实验一 凝集试验

动物免疫学实验
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实验一 凝集反应
免疫血清学反应的一般特点
特异性与交叉性 抗原和抗体的结合为弱能量的非共价健结合 结合温度应在0℃~40℃范围内,pH在4～9范围内 抗原抗体反应的阶段性
第一阶段：无可见反应。 第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等。
带现象：
前带现象 抗体过多； 后带现象 抗原过多
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玻板凝集与试管凝集的关系
玻板凝集
80μl
40μl 20μl 10μl
相当于试管凝集 1：25 1：50 1：100 1：200
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二、试管凝集试验：
1. 每份血清用4支试管，别取对照管3支，共7支。 2. 各管按下表所示加入0.5%石炭酸生理盐水，后加0.2ml被检
血清至第一管中，混匀，吸出1.5ml弃去，再吸0.5ml至第二 管，混匀，吸0.5ml至第三管，依次至第四管，混匀，吸弃 0.5ml，第五管中不加待测血清，第六管中加1:25稀释的布氏 杆菌阳性血清0.5ml，第七管中加1:25稀释的阴性血清0.5ml。
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思考题
• 何为凝集试验？有哪些类型？ • 影响凝集试验的因素有哪些？
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试管法
为一种定量试验，用已知抗原以检测待测 血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量， 以协助临床诊断或供流行病学调查。
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器材及试剂:
抗原和血清：布氏杆菌凝集抗原、 布氏杆菌标准阳性血清、 阴性血清、待检血清
生理盐水、玻片、试管、加液枪、接种环等。
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实验步骤:
一、虎红平板凝集试验： 1. 材料准备
2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03 m L。 2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。 2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。
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3. 判定
3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对 被检血清进行判定。
3.2 受检血清在4 min内出现肉眼可见凝集现象者 判为阳性(十)，无凝集现象，呈均匀粉红色者 判为阴性(一)。
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抗原、抗体的比例适当
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前
后
带
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带
现
现
象
象
抗原、抗体的比例与形成免疫复合物的大小 4
免疫血清学反应的影响因素
1.电解质 2.温度 3.酸碱度
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目的意义：
熟悉玻板凝集试验和试管凝集试验的操作 技术。
掌握凝集反应中阴性和阳性结果的判定。
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基本原理：
细菌等颗粒性抗原与特异性抗体结合后， 在有电解质的情况下，会出现肉眼可见的凝集 块，称为凝集反应。直接凝集反应可分为玻片 凝集与试管凝集。凝集试验是疾病诊断及体内 抗体水平测定的常用方法。
片絮状物，即50%凝集
+：液体透明度不显，有不甚显著的沉淀或仅有沉淀的痕迹，即 25%凝集
-：液体不透明，管底无凝集。
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确定血清凝集价时，应该出现++以上凝集现象的最高稀释 度为准。
判定标准：
牛、马和骆驼凝集价1：100以上 猪、山羊、绵羊和狗1：50以为上 牛、马和骆驼1：50，猪、羊等1：25为可疑。
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3. 各管加入20倍稀释的抗原后，七管同时混匀，37℃ ，4-10h，
取出后室温18-24h，观察并记录结果；
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结果判定：
++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，沉淀
物呈片状、块状或颗粒状，即100%凝集
+++：液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管底，即75%凝集
++：液体不甚透明，管底有明显凝集沉淀，振荡时有块状或小
1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清。 1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。 1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4 cm2的方格。 1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03 ml。 1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。
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2.操作方法
2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应 血清0.03 mL。
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分类:
凝集试验可根据抗原的性质、反应 的方式分为直接凝集试验 (简称凝集试 验)和间接凝集试验。
凝 直接凝集试验 集 试 验 间接凝集试验
试管法
玻片法 间接凝集试验 反向间接凝集试验
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玻片法
玻片法为一种定性试验。此法简便快速， 适用于新分得细菌的鉴定或分型。也可用已 知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存 在相应抗体。