Waters LCMS液质联用培训讲义
液质联用安装培训电子版
液质联用现场安装培训一、关机：先卸掉真空再停电1、退出软件→打开网页（http:192.168.254.101）→Servic e→Vacuumcontrol→Vent vacuum System（10-20min中放完）→关总电源二、开机：打开电源抽真空（大约4-5个小时），若有异常情况，打开网页，点击Star vacuum system（氦气不关）三、Tracontrol（质谱控制软件）查看真空情况：options→vacuum system：Fore：3-7+00，High：至少达到1.0*10-5.四、氦气出口压力：保持在0.6Mpa。
Notice：换氦气后，要对氦气进行充管：Options→vacuum system→Flush Helium Line （至少3-5遍）Helium后面的方框打钩。
五、仪器的三种状态1、Operate：运行状态：进样及看谱图时点击。
2、Standby：待机状态：不用时可将Nebulizer设为2.0psi以下，以节省氮气。
3、Shutdown：关机状态：为保证气体管路电磁阀关闭，换液氮时需将仪器处于该状态下，加液氮后再点击Stangby。
4、Standby参数的设置：Options→Standby前面显示的是设定值，后面显示的是实测值，平时不做实验的时候可将气质设小一点，如：Nebulizer：2.0；ry Gas：2.0；Dry Temp：220，设置好参数后，点击Apply→Close→Yes生效。
六、进样部分参数设置在operate状态下，选择手动进样。
1、Source □方框打钩，Sying pump灯变绿是正常状态。
一般情况下，参数设置如下：Flow rate 240.00 ul/h,点击Fast forward，进样针：Hamilton。
2、标准校正液的配制：95%质谱纯的乙腈（Acetonitrile）与超纯水1:50或者1:100的比例配制。
Waters LC MS培训讲义
Waters 四极杆质谱培训
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碰撞压力 3×10-3mbar
定性实验 调谐仪器
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定性实验 调谐仪器
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定性实验 调谐仪器
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50
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仪器质量校正
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2. 在质量分析器页面（Analyzer）设定以下的数值，括 号内的数值即为设定值：
• LM Resolution 1（15.0） HM Resolution 1（15.0） Ion Energy 1（0.5） • Entrance（50） Collision（2） Exit（50） • LM Resolution 2（15.0） HM Resolution 2（15.0） Ion Energy 2（0.5）
:609 (CV=45)
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定性实验 调谐仪器
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2．子离子扫描 daughter scan
Argon gas
Collision
MS1
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仪器质量校正
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5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
waters液相色谱质谱联用的原理应用课件ppt
影响分子量测定的因素
1）pH的影响：正离子方式 pH要低些，负离子方式pH要高些，
除对离子化有影响外，还影响LC的峰形。 2）气流和温度：当水含量高及流量大时要相应增加。 3）溶剂和缓冲液流量：流速适当高可以提高出峰的灵敏度。 4）溶剂和缓冲液的类型：通常正离子用甲醇好，负离子乙腈 好些 5）选择合适的液相色谱类型：正相、反相、选择合适的色谱 柱 6）合适的电压：DP电压高时，样品在源内分解或碎裂；高 DP 电压时回使多电荷离子比例低，多聚体也减少 7）样品结构和性质 8）杂质的影响：溶剂的纯度、水的纯净程度等。当成分复杂， 杂质太多时，竞争使被测物离子化不好，同时使LC分离不好 9）样品浓度不够，有时需要浓缩
m/z149, 管路中邻苯二甲酸酯的酸酐, C8H4O3H+,149.0233 m/z 288, 2mm 离心管的产生的特征离子
m/z 279, 管路中邻苯二甲酸二丁酯 C16H22O4H+, 279.1591
m/z 316, 2mm 离心管的产生的特征离子 m/z 384, 瓶的光稳定剂产生的离子
d) 样品浓度不够
e）pH值不合适 f）样品在源内分解或碎裂
目标化合物分析
（1）选择离子监测（SIM）
SIM 用于检测已知或目标化合物，比全扫 描方式能得到更高的灵敏度。这种数据采集的 方式一般用在定量目标化合物之前，而且往往 需要已知化合物的性质。 若几种目标化合物用同样的数据采集方式 监测，那么可以同时测定几种离子.
m/z391, 管路中邻苯二甲酸二辛酯, C24H38O4H+, 391.2843
m/z413, 邻苯二甲酸二辛酯+钠, C24H38O4Na+, 413.2668 m/z 538, 乙酸+氧 +铁（喷雾管）, Fe3O(O2CCH3)6,
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pH 值的影响
pH 值的影响
溶剂
水 乙腈 甲醇 异丙醇
一般所用溶剂和缓冲盐
缓冲盐
甲酸 乙酸 氢氧化胺 乙酸胺*
* 缓冲盐浓度应不超过10 mM 。
溶剂和添加剂的选择
• TFA（三氟乙酸）- 用于分析蛋白和多肽
– 它能抑制ESI+电离至少 0.1%。 – 它将很大程度上抑制ESI-电离。
• TEA（三乙胺）
NH
O
N
CH3
Cl
H3C
O
Cl
Linuron 利谷隆+ve ion
(M+H)+ (M-H)-
CH3 H3C
CH3 O
OH
Ibuprofen布洛芬 -ve ion
正离子方式 – 分析碱性化合物
用有机酸调整 pH 值 如：甲酸或乙酸
负离子方式 – 分析酸性化合物
用碱调整 pH 值 如：氢氧化铵/氨水
pH 值的影响
– 有丰富的m/z 102离子存在（三乙胺加质子的峰）。 – 抑制弱碱性化合物的ESI+电离，但能提高弱碱性化合物的
ESI-电离。
• THF（四氢呋喃）
– 100% 的四氢呋喃可能会着火。 – 当喷雾气是空气时，在APCI电离方式，不能用四氢呋喃。 – 腐蚀PEEK管
不恰当的溶剂和缓冲盐
• 不挥发性缓冲盐 (磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸 盐等)－堵塞管路和探头
LC流速一般根据色谱柱规格和电离方式来确定
0.5-2 ml/min
3.9-4.6 mm i.d.
0.1-0.3 ml/min
2.1 mm i.d.
40-50 µl/min
1 mm i.d.
< 10 µl/min
WatersLCMS液质联用培训讲义
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
Waters 四极杆质谱培训
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仪器质量校正
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仪器质量校正
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6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
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5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
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实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥 孔电压,RF lens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参 数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.
1．全扫描 full scan
Collision
MS1
Cell
MS2
Scanning (m/z M)
:609 (CV=45)
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液相色谱质谱联用PPT课件
基本匹配
5、色谱柱
离子交换柱（高离子强度）、蔬水相互作用色谱（盐浓度梯度） 17
6、 柱后修饰 作用： 调节pH值以优化正负离子检测；
添加异丙醇以利于含水溶剂的去溶剂化、稀释缓冲盐； 添加醋酸钠（50mol/L)使缺乏或只有弱质子化位点的样品阳离子化(Ｍ＋Ｎa+) 填充毛细管柱色谱或毛细管电泳，需在柱后添加适当溶剂（补足液流）以达到稳定的喷
6
ESI 实验条件优化 １、待测物质在溶液中的状态（溶液化学）
待测物质在供试品溶液中以离子状态存在，可提高生成气相离子的效率，提高检测灵敏度。
B + RCOOH
BH++RCOO-
HA + NH3
A- +NH4+
2、 溶剂的表面张力
纯水，因表面张力高，所需起始电位Uon高，易产生放电现象； 常用水－甲醇（50:50)溶剂，同时黏度也下降，有利于雾化．
物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚物等)，分析范围广。 LC/MS 联用的主要困难
2
LC-MS 接口 (Interface)类型
ESI (electrospray ionization) API (atmosphere pressure ionization)
APCI(atmospheric chemical ionization)
中等流速：
气动辅助 （离子喷雾）
50-100 m
1 ~200L/min
微柱液相色谱与MS在线联用； 适合于既要高灵敏度又需要较大柱容量的工作：如药物代谢定性定量分析（1~２.1mm)
15
高流速：
气动辅助＋热辅助
500℃ 200 ~ 2m不超过 50℃，所以有机化合物不会热降解．
《LCMS基础》课件
操作过程中需要注意的安全细节和实验室规章制度，易犯的错误和解决方案。
2 常见问题解答和故障排除
常见问题的解答和故障排除对于实验的顺利进行很重要。
实验案例分享
LCMS的应用实例
实验结果和分析
通过以下样品研究案例来展示LCMS技术的实际 应用领域，涵盖医学、环境、农业和食品等方面。
质谱仪器参数设置
掌握质谱参数设置，可优化谱图分辨率，提高 质谱信号响应和信噪比。
结果解读和数据处理
1
质谱数据的分析和解释掌握质谱数据分析方法，对图的解释、分离结果的评估十分重要。
2
数据处理软件的使用和技巧
使用数据处理软件可以提高实验效率和分析结果的可靠性，需要掌握基本的软件 使用技巧。
实验操作和注意事项
《LCMS基础》PPT课件
这份PPT课件将为您介绍液质联用技术的基础知识，以及如何正确操作仪器、 解析结果和了解实验案例。
什么是LCMS？
定义
液质联用技术是将高效液相色谱和质谱联用的一种分析技术。它可以用于定性和定量分析， 检测样品中微量的化合物。
优势
LCMS技术能够提供更准确、更灵敏和更快速的实验结果，其应用领域广泛，涵盖从生物医 药到环境科学的各种研究领域。
介绍不同类型的分析结果，以及如何分析和解释 实验数据以提高实验结果的可靠性。
总结与展望
1
LCMS的发展趋势
总结当前LCMS技术的最新进展和未来发展趋势。
组成
LCMS系统通常包括前处理模块、液相色谱仪和质谱仪三个组成部分。在LCMS分析中，样 品被分离、纯化和检测。
LCMS操作
样品准备和进样
样品制备和加样过程对实验结果影响很大。需 要掌握常见样品制备方法和注意事项。
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ESI-电离。
• THF（四氢呋喃）
– 100% 的四氢呋喃可能会着火。 – 当喷雾气是空气时，在APCI电离方式，不能用四氢呋喃。 – 腐蚀PEEK管
不恰当的溶剂和缓冲盐
• 不挥发性缓冲盐 (磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸 盐等)－堵塞管路和探头
• 表面活性剂－抑制电离 • 无机酸 (硫酸、磷酸等)－腐蚀
• 腐蚀 PEEK
– HNO3 – H2SO4
用PEEK管时注意溶剂的使用
• 溶胀 PEEK
– DMSO – THF – CH2Cl2
溶样的溶剂 – 乙腈／水
利谷隆
溶样的溶剂 –甲醇／水
溶剂的选择
用同位素模型算同位素峰
两种不同有机溶剂的比较
NH
O
N
CH3
Cl
H3C
O
Cl
Linuron 利谷隆+ve ion
(M+H)+ (M-H)-
CH3 H3C
CH3 O
OH
Ibuprofen布洛芬 -ve ion
正离子方式 – 分析碱性化合物
用有机酸调整 pH 值 如：甲酸或乙酸
负离子方式 – 分析酸性化合物
用碱调整 pH 值 如：氢氧化铵/氨水
pH 值的影响
流动相配比的影响
等度 LC
HPLC等度和梯度方法比较
梯度 LC
样品全溶解于水中
分析物溶解
样品溶解于流动相中
流速对大气压电离的影响
Relative intensity
100 50
0
0.5
液质联用讲座.ppt
• LC可以直接分析不挥发性化合物、极性化合物、热不稳 定化合物和大分子化合物(包括蛋白、多肽、多糖、多聚 物等)，分析范围广，而且不需衍生化步骤。
• MS是强有力的结构解析工具，能为结构定性提供较多的 信息，作为理想的色谱检测器，不仅特异性强，而且具有 极高的检测灵敏度。自1983年McLaffeny等 开发串联质 谱技术(MS／MS)以来，经过短短十几年的发展，串联质 谱已成为一种成熟的技术，在许多领域发挥了巨大作用。 串联质谱法是指质量分离的质谱检测技术，在单极质谱给 出化合物相对分子量的信息后，对准分子离子进行多级裂 解，进而获得丰富的化合物碎片信息，确认目标化合物， 对目标化合物进行定量等，有分离、结构解析同步完成的 特点，能直接分析混合物组分，有高度的选择性和可靠性， 其检测水平可以达到pg级
用MS2质量分析器扫描指定母离子的子离子碎片，所 得到的质谱图只能是由指定母离经碰撞产生。
子离子扫描，pruduct ion scan
• 子离子扫描可以得到母离子的碎片信息。这 些信息可以帮助操作者了解母离子的结构信 息，区别几种m/z相同的母离子，降低假阳 性率。 子离子扫描的作用是：
• 通过母离子碎片种类和强度的差异来区别 m/z相同的母离子
• 扫描类型选择
• 全扫描(Full Scan) • 子离子扫描(Daughter Scan) • 母离子扫描(Parent Scan) • 中性碎片丢失扫描(Constant Neutral Loss Scan) • 选择离子监测(SIR) • 多反应监测(MRM)
全扫描
• 全扫描用于检测离子源产生的离子流中，各种离 子的m/z和强度。从全扫描得到的信息可以知道 目前样品中的组分状态。
仪器用途
该系统是Waters-Micromass公司在2005年推出的一 款最新高质量三重四极杆串联液质联用仪，它能广泛应 用于医药、农药、生物化学、食品安全、环保、生命科 学等领域，它是解决不易挥发、热不稳定、大分子量及 宽极性范围等样品分析难题的强有力工具。通过高灵敏 度的串联质谱系统，结合高效液相色谱的分离或直接进 样可以详细地研究未知组分的结构。从分子水平上准确 阐述样品的化学成分，也十分适合新产品、新配方的开 发研制，同时可准确和深入地了解各种化合物的实质性 差异，并实时定性、定量地描述样品中的复杂组分的产
LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍
LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍LC-MS是液相色谱-质谱联用技术，是将液相色谱（LC）与质谱（MS）两种分析技术结合起来，对化合物进行分离和定性定量分析。
液相色谱将混合物中的化合物分离开来，而质谱则对分离后的单个化合物进行分子结构和组成的分析。
LC-MS的原理是首先通过液相色谱将混合物中的化合物分离开来。
液相色谱采用一个固定相（如柱子内的填料）和一个移动相（溶剂），将待分离的化合物通过不同的亲和性与固定相进行交互，从而使化合物逐步分离。
分离后的化合物进入质谱部分进行分析。
质谱主要是通过离子化技术将分离后的化合物转化为离子，并在电场作用下进行分离和检测。
常见的离子化技术包括电喷雾离子源（ESI）和化学电离（CI）等。
在质谱仪中，离子化的化合物被加速到一定能量，通过一个磁场进行分离，根据离子的质量与荷比（m/z）比值，可以得到化合物的分子质量。
LC-MS的基础知识包括液相色谱和质谱。
液相色谱（LC）：液相色谱是一种在液体流动相中通过固定相分离化合物的技术。
在液相色谱中，通过调节流动相的组成、温度、流速等参数，可以改变溶剂在固定相上的极性和亲和力，从而实现化合物的分离。
常见的液相色谱技术包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）、离子色谱（IC）等。
质谱（MS）：质谱是一种通过分析分子离子的质荷比来确定化合物的结构和组成的分析技术。
质谱主要包括离子化、质量分析和信号检测等步骤。
离子化可以通过不同的技术实现，如电喷雾离子源（ESI）、化学电离（CI）等。
质量分析部分主要通过加速离子，使其通过磁场分离，根据离子质量与荷比，可以得到化合物的质量。
信号检测主要是在质谱仪内部检测加速离子之后的荷电粒子。
LC-MS在许多领域中有广泛的应用。
例如，在生物医药领域，LC-MS 可以用于药物代谢和药物残留的研究；在环境科学中，LC-MS可以用于检测水体和土壤中的有机污染物；在食品安全监测中，LC-MS可以用于检测食品中的农药残留和添加剂等。
Waters_液质联用基础知识(waters中国培训中心)
质量过滤器 质子过滤器
离子检测器
数据采集及控制
离子源
分析器
检测器
数据处理
接口
HPLC
色谱分离 质谱图
样品引入 样品引入
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质谱的种类及相关联用技术
GC LC CE Flow Inj Probe FB/EI ESI APCI TSP FAB MALDI Quadrupole Magnetic Sector Time of Flight Ion Trap FT-MS Electron Multiplier Photomultiplier Microchannel Plate
C
原子序数 = 质子数 具有相同的元素符号,在元素符号的左上角表明其质量数
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天然同位素丰度
原子符号 氮
14N 15N
质量, amu 14.0031 15.0001 31.9721 32.9715 33.9679 34.9689 36.9659 78.9183 80.9163
4.00 2.27 7.22 9.12 11.59 14.87 2.04 9.98 19.12 13.15 17.40 25.16 21.42 22.52 26.8228.84
1: Scan AP+ BPI 8.29e4
%
33.78 35.04 38.26 39.52 33.32
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
MS的历史
60’s-70’s 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛 应用) 70’s-80’s 开始广泛研究 LC/MS 1979年 1982年 1984年 1988年 …... 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
waters液质联用-质谱基础知识介绍讲义
1: Scan AP+ BPI 8.29e4
%
33.78 35.04 38.26 39.52 33.32
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00
Time 40.00
为什么使用 LC/MS? …...
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快速得到丰富的结果
世界上第一台现代意义质谱仪在英国剑桥Cavendish实验室出现 电喷雾(Electrospray) 物理现象被发现 (并非为了 MS) 世界上第一台实际意义质谱仪在美国芝加哥大学实验室出现 (扇型磁场MS) 世界上第一台商业质谱仪 四极杆质量分析器质谱仪 飞行时间质量分析器质谱仪 开发GC/MS 大气压电离(APcI)源被发现(但并未被广泛应用) 开始广泛研究 LC/MS 传送带式 LC/MS 接口成为商业产品 离子束LC/MS接口出现 第一台电喷雾 MS仪宣告诞生 电喷雾离子源 MS 首次应用于蛋白质的分析
LC/MS中的质谱
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Mass Spectrometry-质谱
质量是物质固有特征之一，不同的物质有不同的质量谱 分析物被转化为气相离子而被分析 这些离子按其质荷比 (m/z)被分离而被检测 质谱图即是相关的离子流对m/z的图
•灵敏度高 •定性/定量本领高 •脉冲扫描采集数据 •高真空环境工作 •溶剂参与反应(API电离源)
为什么使用 LC/MS?
极高的灵敏度 (2)
©2005 Waters Corporation
为什么使用 LC/MS?
极佳的定量结果(3)
©2005 Waters Corporation
5 orders of magnitude linear dynamic range . over the concentration range 0.1pg to 10000pg, producing a coefficient of determination of 0.9975 for sulfadimethoxine injected on column,
LCMS液质联用仪原理及基础知识介绍
L C /M S 原理及基础知识介绍沃特斯中国有限公司应用部W a t e r s C h i n a L t d .M S 的历史1910年世界上第一台现代意义质谱仪在英国剑桥 C a v e n d i s h 实验室出现 1917年电喷雾 (E l e c t r o s p r a y 物理现象被发现 (并非为了 M S1918年世界上第一台实际意义质谱仪在美国芝加哥大学实验室出现 (扇型磁场 M S1943年世界上第一台商业质谱仪 1953年四极杆质量分析器质谱仪 1955年飞行时间质量分析器质谱仪1960’ s 开发 G C /MS 60’ s -70’ s 大气压电离 (A P c I 源被发现 (但并未被广泛应用70’ s -80’ s 开始广泛研究 L C /MS 1979年传送带式 L C /M S 接口成为商业产品 1982年离子束 L C /M S 接口出现 1984年第一台电喷雾 M S 仪宣告诞生 1988年电喷雾离子源 M S 首次应用于蛋白质的分析… . . .W a t e r s C h i n a L t d . L C /M S 中的液相色谱H i g h P e r f o r m a n c e L i q u i dC h r o m a t o g r a p h y -高效液相色谱液质联用的前提和基础 =进样 +分离根据化合物的化学特性分离样品 (比如极性化合物 , 非极性化合物 , 酸性化合物 , 碱性化合物等等• 分离技术• 分离效率高• 流动相参与分离• 连续流出 , 峰宽有限• 有时需要使用缓冲盐提高分离度• 高压环境工作 (> 1000 p s iW a t e r s C h i n a L t d .L C /M S 中的质谱M a s s S p e c t r o m e t r y -质谱质量是物质固有特征之一 , 不同的物质有不同的质量谱分析物被转化为气相离子而被分析这些离子按其质荷比 (m /z 被分离而被检测质谱图即是相关的离子流对 m /z 的图• 灵敏度高• 定性 /定量本领高• 脉冲扫描采集数据• 高真空环境工作• 溶剂参与反应W a t e r s C h i n a L t d .L C /M S 数据形式G a m a b u f o t a l i n 保留时间W a t e r s C h i n a L t d .质 谱 的 种 类 及 相 关 联 用 技 术液质联用系统的常见部件离子化质子过滤器离子检测器色谱分离样品引入数据采集及控制W a t e r s C h i n a L t d . 从 L C 到 M S 的转变物态转变 : 液态 -气态带电状态: “ 中性” -离子真空变化 : 760 t o r r -10-5t o 10-8t o r rW a t e r s C h i n a L t d .L C /M S 系统构成E I 电离源样品引入A P I 电离源样品引入W a t e r s C h i n a L t d .传统的样品电离方式 :E I 源E I 源 :电子轰击电离源可得经典的质谱谱图可查询质谱库 , 质谱结果可用工业标准谱库检索 , 是绝对的化合物鉴定相对易得 , 耐受性好谱图可解析 , 阐明结构信息但是 , 电离效率较差 , 测定的分子量范围、流速范围有限 ; 可测的化合物类型有限样品灯丝集电极离子聚焦透镜子去析器-E I 源 L C /M S 系统 :W a t e r s I n t e g r i t y 系统E I 的 宝 贵 遗 产HO O G a m a b u f o t a l i n (I I IM -18+M +M -36+341402 38436691 107123145 175191 79201135M - 162 +24191 107 123145 175191 79201 34138436M -18 +M +M -36+M - 162+24102H i g h R e s M a s s S p e c , B r o w n , K a m a n o , P e t t i t , O r g . M a s s S p e c . , 1972W a t e r s I n t e g r i t y L C /M S S y s t e m , P f i z e r , 1996W a t e r s C h i n a L t d .大气压电离技术电喷雾电离 (E l e c t r o s p r a y I o n i z a t i o n - 大气压化学电离(A t m o s p h e r i c P r e s s u r e C h e m i c a l I o n i z a t i o n -相转化过程W a t e r s C h i n a L t d .3 离子从液滴表面蒸发出来1 含各种离子的液滴-++++-----+++--++++-----+++-2 随着液滴的挥发 , 电荷密度增大 , 离子集中到液滴表面++-+-+++-++-+-+++-W a t e r s C h i n a L t d .x xx H H +M1 电离产生起决定作用的溶剂离子2 样品分子与反应离子发生反应 , 形成离子簇M H +xx xxX H +xx H +M H +3 离子去簇后被传输到质谱的质量分析器X = 溶剂分子 , 比如 H 2O , N H 3等等一般适合分析挥发性化合物 , 也常分析从中性到极性的化合物纯气相离子化过程 , 只产生极少的添加离子谱图简单流速范围大 , 从 0.2 到 2. 0m L /m i n , 而不用分流W a t e r s C h i n a L t d . A P I 电 离 源 (E S I + 电 离 模 式 :软 电 离 产 生 [M +H ]+准 分 子 离 子 峰W a t e r s C h i n a L t d .A l l i a n c e Z Q L C /M S 系统W a t e r s C h i n a L t d . W a t e r s Z Q . . .W a t e r s C h i n a L t d .同 一 样 品 的 质 谱 图 可 能 并 不 一 样 !S a m p l e D e s c r i p t i o n80150 m /z 10S A L I C Y L A M I D E 1 (0. 067 C n (C e n , 2, 80. 00, A rS c a n E S + 1. 19e 8138. 01370121. 2100. 290. 18818293. 9. 8114. 0110. 22. 013303. 98. 9143. 0149. 32-H y d r o x y b e n z a m i d e M W : 137 F o r m : C 7H 7 N O 2 C A S R e g N o : 65-45-225225250162839658092120137C O N H 2O HF i g u r e 1. W i l e y L i b r a r y R e f e r e n c e S p e c t r u m o f S a l i c y l a m i d eW a t e r s C h i n a L t d .C ID 产生的过程A n a l y s i s o f S u l f a m e t h a z i n e b y E l e c t r o s p r a y1000, 000, 000, 000S u l f a m e t h a z i n e[M +H ]+2772782792802812822, 0004, 0006, 0008, 00010, 000000P a r e n t I o n R e g i o nM W 278m /zP o s i t i v e i o n m o d e , E S I , 2 u l /m i n , 50% M e O H :49% H 2O :1% H O A c, 00012, 0, 000, 000150200250300m /zW a t e r s C h i n a L t d .优异的 C I D 技术 (可编程A n a l y s i s o f S u l f a m e t h a z i n e b y E l e c t r o s p r a yS u l f a m e t h a z i n e 10002, 0004, 0006, 0008, 00010, 000[M +H ]+2, 0004, 0006, 0008, 00010, 000F r a g m e n I o n R e g i o nM W 186m /zC 6H 8N 3O 2S150200250300m /zW a t e r s C h i n a L t d .多种 C I D 方式 :一次进样得到全部质谱信息C 4H 9-W a t e r s C h i n a L t d .四极杆质量分析器W a t e r s C h i n a L t d .L C /M S 联用中的转变过程液相色谱的现实情况 :从高效液相色谱流出的化合物存在于大气压条件下的溶液之中质谱的现实情况 :在高真空工作条件下的质谱仅接受气相的离子因此液质联用的接口必须完成:去除溶剂保留样品电离化合物W a t e r s C h i n a L t d .L C /M S 面临的挑战W a t e r s C h i n a L t d .接口E I 电离源的液质联用接口 -热束接口 (T B 雾化 , 去溶剂然后电离E S I 和 A P C I 接口 -Z S p r a y 雾化 , 去溶剂和电离同时完成W a t e r s C h i n a L t d .热束接口原理 :喷雾作用和动量分离雾化室动量分离器 (第 1 & 2级压力为 5 T o r 并且 90% 的溶剂和载气(H e 被去除, 压力为 1. 5 T o r r 并且剩余的 1 0%溶剂和氦气被去除。
液质联用培训讲义
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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10. 输入所欲储存之文件名称后按存盘即可，确认所 有的扫描模式都已经被校正。
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仪器质量校正
样品2. 对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲 酸丁酯1ppm实验，调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞 能量（CE） ESI 对羟基苯甲酸甲酯 MRM :151/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丙酯 MRM :179/136,92 CV 30/ CE 15/ CE 20 对羟基苯甲酸丁酯 MRM :193/136,92 CV 30/ CE 18/ CE 25
• 此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
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M+H+ 134 106 148 76 156 175 120 90 116 121 182 118 150 147 132 132 166 备注： * 碱性氨基酸 易中性丢失63(甲酸+NH3) ▼ 带苯环氨基酸 ● 仲氨酸 易中性丢失46(甲酸)
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定性实验 调谐仪器
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WATERS公司的UPLC-TQD培训资料MS1LCMS基础
为什么使用 LC/MS?
极高的灵敏度 (2)
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为什么使用 LC/MS?
极佳的定量结果(3)
5 个数量级的动态线性范围 (0.1pg - 1000pg) 实验系数= 0.9975,样品:磺胺二甲氧哒嗪上柱分析
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608.687
使用单一同位素质量: C: 33 x 12.0000 = 396.000 H: 40 x 1.0078 = 40.312 N: 2 x 14.0031 = 28.006 O: 9 x 15.9949 = 143.954
608.272
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为什么使用 LC/MS?
进一步增加HPLC的分离能力(4)
如果让您来选择， 您满意那一种分 离度?
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为什么使用 LC/MS?
解决无UV吸收样品分析问题(5)
LC_MS_OK
TaiyuanLC_MS5
100
x36
%
2: Diode Array 254 1.00Da 1.71e6
0 TaiyuanLC_MS5 100 2.914.81 5.84
4.00
1: Scan AP+ BPI
8.29e4
2.27 %
2.04 0
7.22 9.12
11.59 14.87
9.98 13.15
19.12
25.16
17.40 21.42 22.52 26.8228.84
33.3233.7835.04 38.2639.52
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4．母离子扫描
MS1
定性实验 调谐仪器
Collision Cell
Argon gas MS2
PPrreeccuurrssoorr
PPrroodduuccttss
Scanning
Static m/z 92
样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸丁酯实验 与氨基酸混合液。 调谐最佳实验锥孔电压（CV）/碰撞能量（CE），对羟基苯甲酸甲 酯/对羟基苯甲酸乙酯/对羟基苯甲酸丁酯三种化合物有共同碎片92， 可进行母离子扫描将其与氨基酸区别开。
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8. 按OK键后会跳出步骤6的自动校正选单，此时 按此页面OK键就会开始进行质量校正。
9. 当所有的校正都完成后，将校正的结果储存起 来，从质量校正页面的档案（File）选取另存新 档（Save As）。输入所欲储存之文件名称后按 OK即可。
Cell
MS2
Products
Scanning (m/z M-46Da)
样品：混合氨基酸实验 中性丢失46(甲酸) 中性丢失63(甲酸+NH3)
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• 常见17种混合氨基酸m/z • 天门冬氨酸(Asp或D) • 丝氨酸(Ser或S) • 谷氨酸(Glu或E) • 甘氨酸(Gly或G) • *组氨酸(His或H) • *精氨酸(Arg或R) • 苏氨酸(Thr或T) • 丙氨酸(Ala或A) • ●脯氨酸(Pro或P) • 半胱氨酸(Cys或C) • ▼酪氨酸(Tyr或Y) • 缬氨酸(Val或V) • 蛋氨酸(Met或M) • *赖氨酸(Lys或K) • 异亮氨酸(Ile或I) • 亮氨酸(Leu或L) • ▼苯丙氨酸(Phe或F)
:609 (CV=45)
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2．子离子扫描 daughter scan
Argon gas
Collision
MS1
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6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
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MRM(MS /MS)
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parent scan(MS/MS),neutral loss scan(MS/MS) 实验参数设置建议如下：
parent scan(MS/MS)
neutral loss scan(MS/MS)
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碰撞压力 3×10-3mbar
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RF only
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• 样品： 利血平标样,调谐最佳实验锥孔cone
voltage(CV)、毛细管电压、RF lens、离子能量等参数 ，进行全扫描获最大分子离子峰609。
• 样品：利血平1ppm (乙腈：水=1:1配置) ESI + scan
在质谱调机页面（MS Tune）监看四个扫描质量： 172.9 ,622.6 ,1072.2 , 1971.6
确认讯号良好及注射针内样品量充足!
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仪器质量校正
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实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥 孔电压,RF lens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参 数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.
1．全扫描 full scan
Collision
MS1
Cell
MS2
Scanning (m/z M)
• 此为第一段和第二段扫描模式参数。这是因为在进行质量
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
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定性实验 调谐仪器
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Full scan(MS),daughter scan(MS/MS),MRM 实验参数设置建议如下：
Full scan(MS)
daughter scan(MS/MS)
Quattro LC/Micro 液质联用培训讲义
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• 仪器质量校正 • 定性实验 调谐仪器 • 定量实验 • 维护及故障排除 • 常用备件号
内容
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1. 注射泵注入校正溶液，以碘化钠铯（异丙醇/水 = 1：1, NaI 2ug/L , CsI 50ng/L）溶液为例，流速5ul/min
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定性实验 调谐仪器
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5. 中性丢失扫描neutral loss：
MS1
Precursor
Scanning (m/z M)
Argon gas Collision
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5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
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Cell
MS2
Precursor
Products
Static (m/z 609.1)
Scanning
利血平标样,根据全扫描获得最佳实验锥孔CV、毛细管电压、RF lens、 离子能量等参数，调谐碰撞能量collision energy (CE)、碰撞压力，进行
子离子扫描实验准备。 Daughter scan：609/195，448，397，174
3. 在质谱调机页面（MS Tune）选择校正仪器以开启 的质量校正页面。
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4. 开启质量校正页面后，质量校正前请先确定目前仪器处 于未校正的状态，所有六种校正都为未校正（No Calibration），若不然则开启一个未校正（Uncal.cal）的 档案。
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11. 根据实验要求，分别按上述步骤实验LM/HM=15 ，LM/HM=14，LM/HM=13三条校正曲线。
用途:根据实验需求分别调用不同分辨率的校正曲线.
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50
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2. 在质量分析器页面（Analyzer）设定以下的数值，括 号内的数值即为设定值：
• LM Resolution 1（15.0） HM Resolution 1（15.0） Ion Energy 1（0.5） • Entrance（50） Collision（2） Exit（50） • LM Resolution 2（15.0） HM Resolution 2（15.0） Ion Energy 2（0.5）
3. 多反应监控MRM
MS1
Argon gas Collision
Cell
MS2
Precursors
Static m/z 609.1