抗血清的制备(实验)

4.向每管加入200ul 2%RBC悬液，此时
每管的液体总量为400ul ，血清稀释度 又增加1倍。 5.摇匀，置37 ℃ 30min。(取出试管 1500r/s 30秒)观察结果。
试管凝集操作程序(倍比稀释法)
单位：uL
管号 生理盐 水 血清 RBC 终稀释 度 1 2 3 4 5 6 7 8对照
论文式实验报告
• 三、引言(前言)引言是论文正文的开场 白
• 1、引起读者对本论文的兴趣。
• 2、为读者提供理解本论文所需的背景资 料。
论文式实验报告
• • • • • • 四、材料与方法材料 1、实验对象 2、实验材料 3、实验分组 4、实验过程和方法 6、数据处理等内容。
论文式实验报告
• 五、结果： • 结果是实验研究成果的结晶
论文式实验报告
• • • • 六、讨论 1.1 1.2 1.3 对实验结果解释和评价
论文式实验报告
• 七、参考文献
期刊：著者．文章名．刊物名称，卷或
年(期)：文章的起讫页码
书籍：编著者．书名．版本．出版地：
出版者，年份
一、颗粒性抗原的制备 （2%~5%RBC的制备）
• （1）静脉采血2-3ml，注入抗凝管中， 轻轻混匀。 • （2）洗涤RBC 将上述抗凝血移至 10ml试管中，加入NS 6-7ml，混匀， 2500r/min离心5min,去上清。重复上 述操作三次，最后一次去上清后，将红 细胞配制成2%~5%的RBC悬液。
• “4+”很强，全部RBC凝集，凝集块全部沉 于 管底，液体澄清。 • “3+”强，RBC大部分凝集并沉于管底，液 体稍混浊。 • “2+”中等强度，RBC大约一半凝集，液体 较混浊。 • “+”弱，仅少量RBC凝集，液体明显混浊。 • “--”不凝集，液体混浊与对照管相同。 • 只要待测血清管出现“2+”以上的凝集现象， 即可判断为反应阳性；以出现“2+”凝集的 最大稀释度为待测血清的抗体效价。
200
200 200 1/4
200
200 200 1/8
200
200 200 1/16
200
200 200 1/32
200
200 200 1/64
200
200 200 1/128
200
200 200 1/256
200
弃去
200 --
[结果判断]
• 选择适当的光暗对比背景，先不要振摇，观 察管底凝集物的范围和上清液的浊度。然后 轻轻摇动试管，注意观察凝集颗粒的大小、 均匀度等。每一试管的观察，都应与对照管 进行比较。盐水对照管诮无凝集现象，轻轻 摇动试管则RBC分散成均匀混浊；而凝集块 则沉于管底，轻摇时不易散开，凝集程度通 常以“+”表示：
4.向每管加入200ul 2%RBC悬液，此时 每管的液体总量为400ul ，血清稀释度 又增加1倍。 5.摇匀，置37 ℃ 30min。观察结果。
溶血反应操作程序(倍比稀释法)
管号 生理 盐水
血清
单位：uL
7 8对照
1
2
3来自百度文库
4
5
6
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
200
• 每个组交一份实验方案（3-4个同学一组）
论文式实验报告
• 一、题目的选择 • 1、准确、具体、简洁、醒目，使人一目 了然，引起重视 • 2、作者与单位(班级)，并注明所在班级 和指导教师姓名。 • 3、摘要和关键词 摘要是对论文主要内 容和观点的概括
论文式实验报告
• 二、关键词 • 又称主题词或索引词，一篇论著(论文) 一般选用2～5个关键词
1.取洁净小试管8支，排列于试管架 上，依次编号。
2.向各管中加入生理盐水200ul。
3.向第一支试管中加入A管血清200ul，充分 混匀，吸出200ul放入第二管，混匀后取出 200ul加入第三管中，如此类推直至第七管， 混匀后取出200ul弃去。第八管不加血清， 为生理盐水对照管。至此，第1~7管的血清 稀释度分别为：1：2，1：4，1：8……1： 128。这种稀释方法称为连续倍比稀释法， 为免疫试验中常用的稀释方法。
试验有何不同？
综 合 性
实
验
免疫血清的制备
刺激机体
• 原理：抗原
刺激机体
产生
抗体
抗 血 清 制 备 的 基 本 流 程
选择合适的抗原 分离纯化抗原 选择免疫动物 确定免疫方案和程序 免疫动物 采血分离血清
抗血清的纯化与鉴定
设计实验方案的设计
• • • • • • 1.设计本实验的理由（实验目的）。 2.实验方案设计。 3. 可行性（理论、人员、实验条件等）。 4.创新性。 5.本实验要解决的主要问题。 6.预期目标。
200
200
200
200
弃去
RBC
200
200
200
200
200
200
200
200
终稀 释度
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64 1/128 1/256
--
观察结果时，应先观察对照管结果是
否正确。对照管应不溶血，在对照管结果
全部正确前提下观察待测血清管的结果，
以出现完全溶血作为抗体的效价。
思考题 • 溶血反应与补体结合
溶血试验
实验原理
• 溶血反应是指补体参与的抗体 致红细胞的溶解反应.
• 参与反应的成分有红细胞、抗红
细胞抗体，也称溶血素、补体。
溶血反应实验过程
1.取洁净小试管8支，排列于试管架 上，依次编号。
2.向各管中加入生理盐水200ul。
3.向第一支试管中加入血清200ul，充分混匀， 吸出200ul放入第二管，混匀后取出200ul 加入第三管中，如此类推直至第七管，混匀 后取出200ul弃去。第八管不加血清，为生 理盐水对照管。至此，第1~7管的血清稀释 度分别为：1：2，1：4，1：8……1： 128。这种稀释方法称为连续倍比稀释法， 为免疫试验中常用的稀释方法。
• 4、取两支小试管并以A、B标记之，将上述
血清一半加入A管，另一半加入B管。将A
管置于56℃水浴箱30分钟（灭活补体）。
• 5、抗血清效价的鉴定。 • 凝集试验和溶血反应
凝集反应
实验原理
指颗粒性抗原(RBC)与相应抗体特异结 合，在适当电解质存在下，形成肉眼可 见的凝集现象。
试管凝集试验过程
• 2、取上述RBC悬液1ml免疫家 兔。免疫部位：静脉、皮内、皮 下等。每只兔子免疫8~10点， 每点0.1ml左右。每隔2~4天免 疫一次。
1班免疫时间表
每隔2天免疫一次
2班免疫时间表
每隔3天免疫一次
3班免疫时间表
每隔4天免疫一次
• 3、心脏采血10ml，凝固后，分离血清 （2000转/min,5分钟)。