Agilent气质联用仪软件定量方法图示解析

积分

实验室练习6：数据定量分析

在这个实验中,您将建立具有三个浓度级别的校正数据库,并将其保存为方法的一部分。该方法用于未知物的定量计算。

在这个实验中：

•获取所需信息以设置校正方法

•建立一个5 个浓度级别的含内标的校正数据库

•定量一个未知化合物

对以下化合物进行定量：

积分

积分积分

精确定量的重要因素之一是正确积分。

1)通过选择File/LoadDataF ile…调用

C:\MSDCHEM\1\DATA\VOADATA\ CLWV020.D 文件，选择

Method / Load Method…调用DEFAULT.M 方法。

2)选择Chromatogram / Select Integrator及RTE Integrator单击

OK。OK 对积分来说只是临时选择。

现在让我们对 caffein设定积分参数。

3)选择Chromatogram / Extract Ion Chromatograms…完成图1 所示

的需要输入的项目（注意时间范围）单击OK。

NOTICE

图 1

4)现在编辑RTE的缺省积分参数。选择Chromatogram / MS Signal

Integration Parameters…完成图 2 所示的要输入的项目。

须知当欲在最小峰面积 (minimum peak area) 中添入大于100 的数之前必须选中Area Counts 选项框。

积分

NOTICE

图 2

5)单击OK接受所做的改变。现在通过选择Chromatogram /

Integrate 用这些参数做积分。注意离子 194被积分，而离子67没有被积分。让我们降低最小面积来解决这一问题。

6)选择Chromatogram / MS Signal Integration Parameters…完成图 3

中所示的各项内容。

NOTICE

图 3

7)单击Save…和OK输入积分文件名字VOLATILE.P，单击OK。

积分

图 4

8)在积分参数框中单击OK 返回离子质量色谱。在Chromatogram /

Integrate 用降低后的最小峰面积参数做积分。

注意此时离子67 和194都被积分了。现在我们建立并保存了积分参数，它将被用于定量数据库。

9)选择Chromatogram / Draw Chromatogram查看当前数据文件的

TIC 图。

建立校正曲线：

建立校正曲线：

无论SCAN 和SIM 方式，用提取离子质量色谱做校正和定量比用总离子流色谱峰要好，因为能提高信噪比。用提取离子定量比用TIC 精度更高。TIC 则用于开始设置校正参数时确定保留时间。

1)选择Calibrate / Set Up Quantitation...。

2)Quantitation Database Globals对话框会显示出来。完成图 5 中所需

填入的内容。

NOTICE

图 5

注意标有NOTICE 处用了 RTE 积分参数文件。

3)完成后单击OK。Edit Compounds框（图 6）会显示出来：

建立校正曲线：

图 6

4)单击Insert Above，图 7会显示出来：

图 7

注意:必须首先输入内标。所有在内标之后输入的化合物都用它定量，直到遇到下一个内标。

5)将7-13 分钟范围内的色谱图放大在窗口中。对准窗口2 中10.7分

钟处双击鼠标右键。

在屏幕上会出现什么信息？

_______________________________________________________________

注意保留时间(箭头在X 轴的位置)被填写在QuantSetup窗口。同时所

指定保留时间的质谱显示在窗口1。

建立校正曲线：

6)输入化合物名称。填入化合物名称。第二个化合物是Tributyl

phosphate大约在10.7分钟。注意如果使用氘代内标时区分定量，化合物是靠信号而不是保留时间，因为内标和要定量的化合物共流出，因此峰会重叠。ISTD选项被选中。

7)将箭头移到窗口将箭头放在M / Z93 上同时击鼠标左右键。

会发生什么？

_______________________________________________________________

8)用同样方法输入一个或几个特征离子。对于Tributyl phosphate，

特征离子是 135 。

9)全部输入之后，在Quant Setup 窗口底部击Save键。

这就完成了需要在定量数据库中添加单个化合物的任务。

10)重复以上步骤，把表1 中每个化合物输入定量数据库。（注意

Tributyl phosphate已经输入了。）

表 1

11)最后一个化合物输入并保存之后, 在定量设置栏目击Exit。Edit

Compounds 画面（图 9）再次显现。注意此时化合物的列出顺序。

定量化合物永远在内标之后（不管保留时间！）有4个化合物列于表中。如有遗漏，点击遗漏的化合物，然后单击InsertAbove...。当定量设置栏再次出现时输入化合物名字，保留时间，目标 / 特征离

子。然后单击 Save 并单击 Exit。一旦4个化合物全部输入，单击

Exit退出编辑化合物对话框（图 9）。

12)系统提示目前的文件尚未定量。单击Yes对文件定量。

我们已经添加了化合物信息，现在要添加校正信息。

13)Update Calibration对话框（图 8）如下：