支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立
(参考课件)OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立
（4）、相关研究表明，卵白蛋白（OVA）容易引起BABL/c小鼠产生 气道高反应性和血清中IgE超敏反应的过敏反应 [1]。并且雌性BABL/c 小鼠的炎症反应更加显著，
研究进展
1.2 致敏原的选择
选择用尘于螨制的作话过价敏格性昂支贵气；管哮喘动物模型的致敏原主要有卵 白若蛋是白病、毒真和菌真孢菌子则、制尘成螨哮、喘蟑模螂型变虽应为原临等床。中在通制过作控哮制喘病模原型体感 的染过而程控中制，哮选喘择发不生同提的供致依敏据原，基但本其都稳能定制性作较出差各，种其不致同敏的的哮机制 喘还模需型要，进但一是步几的乎研每究个；致敏原都有自己自身的缺点。 蟑螂变应原、花粉以及职业性致敏原等由于种类繁多、模型制 作很难标准化而使模型的复制变得非常复杂，因此在制作哮喘 模型的过程中很少选择； 虽然选择使用OVA作为致敏原，很难制作出重症哮喘模型，然 而，OVA具有易于获得、免疫原性强、相关试剂可选择性大等 特点，作为经典抗原，常与特定的佐剂联合使用。
OVA诱导小鼠过敏性哮喘模型的建立
1
Content (目录)
研究 进展
重要 性
病因 病机
治疗 方法
研究 总结
研究 进展
3
研究进展
近年来，随着社会工业化进程的加快，人们生活水平的 提高，过敏性哮喘患者的数量呈上升趋势，研究者们也将如 何治疗过敏性哮喘作为了一个重要的研究方向。为了研究过 敏性哮喘的病因、发病机制和探索相应的治疗方法，因此对 过敏性哮喘动物模型的建立尤为重要。本次实验的目的是建 立BABL/c小鼠过敏性哮喘模型。
支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立
支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立李斌恺赖克方洪燕华王法霞陈如冲林少建钟南山【摘要】目的目前国内对支气管哮喘(简称哮喘) 小鼠的评价多数仅立足于气道炎性指标,不能完全反映哮喘的病理生理特征。
本所率先从国外引进了小动物无创检测和有创检测肺功能仪。
无创法检测时小鼠不必麻醉,而且每次可以同时检测多只小鼠,具有较大的优越性,但能否取代有创法尚需更多的数据。
本研究旨在建立无创检测小鼠气道高反应性的检测方法,并与有创检测方法进行比较。
方法根据动物模型和气道反应性检测方法不同,动物分为: ①无创哮喘组; ②无创对照组; ③有创哮喘组; ④有创对照组。
采用卵白蛋白致敏和激发,建立BALB/ c 小鼠哮喘模型,生理盐水作为对照,分别用无创和有创的方法测定气道反应性。
哮喘动物雾化吸入0 . 2～50 g/ L 倍增浓度的乙酰甲胆碱( Mch) ,测定相应浓度下的增强呼气间歇( Pe nh) 值或气道阻力( RL ) 值等指标。
将小鼠吸入Mc h 后RL 或Penh 增加 2 倍的激发浓度以PC100 来表示。
所有动物都行支气管肺泡灌洗, 收集灌洗液, 涂片染色后分类计数。
结果无创哮喘组PC100 均≤6 . 25 g/ L ,对照组PC100 均≥12 . 5 g/ L 。
其Lo g2 ( 10 PC100 ) 值( 5 . 36 ±0 . 84) 显著低于对照组( 7 . 97 ±0 . 82)( P < 0 . 01) 。
无创哮喘组从Mc h 浓度3 . 12 g/ L 开始, 其Pe nh 值明显高于对照组。
有创哮喘组RL 值从Mc h 浓度0 . 39 g/ L开始就明显高于相应对照组( P < 0 . 05) 。
无创组与有创组的气道反应性相关系数R =0 . 96 ( P < 0 . 01) 。
无创哮喘组和有创哮喘组的嗜酸粒细胞分别为( 54 . 00 ±5 . 96) % , ( 55 . 93 ± 5 . 92) % ,显著高于各自对照组的( 0 . 38 ±0 . 52) % , ( 0 . 63 ±0 . 74) %( P < 0 . 01) 。
气道反应性测定
气道反应性及其测定气道反应性（airway responsiveness）是气管支气管对各种物理化学药物以及变应原等刺激引起气道阻力变化的反应。
在含量较低的情况下，正常人的气道对这些刺激物或变应原的刺激并不发生收缩反应或仅有微弱的反应，而某些人的气道则发生过度的收缩反应，引起气道管腔狭窄和气道阻力明显增高，这就是气道高反应性（airway hyper-responsiveness）.气道高反应性是支气管哮喘主要的病理生理特征和诊断依据。
临床上通过支气管激发试验来测定气道反应性。
早在1873年，英国人Blackleey首先进行了支气管激发试验，自1950年，这项技术有了较快发展，1975年，美国Chai H等用肺功能测定仪进行了支气管激发试验，并制定了标准，与此同时，日本Takishima T等采用气道反应性测定仪（astograph）进行了支气管激发试验。
此后这项技术在呼吸生理，变态反应以及哮喘的基础和临床研究中得到广泛的应用和发展，并进行了标准化和规范化。
第一节气道反应性增高机制及其测定原理吸入某些刺激物或变应原可通过刺激气道平滑肌细胞的受体或感受器直接引起气道平滑肌收缩，也可激活气道炎性细胞释放炎性介质和细胞因子引起气道黏膜充血水肿，气道平滑肌收缩，导致气道管腔狭窄和阻力增高，即气道反应性增高。
目前的研究表明支气管哮喘产生气道反应性增高的机制有以下几个方面：一、气道慢性炎症支气管哮喘是气道慢性炎症性疾病，各种因素作用于气道，使得气道黏膜炎性细胞增多，聚集，释放炎性介质和细胞因子，造成气道黏膜充血水肿，腺体分泌亢进，上皮细胞脱落，气道平滑肌收缩，引起气道管腔狭窄，从而出现气道反应性增高。
气道炎性反应是产生气道高反应性的主要机制。
二、气道神经受体的影响迷走神经反应性增高，释放乙酰胆碱使气道平滑肌收缩，导致气道高反应性。
哮喘患者的气道在长期炎症刺激下和长期应用β 2 –受体激动剂的情况下，使得气道内β 2 –肾上腺能受体数量和功能低下，从而导致气道反应性增高。
建立小鼠哮喘模型两种不同方法的比较
建立小鼠哮喘模型两种不同方法的比较哮喘是一种慢性呼吸系统疾病，特征为阵发性呼吸困难、喘息、咳嗽和胸闷，严重影响患者的生活质量。
为了深入研究哮喘的发病机制和寻找有效的治疗方法，科学家使用小鼠建立了哮喘模型。
目前，有多种方法可以建立小鼠哮喘模型，其中最常用的包括感染性哮喘模型和变态反应性哮喘模型。
本文将对这两种方法进行比较。
感染性哮喘模型是通过感染细菌或病毒引发哮喘样症状。
首先，科学家选择一种感染性病原体，如肺炎克雷伯菌或呼吸道合胞病毒。
然后，将这些病原体通过吸入或直接注射等方式引入小鼠的呼吸道。
之后，小鼠的免疫系统就会开始产生炎症反应，导致呼吸道狭窄和气道高反应性。
这种方法的优点是可以真实地模拟感染性哮喘的病理过程，更符合人类疾病的特点。
但是，此方法需要使用病原体，存在一定的安全风险，并且操作比较繁琐。
与感染性哮喘模型相比，变态反应性哮喘模型更常用且操作相对简单。
变态反应是导致哮喘发生的主要原因之一，患者的免疫系统对特定的抗原物质产生过敏反应，导致气道炎症和收缩。
在小鼠中建立变态反应性哮喘模型，科学家首先选择一个合适的抗原物质，如牛血清白蛋白（BSA）或植物花粉等。
然后，将抗原物质与辅助剂混合，并通过皮下或鼻腔注射的方式给小鼠。
随着时间的推移，小鼠的免疫系统会对该抗原物质产生过敏反应，导致气道炎症和收缩。
此方法的优点是操作相对简单，不需要使用病原体，安全性较高。
但是，由于变态反应的机制相对复杂，该模型无法完全模拟感染性哮喘的病理过程。
除了以上两种方法，小鼠哮喘模型还可以通过化学物质诱导方法来建立。
例如，通过酸性盐类或花粉等刺激物来诱导小鼠产生气道高反应性和炎症反应。
这种方法的优点是操作简单，结果稳定，但是不能真实地模拟人类哮喘的病理特点。
综上所述，感染性哮喘模型和变态反应性哮喘模型是目前小鼠哮喘研究中最常用的两种方法。
感染性哮喘模型能够更真实地模拟人类的哮喘病理特点，但操作繁琐且存在一定的安全风险；而变态反应性哮喘模型操作简单且安全性较高，但不能完全模拟感染性哮喘的病理过程。
支气管哮喘患者FeNO的表达及临床意义
·临床论著·支气管哮喘患者FeNO 的表达及临床意义尹利剑*（商丘市第三人民医院，河南 商丘 476000）摘要 目的：探讨不同呼出气一氧化氮（Fractional exhaled nitric oxide ，FeNO ）水平下支气管哮喘患者痰液、血液、肺功能检测等多个观察指标的表达特点，并分析在气道高反应性中的预测价值。
方法：选取2017年1月至2019年5月于我院就诊的120例疑似支气管哮喘患者作为研究对象进行前瞻性分析，根据FeNO 水平不同，将FeNO ＞49 ppb 的42例患者列为高水平组，FeNO 为26～49 ppb 的33例患者为低水平组，FeNO ≤25 ppb 的45例患者为正常组。
比较三组患者的基本临床资料、痰嗜酸性粒细胞、痰中性粒细胞、血嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（Eosinophilic cationic protein ，ECP ）和免疫球蛋白E （Immunoglobulin E ，IgE ）以及第1s 用力呼气容积（Forced expiratory volume at 1s ，FEV1）、FEV1占预测值百分比（FEV1%Pred ）、用力肺活量（Forced vital capacity ，FVC ）以及FEV1与FVC 比值（FEV1/FVC ）等肺功能检测结果进行统计分析。
结果：经Spearman 相关性分析显示，血IgE 、ECP 水平与FeNO 水平呈正相关（r=0.615/0.629，P>0.01），FEV1%pred 、FEV1/FVC 与FeNO 水平呈负相关（r=-0.494/0.789，P>0.01）。
其中血IgE 、ECP 、FEV1%pred 、FEV1/FVC 对于预测支气管哮喘有一定的价值，而联合上述指标对于预测支气管哮喘的准确性最佳（AUC=0.920，P>0.01）。
结论：不同FeNO 水平支气管哮喘患者在临床表现中具有显著差异，在血IgE 、ECP 和肺功能FEV1%pred 、FEV1/FVC 指标检测的基础上增加FeNO 可大大增加预测支气管哮喘的准确性。
支气管哮喘小气道功能障碍的检测方法及临床应用进展2023
支气管哮喘小气道功能障碍的检测方法及临床应用进展2023摘要支气管哮喘(简称哮喘)是常见的慢性气道炎症性疾病。
小气道功能障碍(SAD)可存在于不同表型、不同临床分期和不同病情严重程度的哮喘患者，并影响药物疗效和患者预后。
目前哮喘合并SAD的判定标准未能达成共识，炎症机制尚不明确。
本文对哮喘合并SAD的评估方法、发生状况、发病机制、临床特征和治疗方面的研究进展进行综述，以提高临床医生对本病的认识。
支气管哮喘(简称哮喘)是常见的慢性气道炎症性疾病。
小气道功能障碍(SAD)可存在于不同表型、不同临床分期和不同病情严重程度的哮喘患者，并影响药物疗效和患者预后。
目前哮喘合并SAD的判定标准未能达成共识，炎症机制尚不明确。
本文对哮喘合并SAD的评估方法、发生状况、发病机制、临床特征和治疗方面的研究进展进行综述，以提高临床医生对本病的认识。
一、SAD的评估方法小气道通常是指内径小于2mm的气道,包括传导区和腺泡区。
由于小气道异常不易被评估和治疗，故被称作〃沉默区〃。
目前尚缺乏判定SAD的金标准，临床常用的小气道功能评估方法如下。
1 .通气肺功能测定[5]:SAD的特点是气道过早闭塞，用力肺活量的降低是反映气体滞留的指标。
用力呼气流量（FEF）[包括最大呼气中期流量（FEF25~751用力呼出50%和75%肺活量时的呼气流量（FEF50和FEF75）]下降提示小气道阻塞。
《成人肺功能诊断规范中国专家共识》推荐将FEF25~75∖FEF50和FEF75至少两项下降至正常预计值的80%以下作为SAD的判定标;宙6I S近期国内一项大样本流行病学研究将SAD定义为FEF25~75%预计值、FEF50%预计值和FEF75%预计值三项中两项及以上小于65%[4]0该法应用广泛，但局限性在于FEF25~75可受肺容量影响，老年人和儿童肺容量受用力不足的影响较大，导致该指标可重复性受限[7]o2 .脉冲振荡法（impu1seosci11ometryJOS）通气肺功能测定中，患者用力呼气后可导致气道张力改变而IOS法是一种在平静呼吸时进行的测试,无需特殊配合且无创、操作简单，能反映整个呼吸系统的小气道功能。
三种哮喘小鼠动物模型的对比研究
•论著.三种哮喘小鼠动物模型的对比研究黄超文赵强钟莲娣钟雪莺仝金斋黄炎明【摘要】目的探讨三种哮喘小鼠造模方式在病理改变、灌洗液中细胞组分、气道反应性、气道炎症指标等方面的差异。
方法分别采用屋尘蠕提取物（HDM）、卵清蛋白（OVA）和甲苯二异氧酸酯（TDI）构建小鼠哮喘模型,检测小鼠肺病理改变、肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞和上皮细胞数量、气道高反应性、炎症因子表达情况。
结果HDM、OVA所诱导的哮喘小鼠BALF中细胞组分主要以嗜酸性粒细胞为主。
三组哮喘小鼠在接受不同浓度的乙酰甲胆碱雾化后气道阻力明显增高，与浓度呈正相关，而HDM和OVA诱导的哮喘小鼠气道阻力较TDI组更高。
三组小鼠的血清IgE和BALF中嗜酸性粒细胞炎症指标IL-4、IL-5JL-13明显增高，TDI组所诱导的IgE和BALF IL-4JL-5JL-13均分别低于HDM组和OVA组。
结论不同造模方式建立的哮喘小鼠动物模型在气道反应性、气道炎症和病理特点各有不同，HDM哮喘小鼠和OVA哮喘小鼠具有典型的嗜酸性粒细胞哮喘表现，而TDI哮喘小鼠表现为混合细胞性哮喘动物模型。
【关键词】哮喘；动物模型；屋尘螭提取物；卵清蛋白；甲苯二异氤酸酯［中图分类号］R562.2［文献标识码］A DOI:10.3969/j.issn.1002-1256.2019.11.001支气管哮喘是一种由多种炎症细胞和炎症组参与的慢性气道变应性炎症,并以气道黏液高分泌、气道高反应性和气道重塑为主要特征⑴。
Brown Norway、Wistar大鼠、Sprague Dawly大鼠为常见的大鼠哮喘动物模型，而BALB/c小鼠、C57BIV6小鼠则是常见的哮喘小鼠动物模型⑷。
目前造模方式常采用屋尘蟻提取物（HDM）、卵清蛋白（OVA）、甲苯二异氤酸酯（TDI）、灭活的呼吸道合胞病毒（RSV）等刺激诱导哮喘动物模型⑶。
本研究拟建立HDM、OVA、TDI分别诱导的三种哮喘小鼠动物模型，对比其在气道反应性、气道炎症和病理方面的差异，评价各模型的优劣。
一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法[发明专利]
![一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1a9a9dfca0c7aa00b52acfc789eb172dec639948.png)
(10)申请公布号 CN 101897627 A(43)申请公布日 2010.12.01C N 101897627 A*CN101897627A*(21)申请号 201010214192.8(22)申请日 2010.06.30A61D 7/00(2006.01)A61B 5/00(2006.01)(71)申请人广州医学院第一附属医院地址510120 广东省广州市越秀区沿江西路151号申请人美国Buxco 电子有限公司广州呼吸疾病研究所呼吸疾病国家重点实验室(72)发明人陈莉延 约瑟夫·马克·罗麦斯克赖克方 钟南山 蒋波(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司 44245代理人陈燕娴(54)发明名称一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法(57)摘要本发明公开了一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法，包括以下操作步骤：(1)提供雌性Balb/c 小鼠，小鼠的年龄为10周龄，小鼠体重为22～25g ，动物级别为SPF 级；(2)提供Buxco 无创检测系统，该Buxco 无创密闭体描舱连接有声音监听设备和信号转化器，将上述小鼠置于体描舱内自由活动；(3)使用辣椒素激发液雾化激发小鼠咳嗽，实时监听小鼠咳嗽声音，通过声音分析软件记录声波，并通过Finepointe 软件将舱内气流变化转化为呼吸波形进行记录并自动实时分析。
本方法同时监测小鼠咳嗽声音和呼吸波形，可大大降低工作强度，节省工作时间，提高工作效率，有利于小鼠咳嗽模型的推广和应用。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 2 页权 利 要 求 书CN 101897627 A1/1页1.一种小鼠咳嗽模型的建立和检测方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)提供雌性Balb/c小鼠，小鼠的年龄为6～15周龄，小鼠体重为22～25g，动物级别为SPF级；(2)提供Buxco无创检测系统，该Buxco无创密闭体描舱连接有声音监听设备和信号转化器，将上述小鼠置于体描舱内自由活动；(3)使用辣椒素激发液雾化激发小鼠咳嗽，实时监听小鼠咳嗽声音，通过声音分析软件记录声波，并通过Finepointe软件将舱内气流变化转化为呼吸波形进行记录并自动实时分析。
不同品系小鼠肥胖哮喘模型建立及比较
不同品系小鼠肥胖哮喘模型建立及比较陈一平;姜晓红;封广义;孙起翔;罗明洁;李超乾【摘要】目的：建立并比较不同品系小鼠营养性肥胖哮喘模型。
方法选用KM、C57BL/6J、BALB/c 3个品系♀小鼠,随机分为对照组、哮喘组、肥胖组、肥胖哮喘组,分别以高脂饲料或普通饲料饲喂12周后,以卵清蛋白( OVA)或磷酸盐缓冲液( PBS)致敏激发小鼠,实验终点测定小鼠体重、身长、脂肪重量、肝脏重量、Lee′s 指数、血清总胆固醇( TC)及甘油三酯( TG)水平、支气管肺泡灌洗液( BALF)中OVA特异性IgE浓度。
观察各组脂肪细胞形态及气道病理学改变。
测定各组小鼠的特殊气道阻力( sRaw)。
结果 KM肥胖组体重及Lee′s指数增长最快,但哮喘特征性表现不明显；C57BL/6J小鼠能形成哮喘特征性表现,但肥胖相关指标差异无显著性；BALB/c肥胖组小鼠肥胖指标较之正常组差异有显著性。
经OVA致敏激发后,BALB/c小鼠显示出更加明显的哮喘症状、气道高反应性和气道炎症表现。
结论BALB/c小鼠经高脂饲料诱导,OVA致敏激发能形成良好的肥胖合并哮喘模型。
%Aim To establish and compare asthma models among different strains of obese mice. Methods Different strains of SPF female mice, namely Kunming ( KM ) , C57BL/6J and BALB/c mice, were randomly divided into four groups ( control group, asthma group, obesity group and obese asthma group). The mice were fed a high-fat diet or a normal diet for 12 weeks, following which they were sensitized and challenged with ovalbu-min ( OVA) or phosphate-buffered saline ( PBS) . Body weight, fat weight, liver weight, Lee′s index, OVA-specific IgE concen-tration in bronchoalveolar lavage fluid ( BALF) , serum total cho-lesterol ( TC) and triglyceride ( TG) levels, and lung and adi-pose morphologies wereevaluated. The specific airway resistance ( sRaw) was measured using double-chamber plethysmography. Results The mice on a high-fat diet showed a more rapid in-crease in body weight compared with those on a normal diet. Af-ter 12 weeks of feeding, body, fat, and liver weights and Lee′s index were higher for the obese mice than for the lean mic e. The adipocyte cross-sectional area was significantly greater in the obese BALB/c and KM mice than in their lean counterparts;the C57BL/6J groups showed no significant differences. The BALB/c mice demonstrated more significant symptoms of acute asthma, local inflammation and airway hyper-responsiveness ( AHR ) . Conclusion Compared with C57BL/6J and KM mice, BALB/c mice fed a high-fat diet and sensitized and challenged with OVA provide the most suitable model for evaluating the relationship between obesity and asthma.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2016(000)002【总页数】5页(P288-292)【关键词】肥胖;哮喘;动物模型;KM 小鼠;C57BL/6J 小鼠;BALB/c小鼠【作者】陈一平;姜晓红;封广义;孙起翔;罗明洁;李超乾【作者单位】广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院老年呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021;广西医科大学第一附属医院呼吸内科，广西南宁 530021【正文语种】中文【中图分类】R-332;R363-332;R562.25;R589.2中国图书分类号：R-332；R363-332；R562.25；R589.2流行病学资料显示，肥胖会增加哮喘的发病风险，在成人是2~3倍[1]，儿童是1~2倍[2]。
支气管哮喘疾病模型的建立讲解
支气管哮喘疾病模型的建立设计背景：在学习药理学这门课程时，我们了解到在炎症反应中，细胞膜磷脂在磷脂酶A2 作用下释放出花生四烯酸。
花生四烯酸经过环氧化酶作用生成前列腺素，血栓素，前列环素;经脂氧酶作用生成白三烯类化合物。
而非甾体抗炎药则能抑制环氧化酶的活性，从而使环氧化酶/脂氧酶失平衡。
导致大量未被环氧化酶利用的花生四烯酸底物通过脂氧酶生成大量的白三烯类化合物（LTs），其中C型LT能够强有力的收缩支气管和促进血管通透性，因此，该类药物可以引发支气管哮喘，其中吲哚美辛对环氧合酶抑制作用最强，据相关文献报道，有人使用吲哚美辛15min后就出现哮喘症状。
据此，我设计用吲哚美辛作为引发剂来建立支气管哮喘模型。
豚鼠性格温顺，极易致敏，对某些药物也非常的敏感，是建立支气管哮喘模型的常用动物。
设计目的：1.复制支气管哮喘模型2.了解支气管哮喘的表现和发生的机理实验动物：豚鼠2只（150-200g）雌雄不限仪器与药品：豚鼠固定板0.2%消炎痛（吲哚美辛）注射液1ml ，5ml注射器1%普鲁卡因医用酒精棉球手术器材木槌方法：1.给药：作后脚掌外侧静脉注射，捉豚鼠并固定一条后腿，另一人剪去注射部位的毛，用酒精棉球涂擦后脚掌外侧的皮肤，使血管显露，取0.2ml 0.2%消炎痛对豚鼠进行后脚掌外侧静脉注射2.注射药物后观察动物的表现3.当出现相应哮喘症状时，将豚鼠固定于板上，取1ml 1%普鲁卡因于腹下部进行局部麻醉，剪开腹下部皮肤3-4cm，分离股动脉左动脉插管，每10分钟于豚鼠股动脉取1ml血进行血气分析（取血次数可根据实验具体情况进行分析）4.白三烯含量测定将豚鼠进行开胸手术取其肺部组织进行匀浆处理，以2000-3000r/min速度进行离心操作10min，取其上层清液1ml，用豚鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒进行检测。
另取正常豚鼠为对照组，用木槌敲击致死后，取其肺部组织按照同样的条件进行操作，将所测得的数值与模型组相比较，分析结果。
小鼠无创性肺功能的测定及其意义
ＬＩ Ｓｈｕｍｉｎ１，３＃ ， ＺＨＡＮＧ Ｍｉｎ２＃ ， ＷＡＮＧ Ｐｅｎｇ４ ， ＨＯＮＧ Ｆａｎ４ ， ＷＡＮＧ Ｃｈｅｎ２ ， ＺＨＡＮＧ Ｙｕｅ２ ， ＧＥＮＧ Ｚｈｅｎｙａｎｇ２ ， ＹＡＮＧ Ｘｉｎｙｕ２ ， ＨＥ Ｘｉａｏｘｉａｏ２ ， ＳＵＮ Ｙｉｎｇ４ ， ＹＡＮＧ Ｆａｎｇ１，２∗
【 摘要】 目的 检测 Ｃ５７ＢＬ ／ ６ 小鼠无创性肺功能指标，为小鼠实验性研究肺功能的监测提供依据。 方法
采用整体体积描记法（ ｗｈｏｌｅ ｂｏｄｙ ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈｙ，ＷＢＰ） 检测 ４６０ 只 Ｃ５７ＢＬ ／ ６ 小鼠肺功能的各项指标，对检测结果 进行统计分析，百分位数法确定参考值范围。 结果 小鼠吸气时间（ Ｔｉ） ６４������ ７ （５５������ ３０ ～ ８２������ ６０） ｍｓ，呼气时间（ Ｔｅ） ８３������ ４（７１������ ７０ ～ １０９������ ２０） ｍｓ，呼气峰值时间比率（ Ｒｐｅｆ） ０������ ２１ （０������ １６ ～ ０������ ２８） ，吸气末端暂停（ ＥＩＰ） ２������ １９ （１������ ９６ ～ ３������ ７６） ｍｓ，呼气末暂停（ ＥＥＰ）１������ ６７（０������ １２ ～ ９������ １５） ｍｓ，潮气量（ ＴＶｂ）０������ ４４（０������ ２５ ～ ０������ ５８） ｍＬ，气道狭窄指数（ Ｐｅｎｈ）１������ ２９（０������ ９１ ～ ２������ ００） ，呼吸暂停（ ＰＡＵ）１������ １８（１������ ００ ～ １������ ６４） ，呼气中期流速（ ＥＦ５０）０������ ６４（０������ ３０ ～ ０������ ９８） ｍＬ ／ ｓ，松弛时间（ Ｔｒ） ３９������ ０ （３２������ ４０ ～ ５１������ ５０） ｍｓ，最大吸气流速（ ＰＩＦ）９������ ７４（５������ ３３ ～ １２������ ８３） ｍＬ ／ ｓ，最大呼气流速（ ＰＥＦ）９������ ８６（５������ １２ ～ １３������ ４７） ｍＬ ／ ｓ， 呼吸频率（ ｆ）４１２（３３１ ～ ４７４） ＢＰＭ，每分钟通气量（ ＭＶｂ）１７４������ ４（８６������ ６９ ～ ２３５������ ０４） ｍＬ。 结论 Ｃ５７ＢＬ ／ ６ 小鼠无创肺功 能指标参考值范围的测定，可为呼吸系统疾病的基础研究提供实验性参考依据。
支气管哮喘(豚鼠)的动物模型制作方法
支气管哮喘（豚鼠）的动物模型制作方法支气管哮喘（bronchial asthma）有气管过敏性的，也有可逆性气管闭塞性的，它是一种慢性气管变体反应性炎症性疾病。
许多细胞包括肥大细胞、嗜酸粒细胞和T淋巴细胞在内都参与了支气管哮喘的发生和发展的过程。
支气管哮喘的致病原因很多，最常见的有过敏反应、支气管敏感性增高、自主神经功能紊乱、感染和内分泌失调等。
在制作实验性支气管哮喘的模型时要根据以上这些要原因去采用不同的方法。
一、模型制作实验性哮喘模型最为理想的是能找到自然发生哮喘的动物。
目前用于制备哮喘模型的动物很多，主要有大鼠、小鼠、豚鼠、犬、兔、羊及猴等。
实验中最常用的是豚鼠。
因为豚鼠的支气管平滑肌发达，适于哮喘发作时的观察。
豚鼠的实验哮喘模型分为4类：①实验过敏性哮喘。
②职业性哮喘模型。
③药物性哮喘（组织液、乙酰胆碱等）。
④支气管平滑肌模型（利用支气管组织切片）等。
可利用这些模型来研究抗体的产生、气管的过敏性和药物对支气管的影响。
激发动物的致敏原可用卵白蛋白、血小板激活因子、寄生虫、花粉，以及一些能引起职业性哮喘的物质，如甲苯二异氰酸、甲酯、邻苯二甲酸苷和乙二胺等。
根据制模方式的不同可分为主动免疫致敏动物模型和被动免疫致敏动物模型。
前者是利用大型动物，让其感染圆线虫类寄生虫。
由于其血液中长期存在抗某一感染寄生虫的特异性抗体（IgE），所以在再次受这一寄生虫抗原攻击时，就会迅速地产生特异的抗原抗体反应，并表现出支气管哮喘的症状。
后者是指在实验前，用一种特殊的抗原及免疫佐剂免疫动物，使动物过敏后，再用同一抗原进行攻击以建立哮喘动物模型。
（一）过敏性哮喘过敏性哮喘的模型制备也有两种方法，即主动致敏和被动致敏。
前者是给动物投与抗原物质以感作，再给与相同物质以诱发哮喘。
后者则是从感作的豚鼠体内采集血液，分离血清并将其注入未感作的豚鼠体内，次后再给与用于感作的抗原物质以诱发哮喘发作（ahaphylaxie）。
主动致敏常用于对某种物质有无抗原性的判断。
大鼠无创性肺功能检测指标的建立
大鼠无创性肺功能检测指标的建立刘俊丹;邱文才;李紫元;梁伟燊;唐陆平;何永明【摘要】用双腔法测量大鼠肺功能的基础数据,为呼吸系统疾病相关的大鼠动物模型的肺功能检测提供参考.采用EMKA无创肺功能监测系统,对40只SD大鼠肺功能的17项指标(潮气量,TV;最大呼气量,EV;每分通气量,MV;吸气时间,Ti;呼气时间,Te;吸气流峰值,PIF;呼气流峰值,PEF;间歇时间,RT;呼吸频率,f;吸气末期停顿,EIP;呼气末期停顿,EEP;暂时停顿,Pau;支气管收缩程度,Penh;延迟时间,dT;特殊气道阻率,SRaw;特殊气道导率,SGaw;呼气中期流速,EF50)进行检测.TV值为1.01mL(0.41~2.23),EV为1.01 mL(0.41~2.22),MV为226.02 mL(76~517),Ti为144.17 msec(108~204),Te为172.45 msec(118~265),PIF为11.05mL/s(4.6~27.1),PEF为10.58 mL/s(3.4~23.9),RT为107.08 msec(76~188),f为196.88 bpm(141~255),EIP为2.72 msec(2~4),EEP为19.56 msec(13~32),Pau 为0.63(0.41~0.88),Penh为0.62(0.33~1.06),dT为39.56ms(4.56~96.38),SRaw为38.53 cm H2 O.s(2.27~83),SGaw为0.078 l/cmH2 O.s(0.01~0.37),EF50为9.5 mL/s(3~20).试验同时发现,大鼠肺功能部分指标在不同时间段、不同性别差异具有显著意义.首次测得SD大鼠无创肺功能多项指标,对呼吸系统疾病的研究和相关标准的制定有着重要的参考价值.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2017(038)012【总页数】5页(P49-53)【关键词】无创式动物肺功能检测分析仪;气流信号;双腔法;肺功能【作者】刘俊丹;邱文才;李紫元;梁伟燊;唐陆平;何永明【作者单位】佛山科学技术学院兽医系,广东佛山 528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山 528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山 528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山 528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山 528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山 528000【正文语种】中文【中图分类】S852.2肺功能检查是呼吸系统疾病的必要检查之一，对于评估疾病的病情严重程度、诊断病变部位、评及对危重病人的监护等方面有重要的指导意义。
通光散汤对小鼠哮喘模型气道高反应性和气道炎症的影响
中 国 比较 医 学 杂 志 ２ １ ０ １年 １ ２月第 ２ １卷 第 １ ２期
Ｃ ｉ Ｃ ｍ ｄ， ｃｏｅ ０ １ Ｖ １ １Ｎ ．２ ｈｎＪ ｏ ｐＭｅ Ｏ ｔ ｒ １ ， ｏ． ． ｏ １ ｂ ２ ２
一
次致 敏后 每 天 灌 胃给 予 通 光 散 汤 ０ ７ （ 当于 ０ ０ 药 ） 对 照 组 以等 体 积 的 Ｎ ．２ｍＬ 相 ．４ｇ生 ； ｓ代 替 Ｏ Ａ 致 敏 、 发 。 Ｖ 激 ① 药 物 组 小 鼠气 道 阻 力 的变 化 与 模 型 组 相 比明 显 下 降 ， 异 显 著 （ 差 Ｐ＜
管 、 管 黏 膜 下 和 周 围 肺 组 织 有 明显 的炎 症 细 胞 浸 润 ， 量 炎 症 细 胞 向 支 气 管 和 血 管 迁 移 ， 皮 细 胞 部 分 有 脱 落 ， 血 大 上 部 分 可 见 黏 液 栓 ， 管 壁 明 显 水 肿 ； 疗 组 小 鼠肺 组织 炎性 细胞 浸 润 和 管 腔 黏 液 分 泌 情 况 较 模 型 组 明显 减 轻 ， 道 血 治 气 粘 液 的分 泌 量 得 到 明显 的控 制 。 结论 通 光 散 汤 对 小 鼠 哮 喘模 型气 道 高 反应 性 和 气 道 炎 症 有 显 著 抑 制 作 用 。
Ｔ ｅ ｄ ｔ ｗ ｒ ｎ ｌ ｅ ｔ ｉ ｉ ｌ ｉ ｎ — ａ ｎ ｌ ｉ ｏ ａｉ ｃ Ａ Ｏ Ａ） ｕ ｉ Ｐ Ｓ ｐ ｃ ａ ｅ（ ｅｓ ｎ １ ． ） ｈ ａ ｅｅ ａ ａ ｚ ｄ ｓ ｔ ｔ ａｌ ｗ ｔ ｏ ｅ ｗ ｙ ａ ａ ｓ ｆ ｒ ｎ ｅ（ Ｎ Ｖ ａ ｙ ａｓ ｃ ｙ ｈ ｙｓ ｖ ａ ｓ ｇ Ｓ Ｓ ａ ｋ ｇ ｖ ｒｉ ３ ０ ． ｎ ｏ
小鼠气道反应性的测定
4．小鼠呼出气体与吸入气体体积差值测定小鼠称取体重后，用25%乌拉坦按4ml/kg剂量腹腔注射麻醉，用自制的气管插管针连接气管并用7号手术缝线固定。
小鼠放入体描箱，将气管插管与前壁三通管相连，并将前壁三通管通过一长约2cm的硅胶管与另一同样规格的体描箱前壁三通管连接。
将两个体描箱顶盖盖好，夹上弹力夹，后壁三通管关闭。
右侧三通管接HX200型传感器，传感器引出的信号接入Medlab生物信号记录分析系统处理。
记录小鼠潮气量体描箱内气体容积按照0.35mv=0.1ml换算。
二、结果1．体描箱密封性测定体描箱内注入0.1ml空气后，压力曲线从基线0mv处上升至0.35mv。
注入0.2ml空气后，压力曲线从基线0mv处上升至0.70mv。
两曲线上升后分别在0.35mv和0.70mv处保持平坦，无下移现象。
2．小鼠呼出气体与吸入气体体积差值测定从放有小鼠的体描箱引出的压力曲线显示小鼠吸气时曲线上升，呼气时回到基线，每一呼吸末的基线水平保持平坦。
从记录小鼠潮气量体描箱引出的压力曲线显示，小鼠呼气时曲线上升，吸气时回到基线，每一呼吸末的基线水平略向下移，且每次下移幅度相等。
选取潮气量记录体描箱工作5秒后的呼吸曲线中连续20个呼吸周期的波形，记录第1个呼吸周期与第20个周期呼气末电压差为0.07mv，故小鼠呼出气体与吸入气体体积差值为：0.07/20×0.1/0.35=0.001ml。
同理可得小鼠潮气量为0.59ml。
三、讨论正常平静呼吸空气时，O2含量大约为21%，CO2含量大约为0.03%。
空气进入肺泡后，O2通过弥散透过肺泡进入肺血管，而肺血管中的CO2则弥散入肺泡，使呼出气体中O2含量下降，CO2含量上升。
由于O2与CO2的分子量和弥散系数等的不同，导致二者在肺泡内并非等体积交换，而存在着一定的体积差。
由于此差值远小于潮气量而常常忽略不计，故通常认为平静呼吸时，受测者所吸入或呼出气体的体积相等，均可用于代表潮气容积。
无创气道炎症评估支气管哮喘的临床应用中国专家共识
和诊治。根据所使用激发物的不同，该技术又分为
非特异性气道反应性测定和特异性气道反应性测定
２．评价指标：（１）定性判断：①在试验过程中， 若ＦＥＶ，或ＰＥＦ较基础值下降≥２０％，或比气道传
导率（ｓＧａｗ）下降≥３５％时，或出现喘息，可判断为
两类。非特异性的激发物，如组胺、乙酰甲胆碱、心
得安、蒸馏水、干冷空气、甘露醇、白三烯Ｅ４、单磷酸
腺苷和臭氧等，其中较为常用的是组胺和乙酰甲胆
碱。特异性以吸入过敏原浸液作为激发物，旨在明 确ＡＨＲ与特定过敏原之间的关系哺Ｊ。
支气管激发试验阳性；②如果吸人最大浓度的激发
物，ＦＥＶ，下降１５．９％～２０％，无气促喘息发作，判
为激发试验可疑阳性；③如果吸人最大浓度的激发
雾化吸人３％高渗盐水约１５ ｍｉｎ，在诱导５、１０、１５ 和２０ ｍｉｎ时分别指导患者主动咳嗽、排痰。排痰前
（５）评价药物对气道炎症的作用Ｉ通过观察药物治 疗前后诱导痰中细胞组分及炎性介质的改变，有助
于研究药物的作用机制。 ４．注意事项：（１）高渗盐水吸入对气道是一种
嘱受试者漱口和吞水，然后再将痰液收集于清洁玻 璃皿中。（５）每次诱导排痰后，复测ＦＥＶ，，若ＦＥＶ。 下降不超过１０％则继续操作，若ＦＥＶ，下降１０％～
万方数据
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困难和哮鸣音；（２）试验前应进行肺功能测定，ＦＥＶ， 占预计值％不得低于７０％；（３）有严重的心肺功能 不全、高血压和妊娠期妇女不宜进行此试验；（４）支 气管激发试验测定有一定的风险，试验时应有安全
检测方法主要分为２种：（１）以ＦＥＶ，为检测指
标，如Ｃｈａｉ测定法（间断吸入法）、Ｙａｎ测定法（简易
哮喘小鼠模型实验技术原理
哮喘小鼠模型实验技术原理哮喘小鼠模型构建：1. 明矾致敏佐剂10%明矾溶液（溶于双蒸水）2ml与500mg/mlOVA（溶于PBS）2ml等量混合后，用NAOH调PH值为6.5.室温孵育60min，离心5min，去掉上清液，重溶于2mlBPS。
致敏时每只老鼠腹腔注射200ul，其中含2mg明矾和100ugOVA2. 致敏：小鼠分别于第0、14天是腹腔注射明矾致敏佐剂0.2ml，对照组注射相同剂量的PBS溶液，正常饮食饲养。
3. 激发：雾化吸入，第21天时小鼠放入有机玻璃箱，5%OVA雾化吸入，每天30min。
末次致敏后24h内检测。
以小鼠出现烦躁不安、呼吸急促、腹腔痉挛等阳性反应作为造模成功的标准。
对照组采用PBS雾化吸入，其他操作均相同。
4. 末次激发24h麻醉小鼠，摘眼球取血，室温静置24h后于4℃3000r离心10min提取血清，放入-80℃冰箱冻存。
取左肺组织于4%多聚甲醛溶液中固定用于病理染色；右肺组织液氮冷冻，-80℃保存用于分生标本。
哮喘小鼠模型特点：哮喘模型组小鼠在激发开始后出现打喷嚏、点头呼吸、呼吸急促、啸鸣音、腹肌收缩、烦躁等典型哮喘发作症状，并且后期观察中发现饮食减少、毛色无光泽、行动迟缓及体重逐渐下降。
肺组织切片可进行HE染色、MBP染色、刚果红染色及EOS浸润等观察小鼠肺部炎症情况。
主要测量其中的白细胞和嗜酸性粒细胞的数量。
比较医学：三种方法构建哮喘小鼠模型分别是HDM、OVA、TDI。
HDM、OVA所诱导的哮喘小鼠BALF中细胞组分主要以嗜酸性粒细胞为主。
三组哮喘小鼠在接受不同浓度的雾化后气道阻力明显增高，与浓度呈正相关，而HDM和OVA诱导的哮喘小鼠气道阻力较TDI更高。
不同造模方式建立的哮喘小鼠模型在气道反应性、气道炎症和病理特点各有不同，HDM和OVA哮喘小鼠具有典型的嗜酸性粒细胞哮喘表现，而TDI 哮喘小鼠表现为混合细胞性哮喘动物模型。
小鼠心肺功能指标的无创法检测
小鼠心肺功能指标的无创法检测邱文才;林洁微;李紫元;梁伟燊;刘俊丹;唐陆平;何永明【摘要】采用尾套法和双腔法分别测量小鼠心肺功能的基础数据,为心血管疾病和呼吸系统疾病相关的研究提供参考.采用MC4000血压分析系统和EMKA无创肺功能监测系统,对100只SPF级昆明小鼠心肺功能的21项指标进行检测.收缩压(SBP)为131 mmHg ± 19 mmHg ,舒张压(DBP)为119 mmHg ± 18 mmHg ,平均动脉压(MAP)为123 mmHg ± 18 mmHg ,脉搏(P)为716 次/分± 73 次/分;吸气时间(Ti)为96 .29 ms ± 9 .93 ms ,呼气时间(Te)为91 .80 ms ± 12 .70 ms ,吸气流峰值(PIF)为1 .88 mL/s ± 0 .31 mL/s ,呼气流峰值(PEF)为2 .36 mL/s ±0 .32 mL/s ,潮气量(TV)为0 .13 mL ± 0 .02 mL ,最大呼气量(EV)为0 .13mL±0 .03mL,间歇时间(RT)为52 .62ms±5 .97ms,每分通气量(MV)为42 .02mL±6 .11mL,呼吸频率(f)为323 .78 bpm ± 36 .09 bpm ,吸气末期停顿(EIP)为1 .79 ms ± 0 .35 ms ,呼气末期停顿(EEP)为12 .72 ms ± 2 .50 ms ,暂时停顿(Pau)为0 .75 ± 0 .12 ,支气管收缩程度(Penh)为0 .95 ± 0 .17 ,延迟时间(dT )为2 .89 ms ± 1 .20 ms ,特殊气道阻率(SRaw )为2 .81 cm ± 1 .18 cm H2O .s ,特殊气道导率(SGaw )为0 .46L/cm ± 0 .22 L/cm H2O .s ,呼气中期流速(EF50)为2 .14 mL/s ± 0 .35 mL/s .试验同时发现,昆明小鼠肺功能部分指标在不同时间段和不同性别之间的差异具有统计学意义(P＜0 .05) .首次采用无创方式测得昆明小鼠心肺功能的多项指标,可为心血管疾病及呼吸系统疾病的研究和相关标准的制定提供基础资料.%The experiment used the methods of double cavity and tail set to measure the basic data of lung and cardiac functions in mice ,so as to provide the reference for the study of respiratory diseases and cardio-vascular diseases .Enterprisi EMKA noninvasive lung function monitoringsystem and MC4000 blood pres-sure analysis system were used to measure 21 indicators of lung and cardiac functions in 100 SPF KM mice . The experimental results showed that systolic blood pressure (SBP) was 131 mmHg ± 19 mmHg ;diastolic blood pressure (DBP) was 119 mmHg ± 18 mmHg ;mean arterial pressure (MAP) was 123 mmHg ± 18mmHg ;pulse (P) was 716 beats/min ± 73 beats/min ;inspiratory time (Ti) was 96 .29 ms ± 9 .93 ms ;ex-piratory time (Te) was 91 .80 ms ± 12 .70ms ;peak inspiratory flow (PIF) was 1 .88 mL/s ± 0 .31 mL/s ;peak expiratory flow (PEF) was 2 .36 mL/s ± 0 .32 mL/s ;tidal volume (TV) was 0 .13 mL ±0 .02 mL ;maximum volume (EV) was 0 .13 mL ± 0 .03 mL ;rest time(RT ) was 52 .62 ms ± 5 .97 ms ;minute ventila-tion (MV) was 42 .02 mL ± 6 .11 mL ;breathing frequency (f) was 323 .78 bpm ± 36 .09 bpm ;endinspira-tor y pause breathing (EIP) was 1 .79 ms ± 0 .35 ms ;end expiratory pause breathing (EEP) was 12 .72 ms ± 2 .50 ms ;temporary pause (Pau) was 0 .75 ± 0 .12 ;bronchoconstriction (Penh) was 0 .95 ± 0 .17 ;delay time (dT) was 2 .89 ms ± 1 .20 ms ;special airway resistance (SRaw) was 2 .81 cm ± 1 .18 cm H2O .s ;spe-cific airway conductance (SGaw ) was 0 .46 L/cm ± 0.22L/cm H2O .s ; mid expiratory flow velocity (EF50) was 2 .14 mL/s ± 0 .35 mL/s .As the same time ,results found that the difference of partial lung function in KM mice was statistically significant in different time points and genders .This experiment for the first time measured a number of indicators in KM mice for noninvasive lung and cardiac functions , which provided basic information for the study on the respiratory systemdiseases and cardiovascular disea-ses and the relevant standard formulation .【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2018(039)006【总页数】5页(P42-46)【关键词】心功能;肺功能;尾套法;双腔法;无创式检测【作者】邱文才;林洁微;李紫元;梁伟燊;刘俊丹;唐陆平;何永明【作者单位】佛山科学技术学院兽医系,广东佛山528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山528000;佛山科学技术学院兽医系,广东佛山528000【正文语种】中文【中图分类】S852.2心肺功能检查是心血管疾病和呼吸系统疾病的必要检查之一，对于评估疾病的病情严重程度、诊断病变部位、评及对危重病人的监护等方面有重要的指导意义[1]。
连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效
连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效包晨;周霞;冯娜娜;李静;宋元林;白春学;杨冬;周建【摘要】目的评价连花定喘片治疗支气管哮喘的疗效.方法将50只SPF级BALB/C小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、连花高剂量组、连花低剂量组,每组10只.采用卵清白蛋白+氢氧化铝致敏,并雾化激发复制小鼠支气管哮喘模型,给药组于每次激发前30 min给药,共计7次.采用特殊气道阻力值评估气道高反应性,肺组织HE染色及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞分类计数评价各组小鼠气道炎症性改变,ELISA法和磁性Luminex(R)分析法检测BALF 和血清中IL-4、IL-13、INF-γ的表达.结果地塞米松组和连花高剂量组能显著降低气道阻力(P＜0.05).地塞米松组和连花高、低剂量组BALF中的各类炎性细胞数量和IL-13的表达均明显减少(P＜0.05).血清IL-13的表达在地塞米松组明显降低(P ＜0.05),但在连花高、低剂量组中没有变化.各组小鼠BALF和血清中IL-4和INF-γ的表达没有统计学差异.结论连花定喘片可缓解哮喘症状,可能与其降低Th2型细胞因子IL-13的含量,从而减轻气道炎症有关.%Objective To evaluate the efficacy of Lianhua Dingchuan Tablets in bronchial asthma.Methods Fifty BALB/C mice were randomly and equally divided into control (Con) group,ovalbumin (OVA) group,dexamethasone (DEX) group,high-dose Lianhua group,low-dose Lianhua group.The mice were sensitized and challenged with OVA plus aluminium hydroxide to establish asthmatic model and were pre-treated 30 minutes before challenge.Specific airway resistance (sRaw) was used to evaluate airway hyperresponsiveness,and airway inflammatory changes were measured.ELISA and Magnetic Luminex(R) were used to quantified the levels of IL-4,IL-13 and INF-γ.Results Airway resistance significantly decreased in DEX group and High-dose Lianhua group (P＜0.05).Levels of inflammatory cells and IL-13 in BALF evidently reduced in DEX group,high-dose Lianhua group and low-dose Lianhua group (P ＜ 0.05),while IL-13 level in serum only decreased in DEX group.There was no significant changes in the levels of IL 4 a nd INF γ among those groups.Conclusions Lianhua Dingchuan Tablets might relieve the symptoms of asthma by reducing IL-13 level and inhibiting the airway inflammation.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2017(044)003【总页数】6页(P333-338)【关键词】连花定喘片;支气管哮喘;气道高反应性;细胞因子;地塞米松【作者】包晨;周霞;冯娜娜;李静;宋元林;白春学;杨冬;周建【作者单位】复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032;复旦大学附属华山医院呼吸科上海200040;复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032;复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032;复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032;复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032;复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032;复旦大学附属中山医院呼吸科上海200032【正文语种】中文【中图分类】R562.2支气管哮喘是一种由嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞等多种炎性细胞参与的气道慢性炎症性疾病,具有可逆性气流受限的特点。
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・论著・支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立李斌恺 赖克方 洪燕华 王法霞 陈如冲 林少建 钟南山 【摘要】 目的 目前国内对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠的评价多数仅立足于气道炎性指标,不能完全反映哮喘的病理生理特征。
本所率先从国外引进了小动物无创检测和有创检测肺功能仪。
无创法检测时小鼠不必麻醉,而且每次可以同时检测多只小鼠,具有较大的优越性,但能否取代有创法尚需更多的数据。
本研究旨在建立无创检测小鼠气道高反应性的检测方法,并与有创检测方法进行比较。
方法 根据动物模型和气道反应性检测方法不同,动物分为:①无创哮喘组;②无创对照组;③有创哮喘组;④有创对照组。
采用卵白蛋白致敏和激发,建立BALB/c小鼠哮喘模型,生理盐水作为对照,分别用无创和有创的方法测定气道反应性。
哮喘动物雾化吸入0.2～50g/L倍增浓度的乙酰甲胆碱(Mch),测定相应浓度下的增强呼气间歇(Penh)值或气道阻力(R L)值等指标。
将小鼠吸入Mch后R L或Penh增加2倍的激发浓度以PC100来表示。
所有动物都行支气管肺泡灌洗,收集灌洗液,涂片染色后分类计数。
结果 无创哮喘组PC100均≤6.25g/L,对照组PC100均≥12.5g/L。
其Log2(10PC100)值(5.36±0.84)显著低于对照组(7.97±0.82)(P<0.01)。
无创哮喘组从Mch浓度3.12g/L开始,其Penh值明显高于对照组。
有创哮喘组R L值从Mch浓度0.39g/L开始就明显高于相应对照组(P<0.05)。
无创组与有创组的气道反应性相关系数R=0.96(P<0.01)。
无创哮喘组和有创哮喘组的嗜酸粒细胞分别为(54.00±5.96)%,(55.93±5.92)%,显著高于各自对照组的(0.38±0.52)%,(0.63±0.74)%(P<0.01)。
结论 本研究表明以Penh为主要测定指标的无创方法,可以成功检测哮喘小鼠气道高反应性。
【关键词】 小鼠;气道反应性;支气管哮喘;增强呼气间歇;无创检测Establishment of non2invasive method for measuring airway re sponsiveness of asthmatic mouse model L IB in2kai,LA I Ke2f ang,HO N G Yan2hua,W A N G Fa2x ia,CH EN R u2chong,L I N S hao2j ian,Z HON GN an2shan.Guangz hou I nstitute of Res pi ratory Diseases,the Fi rst A f f iliated Hos pital of Guangz houMedical College,Guangz hou510120,ChinaCorres ponding author:LA I Ke2f ang【Abstract】 Objective Most of the evaluation on asthmatic mouse model only based on the airwayinflammation,not f ully reflecting its pathophysiology.Noninvasive method of measuring bronchial hyperresponsiveness can detect several conscious mice in one time,but whether it can replace the invasivetechnique needs more data to be identified.This study aims to establish a non2invasive detection of mouseairway hyperresponsiveness,comparing with the invasive method.Methods According to different ways ofdetection,mice were divided into four group s:non2invasive asthma group,non2invasive control group,invasiveasthma group and invasive control group.Mouse was sensitized and challenged with ovalbumin(OVA)forasthmatic model.The mice were challenged with increasing concentrations of methacholine aerosol f rom0.2250g/L,and the airway resistance was measured.Enhance pause(Penh)or airway resistance(R L)was takenfor each group.The dose of methacholine causing100%increase of respiratory resistance was defined asPC100.The PC100values were converted into Log2(10PC100)for statistical analysis.Bronchoalveolar lavagecytology was performed to evaluate the airway inflammation.Re sults The PC100of non2invasive asthmagroup was≤6.25g/L,and the noninvasive control group’s≥12.5g/L.Its Log2(10PC100)value wassignificantly less than that of control group,(5.36±0.84)vs(7.97±0.82)(P<0.01).The Penh value ofnon2invasive asthma group began significantly increasing when the concentration of Mch was3.12g/L.The 基金项目:“863”计划(2006AA02Z4Z5)作者单位:510120广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所通信作者:赖克方R L value of invasive asthma group was increasing at the beginning of0.39g/L(P<0.05).The coefficientrate of two groups was0.96(P<0.01).The EOS(%)of non2invasive asthma group or invasive asthmagroup was54.00±5.96,55.93±5.92respectively,significantly larger than that of control group(0.38±0.52,0.63±0.74,P<0.01).Conclusions This study shows that single2chambered barometric whole2body plethysmography as a non2invasive lung f unction test can successf ully detect airway responsiveness inasthmatic mouse model.【K ey words】 Mice;Airway hyperresponsiveness;Bronchial asthma;Enhance pause;Noninvasivemethod 从最早的电刺激离体气管平滑肌收缩能力测定,到现在的无创单腔整体体积描计,国外在对动物气道反应性的测定技术上经过了漫长的发展历程。
而目前国内在对支气管哮喘(简称哮喘)小鼠的评价上多数仅仅立足于气道炎性指标,在气道反应性的检测方面近几年才起步,而且是用有创的方法。
我所率先从国外引进了动物无创检测的肺功能仪。
气管插管后再测定动物气道阻力的有创法是评价动物气道反应性的经典方法。
无创法则不需气管插管等繁琐的步骤,在动物处于自然状态下就可以直接测定其气道反应性,而且每次可以同时检测多只小鼠,具有较大的优越性,但能否取代有创法尚需更多的数据。
因此,我们有必要探讨其与有创法的相关性,判定其是否能够有效检测动物的气道反应性,以期建立哮喘小鼠气道反应性的无创检测方法。
材料与方法一、仪器与试剂仪器:本实验采用美国Buxco公司小鼠无创肺功能仪和有创肺功能仪,是目前国际上通用的小鼠肺功能检测仪器,主要包括体描箱,压力传感器(流量传感器),信号放大器和雾化器等。
其工作原理是,将乙酰甲胆碱(met hacholine,Mch)或生理盐水(NS)等通过雾化器雾化入体描箱内,箱内小鼠吸入雾化气体后呼吸运动的改变引起箱内压力、流量产出相应的变化,连接于体描箱的压力传感器(流量传感器)将采集到的信号传至信号处理系统,并在信号放大器作用下转化为呼吸动力学各指标值。
两套肺功能仪中,无创肺功能仪具有6个体描箱(也有配置更多的),相应的传感器可以将各个箱内压力、流量的变化同步传至信号处理系统处理,因此可以同步为多只小鼠进行肺功能检测。
主要试剂:鸡卵白蛋白(OVA)(Ⅴ级,美国Sigma公司),氢氧化铝凝胶(美国Sigma公司),Mch(美国Sigma公司)。
二、实验动物及分组实验动物:SPF级BALB/c雌鼠,5～6周龄,体质量18～20g,购自广州中医药大学实验动物中心,并在该中心饲养。
饲料为去OVA(不含鸡蛋)的特殊食物。
饲养环境符合SPF实验动物级环境设施标准。
分组:根据动物模型和气道反应性检测方法不同,分为:①无创哮喘组;②无创对照组;③有创哮喘组;④有创对照组。
其中,无创哮喘组、有创哮喘组每组10只小鼠;无创对照组、有创对照组每组8只小鼠。
三、哮喘模型的建立方法实验第0天、第7天和第14天行腹腔注射致敏:模型组每次给予20μg OV A+150μl Al(O H)3+50μl NS (100mg/L)混悬液;对照组给予200μl NS。