实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二 槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识【实验目的】1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解.2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.【实验原理】采用碱溶酸沉法提取,其原理是芸香苷结构中含有酚羟基,具酸性,能溶于碱水,当加入酸溶液后,则芸香苷沉淀析出.芸香苷的精制是利用其可溶于热水,难溶于冷水的性质与杂质分离.【实验材料】设备:电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品:芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2%硫酸、95%乙醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁【实验步骤】1. 芸香苷的精制:称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70 ℃干燥，得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解:取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识：(1)Molish反应：取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2)酸性实验：取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1 mg，第二组每试管中加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5% 碳酸氢钠溶液、5% 碳酸钠溶液和1% 氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
3、盐酸 镁粉反应： 、盐酸-镁粉反应 镁粉反应： 取芸香苷1 取芸香苷 mg，加乙醇 ml，在水浴上加热 ，加乙醇2 ， 溶解，加镁粉约50 溶解，加镁粉约 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由 ，滴加数滴浓盐酸， 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。 黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物 。 以同法试 验槲皮素。 验槲皮素。 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（ 羟基与糖结 如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-羟基与糖结 合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类） 合成苷） 仍有作用 ，而槲皮素 （ 黄酮醇类） 不呈 还原显色反应。因此可区别两者。 还原显色反应。因此可区别两者。
思考
1、苷类水解有几种催化方法？ 、苷类水解有几种催化方法？ 2、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷 、黄酮类化合物还有哪些提取方法？ 的提取还可用什么方法？ 的提取还可用什么方法？ 3、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐 、酸水解常用什么酸？ 酸水解后处理更方便？ 酸水解后处理更方便？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
芸香苷的提取
方法Ⅰ 方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 槐花米粗粉20g 20 加10倍量沸水煮沸20min，反复2 10倍量沸水煮沸20min，反复2 倍量沸水煮沸20min 次，趁热脱脂棉滤过
药渣
滤液 静置过夜， 静置过夜，滤过
滤液
芸香苷粗品
粗提） 芸香苷的提取 （粗提）
方法Ⅱ 方法Ⅱ ：碱溶酸沉法
芸香苷、槲皮素及糖的检识 芸香苷、
4、三氯化铝反应： 、三氯化铝反应： 取样品1 溶于甲醇中， 取样品 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 溶于甲醇中 三氯化铝甲醇溶液 2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 滴 黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应： 、 柠檬酸反应 柠檬酸反应： 取样品1 取样品 mg，加甲醇 ml，在水浴上加热溶解， ，加甲醇2 ，在水浴上加热溶解， 再加2%二氯氧锆甲醇溶液 二氯氧锆甲醇溶液3~4滴 ， 凡有 羟基或 再加 二氯氧锆甲醇溶液 滴 凡有3-羟基或 5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加 羟基的黄酮即呈鲜黄色。 羟基的黄酮即呈鲜黄色 然后加2%柠檬酸甲醇 柠檬酸甲醇 溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香 羟基的黄酮黄色不褪。 溶液 滴 羟基的黄酮黄色不褪 苷和槲皮素的不同。 苷和槲皮素的不同。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
实验三中药化学成分提取槐米
实验三槐米中芸香苷的提取、精制和检识
一、目的要求
掌握芸香苷的主要性质及提取、分离精制和检识方法。
二、实验原理
根据芸香苷可溶于碱水，在酸性条件下又可沉淀析出，采用碱溶酸沉法提取。
根据芸香苷在冷水和热水中溶解度相差较大，以水为溶剂,采用结晶法进行精制。
三、实验方法
（一）芸香苷的提取
1.不锈钢锅中加500毫升水，加热至沸后加入槐米50克，
用石灰乳调pH值8-9，继续加热20分钟，随时补充损失的水分，趁热用纱布过滤，药渣再提取一次，两次滤液合并。
2.用浓盐酸调提取液使pH值2-3，放置过夜。
3.抽滤，将沉淀抽干，置于室温中自然干燥，得芸香苷粗品。
（二）芸香苷的精制
1.取芸香苷粗品2克置800毫升的烧杯中，加水约400毫升，
加热至沸，使芸香苷完全溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶。
2.抽滤，自然干燥，得芸香苷精制品。
（三）芸香苷的检识(要求写出反应现象)
1.氢氧化钠实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml蒸馏水，振摇。
滴加2-3滴氢氧化钠溶液，芸香苷溶解，呈黄色澄明溶液。
再滴加盐酸溶液2-3滴，观察是否有沉淀生成。
2.α-萘酚—浓硫酸实验（Molish反应）
取芸香苷少许置干燥试管中，加2ml无水乙醇，振摇。
再滴加2-3滴α-萘酚溶液，振摇。
将试管倾斜，沿管壁滴加1ml 浓硫酸，观察两液面交界处颜色变化。
3.盐酸-镁粉实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml 50%的乙醇，水浴加热溶解。
加入少许镁粉，再加入盐酸数滴，观察颜色变化。
芸香苷的提取、分离和鉴定
2.色谱鉴定 a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 层析材料：定性滤纸。 点 液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：预饱和后，上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯、 （365nm）下检视色斑的变化。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 b. 芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱 层析材料：聚酰胺薄膜。 样：提取的槲皮素承芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶
四、鉴定 1.呈色反应 取芸香苷及槲皮素精品约10 mg，各用5 ml乙醇溶解，制成样品溶液， 按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 a. Molish反应 取样品溶液l ml，加10％α-萘酚溶液0.5 ml，振摇后斜置 试管，沿管壁滴加0.5 ml硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。 b. 盐酸－镁粉反应 芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属 镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。 c. 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇 溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记 录现象。 d. 三氯化铝纸片反应 在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液 后，各加1%三氯化铝乙醇溶液两滴，观察颜色变化，记录现象。 e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液2 ml，加入2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4 摘，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变 化。
3.芸香苷的水解 芸香苷的水解 取精制芸香苷1g，研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2% 硫酸100ml，加热回流30min，瓶中混浊液逐渐变为澄清的棕 黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤 液（应为澄清无色液体），用做糖的检查，沉淀物为芸香苷 苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称 重。粗制槲皮素再用50%乙醇重结晶得精制的含2分子结晶水 的槲皮素。 取芸香苷水解后的滤液10 ml，加饱和氢氧化钡溶液（或 碳酸钙粉末）中和至中性，滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液水 浴60℃浓缩至2～3 ml，加2～3 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
槐米中芸香苷提讲义取分离及检识-课件PPT(精)
槐米中芸香苷提取分离及检识
与在含水溶剂中，化合物分子结构对氢键缔合的影响有关， 大致如下：
化合物分子中能形成氢键的基团数目越多，被聚酰胺吸 附越强。 形成氢键的基团所处位置不同，被吸附的强度也不同。 分子中芳香核、共轭双键越多，被吸附强度越大。 化合物若能形成分子内氢键，则被吸附强度减小。
槲皮素
OH
鼠李糖
1.盐酸-镁粉反应：黄酮 2.三氯化铝反应 ：黄酮
3.三氯化铁反应：酚羟基
4. Molisch反应：糖、苷类
HO O
OH OH
OH OH O
芸香苷和槲皮素的色谱检识
样品： 自制1%芸香苷乙醇溶液
自制1%槲皮素乙醇溶液
对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液 1%槲皮素对照品乙醇溶液现方式做保护处理对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑并不能对任何下载内容负责
槐米中芸香苷提取分离及检识
OH HO O OH H 2C OH O O O OH OH 槲皮素 OH 葡萄糖 芸香糖 芸香苷 鼠李糖 O OH O OH CH 3
实验原理： 1.芸香苷分子中含具有酚羟基，能与 碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又 可沉淀析出，可用碱溶酸沉法提取芸 香苷。
薄层色谱
play
OH
2.在热水中溶解度大, 冷水中溶解度
小，采用沸水提取法。芸香苷的精制
OH OH
可根据其在冷、热水（或冷、热乙醇）
中溶解度相差悬殊的性质进行。
3.芸香苷可被稀酸水解生成槲皮素及 葡萄糖、鼠李糖，并可通过色谱及化
HO
O OH OH O
实验四--槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。
)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。
临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质：1.芦丁(Rutin)淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。
溶解度：水：1:100(冷)，1:200(热)甲醇：1:100(冷)，1:9(热)乙醇：1:650(冷)，1:60(热)吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素(Quercetin)即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。
溶解度：乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热)可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。
易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。
(1) 白桦脂醇(Betulin)无色针晶，mp.251℃~252℃。
能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。
(2) 槐二醇(Sophoradiol)无色针晶，mp.219℃~220℃或224℃。
能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
芸香苷的提取分离和鉴定
四、基本原理
HO O
OH
OH
OR OH O
芦丁
R=-Glu-Rha
冷水：1： 8000 热水：1：200
槲皮素 R=H
五、提取、分离流程
槐米(压碎) 20 g
沸水300 ml, 加热30 min,棉花过滤 两次滤液合并
室温放置，析晶
抽滤
粗制芦丁
取 2 g，加水400 ml，煮沸 趁热抽滤 冷却后，析晶，抽滤
精制芦丁
六、芦丁的水解
精制芦丁1 g 置于250 ml 圆底烧瓶， 加入2%H2SO4100ml， 加热回流30min
生成黄色沉淀（注意观察现象） 放冷，析晶，抽滤
滤液 沉淀（槲皮素） 取10ml,加饱和Ba(OH)2中和， 至中性，过滤 滤液 水浴60℃，浓缩至2~3ml，乙醇溶解
（糖的供试液）
紫外光谱：加入诊断试剂，分析光谱 数据，解析结构 参数：200～600 nm
核磁共振谱： 归属芦丁和槲皮素的氢谱和碳谱信号
七、化合物的检识
呈色反应
色谱分析
呈色反应
Molish 反应
盐酸-镁粉 反应 ຫໍສະໝຸດ 三氯化铝 反应色谱分析 聚酰胺色谱：检测芦丁，槲皮素
展开剂： 甲醇－水（8：2）
显色剂：三氯化铝试剂
纸色谱：检测糖 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸
波谱鉴定
芦丁的提取、精制和鉴定
中药化学实验室
一、实验目的
1、熟悉苷类化合物的提取、精制及鉴定方法。 2、掌握黄酮苷水解制苷元的方法。
3、掌握紫外光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
二、实验内容
• • • • 芦丁的提取和精制 芦丁水解制取苷元槲皮素 化合物的检识 波谱鉴定
芸香苷实验报告
一、实验目的1. 掌握芸香苷的提取方法。
2. 学习黄酮类化合物的分离纯化技术。
3. 了解芸香苷的鉴定方法。
4. 培养实验操作技能和科学思维。
二、实验原理芸香苷（Rutin）是一种天然黄酮类化合物，广泛存在于槐米、山楂、茶叶等植物中。
本实验采用醇提法提取芸香苷，通过分离纯化得到较高纯度的芸香苷，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 槐米- 甲醇- 氢氧化钠- 碳酸钠- 盐酸- 硝酸- 氢氧化钠溶液- 醋酸铅溶液- 醋酸镁溶液- 香草醛溶液- 水合氯醛溶液- 蒸馏水- 硅胶2. 实验仪器：- 电子天平- 热水浴锅- 超声波清洗器- 烘箱- 分液漏斗- 抽滤装置- 显微镜- 紫外可见分光光度计四、实验步骤1. 芸香苷的提取：（1）称取干燥的槐米粉末10g，置于100mL三角瓶中。
（2）加入50mL甲醇，超声提取30分钟。
（3）过滤，收集滤液。
（4）将滤液浓缩至约5mL，加入适量的氢氧化钠溶液，调节pH值为8.5。
（5）静置过夜，使芸香苷沉淀。
（6）抽滤，收集沉淀。
2. 芸香苷的分离纯化：（1）将沉淀用适量甲醇溶解，加入适量的硅胶，搅拌均匀。
（2）将混合物倒入色谱柱中，采用柱层析法进行分离纯化。
（3）依次用不同极性的溶剂进行梯度洗脱，收集目标峰。
（4）将收集到的目标峰浓缩，得到纯化的芸香苷。
3. 芸香苷的鉴定：（1）紫外-可见光谱法：取适量纯化后的芸香苷，用甲醇溶解，测定其在254nm和364nm处的吸光度值。
（2）薄层色谱法：将纯化后的芸香苷点于薄层板上，用适宜的溶剂进行展开，与对照品进行对比，观察其斑点位置。
（3）红外光谱法：对纯化后的芸香苷进行红外光谱分析，与标准图谱进行对比，确定其结构。
五、实验结果与分析1. 芸香苷的提取：通过醇提法，从槐米中成功提取了芸香苷。
2. 芸香苷的分离纯化：采用柱层析法，从提取液中分离纯化了芸香苷。
3. 芸香苷的鉴定：通过紫外-可见光谱法、薄层色谱法和红外光谱法，对纯化后的芸香苷进行了鉴定，确认其为芸香苷。
槐米中芸香苷的提取分离及鉴定
盐酸－镁粉反应
溶液置于试管 中1-2ml，加入 金属镁粉少许 ，浓盐酸2-3滴 ，观察并记录 颜色变化。
三氯化铝反应
取一张滤纸片， 分别滴两滴芸 香苷的乙醇溶 液，然后各加 1%三氯化铝醇 溶液两滴，于 紫外光灯下观 察荧光变化
氨熏试验
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
取一张滤纸片， 分别滴两滴芸 香苷的乙醇溶 液，然后将滴 有供试液的部 位分别倒扣在 盛有氨水的瓶 口，观察颜色 变化
槐米中芸香苷的提取分离及鉴定
天然药物教研室：朱仝飞
Contents
1 2 3 4
槐米中芸香苷的理化性质 槐米中芸香苷的提取分离 芸香苷的化学鉴定 重难点小结
Hot Tip 日常生活中的提取分离?
Hot Tip
槐米
槐花
一、槐米中芸香苷的理化性质
槐米的相关知识
(1)豆科植物槐的干燥花蕾 ★芸香苷的结构特点★
一、槐米中芸香苷的理化性质
性状
溶解性
酸碱性
溶解性及酸碱性为选择提取 分离方法的关键因素
二、槐米中芸香苷的提取分离
以下三种提取方法的名称是什么？
渗漉法
煎煮法
回流提 取法
二、槐米中芸香苷的提取分离
以下哪一种提取方法最适宜提取槐米中的芸香苷？
渗漉法
提取范围：遇 热易分解成分 优点：保持良 好的浓度差 缺点：溶剂消 耗多，时间长
沉淀热水或乙醇重结晶芸香苷结晶滤液为何加入石为何ph不能小于2为何使用硼砂水液碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图重结晶分离三芸香苷的化学鉴定三芸香苷的化学鉴定取一张滤纸片分别滴两滴芸香苷的乙醇溶液然后将滴有供试液的部位分别倒扣在盛有氨水的瓶口观察颜色变化取一张滤纸片分别滴两滴芸香苷的乙醇溶液然后各加1三氯化铝醇溶液两滴于紫外光灯下观察荧光变化溶液置于试管中12ml加入金属镁粉少许浓盐酸23滴观察并记录颜色变化
实验芸香苷的提起
【实验材料】槐花米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、乙醇、70%乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%三氯化铝乙醇溶液、2%氯氧化锆甲醇溶液、2%枸椽酸甲醇溶液、10% α-萘酚乙醇溶液、浓硫酸、2%硫酸溶液、葡萄糖标准品、鼠李糖标准品、芸香苷标准品、槲皮素标准品、碳酸钡、氨制硝酸银试液、广泛pH试纸、中速层析滤纸（4cm×15cm）。
【实验原理】（一）芸香苷又名芦丁（Rutin），维生素P，紫槲皮苷。
分子式C27H30O16，分子量610.51。
浅黄色针晶（水），mp.176℃～178℃，[]23Dα+13.82°(乙醇)，[]23Dα-39.43°（吡啶）。
在各种溶剂中的溶解度为：难溶于冷水（1∶8000～10000）、可溶于热水（1∶200）、热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶60）、冷乙醇（1∶650）、可溶于吡啶及碱性溶剂，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。
由于分子中含有多个酚羟基，易被氧化，在空气中久置会使芸香苷颜色加深，尤其在碱性溶液中更易氧化。
OHOO glu OHOHO rha芦丁（二）槲皮素（Quercetin）又名栎精，槲皮黄素。
分子式C15H10O2，分子量 302.23。
为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水，在95℃～97℃成为无水物。
mp.314℃（分解）。
能溶于冷乙醇（1∶290），易溶于沸乙醇（1∶23），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸及吡啶等溶剂，不溶于水、苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。
（三）其他成分槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）、白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、单宁等。
本实验利用芸香苷分子结构中含有多个酚羟基，显弱酸性，能与碱作用生成盐而溶于碱水，加酸酸化后又能沉淀析出的性质，采用碱溶酸沉淀法进行提取。
利用芸香苷在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质，用水作溶剂进行重结晶精制。
实验一槐花米中芸香甙的提取
实验一槐花米中芸香甙的提取、精制和检识芸香甙亦称芦丁（Rutin），广泛存在于植物界，已发现的芦丁植物至少在70种以上，以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，本实验以槐花米作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora joponia L的未开放花蕾，其中芦丁含量高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
芦丁除用作治疗毛细管脆弱引起的出血症和高血病的辅助治疗剂外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Ruercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啉芦丁、6-二乙胺基芦丁等。
槐花米中除含有芦丁外，还含有白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）和多糖粘液质等。
芸香甙的结构一、槐花米主要成份的理化性质1. 芦丁：是槲皮素3位羧基与芸香糖（Rutinose）脱水缩合成的甙。
浅黄色粉末或极细的针状结晶，含3分子结晶水（C27H36O16·3H2O），mp ll7~178℃。
在110℃ 10mmHg下真空干燥12小时变成无水物，无水物易吸湿，可从大气中吸收约2.5分子水份。
无水芦丁在125℃变褐，在190~192℃变成胶状，当温度升至214~215℃发泡分解。
芦丁溶解度在冷水中1∶10000，热水中1∶200，冷乙醇中1∶300，热乙醇中1∶30，沸甲醇中1∶7，冷吡啶中1∶12，微溶于丙酮、乙醇乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
UV λmax nm：259，266（sh），299（sh）。
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又析出，因此可以用碱溶液沉的方法提取芦丁。
芦丁分子因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中，在光的作用下，能缓缓分解，变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解，硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性条件溶液中加热提取芦丁时，往往在加入少量硼砂，就是保护芦丁减少氧化分解。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识
2、Molish反应：
取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加α萘酚试剂1~2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注 入浓硫酸约0.5 ml静置。观察两层溶液的界面变化， 出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的 结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和 槲皮素的不同。
注意事项
1 ．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷 易于被热水溶出。 2 ．在提取过程中，加入硼砂的目的是使其 与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既保 护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻二 酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不溶 于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。
实验结果
1、计算芦丁的得率
目的要求
学习和掌握芸香苷的提取及检测
技术
学会利用芸香苷的水解作用制备
糖类及苷元
实验原理
芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现 已发现含芦丁的植物至少在 70 种以上，如烟叶、 槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为 植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高， 可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素（ Quercetin ） 3 位上的羟基 与芸香糖脱水缩合形成的苷。[芸香糖（Rutinose） 为葡萄糖（ Glucose ）与鼠李糖（ Rhamnose ）组 成的双糖。
芸香苷的提取
方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 加10倍量沸水煮沸20min，反 复2次，趁热脱脂棉滤过 药渣 滤液 静置过夜，滤过 滤液 芸香苷粗品
芸香苷的提取 （粗提）
方法Ⅱ ：碱溶酸沉法
槐花米粗粉20g 加0.4％硼砂水200ml，石灰乳调 pH8～9 煮沸30min，趁热抽滤或4层纱布过滤
实验原理
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
学习和掌握芸香苷的提取及检测
技术
学会利用芸香苷的水解作用制备
糖类及苷元
实验原理
芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现 已发现含芦丁的植物至少在 70 种以上，如烟叶、 槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为 植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高， 可作为大量提取芦丁的原料。
芦丁是由槲皮素（ Quercetin ） 3 位上的羟基 与芸香糖脱水缩合形成的苷。[芸香糖（Rutinose） 为葡萄糖（ Glucose ）与鼠李糖（ Rhamnose ）组 成的双糖。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
4、三氯化铝反应：
取样品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 2~3滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。 5、锆-柠檬酸反应：
取样品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加热溶解， 再加 2% 二氯氧锆甲醇溶液 3~4 滴，凡有 3- 羟基或 5-羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲醇 溶液3~4滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香 苷和槲皮素的不同。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
1、酸性试验：
取小试管 8 支，每 4 支一组，第一组每管中加 入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每 组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、 5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各 2 ml， 振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。 再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉 淀析出或产生混浊。
芸香苷、槲皮素及糖的检识
2、Molish反应：
取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加α萘酚试剂1~2滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注 入浓硫酸约0.5 ml静置。观察两层溶液的界面变化， 出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖的 结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷和 槲皮素的不同。
槐花米中芸香的提取及槲皮素的制备与检识
芸香苷、槲皮素及糖的检识
6、Fehling试验：
取试样数 mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂 甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生 氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其 它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液 滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳 性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和 槲皮素的不同。
思考
1、苷类水解有几种催化方法？ 2 、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷 的提取还可用什么方法？ 3 、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐
酸水解后处理更方便？
芸香苷、槲皮素及糖的检识
1、酸性试验：
取小试管 8 支，每 4 支一组，第一组每管中加 入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每 组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、 5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各 2 ml， 振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色。 再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有沉 淀析出或产生混浊。
滤液 药渣 放冷至60～70℃，浓盐酸调 pH2～3，冰箱中析晶，抽滤 滤液 沉淀 室温下晾干
芸香苷粗品
芸香苷的提取（精制）
芸香苷粗品2g 加蒸馏水400ml，煮沸 溶解15min趁热抽滤 滤液 静置析晶，抽滤 滤液 药渣
结晶 室温下晾干 精制芸香苷
芸香苷的水解
精制芸香苷 加2％硫酸50ml，加热回流40min，至 沉淀不再增加为止，放冷抽滤 沉淀
实验原理
芦丁具有维生素P样作用。有助于保持 及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防 治高血压病的辅助治疗（但不能降压）剂， 亦可防治因缺芦丁所致的其它出血症。多 作口服，也可作注射用。
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实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识
【实验目的】
1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解•
2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.
【实验原理】
采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性,能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出•芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离•【实验材料】
设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品：芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2僦酸、95聽醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、a -萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁
【实验步骤】
1. 芸香苷的精制：
称一定重量的粗品，按约1 : 200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60T〜70 C干燥，
得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解：
取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2僦酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识:
(1) Molish 反应：
取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%a -萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2) 酸性实验：
取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷 1 mg，第二组每试管中
加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液和1%氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
(3) 镁粉-盐酸反应：
取芸香苷1 mg,加乙醇1〜2 ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg滴加几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。
以同法试验槲皮素。
(4) 三氯化铝反应：
取芸香苷1 mg,加甲醇1〜2 ml在水浴上加热溶解，加入1%三氯化铝甲醇溶液2〜3滴，呈鲜黄色，以同法试验槲皮素。
(5) 醋酸镁反应：
取芸香苷1 mg,加甲醇1〜2 ml水浴中加热溶解，加1%醋酸镁甲醇溶液2〜3
滴，呈黄色荧光反应。
以同法试验槲皮素
实验报告
时间___________________________ 班级 ___________________________________ 姓名学号
【实验目的】
【实验原理】
【实验流程】
【实验装置图】
【实验结论】
【实验注意】。