抗酸染色

❖ 3 加热过程中不能让液体沸腾，冲洗时要 等玻片冷却后冲洗，避免玻片炸裂。
❖ 4 掌握好脱色的时间和程度；
抗酸染色
临床微生物学教研室
实验原理：
❖ 分枝杆菌的细胞壁内含大量脂质（主要是分枝菌 酸）包围在肽聚糖的外面，一般不易着色，要经 过加热和延长染色时间来促使其着色。分枝菌酸 与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名 抗酸染色。
❖ 抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸 复红牢固结合成复合物，用3%盐酸酒精处理也不 脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为 红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。
❖
下为止
初染（5%石炭酸复红）
3～5min 冷却后水冲
脱色（3%盐酸酒精）
30秒左右 水冲
复染（碱性美蓝）
1min 水冲
吸水纸吸干
油镜镜检
三 、油镜观察结果
❖ 抗酸菌：红色（+）
初染
脱色
复染
❖ 非抗酸菌和背景：蓝色（—）
初染
脱色
复染
报告
❖ “—”：仔细观察至少300个视野未发现抗酸菌. ❖ “±”：100—300个视野内发现1-2条抗酸菌
❖ 培养基：罗-琴氏（Lowenatein Jensen）培养基 主要成分：蛋黄、甘油、天门冬素、 马铃薯淀粉、无机盐、孔雀绿。
❖ 蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长，孔雀绿可抑制杂 菌生长
❖ 生长Biblioteka Baidu点：缓慢；
❖ 固体培养基：2-4周可见菌落，为粗糙型，表面干燥 呈颗粒状，不透明，乳白色或米黄色。如结节状、 菜花状菌落。 液体培养基：菌膜。
(全部涂膜镜检3遍). ❖ “﹢”：100个视野内发现3-9条抗酸菌(全部涂
膜镜检1遍). ❖ “2﹢”：10个视野内发现1-9条抗酸菌. ❖ “3﹢”：每个视野内发现1-9条抗酸菌. ❖ “4﹢”：每个视野内发现9条以上的抗酸菌.
注意事项
❖ 1 涂片时要充分研磨，固定温度要合适；
❖ 2 染色过程中染色时间要掌握好；
通过抗酸染色,可以将抗酸性细菌和其它 非抗酸性细菌染上不同的颜色，可用于抗酸 菌的形态学鉴定。
目的要求
❖ 掌握结核分枝杆菌形态、培养特性和常用鉴 定方法。
❖ 掌握抗酸染色法。
仪器和材料
❖ 菌种：卡介苗. ❖ 培养基:改良罗氏培养基. ❖ 试剂:抗酸染色液 ❖ 其他:痰标本、显微镜、酒精灯等.
结核杆菌的培养特点
实验方法
❖ 一 、 涂片标本的制备
❖
涂片
干燥
（充分研磨，防止细菌成团）
固定
二、 染色
❖ 初染：用木夹夹持玻片，滴加
❖ 石炭酸复红，以盖满标本为度，
在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，
❖ 出现蒸汽即暂时离开，如此反复
数次，染3-5分钟，若染液蒸发减
❖ 少，可再加染液。
❖
❖ 脱色：用3%
❖
盐酸酒精脱色， 至无红色染液流