去壁低渗法制备植物染色体标本实验
植物染色体技术-去壁低渗法
五、酶解去壁：倒去固定液，蒸馏 水漂洗2-3遍，加入2.5%纤维素酶 与果胶酶的混合酶液1ml.
目的：分离细胞和软化去壁。
六、低渗处理：倾去酶液，加入 0.075M KCl溶液，在20~25℃条件 下低渗处理30min。 目的：使细胞吸收水分而膨胀， 染色体分散到细胞质中，在制片 时便于染色体分散开。
七、去沉淀：静止片刻，去掉大 块沉淀物，倒取上层悬液。
目的：自然沉降。
八、离心：上层清液以200g离心1020min。
九、标本制备：将分离所得的 悬液滴至载玻片上，在酒精灯 火焰上微微加热烤干，用卡宝 品红染色5~10min，在光镜下观 察小麦根尖细胞中期染色体的 形态结构。
这个方法与传统的压片法相比具有若 干优： 用这个方法获得的染色体形态比较完整, 接近正常状态。染色体各组成 部分— 长臂、短臂、着丝点、随体、染色单 体显示的都比较清楚,有利于染色体的测 量 和分析这个方法不但可使 中期染色 体散开,而且也 可使前中期,甚至前期的 染色体散开。
一、材料培养：取约30粒种
子,加水浸润后置于培养皿中 于25℃恒温培养发芽。
二、取材：待根长到1.0-2.0cm时， 在上午9：00剪取种子跟约0.51.0cm。
三、预处理：0.1%的秋水仙素处 理3-4小时，或冰水混合物浸泡24 小时。 目的：是染色体分裂滞留在中期。
四、固定：将经过预处理的根尖清 洗后用镊子将细胞夹碎，定液4-5ml 目的：使小麦根尖细胞固定在原来 的分裂状态，病史构成染色体的核 蛋白变性成沉淀，保持染色体的固 有形态。
植物染色体制片技术—— 去壁低渗法
近年来,有人试图将人类染色体标本 制备方法引用到植物材料上来，取得 一些进展。我们参照人类染色体标本 制备技术,开展了对植物细胞去壁、 低渗、火焰干燥方法的研究。
低渗液处理细胞染色体标本制作过程
低渗液处理细胞染色体标本制作过程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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开放实验 染色体制片
玉米、洋葱、人染色体
果蝇染色体
三、实验步骤
利用血淋巴细胞制备染色体标本步骤 ： 1、采血（0.5ml） 可在采血前向实验动物腹腔注射0.01％秋水素，因血易在注射器
内凝固，故注射器预先经肝素纳浸湿，可采心脏血、静脉血。 2、低渗 加入经37℃预温的0.0375mol/L KCl溶液至7ml混匀后，置37℃水浴中低渗
=3：1)中固定4-5h，固定后的根尖若不能及时制片，用蒸馏水冲洗后， 换70%
的乙醇溶液，置冰箱中保存备用 。
3、解离 根尖从冰箱中取出后，先用自来水冲洗掉根表面的乙醇，再用1N HCL
酸解根尖，温度55—60℃左右，时间1—2分钟，以根变软为止。
4、染色 用水冲洗根表面的HCL，取前端乳白色部分放在干净的载玻片上捣
处理20分钟左右﹙目的 红细胞将破裂，白细胞吸水充分膨大，利于染色体的分散﹚。 3、预固定 加1ml新配制的甲醇-冰醋酸3∶1的固定液，待充分混匀后，离心
1500r/min、 10min ，弃上清液，留管底细胞。 4、固定 加5 ml固定液，室温20 min，再离心，1500r/min、10min，弃上清液，留
培养基的一种配方 ：
1640 4ml ：优质胎牛血清 1 ml
PHA 0.2mg ：肝素钠 0.03ml ： 双抗
PHA (植物凝集素，从血豆中提取的一种糖蛋白，可刺激淋巴母细胞进 行分裂 ) 肝素钠 (配成的浓度为700—1000个效价/ml，起防止血液凝固用 ) ，
双抗（青霉素和链霉素，最终浓度各为100单位/ml ，起杀死培养基中
得染色体的不同带型。 以上采的血样未经培养直接制片，还可将血放入到培养基中培养一定的时间，再制 片。但采血及培养基的配制都必须在无菌室内进行。制片过程将步骤1改为1★其余步 骤相同。 1★收集细胞 速1500r/min 将含有血细胞的培养基（培养瓶充分摇匀）转移到离心管中离心，转 10min ，弃上清液（用吸管吸走，不要将下部细胞吸走），留1ml 。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意
义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法是通过去除细胞壁，使得细胞内的染色体能够在液态介质（通常是醋酸或者醋酸-乙醇混合液）中自由展开，并与染色剂染色，从而得到适合观察和分析的染色体标本。
这种制备方法在植物细胞遗传学中得到广泛应用。
首先，通过去除细胞壁，可使得染色体得以展开成线性或环形的形式，方便进行观察和分析。
其次，在去壁液中低渗透压下染色质水肿膨胀，使染色体的结构更加明晰，染色效果更佳。
同时，去壁液中还含有某些成分，如乙酸和染色剂，可促进染色体的凝聚和染色，从而也有助于染色体的分析和研究。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法在植物细胞遗传学中有着重要的应用价值，可用于染色体数目和形态的分析、基因定位和标记、染色体变异的检测和研究等。
特别是在遗传改良中，该方法也被广泛应用于植物杂交和基因转移等研究领域。
5-牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察
报告成绩实时记录成绩实验五牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察学生姓名学号班级座位号：同组同学日期：年月日备注：【Introduction】（1）简述染色体显色技术：将没有染色的中期染色体经过预处理后，再用不同的方法和染料处理，使染色体上出现明暗相间或深浅不同的明显而稳定的斑带。
每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至染色体结构异常也可被检出。
染色体显色技术分为两大类，一类是产生的染色带分布在整个染色体上，如G、Q和R带；另一类是只能使少数特定的区域显带，如C、T和N带。
染色体显色技术极大地促进了细胞遗传学的发展，使每条染色体都可被准确识别和鉴定，甚至出现小的染色体结构异常也可被检出。
（2）制备中期染色体标本的原理和应用：识别染色体的形态特征的最佳时期是细胞有丝分裂中期和早后期。
这时染色体收缩程度最大，形态最稳定，并且分散排列、易于计数。
如果在同一时间内获得不同物种的染色体标本，就可以了解不同物种之间的染色体水平的异同；或者在同一时间内获得同一物种不同技术处理条件下的染色体标本，还可以了解不同技术处理对染色体的影响。
【Materials & methods】实验仪器：复式双筒显微镜（带油镜）；Motic数码互动系统；擦镜纸/盖玻片；载玻片/镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/吸头；香柏油/二甲苯；搪瓷盘，剪刀，烧杯，小离心管，玻璃注射器；离心机，一次性手套，骨剪（实验班公用），冰箱（0℃）。
实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）。
实验试剂：0.65％生理盐水；甲醇—冰醋酸(3:1)固定液；蒸馏水；自来水;Giemsa染液。
实验操作：1．动物前期处理：牛蛙称重→注射秋水仙素→3.5~4小时后麻醉→取牛蛙→肢解。
2．取骨髓：剪下四肢→剔骨→剪开骨髓腔→生理盐水冲洗→分四个离心管离心→弃去上清液→生理盐水吹打沉淀物→合并于一管。
3．低渗：每管加蒸馏水1 ml→吹打混匀→30度下静置20 min。
4．固定：离心→弃去上清液→加甲醇-冰醋酸固定液l ml→固定15分钟→吹打悬浮→重复上面步骤一次→离心→弃去上清液→吹打悬浮。
实验七 植物染色体标本的制备与观察
解离：取出根尖放入1mol/L HCl（58-60 ℃解离 对比）解离14-15min，软化去除细胞壁及果胶物 质，使细胞易于分散。 染色：倒去热HCl后，用改良苯酚品红染色液染 色5～10min。 漂洗：吸去染色液，用漂洗液换洗2-3次，每次12分钟。
酶解：在载玻片上切取根尖着色深的部分，浸入 小酒杯内1-2第混合酶液中，室温下酶解40min左 右或在28 ℃温箱中酶解20min左右。
取材：将小麦放在25℃温箱中发芽，待根长到 1~2cm左右，窃取0.5cm长的根尖部分。
前处理：剪下根尖用0.1％秋水仙素溶液处理3～ 4h。也可将剪下的根尖放在0～3℃蒸馏水中，置 冰箱中24小时，使分裂的细胞尽可能集中于分裂 中期。
固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定2～ 24小时。换入70%的酒精，使细胞的分裂活动处 于停滞状态。 制片：有多种方法——切片、压片、滴片等。
洗涤：吸去酶液，加蒸馏水，用吸管换洗几次， 吸去残留的煤业后加入45%的醋酸。 压片：用吸管从醋酸中吸去材料，置于干净的载 玻片上，保留少许醋酸，盖上盖玻片，覆以吸水 纸，轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。 镜检
四：实验观察结果
1．分裂细胞观察 低倍镜找分裂细胞区,高倍镜观察染色体形 态。估计染色体数目。
染色体组在细胞分裂中期的表型称为染色体组型 或称核型，包括染色体数目、形态、大小、着丝 点位置及副缢痕及随体的有无等特征。 染色体组型分析就是通过对染色体标本或其照片 进行测量、对比分析、配对、分组、排列，对组 内各染色体的形态进行测量、描述，从而阐明生 物染色体组成的过程。
三、实验材料
器具：恒温培养箱，显微镜
试剂：0.1％秋水仙素溶液，Carnoy固定液， 1mol/L HCL, 亚硫酸水溶液（漂洗液），纤维素酶 ，果胶酶，改良苯酚品红染色液（Carbor fuchsin ，）
大麦和玉米染色体去壁低渗法制片及其核型分析
１３ １ 去壁低 渗火焰 干燥 法制备 染色体 标本 。 ．． 根 尖染 色体 制片步 骤是 ：
催芽一根尖取样 预处理 一固定 一前底渗一解
离一后 低渗 一再 固定 一涂 片一染 色一制 片 。 具体 染色体 制 片方法 是 ：
究具有重要 意义。以往作为简便 的染 色体 制片技
维普资讯
８
大麦与谷类科学
Ｂ Ｒ Ｅ Ｎ Ｅ Ｅ ＬＳ Ｉ Ｎ Ｅ Ａ Ｌ Ｙ Ａ Ｄ Ｃ Ｒ Ａ ＣＥ Ｃ Ｓ
大麦和玉米染色体去壁低渗法制片及其核型分析
虢 国成 向 洋
（ 长沙理工大学生物与食 品工程学院 ，湖南 长沙 ４ ０７ ） １０ ６
摘要 运用去壁低渗火焰干燥法制备大麦和玉米染 色体 片 ，然后对玉 米 、大麦的染色体 核型进行研究 。结果表 明 ：该 法使 细胞质残 留较少和染色体更分散 ，为细胞 学研究提供清 晰度高 的染色体制 片 ；通过核型分析得 到 ，大 麦根尖细胞染 色体数 目为 ２ ｎ＝１ ４，核型公式为 ２ ２ ｎ＝ ｘ＝１ ２ （ Ｓ Ｔ ＋ ｓ （ Ｓ Ｔ ，玉米 根尖细胞染色体 数 目为 ２ ４＝１ｍ ２ Ａ ） ２ｍ ２ Ａ ） ｎ＝２ ，其核 型公 式为 ０
湿 润 ，然 后将 种子 均匀地 摆放 在滤纸 上 ，种 子 间距
约 ０５ ｅ ． ｍ，盖上 盖 ，２ ２ ℃ 条件下 培养 。 ５— ８
（ ） 取 材预处 理 ：处 在 细胞 分 裂 中期 的染 色 ２
体最易观察 ，但细胞分裂中期持续时间很短，一般
只有 １ ３ ｎ ０～ ０ ｍｉ，因此 固定 材 料 的 中期 分裂 相 较 少 ，而且染 色体 紧密排 列在 赤道 面上 ，很 难将 染色
２ ２ ｎ＝ ０＝１ ｍ ＋ ｓ （ ｅｔ） ２ ８ｍ ２ａ 。 ｓ
去壁低渗法制备植物染色体标本
一、实验目的 1、掌屋植物染色体标本的去壁低渗方法 2、了解中期染色体的形态结构
二、实验原理：
植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动 物染色体那样平整地贴在载玻片上，可通过纤 维素酶和果胶酶处理去掉细胞壁；用低渗溶液 处理可以提高染色体的分散程度。陈瑞阳等 （1979，1982）提出了植物染色体标本制备 的酶解去壁低渗法，并在多种植物上得到广泛 应用，成为当前植物染色体研究中的重要方法。
7、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意 观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置， 并尽可能找到具随体染色体。
1、材料培养：将玉米或大麦的种子充分浸种后，摆 在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温箱发芽培养 2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入 盛有1ml0.2%秋水仙素的小瓶中预处理2-3小时 3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放 入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30 分钟。以下可分两种方法进行处理
4、第一种方法： （1）、酶解去壁：吸去氯化钾溶液，加入混 合酶液（2ml滴管5滴左右），在25℃下处理12小时。 （2）、后低渗：吸去酶液，慢慢加入 (25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸 吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1） 固定液固定20-30分钟
植物常规染色体制片-固定和低渗处理
实验二植物常规染色体制片Ⅱ固定和低渗处--固定和低渗处理（综合性实验）遵义师范学院生命科学学院韦若勋一、实验目的1、掌握植物根尖染色体制片过程中固1掌握植物根尖染色体制片过程中固涂片；定和涂片的方法；2、掌握植物根尖染色体制片过程中低渗处理根尖细胞的方法；3、熟悉固定液、低渗溶液和酶液的配制。
二、实验原理、三、实验器具及试剂（一）实验器具指管、量筒、棕色瓶、烧杯、天平等。
指管量筒棕色瓶烧杯天平等三、实验器具及试剂(二)实验试剂1、0.075mol/L 氯化钾称取KCI 5.6g，少许鲜蒸馏水溶解，定溶1000 ml。
225%2、2.5% 纤维素酶和果胶酶酶解混合液纤维素酶、果胶酶各1g,鲜蒸馏水分别溶解,定溶20ml,再等量混合即可。
3、固定液甲醇：冰乙酸=3：1，现配现用。
4、45%醋酸溶液44%醋酸溶液四、实验材料、1、已预处理好的蚕豆、绿豆、洋葱和大蒜已预处理好的蚕豆绿豆洋葱和大蒜等植物的根尖。
五、实验方法与步骤五、实验方法与步骤2、酶解去壁（1）方法①第二次取材,放入管内；②加2.5%混合酶浸没全部材料；③25℃下处理2－3h；④触即破为度。
以一触即破为度。
（2）注意事项处理过程中防止酶液干燥，并摇动酶液，使其充分作用。
五、实验方法与步骤5、后低渗（1）方法①酶液回收：用平口吸管,排气后直插孔底,缓慢吸酶；②鲜蒸馏水清洗3次；③蒸馏水浸没全部材料，处理20min（2）注意事项酶解时冲酶解过度时不宜冲洗。
（3）作用①细胞吸水膨胀使染色体分散膜外；②降低胞质浓度，清洁染色体标本。
五实验方法与步骤4、固定（1）方法①吸干蒸馏水(平、直、慢)；②用固定液冲洗3次(平、直、慢)；③浸没全部材料，处理30min以上。
（2）注意事项①酶解过度时不冲洗；②固定液鲜配鲜用。
固定液鲜配鲜用（3）作用①杀死细胞，保留分裂相；②使细胞质蛋白变性和沉淀,清晰染色体图像；③促进染色体着色。
五、实验方法与步骤5、制片或涂片（1）方法①取冰冻玻片1张，放滤纸上；②取根尖材料放于玻片中央，滴1-2滴固定液；③用镊子迅速将材料压碎涂布，并去除大块组织残渣；④再加固定液，轻吹使染色体扩散，在酒精灯上干燥。
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义植物染色体是进行细胞有丝分裂和有性生殖的关键结构，因此其研究对于揭示植物遗传学的基本原理至关重要。
而植物染色体的标本制备是进行细胞遗传学研究的重要前提。
本文将介绍植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义。
1. 去壁法去壁是制备植物染色体标本的一种重要方法。
在该方法中，通过化学物质的去壁作用，将细胞质与胞壁分离，使得染色体自身单独显示在显微镜下。
实际操作中，可以选择使用酸性酶、酶解剂、酸、碱等化学物质进行去壁处理。
其中，常用的去壁剂包括5%酸性酶、10%酶解剂、0.2M HCl、0.5M NaOH等。
去壁法的优点是使用简便快速，并且对大多数植物都适用。
但对于一些富含淀粉或黏性胶质的细胞来说，由于某些因素，如低温、压力等的作用，有可能导致壁面突出，造成染色体复杂度上升，影响染色体的观察和解析。
2. 低渗法低渗法是制备植物染色体标本的另一种重要方法。
在该方法中，通常采用甘油、尿素、EDTA等化学剂对细胞进行胞浆溶解，使得染色体在细胞浸润后，以单独的形式出现。
此外，低渗法的操作步骤相对简单，且对于密封度较高的细胞比较适用。
低渗法的优点是可以在不破坏细胞形态结构的前提下，使得染色体以单独的形式显示出来，使得对于染色体结构、染色体数量、染色体结构异变等方面的分析更具可靠性。
缺点则是较容易出现染色体陷入一些黏性物质中，难以单独显示，从而影响观察。
3. 在细胞遗传学中的意义制备植物染色体标本是进行细胞遗传学研究的关键步骤。
通过观察染色体特征，可以判断染色体数量、形态、结构等信息，从而更深入地研究植物生物学的机制，深入探究其遗传变异的规律。
同时，标本制备方法的选择和处理也会影响到对遗传信息的解析。
因此，在进行植物细胞遗传学研究时，需要根据具体情况进行合理的标本制备方法选择和处理，以确保研究结果的准确性和可靠性。
此外，植物染色体标本制备的去壁、低渗法也可以应用到其他生物的细胞遗传学研究中，为后续的研究提供基础和参考。
遗传学实验操作规程：染色体标本制备与观察实验操作规程染色体制片
遗传学实验操作规程：染色体标本制备与观察实验操作规程染色体制片技术显示染色体一般的形态和结构,成功的关键是获得大量染色体缩短适宜的分裂细胞。
1. 压片法1.1 取材在适当的时间选取细胞分裂旺盛的组织。
1.2 预处理秋水仙素进行活体或离体处理。
1.3 固定卡诺固定液固定，迅速杀死生活细胞使染色体的组成蛋白变性，保持染色体形态和结构。
1.4 解离1mol/L HCl60℃进行酸解，不同的材料的酸解时间不同。
1.5 染色改良石炭酸品红染色。
1.6 压片染色后盖上盖片，用大拇指按压有材料的部位，粗滤纸吸干多余染液，再用铅笔头轻敲，使重叠细胞分散，得到理想的分裂相。
1.7 观察低倍镜找到分散良好的分裂相后换高倍镜或油镜。
1.8 绘图会制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。
2. 去壁低渗法2.1 前低渗经预处理的材料转入0.075mol/L或蒸馏水中室温下30min。
2.2 酶解去壁纤维素酶和果胶酶混合液处理2～4h。
2.3 后低渗洗去酶液，蒸馏水处理10～30min。
2.4 固定制备细胞悬液倒去蒸馏水将材料充分夹碎，加入固定液。
2.5 制片用吸管吸取细胞悬液，高度30～40cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干。
2.6 染色10% Giemsa染液染色。
2.7 观察低倍找到分散良好的分裂向后换高倍镜观察。
2.8 绘制分散良好的细胞染色体图或拍照进行核型分析。
3. 注意事项显微镜使用完毕后须对油镜头进行清洁，并将电源关闭，罩上防尘罩。
染色体组型分析实验操作规程染色体组型分析是对染色体组中处于有丝分裂中期时染色体的数目、大小、形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的有无等形态特征作一描述.将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像就称为该细胞的组型。
1. 染色体制片→显微照相→放大。
2. 测量测量染色体的长短臂长度，并记录。
3. 计算臂比值、相对长度，根据臂比值确定染色体类型。
实验3、植物染色体标本制备及核型分析---辅助资料
实验3、植物染色体标本制备及核型分析目前，国内外常用的植物染色体制片技术可以分为两种，即压片技术和去壁低渗技术。
Belling(1921)提出植物染色体压片技术后，压片已成为植物染色体研究中最广泛应用的常规技术；但是由于植物细胞有坚实的细胞壁，染色体很难象动物染色体那样平整地贴在载玻片上，Omura 和Kurata(1978)把植物原生质体技术应用到水稻染色体研究之中，用纤维素酶、果胶酶和0.075mol.L-1氯化钾处理取得了一定的进展，陈瑞阳等人（1979、1982）提出了植物染色体标本制备的酶解去壁低渗技术，并在多种植物上得到广泛应用，成为当今植物染色体研究中的重要方法。
压片技术和去壁低渗技术在取材和预处理要求及其操作都是相同的，即两者的材料基础条件是相同的，但它们所采用的染色体分散方法是不同的。
压片法是以人工外加机械压力使染色体分散，而去壁低渗法是用酶分解细胞壁，低渗液使细胞膜吸胀、水表面张力使染色体分开。
两种技术各有其优缺点，前者操作快速简便、省材省时，后者染色体易于展开、且真实不变形，尤其是对成熟细胞多的植物组织，如芽、愈伤组织等材料有独到效果，本实验主要介绍去壁低渗染色体制片技术。
一、实验目的1、掌握植物根尖、茎尖及叶片去壁低渗染色体制片技术，通过3周开放性实验教学，进行植物染色体制片技能训练；2、掌握植物染色体显微照象技术及组型分析技术，通过大量的制片观察，能获得图象清晰、完整、高度分散的染色体典型制片；通过显微摄影，获得某植物染色体自然核型图，并能用国内外通用的植物核型分析标准，确定该植物染色体模型图、核式公式及类型；3、掌握植物有丝分裂制片技术，通过大量的制片观察，能比较快速准确地判断细胞有丝分裂前、中、后、末期的染色体图象，并对其典型制片照像，收集核型分析及有丝分裂过程观察的染色体制片素材；4、结合实验，对某一新资源植物进行染色体组型分析，获得该物种染色体组型公式、类型、核型图及核型模式图。
植物染色体标本的制备和观察
植物染色体标本的制备和观察摘要：目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本的基本原理和方法；2、学会观察和统计植物细胞的染色体数目；3、了解和学习去壁低渗法进行植物染色体制片的基本原理和方法。
方法大蒜的根尖是分裂比较旺盛的，我们可以利用秋水仙素处理根尖使得大蒜根尖的细胞分裂处于分裂中期，然后经固定染色等处理将染色体染色固定，以便观察。
结果大蒜的染色体有16条，都被染色成红色的条状或细丝状物质。
结论大蒜染色体有16条。
关键词：植物染色体；大蒜；秋水仙素前言染色体是遗传物质的载体，本实验便是观察染色体的形态和数目。
植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法。
其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，即可观察到较多的、处于有丝分裂中期的细胞和染色体。
由于现在洋葱发根较难，我们采用的是大蒜根尖进行相关实验。
材料与方法1.实验材料大蒜根尖、白姜花的根尖、野百合的根尖等。
2.实验试剂：0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸，浓盐酸：95%乙醇（1:1）解离液。
3. 实验用具显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、吸水纸、滴管、载玻片、盖玻片。
4.实验植物和试剂大蒜根尖、 0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸；70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水5.实验方法和步骤5.1 取材先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。
5.2 预处理将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡处理3～4小时。
5.3 固定将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定（固定液的量约为材料的10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不能太高）。
固定2～24h后分别在95％和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒精中，于4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。
植物染色体制片技术的比较研究
植物染色体制片技术的比较研究摘要本文以韭兰为材料，对植物染色体常规压片、去壁低渗法制片技术染色效果进行了比较。
实验表明：去壁低渗法获得细胞和染色体都较分散，Giemsa 染色使得背景与材料的对比度较大，便与观察。
不足之处在于去壁低渗过程中，时间特别不易掌握，耗材多，且成功率较低，染色体容易丢失、形态也不太理想。
常规压片耗材少，成功率较高，但不易做分带制片。
关键词植物染色体；常规压片；去壁低渗一、材料与方法1.供试材料试验用植株由校园内采集2.根尖制片（1）常规压片。
首先在早上9：00—10：00采集韭兰的根，在室温下放入0.1%秋水仙素溶液中进行预处理处理8h。
然后在常温下把材料放在卡诺氏固定液下固定10min，接下来就在1 mol/L盐酸溶液中解离到松软刚合适为止。
最后用蒸馏水将韭兰根冲洗干净，这样前处理就结束。
处理完后就可以用醋酸洋红染色或改良苯酚品红染色。
压片/涂片后选取典型的染色体，在40倍物镜及油镜下显微照相。
（2）去壁低渗法。
首先把材料放0.1%秋水仙素溶液中进行预处理处理8h。
然后前低渗，即将根尖放在0.075tool/LKCI低渗液中，在20-25℃条件下处理0.5h。
接下来就是最关键的去壁，倒去KCI溶液，加入2.5%混合酶液，在25-30℃温度下处理2-5h左右。
去壁后要进行后低渗，使细胞完全膨胀，即是用20-30℃蒸馏水慢慢冲洗2-3次后，再将根尖放在0.075tool/LKCI低渗液中处理。
将后低渗后的材料先经固定液固定后，就可以把去壁固定的根尖放在清洁的载片上，将材料夹碎，加1滴固定液。
放于酒精灯上微微加热烤干。
最后用Giemsa染色，后选取典型的染色体，在40倍物镜及油镜下显微照相。
二、结果与分析1.常规压片法常规压片法操作简单，醋酸洋红对于染色体染色均匀，由于它对RNA也有染色效果，以此种方法染色的染色体十分饱满，倘若制片操作合适，加上脱色、沉淀等步骤，能够制出背景清晰、效果良好的装片，可供染色体核型分析。
去壁低渗制备水仙花根尖染色体标本实验条件的优化
为 了让学生加深认识染色体行为变化特征，观察植物细胞有丝分裂及各个时相的染色体变化特征，制 备染色体分散均匀、整洁的标本非常重要，同时优 良的染色体制备技术为倍性研究和核型分析等提供 了有 力的技术支持，去壁低渗制备染色体标本是 目前研究细胞分裂和染色体动态变化的首选方法，采用该方法 制备的标本染色体分散性好，背景清爽，并且大部分 可用于核型分析． 【因此，去壁低渗法在染色体的研究 ｌ 工作中愈发重要． 传统的去壁地渗法采用酶解法去壁， 酶解时间长， 一般需要 ９ — ０ ｉ，而且纤维素酶和 ０１ ｍ ｎ ２
２１ ０ ２年第 ３期 （ 总第 ７ ） ７期
漳州师范学院学报 （ 自然科学版） Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ Ｎ ｒ ｌ ｖ ｒｉ ｏＺ Ｕｎ ｙ（ ｔＳ ｉ ）
Ｎ ． ． ０ ２年 ｏ３２１
Ｇｅ ｅ ａ ｎ ｒ ｌＮｏ ７ ．７
ａ ｄ ｏ ｎ ｌ ｗ ｐ ｒ ａ ｉ ｔ ｔｍｅ ｎ ｔ ｅｒ ｏ －ｉ ｃ ｒ ｍｏ ｏ ｐ ｃ ｍｅ ｓ ｐ ｅ ａ ａ ｉ ｎ ｉ ｉ ｅ ｅＮａ ｓｓ ｕ ｗｅ ｅ ｍｅ ｂ ｌ ｙ ｉ ｏ ｈ ｏ ｔｔ ｉ ｐ ｈｏ ｓ ｍｅｓ ｅ ｉ ｎ ｒ ｐ ｒ ｔｏ ｎ Ｃｈ ｎ ｓ ｒ ｉｓ ｓ ｅ ｒ
果胶酶的价格较高，且易失活，制片条件不好掌握，所以开发实验费用低、观察效果好 、 学生易掌握的水
文章编号 ：０８７ ２ （０２０ —０ ５０ １０ ・８ ６２ １ ）３０ ８ －５
去壁低渗制备水仙花根尖染色体标本实验条件 的优化
曹 芳 ，王 伟
（ 漳州师范学院 生物科学与技术系，福建 漳州 ３３０ ） ６００ 摘 要： 用去壁低渗法制备水仙花根尖染色体标本， 采用 ２ ４型析因实验设计， ｘ 探讨酸解时闻和后低渗时间 对水仙花根尖染 色体标本制备 的影响． 结果表 明酸解时间为 １ｍ ｎ ４ ｉ、后低渗时 间为 ８ ｉ ｍ ｎ时，中期分裂指数最 高
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去壁低渗法制备植物染色体标本实验
方法步骤：
1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温
箱发芽培养
2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和
0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，
在25℃条件下处理30分钟。
以下可分两种方法进行处理
4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。
（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。
（3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟
（4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。
5、悬液法：
（1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液
（2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。
（3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。
（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本
(5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片
上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹
气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。
（6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥
6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。