Excell软件绘制ELISA标准曲线

怎么用Excell软件绘制ELISA标准曲线

许多试剂检测都涉及到标准曲线的问题,究竟如何绘制或制作标准曲线呢?

用Excell和SPSS的软件能做出来吗?,怎么操作?能一起求出计算公式吗?

有没有专门的软件来处理呢?介绍几种?

希望有这方面经验的介绍自己的经历,与大家分享,“与众同乐才是真的快了”

的确,标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果,甚至是关系到实验的成败。

首先,做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意:

1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。

2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段,即曲线几乎成直线的范围内。

3、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。

4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。

5、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。

6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999.

怎样绘制标准曲线?

标准曲线浓度得到后,可通过计算器、Excell或SPSS统计软件进行绘制,并得到相关的回归方程(即计算公式和相关系数(回归系数,个人认为,Excell 软件比较好用一些;SPSS也行,不过是英文的,初学者不是很容易掌握;计算器嘛太麻烦了,所以现在一般不用。

双抗夹心法ELISA拟和曲线:

拟和曲线:

打开EXCEL软件;在工作表中

输入第一行:浓度值,如0 10 50 100 400

输入第二行:该浓度下的调整后的od值,如0 0.586 1.397 1.997 3.42

选择这些输入的数据,用插入里的图表按钮,进入图表向导,在“标准类型”中选择“xy散点图”;在“子图表类型”中选择“折线散点图”,按“下一步”;选择“系列产生在行”,按“下一步”;数据标志,可以填写:如数据y 轴,OD值;数据x轴,浓度;按下一步,点击完成。可得曲线图。

单击曲线,按右键,选择“添加趋势线”,在类型中,选择多项式;在选项中,选择显示公式,选择显示R平方值。得到公式和R平方值。

也可以用上面说的方法,在公司已经提供的图表上,双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和新的曲线。

计算浓度:

举例:第一次实验:

标准曲线为:

y = -4E-05x2 + 0.026x+0.1

R2 = 0.9745 为例,已知OD值,计算浓度。

由于y = -4E-05x2 + 0.026x+0.1,所以可以得到:

4E-05x2 -0.026x +(y-0.1=0

ax2 +bx +C=0

a=4E-05;b=-0.026; C= y-0.1

x=(-b-(b*b-4a(y-0.1(平方根 /(2*a

代入a,b,和y值,得

x=(0.026-(0.026*0.026-0.00016*(y-0.1(平方根/(2*0.00004在excel里可以用以下公式表示:

x=(0.026-EXP(LN(0.026*0.026-0.00016*(y-0.1/2/(2*0.00004

通用公式为: Y=ax2 +bx +C

x=(-b-EXP(LN(b*b-4a(y-c/2/(2*a

您可以应用excel的公式拷贝功能,计算所有浓度。

简化方法

如果有示例的excel表格,过程可参照附件的EXCEL表格,您的新数据可以这样拟和:双击图表,把它输入到图表的数据中,就可以拟和曲线。

根据曲线方程序,更改公式的参数,计算出浓度。

竞争法拟和曲线----Logit-log 直线回归

竞争法一般情况下用Logit-log 直线回归的方法可以拟和成近似一条直线; 令 p = OD/OD0, q = 1 - p,

y = ln (p / q, x = lg (浓度,

其中: OD 为反应值,

OD0 为浓度为 0 的反应值的均值,

则方程为:

y = a + b*x