒｘ ｔ ｐ ａ ｎ ， － Ｔ） 一 ５ｈ ｄ ｏ ｙｒ ｔｍｉｅ ５Ｈ ， ｙ
了 ＨＰ Ｃ 程 序 波 长 紫 外 检 测 法 同 时 测 定 血 浆 中 Ｌ 一 Ｔ ｐ、 ｙ ｒ Ｋ ｎ和 ５Ｈ 该 方 法 简 便 、 速 、 敏 ， 成 功 一 Ｔ， 快 灵 并 应 用 于抑郁 症患 者血 浆 中 Ｔ ｐ的代 谢 分析 。 ｒ
色氨酸含量测定方法
色氨酸含量测定方法
1. 你知道高效液相色谱法吗？就像给色氨酸做一次特别的“体检”。
比如说，我们想知道牛奶里色氨酸的含量，就可以用这个方法呀！把样本放进去，仪器就像个聪明的侦探，能准确找出色氨酸的量呢！
2. 纸层析法也不错哦！这就好像给色氨酸画一张独特的“地图”。
比如检测麦粒里的色氨酸，用这种方法慢慢展开，色氨酸的位置就清晰可见啦，神奇吧！
3. 分光光度法呢，如同给色氨酸安上一个“信号灯”。
像是在研究某种保健品中色氨酸含量时，通过特定的光线照射，就能知道色氨酸有多少啦。
4. 荧光光度法呀，简直就是给色氨酸加上了一层“闪耀的外衣”。
举个例子，检测药品里的色氨酸含量，那闪烁的光芒就是色氨酸在“亮相”呢！
5. 氨基酸分析仪测定法，好像是为色氨酸准备的专属“舞台”。
想要精确知道饲料里色氨酸的量，让它在这个“舞台”上好好表现一下就知道啦。
6. 酶联免疫吸附测定法呢，就像是给色氨酸设下的一个“陷阱”。
比如在检测血液样本中的色氨酸时，它乖乖地就“落网”啦。
7. 气相色谱法也能用来测定色氨酸哦，这相当于为色氨酸造了一条特别的“跑道”。
拿植物样本来说，色氨酸就能在这条跑道上被检测到呢。
8. 微生物法呀，就如同让色氨酸去参加一场“比赛”。
好比检测食品中的色氨酸含量，它在这个“比赛”中的表现就决定了它的数量呢！我觉得呀，这些方法都各有奇妙之处，都能帮我们准确了解色氨酸的含量呢！。
游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)
八．饮料中游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)本方法适合饮料中游离色氨酸的测定本方法检测限：饮料中游离色氨酸为30μg/100ml。
（一）方法提要试样的游离色氨酸经处理后，在高效反相色谱C18柱上分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量游离色氨酸的含量。
（二）仪器1. 高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。
2. 超声清洗仪（溶剂脱气用）。
3. 天平（精确到0.0001g）。
4. 微孔滤膜（HF 0.45 μm）。
（三）试剂1. 1.0mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠（分析纯），加适量去离子水并稀释到100ml。
2. 甲醇（色谱纯）。
3. 0.1%(m/V)磷酸溶液：1.0g磷酸（分析纯）加水至1000mL，溶解混匀，过微孔滤膜0.45μm，待用。
4. 色氨酸对照品，Fluka公司(纯度≥99.5%)。
5. 色氨酸标准溶液：精密称取色氨酸对照品约0.0300g，移入100ml容量瓶中，加入少许水，再加入50μL1.0mol/L氢氧化钠溶液，超声溶解并用水定容到100mL，成浓度为300μg/mL的标准储备液。
取标准储备液5.0mL用去离子水定容到50mL，成为浓度为30μg/mL的标准溶液。
（四）测定步骤1. 样品处理：①汽水、可乐型饮料：取均匀试样置于小烧杯中，微温除去二氧化碳（或超声脱气10min），经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。
②果汁类：取均匀试样置于离心管中，5000rpm/min离心20min，上清液经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。
2. 标准工作曲线制作。
精密吸取色氨酸标准溶液1.0，5.0，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用水定容到100mL，摇匀。
分别取10μL标准工作系列溶液进样分析，以测得的色氨酸的峰面积，分别对色氨酸的浓度绘制标准曲线。
3．色谱条件①色谱柱：Ultimate C18液相色谱柱 4.6mm i.d.× 150mm, 5µm。
高效液相色谱仪测定发酵液中的氨基酸含量
高效液相色谱仪测定氨基酸的含量1 L--色氨酸含量的测定1.1实验仪器与试剂色氨酸样品，甲醇，高效液相色谱仪，0.03%KH2PO4溶液1.2 HPLC色谱分析条件流动相为0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），线性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm。
1.2标准溶液的配制精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
1.3标准直线的制作精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
1.4发酵液中样品中色氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
2L-精氨酸含量的测定2.1实验仪器与试剂L-精氨酸标准样品，乙腈，高效液相色谱仪，磷酸二氢铵。
PH计，磷酸，2.2HPLC色谱分析条件流动相: 以磷酸二氢铵溶液( 称取磷酸二氢铵1.15g, 加水800m 溶解后, 用磷酸调节pH 值至2.0±0.1, 加水稀释至1000ml ) - 乙腈为流动相，线性梯度淋洗; 柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。
2.2标准直线的制作精密称取精氨酸标准标准品50mg，置100ml 容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。
精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml 中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg 的溶液，注入液相色谱仪，以精氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。
2.3发酵液中样品中精氨酸含量的测定取发酵液，稀释配制成约500μg/ ml 的溶液，摇匀，过滤，取25μl 进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。
高效液相色谱法测定氨基酸口服液中L-色氨酸的不确定度评定
； 期
Ｃ ＩＣＡＬ ＡＬＹＳＩＳ Ｍ ＥＴＥＲＡＧＥ 化学 ＡＮＤ 分析 计量 ＨＥＭ ＡＮ
Ｖ Ｉ ２１ ＮＯ． ｏ． ． ２
Ｍ ａ．２ ２ ｒ Ｏｌ
ｄ ｉ Ｏ ９ ９ ｊｓｎ１ ０ － １ ５２ １ ． ． ４ ｏ： ． ６ ／ ．ｓ ． ８６ ４ ．０ ２０ ０ ｌ３ ｉ ０ ２０
ｍｅ ｓ ｒｍｅ ｔ ｎ ｅｔｉｔ． ｅｃ ｎｅ ｔ ｆ － ＲＰｗａ ． ｇ ａｕ ｅ ｎ ｃ ｒ ｎｙ Ａｓｔ ｏ ｔｎ Ｔ ｓ８８ ｕ ａ ｈ ｏＬ ／ｍＬ，ｈ ｘ ａ ｄ ｄｕ ｃ ｒａｎｙｗ ｓ１１ ｇ／ ． ｔｅｅ ｐ ｎ ｅ ｎ ｅｔｉｔ ａ ． ｍＬ
Ｋｅ ｗｏ ｄ Ｌ－ ｙ ｔｐ ａ ； Ｌ ； ｍｉｏ－ｃｄｏ ａ ｑ ｉ ； ａ ｕ ｅ ｎ ｎ ｅ ａｎ ｙ ｙ ｒｓ － ｐ ｏ ｈ ｎ ＨＰ Ｃ ａ ｎ － ｉ ｒ ｌ ｉ ｕ ｄ ｍｅ ｓ ｒ ｍｅ ｔ ｃ ｒ ｉ ｔ ｔ ｒ ａ ｌ ｕ ｔ
色 氨 酸 通 常 以游 离 或 结 合 态 广 泛 存 在 于生 物
称 取 约 ５Ｏ ｇＬ 色氨 酸 标 准 品 ， 水溶 解 并 准 确 ． ｍ 一 ０ 用
０ｍＬ 于 ℃冰箱 中保存 ； 体中， 是人类和动物必需的 ８ 种氨基酸之一 。人体 定 容 至 ５ ， ４ 不能制造它 ， 而必须从膳食 中摄取【２ １］ ，０色氨酸对生 甲醇 ： 色谱纯 ； 水： 超纯 水 ， 电阻率 为 １． Ｍｎ ・ ｍ ； ８２ ｃ 物 的生 长 和 氮平 衡 非 常重 要 ， 氨酸 缺 乏或 代谢 错 色 误 会 引起 一 系列 疾 病 ； 一 方 面 ， 氨 酸 也 可作 为 另 色 氨基 酸 口服液 ：０ｍＬ 支 ， １ ／ 市售 。
二极管阵列检测器 ， 国 Ｗａ ｒ 公司； 美 ｔｓ ｅ 三 色氨酸纯度标准物质 ： Ｂ Ｅ １０６ ， 一 Ｇ Ｗ（） ０２０ 纯度
枸杞干果酒发酵过程中氨基酸组成的变化
枸杞干果酒发酵过程中氨基酸组成的变化丁学利【摘要】采用高效液相色谱法,测定了干果枸杞酒发酵过程中的游离氨基酸组成的变化.发酵前后共检测出20种氨基酸,其中均包含必须氨基酸8种,发酵前后氨基酸总量分别为4 379.61 mg·L-1、1 975.71 mg·L-1.发酵过程中,大多数氨基酸的变化趋势较为类似,均随着发酵的逐渐旺盛,氨基酸含量降低;但也检测出组氨酸和半胱氨酸含量基本保持不变,而甲硫氨酸含量从初始的8.53 mg·L-1上升到最后的10.81mg· L-1.【期刊名称】《陕西林业科技》【年(卷),期】2019(047)001【总页数】5页(P12-15,22)【关键词】干枸杞;果酒;发酵过程;高效液相色谱;氨基酸组成【作者】丁学利【作者单位】宁夏葡萄酒与防沙治沙职业技术学院,银川750199【正文语种】中文【中图分类】S枸杞子通常是人们对茄科枸杞属多年生落叶灌木—宁夏枸杞(Lycium barbaruv)果实的统称，其富含枸杞多糖、类胡萝卜素、甜菜碱、黄酮、多种维生素等多种营养成分和生物活性物质[1]，具有多方药理作用和生物活性功能[2]，如抗病毒、抗凝血、抗肿瘤、降低血糖、保护肾脏等[3-4]。
枸杞发酵酒是以宁夏枸杞干果为原料，在控温条件下通过酵母菌发酵制成，可以较大程度保持枸杞原料的风味和生物活性成分，使营养成分更易于吸收，而且产品风味独特、多样，酒度较低，受众更广，更符合国内外饮料向天然、健康、保健发展的趋势，具有很大的发展空间和市场潜力，是枸杞深加工的趋势之一[5-8]。
枸杞中的主要含氮化合物为氨基酸，游离氨基酸的含量对所发酵的枸杞酒有重要的影响，将直接影响枸杞酒的酒精发酵[9]。
研究表明，若发酵液中氮源缺乏或比例不合适，会对酿酒产生不良的影响，严重时会引起发酵停滞，并会产生过多的硫化氧、双乙酰，影响酒的香气物质形成，产生过多的高级醇，最终影响酒的品质[10]。
柱前衍生—高效液相色谱法测定酱油中游离氨基酸
：
Ｓｃｉ ｃｅ ｅｎ ａｎｄ Ｔ ｅｃｈ ｎｏｌ ｏｇｙ ｎ Ｉ ｎｏｖ ｉ Ｈｅｒ ｄ ａｔ ｏｎ ａｌ
学 术 论 坛
柱前衍生 一高效液 相色谱 法测定酱油 中游 离氨 基酸
罗 继 平
（ 阳市产商 品质量监 督检验所 湖 南衡 阳 衡
４ １０ ） ２ ００
摘 要 ： 立 一 种 潮 定 警 油 Ｉ 种 游 离氨 基 酸 的方 法 。 油 经 离线 衍 生 后 ， 用 常 用ｃ１ 建 ７ 警 采 谱 拄 ， 行 反 相 高 效液 相 色 谱 分析 。 法 捡 出限 ８色 进 方 为０． ｍｏ ／Ｌ， 品加 标 回 收 串 为 ９２ ～１０ ５ Ｉ 样 ％ ２％。 方 法不 需 专 用 氨 基 酸 分 析 色谱 柱 ， 敏 度 高 ， 现 性 好 ． 出限 低 、 收 率 高 谊 灵 重 检 回 关奠词 ： 氨基 酸 柱前衍 生 高效 液相色谱 法 酱油
Ｙ＝ ４．８ ８ ２ ９ ３Ｘ＋Ｏ ０ ９ ．９ ５
０ ９ ９ ．９ ５
０９９ ．９ ０ ０９９ ．９ ８ ０ ９ ９ ．９ ９
０ ９ ９ ．９ ４
１ ２ 准溶液衍生 ．标 衍生试剂 准备 ： ｔｒ ｃ ｇ Ｆｌｏ ＷａｅｓＡｃ Ｑ Ｔａ ｕ ｒ Ｒ ａ ｅ ｔ Ｋｉ 试 剂盒） ｅ ｇ ｎ ｔ （ 包括 ３ 个试剂瓶 ， 分别为 硼酸 盐缓冲溶 液 ， 衍生 试￣ （ ＱＣ 粉末和 无水 Ｊ Ａ ） 乙腈 。 临用前 ， ． ｍＬ无水乙 腈 于衍生试 吸１ ０ 剂瓶 中（ 事前将瓶 振荡 ， 使粉 末完全置于瓶底 ） ， 拧 紧瓶盖 ， １ 秒 ， 入５ ℃烘箱 加热 至粉 末 摇 ０ 放 ５ 完全 溶 解 （ 得 超过 １ ｍｉ ） 不 ｎ。 ０ 衍生 ： ５ Ｌ 将２ ０ 内衬玻璃管 放入２ 液相 ｍＬ 样品瓶 中 。 移液 枪吸取 １ Ｌ 用 ０ 氨基酸标 样工 ｕ 作液 放入 内衬管 底部 ， 加 入７ Ｌ 再 ０ 硼酸 缓冲 盐， 放在 涡旋振 荡器上 涡旋 １ ｎ 再精 确加入 ｍｉ ， ２ Ｌ Ｏ“ 衍生 试 剂 ， 速盖 紧瓶盖 涡旋 ｌ ｎ 迅 ｍｉ ～ ２ ｎ ， ５ ｍｉ 后 于５ ℃烘箱 放置５ ｉ 后 ， 出冷 至室 ｍｎ 取 温 ， 样测定 。 进 １ ３ 品前处理 ．样 根据 酱油 中 氨基酸 态氮 含量 不 同吸取 一 定量酱 油置于５ ｍＬ ０ 容量瓶 中（ 其中氮含量 保证 为０．１ ０ ６“ｇ～０ ８ ｇ ， ５ ． ）用 ％三氯乙酸定容 ， 摇 表１ 梯度 洗脱程 序
高效液相色谱法测定酶法制备L-色氨酸
Ｃ Ｉ ｔ ， Ｉ ｆ 『 ｊ ．
一
￡ ／ Ｌ ｉ ． ｓ ｈ ｅ ｎ ｇ． Ｚ Ｈ １ ｆ 、 ｉ ｎ ｇ ｔ ａ ｏ， ＤＯ
ｎ ｇ
．
Ｃｏｌ ｌ ｃ －ｃ ｏｆ Ｂｉ ｏｌ ｏ ， ｗ ａ ｎｄ Ｆ ｏｏ ｄ Ｅｎｇ ｉ ｎｅ ｅ ｒ ‘ ｉ ｎｇ， Ｓｕ ｚ ｈｏ ｕ Ｕｎｉ ｖｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｓｕ ｚ ｈ ｏｕ ２ ３ ４００ （ ）（ 、 ｈｉ ｎａ
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｈｉ ｇ ｈ ｐｅ ｒ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｎ ｃ ｅ ｌ ｉ ｑ ｕｉ ｄ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｙ ｍｅ ｔ ｈ ｏｄ ｆ ｏｒ ｄ ｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏｆ ｅ ｎｚ ） ｑ ｎａ ｔ ｉ ｃ
一 一
。－ …
・ Ｖ Ｉ Ｖ
高效液 相 色谱法测定酶 法制备 Ｌ 一 色氨 酸
陈 军． 徐礼 生 ． 张兴桃 ． 董 增
（ ＂ Ｉ 、 ： 院
： 院． 茁 徽
Ｊ ｌ ２ ３ ４ ０ ０ （ ） ）
摘 要 ：研 究 了高 效液相 色谱 法测 定酶 法制 备 Ｌ 一色氨 酸 的 最佳 参数 、结果 表 明 ． 流动 相 分配 比
扰 发 酵液 中 Ｌ 一 色氨 酸含 量测 定。此 方法 用 于样品 中的 Ｌ 一 色氨 酸 的测 定 ， 分 离效 果 良好
高效液相色谱-荧光检测法快速测定血清中的色氨酸
高效液相色谱-荧光检测法快速测定血清中的色氨酸王清平;唐爱国【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2002(20)1【摘要】利用色氨酸具有自然荧光的特点,建立了测定血清中色氨酸浓度的高效液相色谱-荧光检测分析方法。
血清标本经高氯酸沉淀蛋白后取上清液进行色谱分析,色谱柱为Nova-Pak C18柱,流动相为5 mmol/L磷酸二氢钾水溶液,流速为1 mL/min,激发波长为254 nm,荧光检测波长为338 nm。
该法检测色氨酸浓度的线性范围为0.49 μmol/L～490.00 μmol/L,最低检测限为0.10 μmol/L,回收率为97.2%～98.6%(平均值为97.9%),批内、批间相对标准偏差均小于5%,苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和5-羟吲哚乙酸等物质对该法均无干扰。
进样后5 min内可完成检测,整个实验过程耗时小于30 min。
方法简便、快速、准确、可靠,适用于临床和科研工作。
【总页数】4页(P52-55)【作者】王清平;唐爱国【作者单位】中南大学湘雅二医院检验科,湖南,长沙,410011;中南大学湘雅二医院检验科,湖南,长沙,410011【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.高效液相色谱-荧光法同时测定血清中的色氨酸和酪氨酸 [J], 任亚萍;唐爱国;周前选;项忠元2.基于涡流色谱技术的在线固相萃取/高效液相色谱-荧光检测法结合在线稀释快速测定牛奶中5种氟喹诺酮抗生素残留 [J], 张艳海;金燕3.高效液相色谱-荧光检测法测定血清色氨酸 [J], 唐爱国;王清平4.高效液相色谱-荧光检测法测定蜂王幼虫中的色氨酸含量 [J], 张金振;周金慧;薛晓峰;吴黎明;陈方;李熠;赵静5.多环芳烃分子印迹柱-高效液相色谱荧光检测法快速测定烤肉中15种多环芳烃[J], 阳文武;谭顺中;郭娅;周浓因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
八．饮料中游离色氨酸的测定(高效液相色谱测定方法)
本方法适合饮料中游离色氨酸的测定
本方法检测限：饮料中游离色氨酸为30μg/100ml。
（一）方法提要
试样的游离色氨酸经处理后，在高效反相色谱C18柱上分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量游离色氨酸的含量。
（二）仪器
1. 高效液相色谱仪带紫外检测器或二极管阵列检测器。
2. 超声清洗仪（溶剂脱气用）。
3. 天平（精确到0.0001g）。
4. 微孔滤膜（HF 0.45 μm）。
（三）试剂
1. 1.0mol/L氢氧化钠溶液：称取4.0g氢氧化钠（分析纯），加适量去离子水并稀释到100ml。
2. 甲醇（色谱纯）。
3. 0.1%(m/V)磷酸溶液：1.0g磷酸（分析纯）加水至1000mL，溶解混匀，过微孔滤膜0.45μm，待用。
4. 色氨酸对照品，Fluka公司(纯度≥99.5%)。
5. 色氨酸标准溶液：精密称取色氨酸对照品约0.0300g，移入100ml容量瓶中，加入少许水，再加入50μL1.0mol/L氢氧化钠溶液，超声溶解并用水定容到100mL，成浓度为300μg/mL的标准储备液。
取标准储备液5.0mL用去离子水定容到50mL，成为浓度为30μg/mL的标准溶液。
（四）测定步骤
1. 样品处理：
①汽水、可乐型饮料：取均匀试样置于小烧杯中，微温除去二氧化碳（或超声脱气10min），经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。
②果汁类：取均匀试样置于离心管中，5000rpm/min离心20min，上清液经0.45μm微孔滤膜过滤后供进样用。
2. 标准工作曲线制作。
精密吸取色氨酸标准溶液1.0，5.0，10.0ml，分别置于100mL容量瓶中，用水定容到100mL，摇匀。
分别取10μL标准工作系列溶液进样
分析，以测得的色氨酸的峰面积，分别对色氨酸的浓度绘制标准曲线。
3．色谱条件
①色谱柱：Ultimate C18液相色谱柱 4.6mm i.d.× 150mm, 5µm。
②流动相：甲醇＋0.1%磷酸溶液=18+82（V+V）。
③流速：1mL/min。
④柱温：35℃。
⑤紫外检测波长：280nm。
4. 样品测定：取样品滤液10μL进液相色谱分离测定，根据色谱峰保留时间定性，外标峰面积法进行定量。
标准色谱图
（五）结果计算
根据待测样品色谱峰面积，由标准回归方程式中得样液中游离色氨酸含量，计算出样品中的含量。
试样中游离色氨酸含量按下式进行计算。
c
X=
10
式中：
X——试样中游离色氨酸含量，单位为毫克每一百克（mg/100g）；
c ——样液的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）；
计算结果保留三位有效数字。
（六）注释
1. 色氨酸的化学名称为L-2-氨基-3(β-吲哚)丙酸，分子式为C11H12N2O2。
它为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。
在水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。
色氨酸是一种必
需氨基酸，它的作用主要有两个，即防止烟酸缺乏症和增加血清素水平。
在所有氨基酸中，色氨酸被认为是特定食品中含量最少的。
虽然稀少，色氨酸是非常必要的，因为它会由肝脏转换成维生素B3（烟酸和烟酰胺），这有助于防止烟酸缺乏症。
色氨酸的作用还包括负责神经传递素的生产。
色氨酸作为一种血清素的初期形式，这种神经传递素负责控制睡眠模式，食欲和情绪。
2. 文中试剂如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。
参考文献
[1] 邓自西.高效液相色谱-二极管阵列检测法测定酵母浸膏中水解和游离色氨酸的含量[J] .浙江农业学报，2003, 15(05)：310-313.。