发色底物测定大曲中的-葡萄糖苷酶活力
柠檬酸发酵过程中黑曲霉α-葡萄糖苷酶和糖化酶变化的研究
柠檬酸发酵过程中黑曲霉α-葡萄糖苷酶和糖化酶变化的研究杨赢;王德培;高年发【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2013(032)001【摘要】以目前柠檬酸生产菌为出发菌株,进行N+入诱变得到一株柠檬酸高产菌株黑曲霉LD20,将其在500m3发酵罐上进行发酵,分别对发酵过程中α-葡萄糖苷酶、糖化酶、总糖、总酸、还原糖、葡萄糖和pH进行了跟踪测定,结果表明糖化酶GA在20h达到最高酶活895.16U/mL,α-葡萄糖苷酶TGA在24h达到最高酶活322.52U/mL,在整个发酵过程中GA的平均酶活力是TGA的2.9倍,说明在柠檬酸发酵过程中,发酵液的糖化作用主要依赖于GA;在柠檬酸发酵后期TGA比GA对酸有更强的耐受性,主要起到转苷作用,将发酵液中的还原糖转化为非发酵性的糖类,从而生成不能被黑曲霉所利用的残糖.【总页数】3页(P22-24)【作者】杨赢;王德培;高年发【作者单位】天津科技大学生物工程学院,天津300457;天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业微生物教育部重点实验室,天津300457;天津科技大学生物工程学院,天津300457;工业微生物教育部重点实验室,天津300457【正文语种】中文【中图分类】TQ921【相关文献】1.航天诱变黑曲霉ZM-8菌株固态发酵产β-葡萄糖苷酶的研究 [J], 刘星斌;张宗舟;蔺海明;马旭光2.柠檬酸高浓度发酵过程中糖化酶活性对柠檬酸发酵的影响 [J], 赵祥颖;乔君;马钦元;刘建军;田延军;范宜晓;赵晨3.低能N+注入选育黑曲霉β-葡萄糖苷酶高产菌株及其发酵优化研究 [J], 刁金山;王丽;陈振;刘会;聂光军;郑之明4.黑曲霉产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究 [J], 赵子高;吕世峰;杨付伟;闫振丽;王林凤5.黑曲霉液体发酵制备β-葡萄糖苷酶的研究 [J], 刘敏;欧阳嘉;勇强;余世袁因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
β-葡聚糖酶活力测定
β-葡聚糖酶活力测定方法• 1 原理•β-葡聚糖酶(EC.3.2.1.6)水解1，3（4）-β-D-葡聚糖苷键，放出还原糖基团与3，5-二硝基水杨酸(DNS试剂)发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖的含量成正比关系，在540nm测其光的吸收值，查标准曲线（以葡萄糖计），可得到还原糖的量，据此计算β-葡聚糖酶的活力。
• 2 仪器和设备• 2.1 分析天平：精度0.0001g• 2.2 恒温水浴：精度±0.2℃• 2.3 计时表• 2.4 分光光度计• 2.5 沸水浴器• 2.6 振荡混合器• 2.7 pH计: 精度0.01pH单位• 3 试剂和溶液• 3.1 0.1M乙酸－乙酸钠缓冲溶液（pH5.0）•溶液A:量取冰醋酸6ml，定容至1000ml，制成0.1M醋酸溶液。
•溶液B:称取8.2g醋酸钠，溶解定容至1000ml，制成0.1M醋酸钠溶液。
•使用时以A:B =3:7的比例混合，低温冷藏备用。
• 3.2 1%的β—葡聚糖溶液的配制•准确称取0.25gβ—葡聚糖放入100ml锥形瓶中，加2ml无水乙醇摇匀到无可见颗粒。
加20ml无离子水混合15分钟，盖紧塞子在沸水中煮5分钟，放置室温自然冷却，或用自来水流水降温。
将已冷却到室温的底物溶液倾入一只25ml容量瓶中，加入2.5ml1M醋酸缓冲液（pH5.0），并用无离子水定容到25ml。
• 3.3 3,5—二硝基水杨酸（DNS）溶液•溶液A:称分析纯的NaOH 104g溶于1300ml水中,加入30g分析纯3,5－二硝基水杨酸。
•溶液B:称分析纯酒石酸钾钠910g，溶于2500ml水中，再称取25g重蒸苯酚和25g无水亚硫酸钠加入酒石酸钾钠溶液。
•将A、B溶液混合，加入1200ml水，定容5000ml，贮存于棕色瓶中，暗处放置一星期后过滤使用。
• 3.4 0.1%苯甲酸• 0.1g苯甲酸加入大约80ml无离子水中溶解，用无离子水定容至100ml。
pNPG法测定纤维素酶系中β—葡萄糖苷酶
pNPG法测定纤维素酶系中β—葡萄糖苷酶
姚卫蓉;丁霄霖
【期刊名称】《微生物学通报》
【年(卷),期】1998(025)003
【摘要】本文报道快速测定β－葡萄糖苷酶活力的方法，此法对ｐＮＰＧ为底物，利用β－葡萄糖苷酶将其分解成ｐＮＰ及葡萄糖，而ｐＮＰ在碱性条件下显色的原理定酶活，通过对各测定条件的研究，确定了测定方法。
【总页数】2页(P982-983)
【作者】姚卫蓉;丁霄霖
【作者单位】无锡轻工大学食品学院60#;无锡轻工大学食品学院60#
【正文语种】中文
【中图分类】Q55
【相关文献】
1.pNPG法测定纤维素酶系中β-葡萄糖苷酶 [J], 李春江;邢淑梅;孙蕾
2.β-葡萄糖苷酶产生菌的筛选及其所产纤维素酶酶系组成分析 [J], 赵林果;周潭澈;孟鹏
3.超声辅助纤维素酶解提取大叶驼蹄瓣总黄酮工艺优化及其抑制α-葡萄糖苷酶活
性研究 [J], 杨晓绒; 张相锋; 焦子伟
4.一种测定粗纤维素酶中β-葡萄糖苷酶酶活方法的建立 [J], 李旭晖;朱明军;郭启
军
5.纤维素酶液中β-葡萄糖苷酶的分离纯化 [J], 宋娜娜;宋向阳;连之娜;勇强;余世袁
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黑曲霉_葡萄糖苷酶的活力测定和酶学性质(1)
安徽农业大学学报,1998,25(3):304-309Journal of A nhui A gricultural U niversity黑曲霉Β-葡萄糖苷酶的活力测定和酶学性质Ξ李 平 宛晓春丁霄霖 陶文沂(安徽农业大学轻工学院,合肥230036)(无锡轻工大学)摘 要 以P-N PG为底物,通过底物浓度、反应温度、反应时间、反应pH的考察,确定了黑曲霉Β-葡萄糖苷酶酶活的最佳测定条件;并对该酶的pH稳定性、热稳定性、米氏常数等进行了研究。
关键词 黑曲霉 Β-葡萄糖苷酶 测定条件 性质分类号 T S20113Β-葡萄糖苷酶能将水果、蔬菜、茶叶等中的风味前体物质Β-糖苷[1]水解为具有浓郁天然风味的香气物质,以改良因加工、贮藏等因素造成对食品感官性状——风味的影响;同时还能协助纤维素酶将纤维素水解为葡萄糖[2],具有重要的理论和实用价值。
Β-葡萄糖苷酶的测定方法很多,概括起来主要有电化法、荧光法、分光光度法等。
电化法由Gu ilbau lt和K ram er[3]设计,以扁桃苷为底物,根据所产生的氢化物,用与自发(内)电解池相联结的一对银—铂电极来测定其葡萄糖苷酶活性;Rob in son[4]使用4-甲基伞形酮的Β-D葡萄糖苷作为底物,经Β-葡萄糖苷酶作用,专一地分解为具有强烈荧光的4-甲基伞形酮,此荧光法灵敏度高且快速;分光光度法[5]可用水杨苷为底物,将水杨苷裂解为水杨醇和Β-D葡萄糖,然后对所产生的葡萄糖进行比色测定;也可用熊果苷(Β-D-葡萄苷-对苯二酚)作为底物,对产生的葡萄糖可用碘量法加以测定;另外还可用对-硝基苯基-Β-D-葡糖苷(P-N PG)为底物,对产生的对—硝基苯进行比色测定。
本试验采用P-N PG为底物的比色测定法,该法简单、快速、灵敏度高[6],且所需仪器常见。
1 材料与方法111 材料菌种:黑曲霉,来源于无锡轻工大学。
培养基:斜面保藏培养基,PDA;发酵培养基,麸皮3%,(N H4)2SO4012%,另加适量无机盐溶液。
_葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展
第26卷第2期2007年3月 食品与生物技术学报Journal of Food Science and Biotechnology V o l.26 N o.2M ar. 2007 文章编号:1673-1689(2007)02-0107-08 收稿日期:2006-12-29.作者简介:李华(1959-),男,重庆梁平人,教授,博导,主要从事分子生物学及葡萄与葡萄酒方面研究.Email :putj@β-葡萄糖苷酶活性测定方法的研究进展李华, 高丽(西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西杨凌712100)摘 要:介绍了葡萄和葡萄酒中β-葡萄糖苷酶的研究概况,理化性质、酶活测定方法,以及不同来源的酶活检测的研究概况,并且经过分析提出以对硝基苯基β-D -葡萄糖苷(pN PG )为底物检测葡萄浆果中的β-葡萄糖苷酶酶活的关键影响因素:粗酶液的制备、酶最适反应温度、最佳反应时间、缓冲液类型和pH 及最佳吸收波长。
关键词:葡萄;β-葡萄糖苷酶;活性中图分类号:Q 55文献标识码:AResearch Advance on Methods of determining β-Glucosidase ActivityLi Hua , GAO Li(Colleg e of Enolo gy ,N o rthwest Univ ersity of A g riculture &Fo restry ,Yangling 712100,China )Abstract :Aro ma is one o f the impor tant factors that determining the character and quality o f w ine.β-g lucosidase is a kind of key enzy me w hich releasing aroma precurso rs.In this manuscript ,the prog re sses of the chemical pro perties ,determination methods ,and the source o f β-g lucosidase w ere review ed.On the o ther hand ,the key facto rs that involv e in the β-gluco sidasedetermination method w ith p -Nitrophenyl -β-D -gluco py ranoside as substrate as follow :tem perature ,reactio n tim e ,buffe r type ,pH and abso rb w avelength.Key words :g rape ;β-glucosidase ;activities 典型的葡萄酒风味主要源于葡萄中的挥发性化合物,然而葡萄浆果中存在着游离态和结合态两大类呈香物质。
大曲液化酶活力测定方法的对比研究
酿酒科技 2019 年第 10 期（总第 304 期）·LIQUOR-MAKING SCIENCE & TECHNOLOGY 2019 No.10(Tol.304)
DOI：10.13746/j.njkj.2019121
大曲液化酶活力测定方法的对比研究
马 群，张梦阳，李宜波，刘忠杰，向 征
（湖北白云边酒业股份有限公司，湖北 松滋 434200）
马 群，张梦阳，李宜波，刘忠杰，向 征·大曲液化酶活力测定方法动移液器、25 mL 试 管 、250 mL 烧 杯 、100 mL 容 量 瓶 、150 mL 三 角瓶。
仪器：分光光度计。 淀粉溶液（20 g/L）：称取 10.00 g 预先于 100～ 105 ℃烘干 2 h 的可溶性淀粉，用水调成糊状，不断 搅拌下注入 400 mL 沸水，继续煮沸至透明。冷却 后，在 500 mL 容量瓶中定容至刻度，摇匀。此溶液 必须现配现用，若用量较少，可按比例适当减少配 制量。 原碘液：称取 11 g 碘，22 g 碘化钾，置于研钵 中 ，加 入 少 量 水 ，研 磨 至 碘 完 全 溶 解 ，用 水 稀 释 至 500 mL，摇匀。贮存于棕色瓶中静置过夜。 稀碘液：量取 2 mL 原碘液，加入 20 g 碘化钾， 用水稀释至 500 mL，摇匀。贮存于棕色瓶中静置 过夜。 糊精溶液：称取 0.3 g 糊精溶于 50 mL 水中,加 热溶解。 磷酸缓冲溶液（pH6.0）：称取 45.23 g 磷酸氢二 钠(Na2HPO4·12H2O)和 8.07 g 柠檬酸(C6H8O7·H2O)， 用 水 溶 解 并 定 容 至 100 mL，再 用 pH 计 校 正 后 使用。 盐 酸 溶 液 [c(HCl) =0.1 mol/L]：按 GB/T 601 配制。 可溶性淀粉溶液(4 g/L)：称取 1.000 g(精确至 0.001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中,用少量水 调成浆状物，边搅拌边缓缓加入 70 mL 沸水中，然 后用水多次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒入其中，搅 拌加热至完全透明，冷却定容至 250 mL。溶液现 配 现 用 。 注 ：可 溶 性 淀 粉 采 用 酶 制 剂 专 用 可 溶 性 淀粉。 1.2 传统比色方法 1.2.1 标准颜色的配制 在 50 mL 试管中加入 5 mL 稀碘液，再滴入 1～ 2 滴糊精溶液，摇匀。 1.2.2 固体曲浸出液的制备 称取 5 g 大曲粉(精确至 0.0001 g)，用少量磷酸 缓冲液充分溶解，于 40 ℃水浴锅中浸取 2 h，每隔 15 min 搅拌 1 次（保证酶液完全浸取出来，并将大
大曲液化酶活力测定方法比较分析
序处理方法与比色法一致。
在此基础之上精密称取1.5g 剂量淀粉，在250.0ml 标准容积容量瓶中定容，制备浓度分别为0g/l 、 0.075g/l 、0.15g/l 、0.3g/l 、0.45g/l 、0.6g/l 、0.9g/l 标准溶液，吸取1.0ml 剂量淀粉溶液加入装有的5.0ml 剂量稀释碘液以及0.5ml 剂量盐酸溶液试管内，充分混合均匀，以稀释碘液以及盐酸溶液为空白对照，对吸光度进行测定，并形成标准曲线。
精密称取10.0ml 剂量可溶性淀粉溶液(溶液浓度为4.0g/l)、5.0ml 剂量磷酸缓冲溶液以及10.0ml 无菌水溶液，置入150.0ml 标准容积三角瓶内，充分混合均匀后在60.0℃水浴条件条件下维持8.0min 。
自加入1.0ml 剂量经稀释待测酶液开始计时，充分混合反应，维持10.0min 。
吸取1.0ml 剂量反应液加入含5.0ml 稀释碘液以及0.5ml 验算溶液试管内，充分混合均匀，在660.0nm 检测波长条件下对吸光度进行测定。
定义测定酶样浓度为c ，反应过程中加入待测定酶液量的为v ，反应时间为t ，则淀粉酶活力X 可以用如下式(2)所示方式进行计算：(2)2 结果与分析2.1 反应时间2.1.1 比色法除前期准备工作以外，固体曲浸出液制备耗时为120.0min ， 成品曲液化力会对液化时间产生直接影响。
以高温曲为例，按照式(1)计算所得液化力。
30g/g *hX t＝一般情况下，高温曲液化力检验合格标准在0.2g/g*h ～ 0.6g/g*h 范围内。
液化力位于底限的情况下，反应时间为150.0min ，液化力位于高限的情况下，反应时间为50.0min 。
假定前期准备阶段以及液化期间反应液制备耗时为30.0min ，则合格曲液化力检测时间在200.0～300.0min 范围内，导致部分液化力偏低不合格曲产生，造成检测耗时较长。
2.1.2 分光光度法除前期准备工作以外，大曲粉浸提前准备工作耗时为15.0min ，淀粉溶液配置等相关准备工作可以与酶液提取同期进行。
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
周建芹;陈韶华;王剑文
【期刊名称】《实验技术与管理》
【年(卷),期】2008(025)012
【摘要】利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产生
的过氧化氢浓度,经过标准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力.研究了缓冲液pH值、水浴温度、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化酶活力测定的影响.结果表明:利用靛蓝
胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时,缓冲液最佳pH值为4、最佳水浴温度为100℃、靛蓝胭脂红最佳用量为1.3 mL.此方法的重现性较好,反应系统较稳定.
【总页数】3页(P58-60)
【作者】周建芹;陈韶华;王剑文
【作者单位】苏州大学,医学部药学院,江苏,苏州,215123;苏州大学,医学部实验中心,江苏,苏州,215123;苏州大学,医学部药学院,江苏,苏州,215123
【正文语种】中文
【中图分类】R331
【相关文献】
1.一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法 [J], 任婷月;周万里;张利群;毕春元;李敬龙
2.黑曲霉ZM-8菌株菌丝体中葡萄糖氧化酶活力测定 [J], 马建忠;刘金鸽;王永刚;
火文
3.小檗碱和黄芩苷对葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量干扰作用研究 [J], 涂秀英;李瑛;魏学鑫;于梅;徐国良;章常华
4.葡萄糖氧化酶法用于测定糖尿病患者口服葡萄糖耐量试验的研究 [J], 左晓红;王文
5.一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法 [J], 惠瑶瑶; 郑斐; 王倩楠; 安贤惠
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kk京尼平苷为底物测定β-葡萄糖苷酶 活力的方法
为无荧光的底物，以此测定；三是以对—硝苯 -β- 葡萄 糖苷(pNPG)为底物进行酶解，底物水解后释放出来的配 基对—硝基苯酚可直接在 400～9420nm 之间测定。目前 国内外普遍使用的是 DN S 法和 pNP G 法，pNPG 法简单、 快速、灵敏度高，但该试剂主要依靠进口，价格昂贵， 因而限制了其使用，国内较常用的是 D N S 法，由于该 方法检测的是经β- 葡萄糖苷酶水解底物产生的极微量的 葡萄糖，反应易受干扰，且检测灵敏度不是很高。
β-glucosidase
可知，当京尼平苷浓度达到 0.625mmol/L 时，酶活达到 最大值，再增大浓度，酶活基本不变，这时酶反应与 底物浓度无关，故以下实验底物浓度取 0.625mmol/L。
2.2.2 p H 值对酶活的影响 酶活性受 pH 值的影响较大，本实验考察了β- 葡萄
糖苷酶在 pH 为 3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、 10.0、11.0 的缓冲溶液中酶的活性，结果见图 3，由图 3 可知，β- 葡萄糖苷酶作用最佳 p H 为 5 . 0 。
京尼平苷(geniposide)又称栀子苷，是从茜草科植 物栀子果实中提取得到的一种环烯醚萜葡萄糖苷，易溶 于水，在栀子中的含量为 5 % 左右。研究表明，京尼 平苷经β－葡萄糖苷酶水解后的产物京尼平能与氨基酸 反应生成稳定的蓝色[4]，Jee-eun Park 等还研究了该蓝色
收稿日期：2005-06-29 基金项目：江西省自然科学基金资助项目(0430003) 作者简介：梁华正( 1 9 6 6 - ) ，男，副教授，硕士，主要从事生物技术方面的研究。
1.2.6 回收率实验 精密量取β- 葡萄糖苷酶溶液 5 份各 1.0ml，精密加
入 0.5U/ml 的β- 葡萄糖苷酶溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、 1.0ml，然后按照 2.1 的方法，在最佳反应条件下水解， 显色，测 5 9 0 n m 处 O D 值，对照标准曲线计算回收率。
分光光度计测定大曲中糖化酶活性
由表 2可知，用分光光度法测定糖化酶酶活 加标回收 率为 95.0%-105%，相对标准偏 差1.045％，符合分析 方法中的规定。
表 2 糖化酶酶活力的回收率
对照实验
取 1g活力为 861.9U／g 的酶液，分别用分光 光度计法和碘量法测 定糖化酶活力，结果 见表 3。 由表3可知，分光度计法 与碘量法测定的精确 度基本相当。
结论
• 实验表明，糖化酶水解淀粉产生的葡萄糖与3， 5-二硝基水杨酸 (DNs)反应生成的棕红色 3-氨基 5-硝基水杨酸，在 520nm 波长处的光吸收强度 与糖化酶活力呈正比，可采用分光光度计法测量 大曲的糖化酶活力。 • 当吸光度值为 0．2～0．5时，实验误差<1％。 分光光度计法与碘量法测定大曲糖化酶活力的精 度基本相当，但分光光度计法比碘量法步骤少， 操作简单，可以实现快速测定。
分光光度法测定大曲糖化酶活力 探讨
丁海艳 阅
大曲中糖化酶
大曲中的微生物群比较复杂，主要有霉菌、酵母菌和细菌等，这些微生 物可以分泌很多胞外酶，真正起糖化作用的是葡萄糖淀粉酶 (Glucoamylase，EC3．2．1．3)简称糖化酶，是一种外切型糖苷 酶，它从淀粉的非还原性末端依次水解 α 一1，4糖苷键，切下一个个 葡萄糖单元，并像 β 一淀粉酶一样，使水解下来的葡萄糖发生构型变 化，形成 β 一D葡萄糖。当遇到支链淀粉的分支点时，它也可以水解 α 一1，6糖苷键，由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。糖化酶也 能微弱水解 α 一1，3糖苷键，它一般都能将淀粉百分之百地
分光光度法测定大曲糖化酶活力探讨大曲中糖化酶大曲中的微生物群比较复杂主要有霉菌酵母菌和细菌等这些微生物可以分泌很多胞外酶真正起糖化作用的是葡萄糖淀粉酶glucoamylaseec3213简称糖化酶是一种外切型糖苷酶它从淀粉的非还原性末端依次水解一14糖苷键切下一个个葡萄糖单元并像一淀粉酶一样使水解下来的葡萄糖发生构型变化形成一d葡萄糖
葡萄糖氧化酶活力测定(分光度法)
葡萄糖氧化酶活力测定（分光度法）1.原理（1）葡萄糖氧化酶的催化特性：葡萄糖氧化酶的每个酶分子中含有两单位FAD （黄素腺嘌呤二核苷酸），作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。
C6H12O6+O2=氧化酶C6H12O7+H2O2在一定时间内葡萄糖经氧化酶催化发生反应后，测定其反应液的过氧化氢浓度即可算出葡萄糖氧化酶的活力。
（2）葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定pH值的缓冲溶液中和加热条件下能使靛蓝胭脂红发生褪色反应，并且其反应速度在一定范围内和过氧化氢浓度成正比，据此测定出产生的过氧化氢的量，进而计算出葡萄糖氧化酶活力。
（3）首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应，在615nm波长处测定吸光度，建立标准曲线。
然后，作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应，再取其反应液与一定浓度的靛蓝胭脂红溶液反应随后测定其在615nm波长处测定吸光度，将吸光度值代入标准曲线方程后可推算出氧化酶活力。
2药品（1）0.2mol/L葡萄糖溶液:称取3.96g一水葡萄糖定容于100.00mL冷藏3小时备用，2天内有效。
（2）1．0×10-3mol/L靛蓝胭脂红溶液：称取0.466g靛蓝胭脂红定容于1000mL。
（2）0.2M醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=5.2)：称取16.16g三水醋酸钠及2.48g冰醋酸定容至1000mL（4）12mg/L过氧化氢标准溶液：准确称取0.040g 30%的过氧化氢溶液（过氧化氢需事先标定取实际值）定容于1000mL。
3实验方法（1）标准曲线的绘制准确吸取0、1、2、3、4、5、6mL过氧化氢标准溶液(12mg/L)，分别置于25mL比色管中，加人1.3mL靛蓝胭脂红溶液(1．0×10-3mol/L)和3．0mL乙酸一乙酸钠缓冲液，再加人蒸馏水稀释至25mL配成含有过氧化氢0.00mg/L、0.48 mg/L、0.96 mg/L、1.44 mg/L、1.92 mg/L、2.40 mg/L、2.88 mg/L的溶液，于沸水浴中加热13min后，用流水冷却比色管5min。
β-葡聚糖酶活性测定(精)
β-葡聚糖酶活性测定β-葡聚糖是由葡萄糖单体通过β-1，3和β-1，4糖苷键连接而成的D型葡萄糖聚合物，它主要存在于单子叶禾本科谷实中的糊粉层和胚乳细胞壁中。
β-葡聚糖酶属于水解酶类，能有效地降解β-葡聚糖分子中的β-1，3和β-1，4糖苷键，使之降解为小分子。
由于在饲料中，大麦的β-葡聚糖含量较高，难以被单胃动物消化利用，而且对饲料中各种养分的消化利用具有明显的干扰和抑制作用，成为麦类饲料中的抗营养因子。
在饲料中添加β-葡聚糖酶，能有效地消除β-葡聚糖的抗营养作用，促进饲料中各种养分的消化和吸收利用，增进畜禽健康。
在啤酒生产中，添加β-葡聚糖酶可以加快麦汁和啤酒的过滤速度、提高麦汁得率、增加可发酵糖的含量。
此外，β-葡聚糖酶在造纸工业、日化工业等其它许多方面也有着广泛的应用，对β-葡聚糖酶的研究将越来越受到人们的重视。
β-葡聚糖酶活力的测定方法主要有3种：还原糖测定法（分光光度法）、粘度测定法和底物染色法。
其中还原糖测定法简便实用，比较准确，而且结果重复性好，是广泛使用的一种酶活测定方法。
其原理是：β-葡聚糖酶能将β-葡聚糖降解成寡糖和单糖，其具有的还原基团在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应，显色的深浅与还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中β-葡聚糖酶的活力成正比，因此，可以利用比色测定反应液的吸光度值来计算还原糖的生成量，从而得出β-葡聚糖酶的活力。
但在该测定方法的具体操作中存在一些影响酶活力测定结果的因素，本文即对还原糖法测定β-葡聚糖酶活力的几个重要影响因素进行研究，并得出最佳测定条件。
1 材料与方法1.1 菌株与培养基1.1.1 发酵产酶菌株黑曲霉（Aspergillus niger）A47菌株，由本实验室保藏。
1.1.2 固态发酵培养基麸皮70 g、米糠27 g、NH4NO3 2.95 g、微量元素液0.05 ml、蒸馏水100 ml，pH值5.0，121 ℃灭菌20 min。
酒酒球菌β-葡萄糖苷酶活性及其对葡萄酒香气的影响研究
酒酒球菌β-葡萄糖苷酶活性及其对葡萄酒香气的影响研究香气、色泽及口感共同影响着葡萄酒的质量,因此,研究葡萄酒香气对提升其质量具有重要意义。
酒酒球菌是葡萄酒生产中启动苹果酸乳酸发酵(Malolactic Fermentation,MLF)的主要乳酸菌,其产生的β-葡萄糖苷酶是降解糖苷释放香气物质的关键酶。
本文选用6株具有优良MLF性能的酒酒球菌菌株,研究这些菌株的β-葡萄糖苷酶活性,及其对提升葡萄酒香气的作用。
本文首先采用平板显色法及分子生物学方法对实验菌株能否产生具有水解活性的β-葡萄糖苷酶进行了检测。
然后,用合成底物(对-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷,pNPG),采用比色法对6株酒酒球菌的β-葡萄糖苷酶活性进行了定量测定,以及对其在细胞中的分布进行了定位研究;在此基础上,又利用实时荧光定量(RT-qPCR)技术对这6株菌的β-葡萄糖苷酶基因进行了相对表达量分析;最后考察了酶活性较高的实验菌株在MLF期间对葡萄酒香气的影响,并采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)表征与分析了香气物质。
主要研究结果如下:(1)显色平板检测及分子检测结果表明,供试O.oeni菌株能够产生具有水解活性的β-葡萄糖苷酶。
(2)酶活性定量测定结果显示,各菌株的酶活性之间存在显著差异,其中菌株CS-1b的酶活性最高。
(3)结合两种糖苷酶基因的表达量分析对酶在细胞中的存在部位进行研究,结果表明,β-葡萄糖苷酶主要为胞内酶,且酶在细胞中的存在部位与其种类有关,磷酸-β-葡萄糖苷酶很可能位于细胞膜上,而β-葡萄糖苷酶很可能位于细胞质中。
(4)不同O.oeni菌株启动MLF,所产生的香气物质种类和含量存在显著差异;用酶活性表现最好的菌株CS-1b启动MLF,酒体中葡萄品种类香气物质的增量最大,表明O.oeni菌株CS-1b具有开发为商业发酵剂的潜力。
传统发酵豆酱高β-葡萄糖苷酶活力制曲工艺研究
传统发酵豆酱高β-葡萄糖苷酶活力制曲工艺研究
刘颖;刘婧美;王佳瑞;马永强
【期刊名称】《食品与机械》
【年(卷),期】2009(025)006
【摘要】在豆酱制曲工艺中,利用高产β-葡萄糖苷酶的米曲霉进行发酵,通过单因素试验和正交试验确定制曲优化条件为大豆浸泡4 h,121℃蒸煮15 min,32℃下制曲,每100 g大豆接入5×108CFU/mL的米曲霉菌液1 mL,制曲时间84 h.最佳条件下β-葡萄糖苷酶湿基酶活力385.775 UI/g,干基酶活力537.86 UI/g.
【总页数】5页(P134-137,166)
【作者】刘颖;刘婧美;王佳瑞;马永强
【作者单位】哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江,哈尔滨,150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江,哈尔滨,150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江,哈尔滨,150076;哈尔滨商业大学食品工程学院,黑龙江,哈尔滨,150076
【正文语种】中文
【相关文献】
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发色底物测定大曲中的-葡萄糖苷酶活力
思考题
在实验中为什么要做空白测定？并分析实 验误差？
淀粉酶的组分有哪些，其性质是什么？
（3）0.05mol/L乙酸缓冲液（pH5.6）：16.4g 乙酸钠加 12ml 乙酸，定容至1000ml；
（4）1mol/L碳酸钠溶液。
实验步骤
1. 制作对硝基苯酚标准曲线 按下表分别取不同体积的对硝基苯酚
（4mol/L），用50mmol/L乙酸缓冲液 （pH5.6）稀释成一系列浓度。然后在分 光光度仪上测定410nm处的光密度，以浓 度为横坐标，光密度为纵坐标作曲线。
仪器、原料和试剂
1．仪器：722型分光光度计、恒温水浴锅、移液管2ml一 个、试管、试管架等。
2．原料：大曲浸提液 3. 试剂：
（1）1.25mol/L对硝基苯酚-α-D-葡萄糖苷（pNPG）溶 液：75.2mg pNPG溶于200ml 0.05mol/L乙酸缓冲液（pH5.6）中；
（2）4mmol/L对硝基苯酚（pNP）溶液：111.3mg pNP 溶于200mL 0.05mol/L乙酸缓冲液（pH5.6）中。
发色底物测定大曲中的 α-葡萄糖苷酶活力
实验目的
掌握利用发色底物测定α-葡萄糖苷外切酶 活力的方法。
进一步理解酶活力的定义和计算方法。
实验原理
淀粉酶是水解酶类的一大亚类，是能够分解淀粉 糖苷键的一类酶的总称。其酶活力的计算多采用 测定产物还原糖含量的方法。但由于淀粉酶包括 的四种酶（α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-1，4-葡萄糖苷 酶、异淀粉酶）水解产物都是还原糖，所以还原 法无法准确测定单一酶活力。而发色底物法可以 解决这一难题，因为它是在糖苷配基上联接了一 个生 色基团。α-葡萄糖苷酶（俗称糖化酶）活力 的测定如果以无色的对硝基苯酚-α-D-葡萄糖苷 （pNPG）作反应底物，经α-葡萄糖苷酶水解α-1， 4-葡萄糖苷键后释放 出对硝基苯酚（pNP），在 碱性条件下后者是黄色的，最后通过监测405或 410 nm下的pNP 产生量作为α-1，4-葡萄糖苷酶活 性大小的判定标准。
红佳酿酵母β-葡萄糖苷酶活性测定及产酶特性
红佳酿酵母β-葡萄糖苷酶活性测定及产酶特性马腾臻;杨学山;张莉;张彦芳;李颍;祝霞;王婧;韩舜愈【摘要】p-NPG法是目前进行β-葡萄糖苷酶活性测定时最常用的一种方法,但测活条件对不同来源糖苷酶活性有显著影响,不但降低了试验数据的可靠性与真实性,也不利于各文献中菌株酶活力大小的比较.为建立酿酒酵母β-葡萄糖苷酶活性测定条件,以商品酵母红佳酿为研究对象,分别利用单因素及正交试验考察了反应时间、温度、底物浓度及缓冲液pH对酶活性的影响.结果表明最佳测活条件为:采用pH 5.5柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲体系,40 mmol/L底物p-NPG,50℃反应10 min;研究发现红佳酿酵母具有较高β-葡萄糖苷酶活性,与其他11株商品酿酒酵母菌株相比其胞外酶活最高,且在培养36 h时达到最大值.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2014(040)010【总页数】6页(P37-42)【关键词】酵母;β-葡萄糖苷酶;酶活测定优化;产酶特性【作者】马腾臻;杨学山;张莉;张彦芳;李颍;祝霞;王婧;韩舜愈【作者单位】甘肃农业大学,甘肃兰州,730070;甘肃省葡萄与葡萄酒工程学重点实验室,甘肃兰州,730070;甘肃省葡萄酒产业技术研发中心,甘肃兰州,730070;;;;;【正文语种】中文香气是葡萄酒的重要感官质量指标之一。
萜烯、C13-降异戊二烯衍生物等品种香气化合物决定了葡萄酒的品种典型性和产地风格，这些物质主要以无味的糖苷键合态形式存在，可在酿造过程中通过酶水解或者酸水解作用转变为游离态，从而增强葡萄酒品种香［1－2］。
β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase EC 3.2.1.21，βG)可水解糖苷键合态风味前体物，是进行葡萄酒风味修饰的关键酶［3］。
葡萄酒中的糖苷酶可来源于葡萄果实、商品酶制剂(多源于丝状真菌)、酵母(酿酒酵母和非酿酒酵母)及乳酸菌［4］，酿造过程中酵母来源β-葡萄糖苷酶对键合态香气化合物的释放起着重要作用［5－6］，可使发酵后酒的品种风味特征得到有效表达［1］。
曲的糖化力测定新的方法
曲的糖化力测定新的方法
周秀琴
【期刊名称】《酿酒科技》
【年(卷),期】1998(000)004
【摘要】曲的糖化力测定新方法周秀琴摘译关键词曲糖化力测定国外研究曲是清酒（相当于我国黄酒）酿造的重要原料之一，曲的糖化力对酿酒生产至关重要。
在清酒生产中，原料大米经蒸煮后，可分两条途径转化为糖，一条是由α－淀粉酶作用生成聚合度低的低聚糖，再经葡萄糖苷酶作用生...
【总页数】1页(P68)
【作者】周秀琴
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】TS261.1
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葡萄糖淀粉酶的活力测定
葡萄糖淀粉酶的活力测定【摘要】糖化酶有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端开始，分解α-1,4-葡萄糖苷键生成葡萄糖。
葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算酶活力。
1g 固体酶粉（或1ml液体酶），于40℃、pH值为4.6的条件下，1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖，即为1个酶活力单位，以u/g（u/ml）表示。
【关键词】葡萄糖淀粉酶活力测定酶活力【引言】酶作为生物体内催化剂，测定其活力是非常有必要的。
不同种类的酶的活力测定方法不同。
按照淀粉酶水解淀粉的作用方式，可以分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。
根据其催化产物的特点和现有测定方法规定酶活力单位为：每分钟每克鲜重麦种所催化生成的麦芽糖毫克数，来对这两种酶进行有效的测定。
两种酶作用淀粉的方式不同。
α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。
β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。
淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
【正文】一．实验原理：葡萄糖淀粉酶（糖化酶）在一定的条件下能水解生成葡萄糖，葡萄糖的醛基被弱氧化剂次碘酸钠氧化。
过量的碘用硫代硫酸钠滴定。
从碘的减少量计算葡萄糖的量，从而计算酶活力。
二．试剂与材料：1.2%可溶性淀粉液：称取可溶性淀粉2g，以少许蒸馏水调匀，侵入80ml的沸水中，继续煮至透明状，冷却后，加水定容至100ml2.PH4.6，0.1mol/L醋酸缓冲液：0.1mol/L苏酸溶液与0.1mol/L醋酸钠溶液等体积混合。
分光光度法测定大曲糖化酶活力探讨
分光光度法测定大曲糖化酶活力探讨
马歌丽;魏泉增;张志刚
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2008(000)009
【摘要】采用分光光度计法测量了大曲的糖化酶活力.结果表明,糖化酶水解淀粉产生的葡萄糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应生成的棕红色3-氮基-5硝基-水杨酸,在波长520nm处的光吸收强度与糖化酶活力呈正比.
【总页数】3页(P69-71)
【作者】马歌丽;魏泉增;张志刚
【作者单位】郑州轻工业学院,食品与生物工程学院,河南郑州450002;郑州轻工业学院,食品与生物工程学院,河南郑州450002;洛阳伊龙药业有限公司,河南洛阳417300
【正文语种】中文
【中图分类】O657.3
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1.高温大曲中高产糖化酶菌株的筛选鉴定及固态发酵条件优化 [J], 鲁珍;刘家扬;谌馥佳;李恩中;杨锟;张建设;郜胜勤
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浓香型白酒大曲在发酵和成熟过程中主要功能酶活力分析
浓香型白酒大曲在发酵和成熟过程中主要功能酶活力分析王玉霞;李兵;申孟林;尹旭敏;郭小丽;陈桥;张超【期刊名称】《食品工业科技》【年(卷),期】2018(039)011【摘要】为了对浓香型白酒大曲中功能酶系进行深入研究,实验根据大曲制作、发酵与成熟工艺流程,选取10个时间节点的大曲样品,分析曲皮和曲心α-淀粉酶、单宁酶、木聚糖酶和脂肪酶活力及变化规律.结果显示,在进入发酵期后,曲皮中d-淀粉酶活力基本在523.28～765.78 U范围内变化波动;曲心α-淀粉酶活力在曲块发酵期升降变化波动较大,而在成熟期后期基本维持在350 U左右.在整个研究期内,曲皮和曲心单宁酶活力变化规律较为相似,均先迅速升高,后火期达到最大,然后缓慢降低;木聚糖酶活力在曲皮和曲心样品中,都呈现出持续上升至养曲阶段达到最大值(119.72 U和113.70 U)后再下降的趋势;与其它酶相比较,脂肪酶活力在曲皮和曲心中的变化趋势差异较大,其中曲皮脂肪酶活力呈现先升高再降低,再次升高后降低的变化,而曲心中脂肪酶活力则是持续升高至贮藏一个月达到最大(597.50 U)后急剧下降,然后再次缓慢升高的变化规律.针对白酒大曲发酵和成熟过程中主要功能酶活力变化规律的考察,将为高产酶微生物的分离和筛选提供表征性指导作用,同时也将为制曲工艺的改良和加强型特种大曲的研制提供基础数据.【总页数】6页(P270-274,286)【作者】王玉霞;李兵;申孟林;尹旭敏;郭小丽;陈桥;张超【作者单位】宜宾学院生命科学与食品工程学院,四川宜宾644000;宜宾学院生命科学与食品工程学院,四川宜宾644000;西华大学食品与生物工程学院,四川成都610039;宜宾学院生命科学与食品工程学院,四川宜宾644000;西华大学食品与生物工程学院,四川成都610039;重庆农业科学院农产品贮藏加工研究所,重庆401329;宜宾学院生命科学与食品工程学院,四川宜宾644000;宜宾学院生命科学与食品工程学院,四川宜宾644000;宜宾学院生命科学与食品工程学院,四川宜宾644000【正文语种】中文【中图分类】TS261.1【相关文献】1.浓香型大曲贮藏过程中糖化力发酵力变化及真菌多样性分析 [J], 施思;彭智辅;乔宗伟;刘多涛;罗青春;涂福明2.浓香型大曲白酒蒸馏过程中四大酯馏出特性的分析 [J], 张鹏;张亮臣;孙振宇;费立发;柳刚;何金凤;周振明;许秀青3.浓香型白酒发酵过程中酒醅的微生物区系分析 [J], 乔宗伟;张文学;张丽莺;张其圣;岳元媛4.特香型大曲发酵过程中曲块不同部位理化指标及主要酶系动态分析 [J], 周斐成;吴生文;朱庆圣;廖昶;李雪亮;吴晓玉;丁忠涛;崔立操5.传统浓香型白酒大曲发酵过程中细菌和真菌动态变化研究 [J], 王少磊;颜守保;金晓丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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仪器、原料和试剂
1．仪器：722型分光光度计、恒温水浴锅、移液管2ml一 个、试管、试管架等。
2．原料：大曲浸提液 3. 试剂：
（1）1.25mol/L对硝基苯酚-α-D-葡萄糖苷（pNPG）溶 液：75.2mg pNPG溶于200ml 0.05mol/L乙酸缓冲液（pH5.6）中；
（2）4mmol/L对硝基苯酚（pNP）溶液：111.3mg pNP 溶于200mL 0.05mol/L乙酸缓冲液（pH5.6）中。
发色底物测定大曲中的 α-葡萄糖苷酶活力
实验目的
掌握利用发色底物测定α-葡萄糖苷外切酶 活力的方法。
进一步理解酶活力的定义和计算方法。
实验原理
淀粉酶是水解酶类的一大亚类，是能够分解淀粉 糖苷键的一类酶的总称。其酶活力的计算多采用 测定产物还原糖含量的方法。但由于淀粉酶包括 的四种酶（α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-1，4-葡萄糖苷 酶、异淀粉酶）水解产物都是还原糖，所以还原 法无法准确测定单一酶活力。而发色底物法可以 解决这一难题，因为它是在糖苷配基上联接了一 个生 色基团。α-葡萄糖苷酶（俗称糖化酶）活力 的测定如果以无色的对硝基苯酚-α-D-葡萄糖苷 （pNPG）作反应底物，经α-葡萄糖苷酶水解α-1， 4-葡萄糖苷键后释放 出对硝基苯酚（pNP），在 碱性条件下后者是黄色的，最后通过监测405或 410 nm下的pNP 产生量作为α-1，4-葡萄糖苷酶活 性大小的判定标准。
的量，并计算酶活力。酶活力单位定义为： 在上述分析条件下每分钟催化形成1μmol pNP所需要的酶量为一个活力单位。
计算
酶活力= (A×n)/(V×t) 式中 V—酶液量（ml）； n—酶液稀释倍数； t—反应时间（min）。
注意事项
如反应进行得太快，应适当减少大曲浸提 液的加入量；反之则增加。
编号 pNP浓度/（mol/L）
pNP加入量/ml 水加入量/ml 碳酸钠加入量/ml
A410
1
2
3
4
5
6
0
4
12 24 36 60
0 0.01 0.03 0.06 0.09 0.15
1.0 0.99 0.97 0.94 0.91 0.8522来自222
2
2．α-1，4-葡萄糖苷酶活力的测定
取0.8ml对硝基苯酚-α-D-葡萄糖苷 (pNPG)(1.25mmol/L),加入0.2ml大曲浸提液， 迅速混匀后于40℃水浴中保温10min，去出 并立即加入2ml 1mol/L的碳酸钠溶液终止反 应，用分光光度计测定410nm波长处的光密 度，在标准曲线上查出相当于对硝基苯酚
（3）0.05mol/L乙酸缓冲液（pH5.6）：16.4g 乙酸钠加 12ml 乙酸，定容至1000ml；
（4）1mol/L碳酸钠溶液。
实验步骤
1. 制作对硝基苯酚标准曲线 按下表分别取不同体积的对硝基苯酚
（4mol/L），用50mmol/L乙酸缓冲液 （pH5.6）稀释成一系列浓度。然后在分 光光度仪上测定410nm处的光密度，以浓 度为横坐标，光密度为纵坐标作曲线。
思考题
在实验中为什么要做空白测定？并分析实 验误差？
淀粉酶的组分有哪些，其性质是什么？