电化学发光免疫分析方法及其应用

合集下载

电化学发光免疫分析法-精品文档

电化学发光免疫分析法
Electro-Chemiluminescence Immunoassay (ECLI )
免疫分析法发光和化学发光化学发光免疫分析法电化学发光电化学发光免疫分析法
免疫分析
基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段；免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。
化学发光是指在某些特殊的化学反应中，反应的中间体或产物由于吸收了反应释放的化学能而处于电子激发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。
化学发光反应包括两个关键步骤，即化学激发和发光。
化学发光反应能级图
化学发光分析
根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为化学发光分析。
免疫分析法发光和化学发光化学发光免疫分析法电化学发光电化学发光免疫分析法
电致化学发光（ECL)
电致化学发光 (ECL) 是通过在电极上施加一定波形的电压或电流信号进行电解反应的产物之间或与体系中共存组分反应产生化学发光的现象。
电致化学发光（ECL)
ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。因此ECL反应易精确控制，具有灵活性。
电化学发光原理图
T P A T P A R u ( b p y ) R u ( b p y )
基态
3 + 3
● +
●
激发态
* R u ( b p y ) 3
2 + 3
不稳定
光子 ( 6 2 0 n m )

化学发光免疫分析技术原理简介

化学发光免疫分析技术原理简介20 世纪60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。

1977 年Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合，创建了化学发光免疫分析法，保留了化学发光的高度灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。

近年来对技术与仪器的不断改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测方法。

1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一些新的特点。

这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。

一、化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术，既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。

在CLIA中，主要有两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。

免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺( luminol) 、异鲁米诺(isolu-minol) 、金刚烷( AMPPD) 及吖啶酯( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子，随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。

将发光物质直接标记于抗原(称为化学发光免疫分析)或抗体上(称为免疫化学发光分析) ，经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速稳定的发光，其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。

亦可将氧化剂(如碱性磷酸酶等)或催化剂标记于抗原或抗体上，当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物，再与发光底物反应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。

发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA 在内的传统检测方法，检测范围宽，测试时间短，仅需30 - 60min 即可。

试剂货架寿命长，稳定性好，具有大规模自动化测试的功能。

这项技术发展很快，已有许多厂商生产各具特色的测定仪器与配套试剂。

化学发光免疫分析技术

T4降低： ⑴见于甲状腺功效减退病人，轻型甲减、亚临床甲减改变较T3 显著； ⑵缺碘性甲状腺肿可见T4降低或在正常低限，而T3正常； ⑶ 肾病综合征、肝功效衰竭、遗传性TBG缺点症、肢端肥大症、重症全身性疾病状态等；⑷以及应用糖皮质激素、雄激素、生长激素、苯妥英钠等药品
化学发光免疫分析技术
第31页
化学发光免疫分析技术
第4页
是当前世界公认先进标识免疫测定技术，化学发光免
疫分析技术含有高度准确性和特异性，成为检验方法中最为主要技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病诊疗主要伎俩已被广泛用于机体免疫功效、传染性疾病、内分泌功效、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功效等方面体外诊疗分析技术
第7页
• 分析方法简便快速
• 结果稳定、误差小
• 样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免去了各种可能原因（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
• 安全性好及使用期长
• 免去了使用放射性物质。到当前为止，还未发觉其危害性；试剂稳定，保留期可达一年。
T3降低： ⑴仅于较重甲状腺功效减退病人，T3和T4均下降，轻型甲减T3 不一定下降； ⑵重症全身性疾病状态或慢性病变可造成T3下降，多见于慢性肾功效不全、慢性心功效不全、糖尿病、心梗等疾病患者。
化学发光免疫分析技术
第33页
游离甲状腺素（FT4）游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）
• FT3和FT4分别为T3和T4在血清中未与蛋白结合部分，其不受血清中TBG影响，直接反应甲状腺功效状态，其敏感性和特异性均高于T3和T4
化学发光免疫分析技术
第15页
㈠辣根过氧化物酶标识化学发光免疫分析
该分析系统采取辣根过氧化物酶（HRP）标识抗体(或抗原)，在与反应体系中待测标本和固相载体发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶（HRP）标识抗体复合物，这时加入鲁米诺发光剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。

罗氏电化学发光免疫分析(精)

罗氏电化学发光免疫剖析技术是罗氏企业开发的,但全自动机械制造却由日本的日立企业肩负,所以仪器上还有Hitachi的标记。

这个仪器让大家惊讶的一大原由就在于向来在实验室研究的电致化学发光竟然已经真实地家产化了,此中我们向来没法解决的诸多问题(特别是重现性均已获得解答,看来罗氏确实花了许多心血开发这款仪器。

罗氏电化学发光免疫剖析技术的性能特色——创新的技术,独出心裁一、最初进的检测原理电化学发光免疫测定,是当前最初进的标记免疫测定技术,是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定此后的新一代标记免疫测定技术,拥有敏感、快速和稳固的特色,在固相标记免疫测定中技术上居当先地位。

电化学发光(ECL是一种在电极表面由电化学引起的特异性化学发光反响,实质上是电化学和化学发光两个过程的完满联合。

电化学发光与一般化学发光的主要差别在于前者是电启动发光反响,循环及多次发光,后者是经过化合物混淆启动发光反响,是单次瞬时发光。

所以ECL反响易精准控制,重复性极好。

电化学发光免疫测定是电化学发光(ECL和免疫测定相联合的产物,直接以[Ru(bpy3]2+标记抗体,反响时标记物直接发光。

且[Ru(bpy3]2+在电极表面的反响过程能够循环往复进行,产生很多光子,使光信号得以加强。

二、专利的包被技术链霉亲和素(streptoavidin,SA和生物素(biotin,B是拥有很强的非共价互相作用的一对化合物,特异性强且联合密切。

一分子SA可与四分子B相联合,增大了抗体联合量,达到放大成效。

在ECL的试剂中,SA经过特别的蛋白联合物平均坚固地包被在磁性微粒上,形成通用的能与B联合的固相载体,另一试剂为活化的B衍生物化合的抗原或抗体。

两种试剂混淆时,抗原或抗体即包被在磁性微粒上。

三、独到的载体ECL中采纳的固相载体是带有磁性的直径约2.8m的聚苯乙烯微粒。

其特色是反响面踊跃大,比板式扩大20-30倍,使反响在近乎液相中进行,反响速度大大加速,利用氧化铁的磁性,使用电磁场分别联合态和游离态,方便快速,实现了精准的全自动化。

电化学发光免疫分析

电化学发光免疫分析是一种在电极表面由电化学引发的异性化学发光反应，是电化学和化学
发光两个过程的完美结合。

电化学发光免疫测定是电化学发光和免疫测定相结合的产物，是
目前非常先进的标记免疫测定技术。

电化学发光技术主要技术：
1. 三联吡啶钌标记技术；
（1）循环使用，不会被消耗，电极表面的氧化还原反应循环进行，测定信号无限循环放大，检测灵敏度大大提高
（2）其盐是很稳定的水溶性化合物，试剂的稳定性好，效期长
（3）N 羟基琥珀酰胺（ NHS ）酯能与蛋白质赖氨酸的ε-氨基或核酸上的氨基形成稳定的酰
胺键，应用广泛，宽广的检测菜单
（4）惰性元素，非放射性元素，稳定
（5） [Ru(bpy)32+]和TPA ，无电压的情况非常稳定，确保反应结果的准确性
2. 链霉亲和素—生物素技术；
（1）特异性强且结合紧密，灵敏度高
（2）一分子SA可与四分子B相结合，增大了抗体结合量，灵敏度高
3. 磁性微粒子技术；
（1）反应面积大，结合量增大
（2）反应在近乎液相中进行，信号均匀精确
（3）分离方便迅速，无背景干扰
4. 电启动的化学发光反应。

（1）实现了结合相和游离相的完全自动化分离
（2）彻底清洗，反应易于控制
电化学发光技术特点：试剂稳定、测量范围宽，灵敏度高、特异性优异、检测菜单丰富、准
确性好，精密度高、操作便捷；。

电化学发光免疫传感器的研究及应用现状

电化学发光免疫传感器的研究及应用现状摘要：电化学发光免疫技术是将高灵敏度的电化学发光和高特异性的免疫反应相结合的一种交叉学科研究的成果。

电化学发光主要应用在免疫系统、生物酶等方面的研究，而电化学发光免疫传感器在临床领域中有较明显的成果。

因此，本文将从电化学发光免疫传感器的研究和应用现状两个方面，对电化学发光免疫传感器进行进一步的研究，尤其在医学方面能够有更多突破，实现在更多领域中的应用。

关键词：电化学发光；免疫传感器；研究；应用现状；一、电化学发光免疫传感器的概念（一）电化学发光的概念电化学发光即电致化学发光，是一种通过在电极上施加一定电压，用来引发物质在电极表面进行电化学反应，反应产生的能量激发发光物质由基态迁移到激发态，处于激发态的物质不稳定会返回基态，在这一过程中会伴随光信号产生，产生光信号后通过光/电转换器，将光信号转换成电信号，来实现对目标物的检测。

ECL分析法不仅具有仪器简单，灵敏度高，还具有试剂用量少、时空可控性强等优点，现阶段，电化学发光技术已广泛应用于免疫分析、生物分子和其他生物分子检测中。

（二）免疫传感器的概念免疫传感器是一种将高特异性的免疫反应和高超的物理转换器结合起来的一种分析类器件。

由于免疫反应具有强的特异性，加之物理转换器的高的灵敏度，使得免疫传感器也成为一种有效检测样品的方法，受到人们的热切关注。

目前，免疫传感器也已经广泛地应用于临床医学检测等领域。

（三）电化学发光免疫传感器的概念电化学发光免疫传感器是一种将电化学发光与免疫传感器结合起来的一种具有很高免疫特性的一种装置。

利用电化学发光的高灵敏度的传感技术，再结合特异性免疫反应，最终可以达到一种对临床中微量物质进行定量的检测。

二、电化学发光免疫传感器的研究及应用电化学发光免疫传感器是将抗体或者抗原通过一定方式负载在电极上作为识别探针，当抗体与抗原发生特异性反应后，其产生的复合物与电化学发光信号之间建立一定关系，然后通过光电转换器，将光信号转换成电信号，从而对目标物进行检测。

谈一谈化学发光免疫分析技术在临床检验中的作用

谈一谈化学发光免疫分析技术在临床检验中的作用发表时间：2020-09-08T14:21:18.157Z 来源：《中国医学人文》2020年16期作者：色郎康珠[导读] 化学发光免疫分析（CLLA）属于一个新型的标记免疫分析的技术化学发光免疫分析（CLLA）属于一个新型的标记免疫分析的技术，主要是将具有灵敏度特别高的化学发光测定技术和高特异性的免疫反应相结合而创建的检测。

微量抗原或抗体，其具有非常灵敏的特点，还包括其检测内容比较细致、操作容易等等一些优良特点，所以被广泛的使用在临床的检验当中。

而且化学发光免疫分析能够帮助患者对于其所患的疾病以及身体病理特征进行更加及时更加有效的判断，这为临床的诊断提供了科学的参考依据。

基于此，本文结合实际生活中的相关治疗，对于化学发光免疫分析的相关技术以及具体的应用进行以下相关的分析和探讨，希望对大家能够有所帮助。

化学发光免疫技术的科学原理化学发光免疫技术的主要原理是通过化学发光剂，直接对患者的抗体或者是抗原进行基本的标记。

待抗原体、磁性颗粒性出现任何的反应之后，能够经过磁场的作用将游离和结合状态之下的化学发光剂进行快速的分离，进而能够将化学发光剂添加到已经结合的状态当中去，并且进行更加快速的反应。

同时，在这样的状态下进行监测，可以将发光度变小，测量的方式一定要通过定性或者定量的方式进行检测。

化学发光剂免疫技术的基本类型1、酶催化化学发光的免疫分析酶催化化学发光免疫技术主要是在抗体或者抗原在检测的标本中发生反应的时候，医生通过发光的酶来当做基本的标记物。

2、直接标记发光物质的免疫分析直接标记的发光剂免疫技术主要是通过更加直接的方式直接通过吖啶酯对抗体进行标记，等到抗体出现符合复合反应的现象以后，从中加入NaOH以及带有双氧水的氧化剂之后会出现碱性的化学性质，同时还会呈现出发光的特殊现象。

3、电化学发光的免疫分析电化学发光的免疫分析类型主要是分析了化学反应的光以及电化学，依托于三丙胺，并且将三丙胺当做电子的供体，通过使用三联吡啶钌对抗体或者抗原进行基本的标记，通过电场的基本作用发生电子转移的现象，同时还会出现发光的特殊反应。

电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用分析

电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用分析苏东梅【摘要】目的：探讨电化学发光免疫分析及在临床检验中的应用效果。

方法指定一名具有专业知识及丰富经验的临床实验室检验人员分别利用ECLIA、ELISA等方法完成100例乙肝患者血样中乙型肝炎病毒核心抗体（抗-HBc）检验。

记录两种方法检测抗-HBc阳性率，给予统计学分析后得出结论。

结果ECLIA法检测100例乙肝患者血样中抗-HBc阳性率高达98.00％，显著高于ELISA法检测阳性率81.00％，对比结果具有统计学意义（P＜0.05）。

结论电化学发光免疫分析方法可显著提高临床检验结果准确性，为临床医生提供真实可靠的诊断依据，使患者及时确诊病情并获得正确治疗，保障其临床疗效及预后。

%Objective To explore the electrochemiluminescence immunoassay and the application effect in clinical examination. Methods A clinical laboratory staff with professional knowledge and rich experience was specified, using ECLIA, ELISA respectively(anti-HBc)test completed 100 cases of hepatitis B blood samples of patients with hepatitis B virus core antibody. The positive rate of anti–HBc of the two methods was detected and record, gives statistical analysis conclusion. Results The positive rate of anti-HBc ECLIA was up to 98%in 100 cases of hepatitis B patients, it was significantly higher than those of detected by ELISA(81%), comparison of the results was statistical significance(P<0.05). Conclusion Electrochemiluminescence immunoassay method can significantly improve the accuracy of clinical test results, provide the reliable basis for the diagnosis for clinicians, enable patients totimely diagnose the disease and get the correct treatment, ensure the therapeutic effect and prognosis.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2014(000)023【总页数】3页(P102-103,156)【关键词】电化学发光免疫分析;临床检验;应用效果【作者】苏东梅【作者单位】广东省茂名市中医院检验科，广东茂名525000【正文语种】中文【中图分类】R446.6电化学发光免疫分析（electro-chemiluminescence immunoassay，ECLIA）是近年来于临床推广使用的新型标记免疫测定技术，特点为检测速度快、易于控制、灵敏度较高等[1-3]。

电化学发光免疫分析方法及其在医学中的应用研究

电化学发光免疫分析方法及其在医学中的应用研究目的：分析电化学发光免疫分析的方法和医学中的应用情况。

方法：对AFP 含量进行电化学发光免疫分析与放射免疫分析，做出线性评价、精密度评价与回收实验，并进行对比，运用两种方法对60例患者血清标本的AFP含量进行平行检测，然后进行相关性分析。

结果：电化学发光免疫分析法的重复率明显优于放射免疫分析。

电化学发光免疫分析法的回收率明显优于放射免疫分析。

数据差异具有统计学意义（P＜0.05）。

结论：电化学发光免疫检测血清甲胎蛋白的精确度与准确性都要优于放射免疫分析法，值得临床推广与运用。

标签：电化学发光免疫；临床运用；放射免疫；检验电化学发光免疫分析出现于自20世纪90年代，是一类化学发光免疫分析技术，集纳米微粒子技术、电子发光技术、抗原-抗体免疫反应、生物素-亲和素系统以及电磁场分离整合设计的自动化标记免疫分析系统，结合了电化学发光与免疫测定，具有化学发光与电化学两个过程，磁珠微球当做固相载体，发光物质为三氯联吡啶钌[Ru（bpy）3]2+，电极进行激发，三丙胺参与循环反应，稳定快速的发光，检测的结果可靠、稳定，具有的准确度与精密度要高于酶联免疫法[1]。

发光检测灵敏度高，不具有人为操作误差的影响。

1材料与方法1.1材料选取60例患者血清标本，18份标本血清甲胎蛋白浓度正常，42份标本血清甲胎蛋白的浓度超出正常的范围。

通过Roche Elecsys2010全自动化学发光免疫分析仪器与SN-697型自动双探头放射免疫γ计数器进行检验。

1.2方法放射免疫分析法运用甲胎蛋白宽范围放射免疫分析测定盒，电化学发光免疫分析运用的检测试剂为Elecsys2010配套AFP定量检测试剂盒，按照试剂说明书进行检测操作。

2结果2.1 通过NCCLS精密度评价方案，运用电化学发光免疫分析与放射免疫分析法对高浓度、中浓度、低浓度的血清甲胎蛋白质控血清作重复性实验。

实验结果显示，电化学发光免疫分析与放射免疫分析法都具有较好的重复性，而电化学发光免疫分析的CV值对比放射免疫分析法相对较小。

电化学发光免疫分析法

化学发光免疫分析
Chemiluminescence immunoassay (CLIA)
• 化学发光分析----根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，成为化学发光分析。
• 化学发光免疫分析----是集灵敏的化学发光技术和特异的抗原抗体免疫测定于一体的检测技术。
• 化学发光免疫分析的特点：灵敏度高、特异性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。
化学发光免疫技术的类型
按发光剂不同分为
1. 发光酶免疫测定（Chemiluminescence enzyme immunpassay CLEIA）
2. 化学发光免疫测定技术（Chemiluminescence immunoassay CLIA）
活性。
酶1,促酶反促应反的应发的光发底物光底物
• 是指经酶的降解作用而发出光的一类发光底物 • CLEIA中常用的酶有HRP和AP • HRP的发光底物有鲁米诺、对一羟基苯乙酸 • AP的发光底物有AMPPD、4—MUP（荧光底物）特点：可做标记物，也可以做过氧化物酶的底物
1.鲁鲁米米诺诺
对一羟基苯乙酸（HPA）
进行电解反应的产物之间或与体系中共存组分反应产生化学发光的现象. 它包含了电化学和化学发光两个过程.
ECL和CL的区别在于:ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应,因此ECL反应便于精确控制, 具有灵活性.
电化学发光剂
三联吡啶钌的特点
ECL分析中采用三联吡啶钌作为标记物，其活化衍生物是三联吡啶钌+N羟基琥珀酸胺脂（NHS），该衍生物具有水溶性，且高度稳定，保证电化学发光反应的高效和稳定，而且避免了本底噪声的干扰。

化学发光免疫分析技术在疾病研究中的应用

化学发光免疫分析技术在疾病研究中的应用魏宏陈秋勇吴学敏刘玉涛王隆柏陈如敬严山周伦江！(福建省农业科学院畜牧兽医研究所/福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福州350013)摘要化学发光免疫分析技术(CLIA "是一种具有极高敏感度和特异性的新型检测分析技术，在临床、食品、环境、药物检测及动物疫病诊断等领域均有相关研究％本文主要收集近年来CLIA 在疾病研究方面的相关报道，希望能够进一步开展CLIA 在医学及兽医学领域的研究及应用%关键词化学发光免疫分析技术医学兽医学兽药残留人畜共患病文献标识码：A文章编号：1003-4331(2020)06-0027-04Application of chemiluminescence immunoassay technology in disease researchWei Hong Chen Qiuyong Wu Xuemin Liu Yutao Wang Longbai Chen Rujing Yan Shan Zhou Lunjiang **基金项目：福建省科学技术厅省属公益基本科研专项(2017R1023 -9)、农业科技创新联盟专项(CXLM202006)资助 %作者简介：魏宏(1978-),女，主要从事动物传染病研究％*通信作者：周伦江，研究员% E-mail:****************%(Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine , Fujian Academy of Agricultural Science/Fujian Animal Diseases Control Technology Development Center ,Fuzhou 350013)Abstract Chemiluminescence immunoassay (ClLIA) is a new detection and analysis technology with extremely high sensitivity and specificity. It has been studied in clinical, food, environmental, drug testing and animal disease diagnosis. This article mainly collects relevant reports on CLIA in disease research in recent years, and hope to further carry out research and application of CLIA in thefields of medicine and veterinary medicine.Key words Chemiluminescence immunoassay Medical Veterinary Veterinary residue Zoonosis化学发光免疫分析技术(Chemiluminescenceimmunoassay ,CLIA )是由 Halman 等⑴在 1977 年提出的，CLIA 结合了高敏感性的化学发光反应系统和高特异性的免疫反应系统，是当前应用最为广泛的一种分析技术方法叫CLIA 以化学发光剂为示踪物直接标记抗原或抗体进行免疫测定$目前化学发光免疫分析技术主要可以分为化学发光酶免疫分析(Chemiluminescence enzyme immunoassay , CLEIA ) %化学发光标记免疫分析(Chemiluminescence label ing , CLL "及电化学发光免疫分析(electrochemilumi - nescence ,ECL )三种类型叫CLIA 具有高灵敏度、选择性好、检测范围广、反应速度快、分析时间短、操作简单、可实现自动化等特点铁40年来CLIA 飞速发展，已经在生命科学研究、药物分析、医学临床研究、食品分析检测、动物医学和环境治理等研究领域得到了广泛的应用，取得了很多重要的研究成果叫化学发光免疫分析技术的基本原理是利用化学发光反应的发光剂或催化剂等示踪物标记抗原或抗体，被标记的抗原或抗体与被检测物发生一系列的免疫反应，经过离心、洗涤等理化步骤后,通过测定发光强度的形式来对待测物进行定量Y6Z $ CLIA 是化学发光法和免疫分析法的结合产物, 以其高灵敏度和高特异性的特点不断丰富着人类对科学技术及研究领域的新认识$本文现收集近年来关于CLIA 相关研究的成果, 对该技术的研究及应用进展进行分析，希望在这人类科学技术飞速发展的时期，能够促使CLIA 在疾病研究领域有更好的发展前景，帮助解决更多的问题$1 CLIA 在医学上的应用乙肝病毒(HBV "具有较强的传染性，危害较大，因此对乙肝患者的检出准确率也要求较高。

电化学发光免疫分析技术与临床应用

合的产物，能对各种物质进行快速分析，是目前最先进的标记免疫测定技术，该系统是通过在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，由电启动发光过程，在电极表面循环进行，产生大量光子，
行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强
度与［ｕ（ｐ）的浓度呈线性关系，可测出待Ｒｂｙ３］
配体的含量。电化学发光免疫分析采用链霉亲和素一生物素包被技术，这是一种新型生物反应放大系统。以直径为２８ｌｎ的磁性球作为载体，反应面积比板式．ａ扩大了２３０～０倍，利用生物素一链霉素亲和素的牢固结合力，免疫放大能力和反应系统中的磁分离功能，使免疫反应在微球表面快速进行。并且，电
分析，能为临床准确，及时的诊断疾病，监测治疗效果显得十分必要。由于普通的细菌培养方法往往存在培养时问过长等诸多缺陷，因此，现在很多实验室都在寻求快速、灵敏的检测方法。研究表明用
放大核酸序列分析的方法对食物中沙门杆菌进行检测，结果表明，应用ＥＬＡ技术在１就可得ＣＩ８ｈ后
电化学活性底物在反应中引起的光子发射。含三丙
发光过程产生许多光子，使光信号得以增强。因此，其检测灵敏度大为提高，可达到检测浓度小于１ｍｌＬ的超微量物质，线性范围也可达６个数量ｏＰ／

化学发光免疫分析技术及其应用研究进展蒋恩彬

化学发光免疫分析技术及其应用研究进展蒋恩彬摘要]本文主要对化学发光免疫分析技术及其应用研究进展进行了分析，首先对化学发光免疫分析技术的相关概念进行了分析；然后从临床检验和兽医学应用化学发光免疫分析技术进行了分析；最后对化学发光免疫分析技术进行了新进展研究，希望对有关人士有所帮助。

[关键词]化学发光免疫分析、临床检验、兽医学一、前言由于化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、适用范围广泛等特点，所以受到了人们的认可，在医学、药品等众多领域得到广泛的应用。

同时化学发光免疫分析主要利用了化学发光测定技术和免疫反应，化学发光测定技术传统的免疫分析，需要的培育时间比较长。

二、化学发光免疫技术的工作原理1、检测器的检测原理化学反应的检测过程中，一些化学基团在处于被氧化状态之后，会形成一个激发态，在回归至基态的过程中，会发射出光子，实质上就是免疫反应与化学反应有机结合在一起之后形成的一种分析方法，即微量倍增技术。

微量倍增技术在临床检验中的应用，主要是通过粒径比较小的颗粒磁粉增大复合物表面的面积，提升复合物的吸附量，加强表面能，以此加快反应速度。

2、基本原理化学发光免疫技术，反应过程主要包括两类，即化学发光反应与免疫反应。

化学发光免疫技术的工作原理，主要是在抗体或者抗原上对化学发光物质或者其它一系列处于发光状态的酶标记物进行标记，使其产生免疫反应，使抗体与抗原能够特异性结合，产生一种复合物，然后在该复合物中加入发光底物或者氧化剂，使复合物可以发光。

根据待测物质具备的浓度与仪器监测中获取的发光强度之间存在的线性关系，实现浓度的合理测定。

三、化学发光免疫分析的分类化学发光免疫分析根据应用于免疫分析体系中的方式不同，可以分为以下三类：1、直接标记发光物质的免疫分析这种分析方式是用吖啶酯直接标记抗体，作为抗原，然后与待测标本中相应抗体发生免疫反应，就会形成固相包被抗体一待测抗原一吖啶酯标记抗体复合物，到这一步后再加入双氧水氧化剂，这样环境就会呈碱性，吖啶酯就会在不需要催化剂的情况下分解、发光。

电化学发光免疫分析技术

电化学发光免疫分析
测量池中3个反应步骤
结合相/游离相的分离 ECL反应释放微粒子清洗测量池
电化学发光免疫分析测量池示意图
电化学发光免疫分析
结合相/游离相的分离
➢吸入包被了抗原抗体复合物的微粒子
➢ 激活磁铁（为避免干扰，测定开始前磁铁不被激活）
➢通过电极上的磁铁捕获抗原抗体复合物
➢ 吸入TPA-ProCell冲洗工作电极上的微粒
电化学发光免疫分析特点
高灵敏度，检测下限达1pmol 线形范围宽，达7个数量级快速，出第一个结果的时间仅需数分钟应用范围广，可以同样的灵敏度和线性范围检测各种物质，包括DNA 试剂稳定，无污染和衰变问题自动化程度高
➢ 发射出的光在短时间内 (0.20-0.60 sec.)达到峰值
➢ 光电倍增管检测到ECL信号并转换成电子信号
➢ 相应的信号值用于计算出结果
电化学发光免疫分析
释放微粒子与清洗
➢测量池中吸入清洗液
➢ 将微粒子从电极上冲洗掉
➢ 吸入TPA-ProCell冲洗测量池表面
➢ 测量池可进行下一次的测定
电化学发光免疫分析技术
电化学发光免疫分析技术
电化学发光免疫分析原理电化学发光免疫分析过程电化学发光免疫分析特点
电化学发光免疫分析原理
电化学发光免疫分析（ellectrochemiluminescence immunoassay,ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记
抗体（抗原），以三丙胺（TPA）为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应
电化学发光免疫分析
反应时相－发光
ECL反应
➢ 钌复合物也释放一个电子，氧化形成激发态的3 价的三联吡啶钌，接着和激发态的TPA自由基发生化学发光反应,发射一个波长620nm的光子。

电化学发光免疫测定及其临床应用

电化学发光免疫测定及其临床应用罗氏诊断.巴塞尔.瑞士易生物 w w w .e b i o e .c o m目录第一篇电化学发光免疫测定一、化学发光反应（一）氨基苯二酰肼类参加的CL 反应（二）口丫啶酯参加的CL 反应（三）Dioxatene 参加的CL 反应（四）电化学发光反应二、电化学发光免疫测定（一）试管内的化学反应（二）流动池中的电化学发光反应三、Elecsys 系列全自动电化学发光免疫分析系统（一）Elecsys1010全自动免疫分析仪（二）Elecsys2010全自动免疫分析仪（三）E170免疫分析模块第二篇临床应用第三篇检测项目一、甲状腺功能二、激素三、肿瘤标志四、心肌标志五、骨标志六、感染性疾病七、贫血八、糖尿病九、过敏反应十、药物易生物 w w w .e b i o e .c o m第一篇电化学发光免疫测定1959年Berson 和Yalow 建立了放射免疫分析方法（RIA ），大大提高了免疫测定的敏感度。

这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域，应用于激素、蛋白质、感染性疾病的抗原和抗体以及药物等的微量测定。

由于RIA 有放射性污染等缺点，不少学者进行了新标记物的探索。

1971年Engvall 和Perlman 建立了固相酶免疫测定方法（ELISA ），这种非放射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。

但是，因ELISA 最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性达不到RIA 水平。

化学发光免疫测定（CLIA ）出现于20世纪90年代。

由于最后测定的是光子的量，不但对检测者无害，其敏感度和精密度均优于RIA ，而且试剂稳定，并可进行全自动分析，是理想的标记免疫测定方法。

1996年发展的电化学发光免疫测定（ECLIA ）在发光反应中加入了电化学反应，并结合各种免疫测定的先进技术，是目前最先进的化学发光免疫测定系统。

电化学发光免疫分析的原理

电化学发光免疫分析的原理
电化学发光免疫分析技术（Electrochemiluminescence Immunoassay，简称ECLIA）是一种新的生物分析技术，它利用生物反应物和特定的抗体来检测分子，从而对检测物有着准确的测定。

ECLIA的基本原理是，将待测物和夹带特异性抗体的过滤管体中的反应液一起放入体外，然后再加入电催化剂以及分子活性物质（如碳酸氢钠），在外部加入电场来促进反应物和抗体之间的免疫反应，即反应物与抗体结合后发出电化学发光。

与其他免疫分析方法相比，ECLIA具有更高的灵敏度和准确度。

ECLIA的优势有：（1）具有极佳的灵敏度（亚拉芬斯），可以检测出极低浓度的免疫物质；（2）反应过程十分快捷，几十秒内即可完成；（3）测量过程简便，不需要复杂的仪器和设备；（4）结果可以实时观察和记录，减少了人工把柄；（5）可以实现多重反应，可以同时检测多种免疫物质；（6）可以宽泛应用于血液、尿液、细胞液等多种样本中的病毒抗体的检测，对于应用研究和检验检测有重要的作用。

以上就是ECLIA技术的原理和优势，它在生物学研究、病毒检测以及其他方面都非常有用，受到了广泛应用。

随着实验技术的发展，ECLIA技术被不断改进和完善，也会被用于更多的生物医学检测工作中。

免疫电化学发光法

免疫电化学发光法
免疫电化学发光法（Immuno-electrochemiluminescence, ECL）是一种用于检测生物分子或生物活性的方法。

该方法结合了免疫分析和电化学发光技术。

免疫电化学发光法的原理是利用免疫反应的特异性，将待检测的生物分子与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

然后，该复合物被固定在电极表面，可以是金电极或碳纳米管等。

接下来，通过施加恒定的电压或电流，引发电化学反应，从而产生特定的荧光信号。

这种荧光信号是通过化学发光产生的，即在电极上发生的电化学反应会导致荧光物质的生成，进而产生荧光信号。

这种发光反应可以通过电化学放大机制，使得信号更加灵敏和稳定。

免疫电化学发光法具有高灵敏度、高选择性、广泛的动态范围和快速的分析速度等优点，因此在生物医学、生物传感器、基因检测等领域得到了广泛应用。

相关主题

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

２ＥＣＬＩＡ的类型根据电化学发光剂在免疫反应步骤中的作用部位不同，ＥＣＬＩＡ可分为底物电化学发光免疫反应和标记物电化学发光免疫反应两种。前者的抗原抗体免疫反应操作步骤与酶免疫测定基本相同，仅在最后一步将酶反应底物改为电化学发光剂来检测电化学发光信号。常用的辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶的发，２二氧杂光底物分别为鲁米诺及其衍生物系列和１环乙烷磷酸酶及其衍生物系列
［１］１９２９年电致化学发光现象由Ｈａｒｖｅｙ发现。２０
免疫反应系统和电化学发光系统。免疫反应系统主要是抗原抗体结合形成免疫复合物，而电化学发光系统是利用电化学发光物质经氧化剂氧化形成激发态中间体，这种中间体不稳定，在其返回基态时，会发射出光子，其产率可以用发光信号检测仪接收测［４］检测量。以钌标记物电化学发光免疫分析为例，中以标记有链霉亲和素直径几微米的磁珠作为固相载体，与生物素标记抗原或抗体结合后可以捕获检测样本中的抗体或抗原，再与反应体系中钌分子标记的抗抗体或抗体结合，形成的免疫复合体在外磁场的作用下，借助磁珠的磁力吸附完成固液相分离，截留特异性抗原抗体复合体，洗涤除去多余或游离的抗体或抗原。当反应体系中加入电子供体三丙胺后，在电场作用下，钌分子和三丙胺在电极表面分别被氧化成三价钌和带阳离子的自由基三丙胺。后者很不稳定，迅速失去一个质子形成强还原剂自由基三丙胺，将三价钌分子还原成激发态的二价钌，其自身则被氧化成二丙胺和丙醛。接着激发态的钌分子２０ｎｍ的衰减成基态钌分子，同时放出一个波长为６［３，５］光子。这一过程在电极表面以每毫秒几十万次的速度循环进行，产生的光子经光电倍增管检测光强度，从而测出待检抗体或抗原的含量。
［３］ＥＣＬＩＡ），它是一种在电极表面由电化学引发的特
异性化学发光反应，比通过化合物简单混合启动的化学发光反应更易精确控制。本文就近年来该方法的研究进展及其在医学领域的应用作一综述。１ＥＣＬＩＡ的基本原理ＥＣＬＩＡ是利用电化学发光剂标记的抗原或抗体与待测物经过一系列的免疫反应和洗涤等理化步骤，最后用光学仪器测量免疫反应前后电化学发光信号强度的改变，从而对抗原或抗体物质进行定量分析的一种方法。该方法主要包含了两个部分，即
１２］断的敏感性。黄琛等［分别用蛋白质芯片法和
。这一类型
的ＥＣＬＩＡ既避免了放射性核素的半衰期短及放射性危害，又克服了酶标记的不稳定性。它集电化学发光、生物素亲和素、磁微粒技术和免疫分析于一体，是继放射免疫分析、荧光免疫分析、酶免疫分析和化学发光免疫分析后的新一代免疫标记技术。同其他免疫反应一样，标记物电化学免疫分析反应也有直接法、双抗体夹心法和竞争法等３种主要方式。３ＥＣＬＩＡ的应用３．１细菌、病毒及其毒素测定与传统的基础培养法相比，用ＥＣＬＩＡ检测肉类、家禽甚至饮用水中的细菌克服了速度慢、检出率低、结果不准确的缺点。Ｙｕ等
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３４１２２．２０１１．０２．００５基金项目：国家科技支撑计划（２００８ＢＡＩ５６Ｂ０３）作者单位：２０００２５上海，中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所，卫生部寄生虫与病原生物学重点实验室，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心
ＥｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎＧＵＯＪｉａｎ，ＣＨＥＮＪｉａｘｕ．ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰａｒａｓｉｔｅａｎｄＶｅｃｔｏｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＨｅａｌｔｈ，ＷＨＯＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｎｇＣｅｎｔｅｒｆｏｒＭａｌａｒｉａ，Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍｉａｓｉｓａｎｄ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰａｒａｓｉｔｉｃＤｉｓｅａｓｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ＳｈａｎｇｈａｉＦｉｌａｒｉａｓｉｓ２０００２５，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＣＨＥＮＪｉａｘｕ，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｊｉａｘｕ１９６２＠１６３．ｃｏｍＳｕｐｐｏｒｔｅｄｂｙＮａｔｉｏｎａｌＫｅｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲ＆ＤＰｒｏｇｒａｍ（２００８ＢＡＩ５６Ｂ０３）Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ（ＥＣＬＩＡ）ｉｓａｎｅｗｈｉｇｈｌｙｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｔｅｃｈ【ｎｏｌｏｇｙｉｎｗｈｉｃｈｎｏｒａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓａｒｅｕｓｅｄ．Ｉｔｈａｓｅｘｔｒｅｍｅｌｙｌｏｗｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔａｎｄｗｉｄｅｄｙｎａｍｉｃｒａｎｇｅａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．Ｔｈｉｓｔｅｃｈｎｉｑｕｅｈａｓｂｅｅｎｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｈｏｒｍｏｎｅｓ，ｔｕｍｏｒｍａｒｋｅｒｓａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｓ，ａｎｄｗｉｌｌｂｅａ，ｆｏｏｄａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｔｃ．．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｎｏｖｅｌｍｏｄｅｒｎｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔｏｏｌｉｎｔｈｅｆｉｅｌｄｓｏｆｍｅｄｉｃｉｎｅｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆＥＣＬＩＡｗａｓｒｅｖｉｅｗｅｄ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ；Ｂｉｏａｎａｌｙｓｉｓ；Ｔｒａｃｅｔｅｓｔ
［６］
ｇ数量级。同时检测炭疽杆菌芽孢，检出值为于ｐ１００个芽孢。在测定可溶性或颗粒抗原时，ＥＣＬＩＡ的灵敏度极高。３．２肿瘤标志物测定肿瘤标志物的检测对肿瘤早期诊断及判断预后、转归、评价疗效都具有重要意义。应用ＥＣＬＩＡ对疑似肿瘤患者进行肿瘤标志物检测，既简便、快速，有利于早期诊断，又可免除介入检查的痛苦和高昂费用。戴
世纪６０年代，伴随电子技术的迅猛发展，光电传感器与化学发光技术也得到了推动和发展，对电化学发光
２］现象的详细研究开始出现［。至２０世纪９０年代初，
电化学发光和免疫测定相结合形成了电化学发光免疫分析方法（ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，
［８］
ＥＣＬＩＡ法检测６９例肿瘤患者和６５例正常对照组血清中的糖类抗原１９９（ｃａｎｃｅｒａｎｔｉｇｅｎ，ＣＡ１９９）、糖类抗原２４２（ｃａｎｃｅｒａｎｔｉｇｅｎ，ＣＡ２４２）、甲胎蛋白（ａｌｐｈａｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＦＰ）等１２项肿瘤标志物指标，发现蛋白质芯片ＣＬＩＡ法简单、方便，而ＥＣＬＩＡ法能更精确地检法较Ｅ
２＋３［７］
３项肿瘤标志物糖类抗原１５３（ｃａｎｃｅｒａｎｔｉｇｅｎ，ＣＡ１５３）、糖类抗原１２５（ｃａｎｃｅｒａｎｔｉｇｅｎ，ＣＡ１２５）、癌胚抗原ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃａｎｔｉｇｅｎ，ＣＥＡ）的含量进行检测，结（果显示３项指标联合检测的灵敏度和特异度分别为９０．７６％和９６．８３％，优于单项检测时的７７．９４％和８９．５７％、９５．６３％和４１．１７％、３８．２３％和９３．９１％，提示用ＥＣＬＩＡ联合检测能提高乳腺癌早期诊断和鉴别诊
１１］庆福等［采用ＥＣＬＩＡ对７８例乳腺癌患者血清中的