邻二氮菲分光光度法测定微量铁教学提纲
《分光光度分析》实验四 邻二氮菲分光光度法测定铁
(7) 盐酸溶液(6 mol· -1) L
(8) 铁标准溶液(20 g· -1，200 g· -1配成250mL，见后面) mL mL 说明： (1) - (7) 由实验室教师配制，(8) 每组配制一份
四、实验内容
条件试验
铁含量的测定 摩尔比法测定配合物的组成比、摩尔吸光系 数及反应的平衡常数
亚铁的含量?试拟出一简单步骤。
4. 制作工作曲线和进行其它条件试验时，加入
试剂的顺序能否任意改变?为什么?
50 mL 容量瓶
1 mL盐酸羟胺溶液 摇匀
用水稀释至刻度，摇匀 放置l0 min
X mL 1 mol· -1 NaOH L
l cm比色皿 绘制A与pH关系 的酸度影响曲线
以蒸馏水为参比 在所选择的波长下，测量各溶液的吸光度 (用pH计测量溶液pH值) A
pH
X mL NaOH: 0.00 mL，0.20 mL， 0.50 mL，1.00 mL 1.50 mL，2.00 mL ， 2.50 mL, 3.00 mL
2+
Fe2+ + 3 N N N Fe N
3
lg 3=21.3
Fe3+与邻二氮菲生成1:3的淡蓝色配合物，其lg 3＝14.1
盐酸羟胺还原
2 Fe3++2NH2OH· HCl=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2Cl-
为了尽量减少其他离子的影响，通常在微酸性(pH约5)溶液中
显色。
本法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、
实验四
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定水中微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
3、学会721型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4、学会数据处理的基本方法。
5、掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲(又称邻菲罗啉)，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合物：此配合物的lgK=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl → 2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl-测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。
本实验采用HAc-NaAc缓冲溶液控制溶液pH≈5.0，使显色反应进行完全。
为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。
本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+-等离子不干扰测定。
实验八 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验八邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的2. 掌握邻二氮菲的制备方法及其在测定微量铁中的应用。
3. 理解标准曲线的绘制方法及其在实验中的应用。
二、实验原理邻二氮菲是一种具有荧光特性的有机物，其分子结构如图1所示。
图1 邻二氮菲分子结构邻二氮菲能够与铁(Ⅲ)形成荧光化合物，而这种荧光化合物的发射峰位于535nm左右，因此可以通过测量荧光发射强度来确定铁(Ⅲ)的含量。
在实验中，首先要制备邻二氮菲溶液。
制备方法如下：取一定量的邻二氮菲与一定量的苯甲酸，加入适量的氢氧化钠溶液，煮沸并搅拌至邻二氮菲完全溶解，加入足量的水，制成1mmol/L的邻二氮菲溶液。
然后测定铁离子溶液的荧光强度，在一定波长下测定它的荧光强度，得到标准曲线。
最后将待测样品溶液与邻二氮菲溶液混合，测定混合溶液荧光强度，并用标准曲线计算出铁离子的含量。
三、实验步骤2. 制备标准曲线。
将一定量的FeCl3溶液加入邻二氮菲溶液中，混合均匀后，在535nm处测定其荧光强度。
重复上述步骤，得到一系列不同浓度的FeCl3溶液荧光强度数据。
3. 测定样品荧光强度。
将待测样品溶液与邻二氮菲溶液混合，混合均匀后，在535nm 处测定其荧光强度。
4. 计算样品中Fe离子的含量。
使用标准曲线计算样品中Fe离子的含量。
四、实验注意事项1. 实验中所用的器皿应干净，避免污染。
2. 制备邻二氮菲溶液时应注意氢氧化钠的浓度和量，以确保邻二氮菲完全溶解。
3. 实验室应尽量保持安静，避免干扰荧光信号。
4. 注意各种溶液的安全操作，如防止接触皮肤和眼睛。
五、实验结果及分析利用邻二氮菲分光光度法测定一系列不同浓度的FeCl3标准溶液，得到的测量结果如下表所示。
所得数据可用图表表示，如下图所示。
根据标准曲线可以得到如下方程：y = 0.2948x + 2.2939，其中y表示荧光强度，x表示FeCl3溶液的浓度。
六、实验总结本实验通过邻二氮菲分光光度法测定微量铁，熟悉了邻二氮菲荧光原理及其制备方法，掌握了标准曲线的制备方法和其在实验中的应用。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁_6
实验二邻二氮菲分光光度法测定微量铁试验目的1.掌握紫外可见分光光度计的基本操作。
2.掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理和方法。
3.掌握吸收曲线绘制及最大吸收波长的选择。
4.掌握标准曲线的绘制及应用。
实验原理邻二氮菲（1,10-邻二氮杂菲）是一种有机配位剂，可与Fe离子形成红色配位离子：在pH=3~9范围内，该反应迅速完成，生成的红色配位离子在510nm 波长附近有一吸收峰，摩尔吸收系数为1.1*104，反应十分灵敏，Fe2+离子浓度与吸光度符合光吸收定律，适合于微量铁的测定。
实验中，采用pH=4.5~5的缓冲溶液保持标准系列溶液与样品溶液的酸度，采用盐酸羟胺还原标准液及样品溶液中的Fe3+离子并防止测定过程中二价铁离子被空气氧化。
实验仪器与试剂1.V-1100D型可见分光光度计2.标准铁储备溶液（1.00×10-3mol/L）3.邻二氮菲溶液（0.15%，新鲜配制）4.盐酸羟胺溶液（10%，新鲜配制）5.醋酸盐缓冲液6.50ml容量瓶7个7.5ml移液管4只8.1cm玻璃比色皿2个9.铁样品溶液实验步骤1.标准系列溶液及样品溶液配制：按照下表配制标准系列溶液及样品溶液。
2.吸收曲线绘制：用1cm的比色皿，以1号溶液作为参比溶液，测定4号溶液在不同波长下的吸光度，以吸光度为纵坐标，波长为横坐标制图，绘制吸收曲线，并从吸收曲线上找出最大吸收波长。
3.标准曲线制作：在选定的最大吸收波长处，用1cm比色皿，以1号溶液作为参比溶液，分别测定2~7号溶液的吸光度，以吸光度值为纵坐标，系列标准溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线。
实验数据处理与结果1.吸收曲线：2.标准曲线：样品铁溶液中铁含量计算：Cx=C 读取值×50.200.50=9.9×10-4mol/L摩尔系数计算：ε=1212C C A A --=1.219×104 实验思考与讨论1.标准曲线的线性不好的原因：所选标准溶液的浓度可能只有一部分在线性范围内，该实验5、6号之间的线性不是很好，很大的原因可能是它们之间的某一浓度之后便超出了线性的范围。
实验8 邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验八邻二氮菲分光光度法测定微量铁一目的要求1.了解邻二氮菲测定铁的基本原理及基本条件，学习显色溶液的制备操作技术；2.掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择；3.掌握标准曲线定量的实验技术；4.了解T6新世纪紫外可见分光光度计的使用方法。
二基本原理邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的一种较好的显色剂。
在PH=4-6的溶液中，邻二氮菲与Fe2+生成稳定的橙红色络合物。
橙红色络合物的最大吸收波长在510nm处，摩尔吸光系数ε510 =1.1×104，反应的灵敏度、稳定性、选择性均较好。
此反应可用于微量Fe2+的测定，如果铁以Fe3+的形式存在，则应预先加入还原剂盐酸羟胺或对苯二酚将Fe3+还原成Fe2+。
三仪器与试剂1.仪器T6新世纪紫外可见分光光度计容量瓶50ml：7个；吸量管5ml：4支；吸量管10ml：1支。
2.试剂10μg/ml铁标准溶液：准确称取0.8634g NH4Fe(SO4)2.12H2O，置于烧杯中，以50ml 1mol/L HCL 溶液溶解后转入1000ml 容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。
从中吸取50ml该溶液于500ml容量瓶中，加50ml 1mol/L HCL 溶液，用水稀释至刻度，摇匀。
10g/L盐酸羟胺溶液（临用时配制）。
1g/L邻二氮氮菲溶液（临用时配制）：应先用少许酒精溶解，再用水稀释。
NaAc-HAc缓冲溶液（PH=4.6）：将30ml冰醋酸和30g无水醋酸钠溶于100ml水中，稀释至500ml。
铁试样溶液：其中含铁0.02~0.06mg/10ml。
四实验步骤1.显色溶液的配制取50ml容量瓶7个，分别准确加入10μg/ml的铁标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00（ml）及试样溶液10.00ml，再于各容量瓶中分别加入10g/L盐酸羟胺2.5ml，摇匀，稍停2min，再各加入NaAc-Hac缓冲溶液5ml及1g/L邻二氮氮菲溶液5ml，每加一种试剂后均摇匀再加另一种试剂，最后用水稀释到刻度，摇匀，放置10分钟。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁_2
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的➢ 学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
➢ 掌721握型分光光度计的正确使用方法，并了解此仪的主器要构造。
二、实验原理在pH=2～9的溶液中，Fe 2+与邻二氮菲(phen)生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+：[]++→+232)phen (Fe phen 3Fe （橘红色）此配合物的lgK 稳=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol -1·cm -1，而Fe 3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK 稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH 2OH·HCl)将Fe 3+还原为Fe 2+，其反应式如下：2Fe 3++2NH 2OH·HCl →2Fe 2++N 2+H 2O+4H ++2Cl -测定时控制溶液的酸度为pH ≈5较为适宜。
用邻二氮菲可测定试样中铁的总量。
三、仪器及物品721型分光光度计，1 cm 吸收池，10 mL 吸量管，50 mL 比色管（或容量瓶）；1.0×10-3 mol·L -1 铁标准溶液，100ug·mL -1铁标准溶液，0.15%邻二氮菲水溶液，10%盐酸羟胺溶液（新配），1 mol·L -1乙酸钠溶液，6 mol·L -1 HCl （工业盐酸试样）。
四、实验过程1、绘制吸收曲线，选择测量波长：用吸量管吸取2.00 mL1.0×10-3mol.L -1铁标准溶液，注入50 mL 比色管中，加入1.00 mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，加入2.00 mL0.15%邻二氮菲溶液，5.0 mL NaAc 溶液，以水稀释至刻度。
在光度计上用1 cm 比色皿，蒸馏水为参比溶液，在440-560 nm 间，每隔10 nm 测量一次吸光度，绘制吸收曲线，选择测量的适宜波长。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
分光光度法测铁含量一、实验目的⒈学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；⒉掌握721型分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。
对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件。
⒊本试验测定工业盐酸中铁含量的原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc。
当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即工业盐酸中铁的含量。
⒋邻二氮菲法的优点：用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
⒌邻二氮菲法简介：邻二氮菲为显色剂，选择测定微量铁的适宜条件和测量条件，并用于工业盐酸中铁的测定。
⒍邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据：邻二氮菲亦称邻菲咯啉（简写phen），是光度法测定铁的优良试剂。
在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。
此配合物的lgK稳 = 21.3，摩尔吸光系数ε510= 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁]
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实验邻二氮菲分光光度法测定微量铁
日期：年月日
实验人员：
一、实验目的（4分）
1．了解邻二氮菲测定铁的基本原理及基本条件，学习显色溶液的制备操作技术。
2．掌握吸收曲线的测绘和测量波长的选择。
3
4．了解
1．数据
查标准曲线，当Ax＝0.363时，Cx＝42.0 µg/50ml
③计算试样溶液总含铁量。
42.0 µg
原样中铁含量= ---------------- = 4.20(µg/ml)
10.00ml
实验紫外分光光度法测定水中总酚浓度
日期：年月日
实验人员：
一、实验目的
1.学习紫外分光光度法测定有机物的方法；
2.学习? 型紫外可见光光度计的使用方法。
二、实验原理
苯酚在235nm附近有强烈紫外吸收。
A=abc
三、数据记录和处理
1．数据记录
②通过标准曲线求试样容量瓶中苯酚含量Cx。
查标准曲线，当Ax＝0.213时，Cx＝20.0 µg/50ml
③计算试样溶液苯酚含量。
20.0 µg
苯酚含量= ---------------- = 4.00(µg/ml) = 4.00(mg/L)
5.00ml
实验混合液中Co2+和Cr3+双组分的光度法测定
日期：年月日
实验人员：
一、实验目的
掌握用分光光度法测定双组分的原理和方法。
二、实验原理
处测得的标准曲线(共4条)。
绘制时
求出四条直线的斜率。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁 一、实验目的 1、学会吸收曲线及标准
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
3、学会722型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4、学会数据处理的基本方法。
5、掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合，此配合物的lgK=21.3，摩尔吸光ε510=1.1×104L·mol-1·cm-1，稳=14.1。
所以在加入显色剂之而Fe3+能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳前，应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：2Fe3++2NH2OH·HCl→2Fe2++N2+H2O+4H++2Cl-测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。
本实验采用HAc-NaAc 缓冲溶液控制溶液pH≈5.0，使显色反应进行完全。
为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。
本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+等离子不干扰测定。
但Bi3+、Cd2+、Hg2+、Zn2+、Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀干扰测定。
邻二氮菲分光光度法测定水中微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的基本原理。
2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。
3、学会721型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。
4、学会数据处理的基本方法。
5、掌握比色皿的正确使用。
二、实验原理根据朗伯-比耳定律：A=εbc，当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A 为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。
同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。
文档来自于网络搜索用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲(又称邻菲罗啉)，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合物：文档来自于网络搜索=21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104L·mol-1·cm-1，而Fe3+此配合物的lgK稳=14.1。
所以在加入显色剂之前，能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳应用盐酸羟胺(NH2OH·HCl)将Fe3+还原为Fe2+，其反应式如下：文档来自于网络搜索2Fe3+ + 2NH 2OH·HCl → 2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl-文档来自于网络搜索测定时酸度高，反应进行较慢；酸度太低，则离子易水解。
本实验采用HAc-NaAc缓冲溶液控制溶液pH≈5.0，使显色反应进行完全。
文档来自于网络搜索为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。
文档来自于网络搜索本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+-等离子不干扰测定。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁教学提纲
邻二氮菲分光光度法测定微量铁邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、实验原理邻二氮菲（1, 10—二氮杂菲），也称邻菲罗啉是测定微量铁的一个很好的显色剂。
在pH2—9范围内（一般控制在5—6间）Fe2+与试剂生成稳定的橙红色配合物Fe（Phen）32+|gK=21.3，在510nm下，其摩尔吸光系数为1.1104L/moL.cm, ）Fe3+与邻二氮菲作用生成兰色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺使Fe2+还原为Fe3+:2 Fe3++2NH2OHHCI=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2C「二、试剂与仪器仪器：1. 721型分光光度计2. 50mL 容量瓶8 个,100mL1 个,500mL1 个3. 移液管：2 mL1支，10 mL1支4 .刻度吸管：10mL、5mL、1mL各1支试剂：1. 铁标准储备溶液100ug/mL：1000 mL （准确称取0.4317g铁盐NH4Fe（SO4）212H2O置于烧杯中，加入3moL/LHCI20mL和30ml水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
）2. 铁标准使用液10ug/mL:用移液管移取上述铁标准储备液10.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加入3moL/LHCI2.0mL和少量水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
3. HCI3moL/L : 100mL4. 盐酸羟胺100g/L （新鲜配制）：100mL5 •邻二氮菲溶液1.5g/L （新鲜配制）：200mL6. HAc—NaAc缓冲溶液（pH=5）500 mL:称取136gNaAc,加水使之溶解，再加入120 mL冰醋酸，加水稀释至500 mL7 .水样配制（0.4ug/mL）:取2mL100ug/mL铁标准储备溶液加水稀释至500mL三、实验步骤1. 配置10.00ug/mL的铁标准溶液。
1. 绘制吸收曲线：用吸量管吸取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、2.00ml、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00ml 分别放入50 mL 容量瓶中，加入1 mL10% 盐酸羟胺溶液、2.0 mL1.5g/L邻二氮菲溶液和5 mL HAc —NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，在440—560nm波长范围内分别测定其吸光度 A 值。
04实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-教案
04实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量-教案实验四邻二氮菲分光光度法测定铁的含量教案课程名称:分析化学实验B教学内容:邻二氮菲分光光度法测定铁的含量实验类型:验证教学对象:化工、环境工程、药学、生物科学、应用化学、医学检验、制药、复合材料、生物工程、生物技术授课地点:中南大学南校区化学实验楼401授课学时:4学时一、教学目的与要求1、练习巩固吸量管、比色管(容量瓶)、比色皿的正确使用;2、了解分光光度法的基本原理，学会吸收曲线测绘及选择测定波长和标准曲线的绘制;3、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的原理、方法和计算;4、学习掌握722S型分光光度计的正确使用，了解其工作原理;5、掌握利用标准曲线法进行定量分析的操作与数据处理方法。
二、知识点分光光度法、朗伯—比耳定律、配位反应、显色反应、标准溶液、吸收曲线、最大吸收波长、标准曲线、吸量管、比色管、比色皿、实验报告的撰写(数据处理三线表表格化)、有效数字三、技能点玻璃器皿的洗涤、吸量管的使用、标准系列溶液的配制、比色皿的使用、分光光度计的使用四、教学重点及难点重点:邻二氮菲分光光度法测定微量铁的基本原理和操作方法难点:722s型分光度计的操作五、教学方法任务驱动法、分组讨论法、阅读指导法、现场讲解指导等六、复习引入1、复习分光光度法有关知识，提问学生:(1) 分光光度法测定对象是什么,(有色溶液物质)(2) 在用分光光度法测定微量铁中，以什么试剂作显色剂,(邻二氮菲) (3) 测定波长如何选择,(吸收曲线)[引入] 分光光度法的应用:邻二氮菲分光光度法测定微量铁-标准曲线法[引言] 铁是最重要的基本结构材料，铁合金用途很广，国防和战争更是钢铁的较量，钢铁的年产量代表一个国家的现代化水平，因而，对各种样品中所含的铁进行测定，有助于对产品的生产进行监督。
测定铁的方法很多，选择不同方法主要是看不同样品中铁的含量，含量高的含铁试样采用滴定分析法测定，含量低的含铁试样采用仪器分析方法测定。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
七、思索题 ⒈邻二氮菲分光光度法测定微量铁时 为何要加入盐酸羟胺溶液？ 2参比溶液旳作用是什么？在本试验 中可否用蒸馏水作参比？
3邻二氮菲与铁旳显色反应，其主要 条件有哪些？
参比溶液旳选择应是视详细情况而定。一般 1.当试液、显色剂和所用旳其他试剂在测定波长
都无吸收时，可用纯溶剂作参比溶液； 2.当试液无吸收，而显色剂或其试剂在测定波优
四、试验环节 （一）准备工作 打开仪器电源开关，预热，调解仪 器。 配制20.00μg·mL-1铁原则溶液：移 取100.0μg·mL-1铁原则溶液10.00mL于 100mL旳容量瓶中，并用蒸馏水稀至刻 线，摇匀。
四、试验环节 （二）吸收曲线旳制作 1.在1支50mL容量瓶中，加入 20.00μg/mL铁 原则溶液， 2.再加入1 mL 100g·L-1盐酸羟胺溶液摇匀 3. 5.0 mL pH≈5缓冲溶液 4. 1 mL 1.5g·L-1邻二氮菲溶液， 5.以水稀释至刻度，摇匀。 6.测量：用1cm比色皿，以试剂空白为参比， 在440~560nm处，每隔10nm测量一次吸光度，在峰 值附近每隔 5nm 测量一次吸光度A并统计。以波 长为横坐标，吸光度为纵坐标拟定最大吸收波长。
二、试验原理
邻二氮菲法简介： 邻二氮菲亦称邻菲 咯啉为显色剂，是光度法测定铁旳优良 试剂。在pH=2～9旳范围内，邻二氮菲 与二价铁生成稳定旳橙色配合物 （（Fe(phen)3）2+）。
测定时控制溶液旳酸度为pH≈5较为合适
三、仪器试剂 ⒈仪器：普析T6型分光光度计；1cm 吸收池一套；10mL 吸量管；5mL量筒 50mL 容量瓶或比色管(1＋7个)。 ⒉试剂：100.0μg·mL-1铁原则溶液； 1.5g·L-1邻二氮菲水溶液； 100g·L-1 盐酸羟胺溶液（新配）； pH≈5缓冲溶 液； 20.00μg·mL-1铁原则溶液(自己配)
邻二氮菲分光光度法测定铁
实验十九 分光光度法测定微量铁一.实验目的1.了解分光光度计的构造和使用方法。
2.了解邻二氮菲光度法测定铁的实验条件，掌握和了解实验条件的一般研究方法3.学习邻二氮菲分光光度法测铁的方法。
二.实验原理吸光光度法是根据溶液中物质对光选择性的吸收而进行分析的方法。
它具有较高的灵敏度和一定的准确度，特别适宜于微量组分的测定。
吸光光度法可以分为比色法和分光光度法两大类。
本实验采用分光光度法。
分光光度法测定物质含量时应注意的主要是显色反应的条件和测量吸光度的条件。
显色反应的条件有显色剂用量、介质的酸度、显色时间、显色时溶液的温度、干扰物质的消除方法等。
测量吸光度的条件包括应选择的入射光波长，吸光度范围和参比溶液等。
光度法测定微量铁的显色剂有邻二氮菲(phen)、磺基水杨酸、硫氰酸盐等。
目前大都采用邻二氮菲为显色剂测定微量铁。
在pH=2～9的条件下，Fe 2+离子与邻二氮菲生成稳定的橘红色络合物，反应如下：++→+232)(phen Fe phen Fe (橘红色)此络合物lgK 稳=21.3，摩尔吸光系数4510101.1⨯=ε。
显色前，要用盐酸羟胺把Fe 3+离子还原为Fe2+离子，反应如下：-++++++↑+→•+Cl HO H N Fe HCl OH NH Fe 24222222223测定时应控制溶液酸度在pH=5左右为宜，酸度太高，反应进行较慢，酸度太低，Fe 2+离子水解，影响显色。
三.仪器及试剂仪器 752型分光光度计（1cm 比色皿）、50ml 容量瓶若干 试剂 1. 1001-•ml g μ铁标准溶液2. 101-•ml g μ铁标准溶液由1001-•ml g μ稀释制得 3.盐酸羟胺10%溶液 4.邻二氮菲溶液0.15% 5.NaAc 溶液1mol/L四.实验步骤1.测量波长的选择在50ml 容量瓶中按次序准确加入以下溶液，101-•ml g μ铁标准溶液5ml ，10%盐酸羟胺1ml ，摇匀，再加入1mol/LNaAc 溶液5ml ，0.15%邻二氮菲3ml 。
试验21邻二氮菲光度法测定微量铁含量
试验21邻二氮菲光度法测定微量铁含量实验21 邻二氮菲光度法测定微量铁含量一、实验目的1. 掌握吸光光度法测定微量铁的原理和方法。
2. 了解分光光度计的性能、结构并掌握其使用方法。
3. 学会刻度吸管的使用方法。
二、实验原理铁的吸光光度法测定所用的显色剂较多，有邻二氮菲及其衍生物、磺基水杨酸、硫氰酸盐、5-Br-PADAP等。
其中邻二氮菲吸光光度法的灵敏度高，稳定性好，干扰容易消除，是一种测定铁的良好而灵敏的方法，因而是目前普遍采用的一种方法。
在pH为2～9的溶液中，Fe2+与邻二氮菲（Phen）生成稳定的橘红色络合物Fe(Phen)32+，其lgK=21.3，摩尔吸光系数ε508 = 1.1×104L·mol-1·cm-1，铁含量在0.1～6μg·mL-1范围内遵守朗伯－比尔定律。
Fe3+也和邻二氮菲生成配合物，因此在显色之前需用盐酸羟胺或抗坏血酸将Fe3+全部还原为Fe2+，然后再加入邻二氮菲，并调节溶液酸度至适宜的酸度范围。
有关反应如下：2Fe3+ + 2NH2OH·HCl =2 Fe2+ + N2↑+ 2H2O + 4H+ + 2Cl- 用吸光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法（又称工作曲线法）：（1）配制一系列浓度由小到大的的标准溶液，在实验条件下依次测量各标准溶液的吸光度A。
（2）以溶液的浓度C 为横坐标，相应的吸光度A 为纵坐标，绘制标准曲线。
（3）在同样实验条件下，测定待测溶液的吸光度A x，根据测得吸光度值从标准曲线上查出相应的浓度C x。
即可计算试样中被测物质的质量浓度。
三、仪器试剂1、仪器：722N型分光光度计；100 mL容量瓶；25 mL刻度吸管。
2、试剂：铁标准溶液10 mg·L-1；待测铁试液；100 g·L-1NaAc 溶液；100 g·L-1盐酸羟胺溶液；1.0 g·L-1邻二氮菲溶液。
邻二氮菲分光光度法测定铁含量
一、实验目的
1. 了解并掌握邻菲罗啉分光光度法测定盐酸中铁含量的方法 及操作。
2. 进一步掌握紫外可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理
1. 邻菲罗啉是测量微量铁的一种优良的显色剂。在 pH=2~9的范围内，Fe2+与邻菲罗啉作用生成稳定的桔红 色配合物，Fe3+与邻菲罗啉生成蓝色配合物且稳定性较 差，因此在实际应用中，常加入还原剂盐酸羟胺使Fe3+ 还原成Fe2+。
四、实验步骤
【操作步骤】 比色皿装样：1号溶液 GOTOλ 输入最大吸收波长 ENTER ZERO START 记录数值 比色皿装样：2号溶液 ZERO START 记录数值 比色皿装样：3号溶液 ZERO START 记录数值。
五、数据记录及处理
1. 绘制工业盐酸的标准曲线。 2. 求出试样含铁量。
5 min 5 ml邻菲罗啉 摇匀 慢慢滴加NaOH至pH
3.8~4.1 5 ml乙酸--乙酸钠缓冲液 摇匀 蒸馏水稀释
至刻度线，摇匀 放置15 min 以空白溶液为参比，测定各
显色液的序吸号光度 绘1制标准2曲线。3
4
5
6
加入铁标准溶液(ml) 0
2
4
6
8
10ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
相当于铁的含量 (mg)
2. 本实验在pH=4~5的条件下，用盐酸羟胺把三价铁Fe3+还 原成二价铁Fe2+，二价铁与邻菲罗啉生成桔红色配合物 ，用分光光度计测定，其反应式如下：
Fe2+ + 3C12H8N2 == [Fe(C12H8N2)3]2+
三、实验仪器及药品
实验仪器：
试纸 实验药品： 钠缓冲液、
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
实验六 邻二氮菲分光光度法测定微量铁1．实验要求（1）了解可见分光光度计结构及工作原理及使用方法； （2）掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的基本原理及方法； （3）掌握标准系列的配制及标准曲线的制作方法； （4）掌握吸收曲线的制作方法。
2．实验原理4Fe 3+ + 2NH 2OH4Fe 2+ + N 2O + H 2O + 4H +NNFe32+NNFe 2++ 3（显色剂） （橙红色） 1,10-邻二氮杂菲 1,10-邻二氮杂菲亚铁3．仪器和试剂（2）试剂① 铁标准溶液 =ρ10.0μg /mL●铁标准储备液=ρ100.0μg/mL准确称取0.8634g优级纯的铁铵矾NH4Fe(SO4)2·12H2O于小烧杯中，加水溶解，加入3mol/L H2SO4溶液10mL，酸化后的溶液转移到1000mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
●铁标准溶液=ρ10.0μg/mL移取100.0μg/mL铁储备液10.00 mL于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
②盐酸羟胺水溶液（用时配制）100g/L③邻二氮菲（又称邻菲罗啉）溶液 1.5 g/L称取0.75g邻二氮菲于小烧杯中，加入2～3 mL95%乙醇溶解，再用蒸馏水稀释到500mL。
避光保存，两周内有效。
④ NaAc溶液 1.0mol/L称取41g分析纯醋酸钠，加水溶解后，稀释至500mL。
⑤广泛pH试纸和不同范围的精密pH试纸。
4．实验步骤及数据记录（1）标准系列及试液的配制容量瓶编号245680.0mL2.0mL4.0mL5.06.0mL8.0mL试液25mL1*邻二氮菲摇匀NaAc H2O稀释摇匀刻度10%,1.0mL摇匀A（2）吸收曲线的测绘0号5号吸收池1cmA440～540nm10～1nm/隔5．实验结果计算（1）水样中铁的质量浓度 ρ（Fe ）=00.5mV m =（mg/L ） 式中 m ——5.00mL 水样中铁的质量（从标准曲线上查得） V ——水样体积（5.00mL ）（2）bcA =ε6．思考题（1）吸收曲线与标准曲线各有何使用意义？（2）测绘吸收曲线时，在510nm 附近，测量点间隔为什么要密一些？ （3）实验所用的参比溶液为什么选用试剂空白，而不用蒸馏水？ （4）配制500m L100μg /mL 的铁标准溶液需称取多少克的NH 4Fe(SO 4)2•12H 2O?。
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁分光光度法测铁含量一、实验目的⒈学习确定实验条件的方法，掌握邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理；⒉掌握721型分光光度计的使用方法，并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理⒈确定适宜的条件的原因：在可见光分光光度法的测定中，通常是将被测物与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。
因此，显色条件的完全程度和吸光度的测量条件都会影响到测量结果的准确性。
为了使测定有较高的灵敏度和准确性，必须选择适宜的显色反应条件和仪器测量条件。
通常所研究的显色反应条件有显色温度和时间，显色剂用量，显色液酸度，干扰物质的影响因素及消除等，但主要是测量波长和参比溶液的选择。
对显色剂用量和测量波长的选择是该实验的内容。
⒉如何确定适宜的条件：条件试验的一般步骤为改变其中一个因素，暂时固定其他因素，显色后测量相应溶液吸光度，通过吸光度与变化因素的曲线来确定适宜的条件。
⒊本试验测定工业盐酸中铁含量的原理：根据朗伯－比耳定律：A=εbc。
当入射光波长λ及光程b一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。
只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即工业盐酸中铁的含量。
⒋邻二氮菲法的优点：用分光光度法测定试样中的微量铁，目前一般采用邻二氮菲法，该法具有高灵敏度、高选择性，且稳定性好，干扰易消除等优点。
⒌邻二氮菲法简介：邻二氮菲为显色剂，选择测定微量铁的适宜条件和测量条件，并用于工业盐酸中铁的测定。
⒍邻二氮菲可测定试样中铁的总量的条件和依据：邻二氮菲亦称邻菲咯啉（简写phen），是光度法测定铁的优良试剂。
在pH=2～9的范围内，邻二氮菲与二价铁生成稳定的桔红色配合物（（Fe(phen)3）2+）。
此配合物的lgK= 21.3，摩尔吸光系数ε510 = 1.1×104 L·mol-1·cm-1，而Fe3+稳能与邻二氮菲生成3∶1配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。
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邻二氮菲分光光度法测定微量铁
邻二氮菲分光光度法测定微量铁
一、实验原理
邻二氮菲（1，10—二氮杂菲），也称邻菲罗啉是测定微量铁的一个很好的显色剂。
在pH2—9范围内（一般控制在5—6间）Fe2+与试剂生成稳定的橙红色配合物Fe（Phen）32+lgK=21.3，在510nm下，其摩尔吸光系数为
1.1104L/moL.cm, ）Fe3+与邻二氮菲作用生成兰色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺使Fe2+还原为Fe3+：
2 Fe3++2NH2OHHCl=2 Fe2++N2+4H++2H2O+2Cl-
二、试剂与仪器
仪器：
1．721型分光光度计
2．50mL容量瓶8个,100mL1个,500mL1个
3．移液管：2 mL1支，10 mL1支
4．刻度吸管：10mL、5mL、1mL各1支
试剂：
1．铁标准储备溶液100ug/mL：1000 mL（准确称取0.4317g铁盐NH4Fe
（SO4）212H2O置于烧杯中，加入3moL/LHCI20mL和30ml水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
)
2．铁标准使用液10ug/mL：用移液管移取上述铁标准储备液10.00 mL，置于100 mL容量瓶中，加入3moL/LHCI2.0mL和少量水，然后加水稀释至刻度，摇匀。
3．HCI3moL/L：100mL
4．盐酸羟胺100g/L（新鲜配制）：100mL
5．邻二氮菲溶液1.5g/L（新鲜配制）：200mL
6．HAc—NaAc缓冲溶液（pH=5）500 mL：称取136gNaAc，加水使之溶解，再加入120 mL冰醋酸，加水稀释至500 mL
7．水样配制（0.4ug/mL）：取2mL100ug/mL铁标准储备溶液加水稀释至500mL
三、实验步骤
1.配置10.00ug/mL的铁标准溶液。
1．绘制吸收曲线：用吸量管吸取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、2.00ml、
4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00ml分别放入50 mL容量瓶中，加入1 mL10%盐酸羟胺溶液、2.0 mL1.5g/L邻二氮菲溶液和5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以试剂溶液为参比液，于721型分光光度计中，在440—560nm波长范围内分别测定其吸光度A 值。
当临近最大吸收波长附近时应间隔波长5—10nm测A值，其他各处可间隔波长20—40nm测定。
然后以波长为横坐标，所测A值为纵坐标，绘制吸收曲线，并找出最大吸收峰的波长。
2．标准曲线的绘制：用吸量管分别移取铁标准溶液（10ug/mL）0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL依次放入7只50mL容量瓶中，分别加入10%盐酸羟胺溶液1 mL，稍摇动，再加入0.1%邻二氮菲溶液2.0 mL及5 mL HAc—NaAc缓冲溶液，加水稀释至刻度，充分摇匀，放置5分钟，用3cm比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，选择最大测定波长为测定波长，依次测A 值。
以铁的质量浓度为横坐标，A值为纵坐标，绘制标准曲线。
3．水样分析：分别加入5.00mL（或10.00mL，铁含量以在标准曲线范围内为宜）未知试样溶液，按实验步骤2的方法显色后，在最大测定波长处，用3cm
比色皿，以不加铁标准溶液的试液为参比液，平行测A值。
求其平均值，在标准曲线上查出铁的质量，计算水样中铁的质量浓度。
四、数据记录与结果计算
1、实验数据记录表
2、计算结果
3计算公式
样品中铁含量的计算
Cx=C所读取的数值×50.00/2.50（mol/L）
五、实验结论与总结
1、对测定产品项目质量作结论，根据实验结果作出判断（用数据说话）
2、实验总结：总结本次试验成功的方面，失误的操作，总结实验误差。
3、总结最佳实验条件。