去壁低渗法制备植物染色体标本实验

去壁低渗法制备植物染色体标本实验

方法步骤：

1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温

箱发芽培养

2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和

0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，

在25℃条件下处理30分钟。以下可分两种方法进行处理

4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。

（3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟

（4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。

5、悬液法：

（1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液

（2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。

（3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本

(5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片

上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹

气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。

（6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥

6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。