紫外可见分光光度法案例
紫外-可见分光光度法在药物检验中的应用
【主要内容】紫外可见分光光度法是通过被测物质在紫外光区的特定泼 长或一定泼长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。 被测物质的分子结构中如含有共轭体系、芳香环或发色基团，均可在近 紫外区（200–400nm）或可见光区（400–760nm）产生吸收。在药品检 验中主要用于药品的性状. 鉴别. 检查和含量测定。 应用原理： ① 已知物质的吸收峰泼长或吸收度比值作为物质的定性鉴别; ② 当被测物质本身在紫外光区无吸收，而杂质在紫外光区有相当强度的吸收, 或杂质的吸收峰处没有被测物质的吸收峰，则可用本法做杂质检查； ③ 可选择被测物质的最大吸收泼长处测出吸收度，再用对照品或吸收系数求 算出被测物质的含量测定。
药物检验论文 论文名称：紫外-可见分光光度法在药物检验中的应用
【摘要】:在药品检验中本法主要用于药品的性状. 鉴别. 检查和含量测定，具有灵敏度高、样品用量少
的优点，实用于微量和痕量物质的分析。测定
时,除另有规定外应以配制拱试品溶液的同批溶 剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定 的吸收峰泼长±2nm以内测试几个点的吸收度， 以核对供试品的吸收峰泼长位置是否正确,除另有 规定外，吸收峰泼长应在该药品项下规定的泼长
LIGHT SOURCE 出现ok！自检通过
SELFTESTING 狭缝宽度测试 SLIT＝2 OK! 自检通过
SELFTESTING 滤色片测试 FILTER OK! 自检通过
SELFTESTING 自检单色器 MONOCHROMATOR OK!自检通过
546.0 nm BLAKING
546.0 nm0.000A/100﹪T 自检完毕进入测试状态
例，草乌鉴别：取本品粉末0.5g，加乙 醚10ml与氨试液5ml,振摇10min，滤过， 滤液置于分液漏斗中，加0.25mon/l硫酸 溶液20ml，振摇提取，分别取酸液适量， 用水稀释后，照紫外-可见分光度法 （《中国药典》2005版一部附录VA）测 定，在231nm与275nm波长处有最大吸 收，
紫外可见分光光度法实验
紫外可见分光 光度法实验
实验2 鉴定和识别有机化合 物中的电子跃迁类型
实验3 紫外分光光度法同时测 定维生素C和维生素E
指导老师：马少妹
实验4 三氯苯酚存在时苯 酚含量的紫外分光 光度法测定
实验5 紫外可见吸收光谱法 测定双组分混合物
2020/9/30
仪器分析实验报告写法
1.每个实验于下个实验之前交，每人交一份。报告要书写整齐清楚。 2.报告不可剽窃或抄袭他人之作，更不可造假数据。 3.报告以A4大小纸张撰写，格式如下: 封面 : 记载实验序号、实验项目、实验日期及报告人姓名。 內容 : 按“前言→实验方法及步骤→实验結果→ 讨论→结语→参考文献→ 附录”等。 (I)在“前言”(或“绪论”)部份，扼要敘述实验目的，所使用之仪器的特 性，分析的基本原理，理论背景等，并用几句话归纳所作的实验项目及所 获得的结果。
2020/9/30
（6）气态苯和溶液中苯的吸收曲线有何个同？为什么？ （7）助色团—NH2将如何影响苯胺？质子化作用后，产高等教育出版社 赵文宽等编，《仪器分析实验》）
2020/9/30
实验3 同时测定维生素C和维生素E 2．实验目的 掌握在紫外区中同时测定—个双组分体系[抗坏血酸(维生素C) 和α-生育酚(维生索E)的实验方法。 2．仪器和试剂 916型紫外-可见分光光度计； ，石英比色皿2只，容量瓶移和 液管若干。抗坏血酸（AR）：0.0132g／L在无水乙醇中(7.50 ×l0-5mol/L)；α-生育酚(维生素E)：0.0488g/L在无水乙醇中； 无水乙醇；未知溶液：在无水乙醇中含有抗杯血酸和α-生育酚 溶液。
2020/9/30
为292nm)，以吸光度对浓度作图。
（2）计算抗坏血酸和α-生育酚在最大吸收波长（246nm和 292nm）时的摩尔吸光系数：即标准曲线图的斜率。
紫外可见分光光度法测定药物含量的计算实例.
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
A 1 V D
含量%
E 1% 1cm
100
100 %
m
0.582 1 250 100
715 100
5 100% 99.05%
0.0411
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度 ，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度， 摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为 0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用 稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀 释至刻度，摇匀。在271nm波长处测定吸光度为0.416，计算甲 氧苄啶标示量百分含量。
Байду номын сангаас
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
标示量%
cR
Ax AR
D
每支容量
100%
S
0.05134 0.420 25 100 2 25100 0.416 1 1 100% 103.7%
0.1
药物分析/药物的含量测定
紫外可见分光光度 法测定药物含量的 计算实例
制作人：谭韬
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
精密称取对乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml， 置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇 匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。 按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含 量
紫外可见分光光度法测定药物含量的计算实例(精)
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
标示量%
cR
Ax AR
D
每支容量
100%
S
0.05134 0.420 25 100 2 25100 0.416 1 1 100% 103.7%
0.1
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
A 1 V D
含量%
E 1% 1cm
100
100 %
m
ห้องสมุดไป่ตู้
0.582 1 250 100
715 100
5 100% 99.05%
0.0411
(二）分光光度法
甲氧苄啶注射液（规格2 ml：0.1g）含量测定
精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度 ，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度， 摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为 0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用 稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀 释至刻度，摇匀。在271nm波长处测定吸光度为0.416，计算甲 氧苄啶标示量百分含量。
药物分析/药物的含量测定
紫外可见分光光度 法测定药物含量的 计算实例
制作人：谭韬
(二）分光光度法
对乙酰氨基酚原料药含量测定
精密称取对乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加 0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml， 置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇 匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。 按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含 量
实验四、紫外-可见分光光度法测苯甲酸含量
实验四、紫外-可见分光光度法测苯甲酸含量一、实验目的1．学会使用紫外-可见分光光度计，掌握标准对比法。
2．掌握标准对照法曲线的绘制和含量的计算。
二、实验原理在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm。
可采用紫外分光光度计测定物质在紫外光区的吸收光谱并进行定量分析。
三、实验器材试药：0.01mol/L、0.1mol/L氢氧化钠、苯甲酸仪器：量瓶、烧杯、紫外-可见分光光度计四、实验步骤1、苯甲酸标准储备液的制备精确称取苯甲酸100mg，用0.1mol/L氢氧化钠溶液100ml溶解后，再用蒸馏水稀释1000ml。
此溶液1ml含0.1mg苯甲酸。
2、苯甲酸吸收曲线的测量吸取苯甲酸贮备液4.00ml，放入50ml容量瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀。
此溶液1ml含8μg苯甲酸。
测量条件光源：氢灯；参比液：0.01mol/L氢氧化钠；测量波长范围：210～240nm。
3、标准曲线的制备取标准储备液适量，置于50mL容量瓶中，加0.01mol/L氢氧化钠稀释，分别得到浓度为4、8、12、16、20、24μg.L-1的溶液，取各溶液于“2项”曲线中的最大吸收波长处测吸收度A，得回归方程和相关系数R2。
4、标准对比法测定样品液苯甲酸的含量取10.00ml样品液，放入50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠定容，摇匀。
在上述曲线中找出最大吸收波长，以此作定量分析的入射光。
以0.01mol/L氢氧化钠溶液为参比。
在完全相同的条件下测出标准苯甲酸溶液和稀释好的样品液的吸光度值。
5、按“3项”所得回归方程计算样品液中苯甲酸的浓度。
五、数据处理1）样品液中苯甲酸含量试样溶液的吸光度为,从标准曲线上可查得c= mg/ml。
六、思考题1、如果试液测得的吸光度不在标准曲线范围之内怎么办？2、从实验测出的吸光度求苯甲酸含量的根据是什么？如何求得？。
紫外可见分光光度法经典案例(2)
21
22
23
➢ 影响吸收带位置的因素： 1．溶剂效应： ➢ 对λmax影响：
n -π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↓蓝移 π-π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↑红移
24
➢ 影响吸收带位置的因素： 1．溶剂效应：
➢ 对吸收光谱精细结构影响： 溶剂极性↑，苯环精细结构消失
2．pH值的影响：影响物质存 在型体，影响吸收波长
（一）光学因素 （二）化学因素
32
（一）光学因素
非单色光的影响： ✓ Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光
• 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 • 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 • 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 • 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度
第四章 紫外-可见分光光度法
第一节 光学分析法概论
一、电磁辐射和电磁波谱 二、光学分析法及其分类 三、光谱法仪器-分光光度计
1
一、电磁辐射和电磁波谱
1．电磁辐射（电磁波，光） ：以巨大速度通过空间， 不需要任何物质作为传播媒介的一种能量。
2．电磁辐射的性质：具有波、粒二向性
波动性： c ， 1
粒子性E：h h c
42
2. 共轭体系的判断
• 共轭体系会产生很强的K吸收带，通过绘制吸收光谱， 可以判断化合物是否存在共轭体系或共轭的程度。
• 如果一化合物在210nm以上无强吸收带，可以认定该化 合物不存在共轭体系；若在215～250nm区域有强吸收 带，则该化合物可能有两至三个双键的共轭体系。
• 如1－3丁二烯， 为217nm， 为21,000；若260～ 350nm区域有很强的吸收带，则可能有三至五个双键的 共轭体系，如癸五烯有五个共轭双键， 为335nm， 为118,000。
实验三 紫外分光光度法测定色氨酸的含量
湖北工程学院生命科学技术学院实验报告课程：学号：姓名：分数：实验（三）紫外-可见分光光度计一．实验目的紫外可见分光光度计是一种历史悠久、覆盖面很广、在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得到了极其广泛的应用。
因此通过此实验，可以了解UVPROBE仪器的实验结构和实验原理，简单操作步骤和注意事项，会用光度计仪器来分析样品镀膜的透射率，来达到工作上对镀膜性质分析的需要。
二．实验原理物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
物质在光的照射下会产生对光的吸收效应，而且物质对光的吸收是具有选择性的。
各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。
因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也就是紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律。
即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
三．实验器材及试剂台式电脑，紫外-可见分光光度计，5ppm Cyadox溶液、5ppm邻苯二胺溶液、5ppm 2-硝基酚溶液置于棕色容量瓶中。
四．实验步骤1.首先打开电源的总开关，然后打开电脑，等电脑待机状态的时候再打开光度计仪器的开关。
2.要预热五到十分钟，然后打开软件，进入软件的操作界面。
3.然后初始化，点击菜单的“M”，在“测定”菜单中中的波长范围中改变参数，开始选择900，结束选择300。
T9-紫外可见分光光度计应用案例--普析
紫外可见分光光度计应用案例案例1.肉制品中亚硝酸盐的测定前处理方法：称取5g(精确至0.01g)制成匀浆的试样，置于50mL烧杯中，加12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。
在振荡上述提取液时加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。
加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。
检测仪器：T9型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）仪器条件（见表1）：表1 测量参数检测界面（见图1）：图1 肉制品中亚硝酸盐的检测界面上图标准曲线中，亚硝酸钠标准系列的质量依次为：0.0μg、2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg、10.0μg、15.0μg、20.0μg、25.0μg（100mL容量瓶中）。
方法检出限：该方法检出限为1mg/kg，能够满足《GB 5009.33-2010食品安全国家标准食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定第二法分光光度法》的检测要求。
参考标准：《GB 5009.33-2010食品安全国家标准食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定第二法分光光度法》案例2.啤酒中甲醛的测定前处理方法：吸取已除去二氧化碳的样品25.00mL移入500mL蒸馏瓶中，加200g/L磷酸溶液20.00mL于蒸馏瓶，接水蒸气蒸馏装置中蒸馏，收集馏出液于100mL容量瓶中（约100mL），冷却后加水稀释至刻度。
检测仪器：T9型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）仪器条件（见表2）：表2 测量参数检测界面（见图2）：图2 啤酒中甲醛的检测界面上图标准曲线中，甲醛标准系列的质量依次为：0.0μg、0.5μg、1.0μg、2.0μg、3.0μg、4.0μg、8.0μg（25mL比色管中）。
方法检出限：该方法检出限为0.8μg，能够满足《GB/T 5009.49-2008 发酵酒及其配制酒卫生标准的分析方法（4.4甲醛）》的检测要求。
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量一、实验目的1.了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV-2501的操作。
2.掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。
3.掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。
二、实验原理为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。
防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，根据GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。
苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。
根据苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。
三、仪器和试剂1.紫外可见分光光度计UV-2501（日本岛津），1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。
2.NaOH溶液（0.1mol/L）3.苯甲酸钠标准溶液的配制(1)苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。
该贮备液可置于冰箱保存一段时间。
(2)苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。
(3)系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/L NaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。
得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。
4.雪碧（500mL）5.蒸馏水四、实验步骤1.吸收曲线的绘制（1）系列标准溶液的配制50mL瓶编号 1 2 3 4 5 6 100.0mg/L苯甲酸钠标准溶液体积（mL）0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.000.1mol/L NaOH溶液体积（mL） 1.00用蒸馏水容量50.0系列标准溶液浓度（mg/L）0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 记录吸光度A值（2）吸收曲线的测定用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm~300nm波长范围内扫描，即的苯甲酸钠的吸收曲线。
紫外-可见分光光度法快速测定饮料中的柠檬黄
分光光度法快速检测饮料中柠檬黄的含量
一实验目的
掌握紫外-可见分光光度计在食品检测中的应用。
二实验原理
柠檬黄的是我国允许使用的合成色素，结构如图1，其在紫外可见区域有特征吸收，可经简单的前处理，通过紫外-可见分光光度计检测其在水系溶液中的含量。
图1
三仪器与试剂
仪器：UV-1240或UV-1801紫外-可见分光光度计计容量瓶
试剂：0.5 mg/ml柠檬黄标准储备液去离子水冰柠味佳得乐（或其他只含柠檬黄食用色素的饮料）
四实验步骤
1 工作曲线溶液的配制
取0.5ml、1ml、1.5ml、2ml、2.5ml标准溶液溶于25ml容量瓶，去离子水定容。
2 吸收曲线的绘制，找最大吸收波长
去最大溶度的工作曲线溶液，于紫外-可见分光光度计的中进行波长扫描（210nm-500nm），
找出最大吸收波长
3工作曲线的测定
取步骤1配制的标准溶液分别用紫外-可见分光光度计测吸收度，吸光度与浓度线性回归，得出工作曲线方程。
4 样品含量的测定
取待测饮料适量，水浴加热除二氧化碳，放冷，紫外-可见分光光度计测吸收度，根据工作曲线方程算出柠檬黄的含量。
（注：国标规定柠檬黄在饮料用的最大用量为0.1g/1kg）
五思考题
1 本次试验的参比试剂是什么？
2 还有什么方法可以用于饮料中色素的检测。
紫外-可见分光光度法-n经典案例
紫外-可见分光光度法是一种基于物 质分子对紫外-可见光的吸收特性来 进行定量和定性分析的方法。
特点
具有较高的灵敏度、准确度和重现性 ，可广泛应用于多种物质的分析。
工作原理
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
物质分子在紫外-可见光的特定波长范 围内能够吸收光能，引起分子振动和 电子能级跃迁，从而产生吸收光谱。
通过测量物质在特定波长下的吸光度， 可以推算出物质的浓度。
根据标准曲线和吸光度数据，计 算出水样中重金属离子的浓度。
结果分析
通过对比标准曲线和吸光度数据，可以确定水样中是否存在重金属离子，并计算 出其浓度。
结果的准确性受到多种因素的影响，如试剂的纯度、实验操作的准确性、仪器的 精度等。因此，实验过程中需要严格控制实验条件，确保结果的可靠性。
05
经典案例三：药物中有效成分的测定
结果解释
根据检测结果，判断样品是否符合国家或国际标 准，以及防腐剂的种类和浓度是否合理。
结果应用
为食品监管部门提供依据，对不合格产品进行处 理或召回，保障消费者权益。
04
经典案例二：水中重金属离子的检测
案例概述
目的
检测水样中是否存在重金属离子，如铜、铅、锌等。
原理
重金属离子可以与某些显色剂发生反应，生成有色化合物，通过紫外-可见分光 光度法测定其吸光度，从而确定重金属离子的浓度。
结果分析
1
通过实验，测得感冒清热颗粒中有效成分的浓度 为0.98 mg/mL，与标准值相符。
2
精密度实验结果表明，该方法的相对标准偏差 （RSD）为0.8%，说明方法的精密度较高。
3
回收率实验结果表明，该方法的平均回收率为 98.5%，说明方法的准确度较高。
紫外可见分光光度法
紫外－可见分光光度法
第一节 紫外-可见吸收光谱 第二节 朗伯-比尔定律 第三节 紫外－可见分光光度计 第四节 分析条件的选择
第五节 测定方法
概
述
紫外可见分光光度法(Ultraviolet-Visible Spectrophotometry)，又称:紫外-可见分子 吸收光谱法(Ultraviolet-Visible Molecular Absorption Spectrometry)是利用被测物质 对光的吸收特征和吸收强度对物质进行定 量和定性的分析方法。
形成的溶液具有良好的化学和光化学稳定性；
在样品的吸收光谱区无明显吸收；
如果要与标准品的吸收光谱相比较，须用相同的溶剂。
5．pH值的影响
很多化合物都具有酸性或碱性可解离基团，在不同 pH的溶液中，分子的解离形式可能发生改变，其 吸收光谱的形状、λmax和吸收强度可能不一样。
OH O-
OHH+
λmax 210.5nm ,270nm
完全透过
无色
吸收黄色光
2014-12-23
蓝色
13
课堂互动
1．紫外-可见光的波长范围是 A．200~400nm B．400~780nm C．200~780nm D．360~800nm 2．下列叙述错误的是 A．光的能量与其波长成反比 B．有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈 C．物质对光的吸收有选择性 D．光的能量与其频率成反比
2mg/ml的溶液，在1cm吸收池中，于310nm处测
定吸光度A。规定A≤0.05。
(三)、结构分析
有机化合物的紫外吸收光谱 可以推定分子骨架，判断发色团之间的共轭关系
和估计共轭体系中取代基的种类、位置和数目 。
1.饱和碳氢化合物 只产生ơ→ơ*跃迁，所需能量很大， 200－400nm没有吸收，常作为溶剂。
紫外可见分光光度法测定阿司匹林中乙酰水杨酸和水杨酸含量
紫外可见分光光度法测定阿司匹林中水杨酸和乙酰水杨酸的含量一、实验目的1 •掌握用紫外可见分光光度法测定药物中乙酰水杨酸的方法。
2 •学会使用UV-2550紫外-可见分光光度计。
二、实验原理阿司匹林是解热镇痛药，主要成分为乙酰水杨酸，摩尔质量180.16g/mol。
阿司匹林少量水解成水杨酸，因而在阿司匹林样品中混有少量水杨酸。
本实验采用双波长法和校正曲线法。
水杨酸干扰阿司匹林的吸光度测定，在选定的两波长下测定吸光度差值。
配制一系列浓度不同的标准阿司匹林溶液，在测定条件相同的情况下，分别测定其在两个波长下的吸光度，以标准浓度为横坐标，以相应吸光度差值为纵坐标，绘制△ A-C关系图，在相同条件下测出试样在两波长处的吸光度，可从校正曲线上查出试样液的浓度。
Ate■■呻I图1 紫外吸收图谱I, 阿司匹林2*水杨酸三、仪器和试剂1. 仪器UV-2550紫外-可见分光光度计、容量瓶10ml、50ml。
2. 水杨酸标准品1.008mg/ml、阿司匹林标准品1.008mg/ml、阿司匹林样品40mg/ 片、乙醇。
四、实验步骤1.样品溶液、标准溶液的配置：标准溶液的配置：取6个10ml容量瓶，标号1~6。
使用微量进样器精密吸取阿司匹林标准品0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml注入各个容量瓶，95% 乙醇定容。
配置成约40卩l/ml、60卩l/ml、80卩l/ml、100卩l/ml、120卩l/ml 的标准溶液，备用。
并将水杨酸标准品溶液稀释为20 11 l/ml，备用。
样品溶液的配置：取1片阿司匹林研细，加入无水乙醇1~2ml分次研磨，使溶解。
利用滤膜过滤后转入50ml容量瓶中，充分振摇，乙醇定容（浓度：800 1 l/ml ）。
取1ml定容后的样品溶液，转入10ml容量瓶，乙醇定容。
配置成约为80卩l/ml的样品溶液。
2. 波长选择使用紫外-可见分光光度计，先用95汇醇进行基线校正。
用阿司匹林标准品3和稀释过的水杨酸标准品进行光谱测量。
紫外-可见分光光度分析实验
实验步骤
3.4仪器与设备
高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器或 紫外检测器。 离心机：10000r/min。 涡旋混合器。 带盖塑料离心管：50mL 氮吹仪，可控温至60℃。 固相萃取装置。 超声波提取器。 震荡摇床。
《饲料分析与饲料质量检测技术》基本技能培训实验教学
实 验 原理
• 2 高效液相色谱的组成部分及各部分的作用
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实 验 原理
• 贮液瓶：提供液相色谱分离 的流动相 • 高压泵：将流动相打到色谱 柱 • 进样器：将样品通过六通阀 进入到色谱柱 • 分离柱：根据组分在两相中 的不同的作用方式将组分分 离 • 检测器：检测分离出的组 分，并给出信号 • 记录仪：记录并处理数据
综合实验
• • 实验名称：三聚氰胺的测定 仪器：紫外可见光谱分析、高效液相 色谱（ ＨＰＬＣ）
《饲料分析与饲料质分
紫外-可见分光光度分析实验
三聚氰胺最大吸收波长的确定
《饲料分析与饲料质量检测技术》基本技能培训实验教学
试验背景
三聚氰胺(melamine)是一种有机含氮杂环化合 物 ， 学 名 1,3,5- 三 嗪 -2,4,6- 三 胺 ， 或 称 为 2,4,6- 三氨基－1,3,5-三嗪，简称三胺、蜜 胺、氰尿酰胺，是一种重要的化工原料，主要 用途是与醛缩合，生成三聚氰胺-甲醛树脂， 生产塑料，这种塑料不易着火，耐水、耐热、 耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀，有良好的绝缘 性能和机械强度，是木材、涂料、造纸、纺 织、皮革、电器等不可缺少的原料。它还可以 用来做胶水和阻燃剂，在部分亚洲国家，也被 用来制造化肥。
操作界面参数设定示范
紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量
实验四 紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量一、实验目的1、理解紫外—可见分光光度法定性分析、定星分析的原理。
2、掌握紫外—可见分光光度法测定维生素B12含量的原理。
3、掌握UV—7502PC紫外—可见分光光度计的结构、原理与操作。
二、原理分子中的电子发生跃迁需要的能量约在1~20eV之间，其对应的吸收光的波长范围大部分处于紫外和可见光区域，通常将分子在这一区域的吸收光谱称为电子光谱或紫外—可见吸收光谱。
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律，即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。
1. 紫外-可见分光光度计的基本结构紫外-可见分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录系统组成。
图1 紫外—可见分光光度计基本结构图2.透光率和吸光度如图2所示：入射光强度I0，吸收光强度I a，透过光强度I t， 反射光强度为I r I0═ I a + I t + I r被测溶液和参比的吸收池同样材料和厚度，反射光强度影响相互抵消，上式简化为I0═ I a + I t透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；反之，透光率愈小，溶液对光的吸收愈多透光率的负对数称为吸光度，用符号A 表示。
实例解析——紫外可见分光光度法(UV-VIS)
紫外可见分光光度法实例解析一、原理分析UV-VIS依据电子跃迁光谱，通常分子轨道基态外层电子处在，当分子外层吸收紫外或者可见辐射后，从基态向激发态跃迁。
其中紫外光谱：200~400nm，可见400~780nm。
其定性依据是不同物质对不同波长吸光度不同，定量依据是朗伯比尔定律A= εbc 吸光度分子二、适用范围一般适用于有机物，尤其是含有发色光能团、大共轭体系如含有苯环的有机物的测定三、特点：灵敏度高、选择性好、准确度好、通用性强、操作简单、价格低廉缺点：远不如红外光谱好，很多化合物在紫外没有吸收或者吸收很弱，而且紫外光谱特征性不强。
可以用来检验一些具有大的共轭体系或者发色官能团，并作为其他方法的补充。
四、仪器组成：光源——单色器——狭缝——样品池——检测器五、准备工作实验开始前查相关文献确定显色剂，显色剂：将待测组分形成有色化合物反应类型：络合反应氧化还原反应取代反应缩合反应显色剂选择条件：(1)灵敏度(2)选择性(3)生色物质稳定(4)组成恒定(5)显色剂在测定波长处无明显吸收，有色化合物与显色剂颜色对比大六、实验仪器前期设定：由待测物质查阅相关文献，确定使用可见区还是紫外区，确定光源钨丝或者氢、氘。
由待测物质确定样品池采用紫外区的石英池或者可见区的玻璃池检测器选用光电倍增管达到最佳检测效果七、配置标准检测液、显色剂溶液、参比溶液、标准溶液标准溶液：由分析纯的待测物质配置而成的溶液参比溶液：若仅待测组分和显色剂反应产物有吸收，其他试剂无吸收，用水做参比若显色剂和其他试剂略有吸收，试液本身无吸收，用“试剂空白”（不加试样溶液）参比若待测试液有吸收，而显色剂无吸收，则用“试样空白”（不加显色剂）做参比一般都选用试剂空白，即八、样品前处理，制成相应的溶液，如果其中有干扰离子，则加入掩蔽剂进行掩蔽或者采用化学方法分离出干扰离子九、实验条件确定：(1)最大吸收波长确定取1ml的标准溶液，1ml显色剂配制成溶液，稀释、定容、差文献确定谱线大致范围，多次测定，选择有最大吸收时的波长定为最大吸收波长，并且和标线对比，确定其误差是否在允许范围内，适当控制吸光度在最适范围(2)显色剂用量确定分别取1ml标准液，不同体积显色剂配成溶液，稀释、定容、多次测定得到吸光度-显色剂用量曲线，选择使得曲线平缓的最低用量再增加0.5ml为最佳显色剂用量（设为a ml）(3)显色温度确定取分别取1ml标准液、和a ml的显色显色液，稀释定容，测量在相同时间，不同温度下的吸光度显色时间曲线，得到最适温度T0(4)显色时间的确定分别取1ml标准液、和a ml的显色显色液，稀释定容，恒温T0测量，分在测量得到吸光度-显色时间曲线。
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第七章 紫外-可见分光光度法
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
◆学习目标⊙ ◆知识要求⊙ ◆能力要求⊙全国高职高专药品类来自业卫生部“十二五”规划教材
◆学习目标
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
通过学习光谱分析法概论、紫外-可见分光光度法 的基本原理、分光光度计的基本构造、降低测量误 差的方法、常用的定性、定量方法等知识，了解光 学分析法的知识体系，熟悉紫外-可见分光光度法 的实际应用，会用紫外-可见分光光度计测定溶液 的吸光度，并对有关物质进行定性定量分析，为学 习红外分光光度法、荧光分光光度法、核磁共振波 谱法及药物分析课中有关药品的定性鉴别、杂质检 查和含量测定方法奠定基础。
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材
◆知识要求
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
1．掌握光的吸收定律概念、表达式及条件，吸光系数和 吸收光谱的意义，常用定量分析方法的原理和应用。
2．熟悉紫外-可见分光光度计的基本结构、吸光度测量 条件的选择、偏离光的吸收定律的主要因素。
3．了解光谱分析法的分类、紫外-可见吸收光谱的产生 机制、定性分析的依据和方法。
仪器简单
操作简便
价格低廉
测定快速
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
课堂活动
1．紫外-可见光的波长范围是
A．200~400nm
B．400~760nm
C．200~760nm
D．360~800nm
2．下列叙述错误的是
A．光的能量与其波长成反比
B．有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈
利用光谱进行定性、定量和结构分析的方法称为光 谱分析法，简称光谱法。
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
一、物质对光的选择性吸收
单色光: 单一波长的光束 复色光: 含有多种波长的光束 电磁波谱: 以波长大小顺序排列的电磁波谱图
波长 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500mm 1cm 1m
根据可见光、紫外光与物质分子的相互作用建立了 紫外-可见分光光度法，
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第一节 概述
分析化学（第2版） 谢庆娟 李维斌
根据待测物质（原子或分子）发射或吸收的电磁辐 射，以及待测物质与电磁辐射的相互作用而建立起 来的定性、定量和结构分析方法，统称为光学分析 法。
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第一节 概述
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点滴积累 1．光的本质是电磁波；物质对光的吸收具有
选择性。 2．吸光度与透光率的关系是 :
3．吸收曲线是溶液在一定条件下的吸光度随 入射光波长变化而变化的曲线。
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光谱 射线 X射线 紫外光 可见光 红外光 微波 无线电波
方法 光谱法
分光光度法 光谱法
可见光
核磁共振
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第一节 概述
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红光与绿光互补、紫光与黄光互补，等等。
白光的组成
白光的色散
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第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理
一、光的吸收定律 当一束平行的单色光通过均匀、无散射的含有吸光性
物质的溶液时，在入射光的波长、强度及溶液的温度 等条件不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓 度c及液层厚度L的乘积成正比，即： A＝K·L ·c 。 称为光的吸收定律（朗伯-比尔定律）。 光的吸收定律是定量分析的理论依据。
C．物质对光的吸收有选择性
D．光的能量与其频率成反比
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第一节 概述
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课堂活动
3．紫外-可见分光光度法属于 A．原子发射光谱法 B．原子吸收光谱法 C．分子发射光谱法 D．分子吸收光谱法
4．分子吸收可见-紫外光后，可发生哪种类型的分子能 级跃迁 A．转动能级跃迁 B．振动能级跃迁 C．电子能级跃迁 D．以上都能发生
第一节 概述
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二、透光率与吸光度
I0＝Ia + It + Ir I0＝Ia + It
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第一节 概述
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透射光强度It与入射光强度I0的比值称为透光率或透光度T 透光率的负对数为吸光度A
A lgT
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◆能力要求
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1.能够用光的吸收定律解决定量计算问题 。 2. 能 够 绘 制 吸 收 光 谱 曲 线 ， 找 出 被 测 组 分 的 最
大吸收波长。
3.能够绘制标准曲线，并能应用标准曲线对样品 进行定量分析。
4.会使用常见的紫外-可见分光光度计测定溶液的 吸光度。
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案例导入
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在夏天参加户外活动时，如果天气晴朗，就应该注 意保护皮肤，否则，暴露在火辣辣太阳之下的皮肤， 数小时后就会出现红肿、瘙痒、发热、刺痛症状，数 日后出现蜕皮现象，这表明太阳光中有一种光线能伤 害生物细胞。科学家研究证实，这种光线是紫外线。
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第一节 概述
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A
max=515
480
520
560nm
吸收光谱曲线示意图
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第一节 概述
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四、紫外-可见分光光度的特点
特点
灵敏度高 准确度高 精密度好 选择性好 易于普及 应用广泛
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第一节 概述
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三、吸收光谱曲线
概念：以波长λ为横坐标，吸光度A为纵坐标所描 绘的曲线，称为吸收光谱曲线，简称吸收光谱。
特点：在相同条件下，同一物质的不同浓度的溶 液，其吸收光谱曲线相似，且λmax相同。这是定 性分析的基础。