细菌分离培养及药敏试验方法及步骤
大肠埃希氏菌的分离鉴定与药敏试验
大肠埃希氏菌的分离鉴定与药敏试验作者：张鑫来源：《当代畜禽养殖业》 2019年第2期张鑫浙江省湖州市安吉县天荒坪镇畜牧兽医站 313300摘要：大肠埃希氏菌通常被称作大肠杆菌，外文名称（学名）Escherichia coli。
它属于细菌界，变形菌门，V-变形菌纲，肠杆菌目，肠杆菌科，埃希氏菌属，大肠杆菌种。
大肠杆菌主要寄生于人和动物的大肠内，约占肠道菌的1%。
是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。
该菌常引起动物严重腹泻和败血症。
关键词：大肠埃希氏菌；分离鉴定；药敏试验近年来随着集约化养鸡业的迅速发展，大肠杆菌病的流行日趋严重，其不仅使患病的鸡群生长发育受阻，饲料转化率下降，死淘率及屠宰废弃率增加，而且种鸡及产蛋鸡的蛋品质下降，孵化率降低，以及治疗费用增加等等，给养鸡户造成了极大的经济损失。
1 大肠埃希氏菌的主要特点大肠埃希氏菌属于原核生物，具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核，有拟核。
细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
大肠埃希氏菌属于异养兼性厌氧型。
大肠埃希氏菌和人体在不致病的情况下可认为是互利共生，在致病的情况下可认为是寄生。
大肠埃希氏菌遇到伊红美蓝，菌落呈深紫色，并有金属光泽。
2 大肠埃希氏菌导致的疾病（1）鸡大肠杆菌病引起的急性败血症。
各种日龄的鸡均可发病，病鸡腹泻或呼吸困难。
剖检心脏和肝脏，表面覆盖一层容易剥离的白色纤维素膜(肝周炎、心包炎)，肉鸡大肠杆菌病还容易继发肉鸡腹水症。
（2）雏鸡脐炎。
该病一般是由大肠杆菌和其他细菌混合感染引起，主要发生于刚出壳的雏鸡，多数在出壳后2~3日内死亡。
病雏虚弱，常堆挤在一起，水样腹泻，腹部膨大，脐孔未闭合，呈蓝黑色，有刺激性恶臭味，死亡率在l0%以上。
（3）气囊炎。
病鸡表现为咳嗽和呼吸困难，呈地方性流行，病死率5%~20%，有时可达50%。
还有鸡大肠杆菌病引起的肠炎、蛋鸡输卵管炎、卵黄性腹膜炎、脑炎和全眼球炎等。
分枝杆菌分离培养和药敏试验
分枝杆菌分离培养和药敏试验引言分枝杆菌（Branchiobdella）是一类无脊椎动物寄生虫，常见于淡水环境中。
它们具有扁平的身体和分枝状的触手，因此得名。
分枝杆菌对环境条件非常敏感，因此分离培养和药敏试验对其研究具有重要意义。
分枝杆菌分离培养的方法1.样品采集：在淡水环境中选择活跃的分枝杆菌寄生体作为样品。
2.样品处理：将样品置于理化条件适宜的培养基中，如R2A培养基等。
以适宜的温度和光照条件下培养。
3.分离纯培养：利用无菌技术将分枝杆菌从其他微生物分离出来。
常用方法包括稀释涂布法、均匀涂布法等。
4.单菌种培养：将分离得到的单个分枝杆菌菌落接种到新的培养基上进行单菌种培养。
5.培养基优化：根据菌株特性，优化培养基组成、温度、光照和其他环境条件。
通过观察菌落形态、生长速度等指标，选择适宜的培养条件。
分枝杆菌药敏试验的方法1.制备药敏试验板：选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂、肉汤琼脂等。
将药物分别加入琼脂中，并制备成不同浓度的试验板。
2.培养分枝杆菌：将分枝杆菌菌液均匀涂布在药敏试验板上，培养在适宜的温度下。
3.药敏试验观察：观察菌落的生长情况和抑菌效果。
记录最小抑菌浓度（MIC）。
4.药敏结果解读：根据国际标准或相关研究的参考值，判断分枝杆菌对药物的敏感性和抗药性。
可以根据MIC值进行药物分类，如敏感、中度敏感和耐药。
5.药敏结果分析：根据实验结果，分析分枝杆菌的药物抗性特征，为临床治疗提供参考。
结论分枝杆菌分离培养和药敏试验是研究该虫寄生虫的重要手段。
合理的分离培养方法可以得到纯种菌落，为后续研究和药敏试验提供可靠的基础。
药敏试验能够判断分枝杆菌对药物的敏感性，为临床治疗提供重要参考。
参考文献： 1. Johnston, D.J. (2000). A new family of Branchiobdellidan (Annelida: Clitellata) ectosymbiontic on freshwater crayfishes: The Evansobdellidae. Proceedings of the Biological Society of Washington, 113(3): 842-850. 2. Erséus, C. (2001). Chapter 25 PhylumAnnelida: Clitellata, Branchiobdellida. In: Animal biodiversity: an outline of higher-level classification and survey of taxonomic richness (ed. by Z.Q. Zhang). pp. 281-282. 3. Erséus, C. (2005). Order Branchiobdellida. In: Annelida: Polychaeta, Myzostomida, Branchiura and Vestimentifera (ed. by J. B. Hutchings, S. P. Nimis, and C. Reish). pp. 97-100.。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验一、引言鸭疫是一种由鸭疫里默氏杆菌引起的急性传染病，主要发生在水禽中，特别是对于幼鸭来说更为致命。
鸭疫病症主要表现为高热、抑郁、呼吸急促、鸭群死亡率极高，对农业生产造成了严重的危害。
对鸭疫病原菌的分离鉴定及药敏试验成为显得尤为重要。
二、分离鉴定1. 样品采集从患有鸭疫的幼鹅体内取样，如肺、脾、肝等内脏组织进行采集。
将样品放入无菌离心管中，冷链运输至实验室。
2. 细菌分离将取样的组织进行匀浆处理，然后用无菌梳子在无菌平板上均匀涂布。
置于37℃培养箱中培养24-48小时，直至出现细菌克隆。
3. 形态特征观察观察克隆菌落的形态特征，里默氏杆菌在培养基上呈现为小、灰白色，透明且呈环形的菌落，细菌呈杆状。
4. 生理生化特性鉴定将分离的细菌进行革兰氏染色，鉴定其为革兰氏阴性菌；进行氧化酶试验、嗜碱性酸加索试验等生化鉴定来确认细菌的特性。
5. 分子生物学鉴定利用PCR技术进行DNA提取和扩增，选择里默氏杆菌特异的引物进行扩增，最后通过测序鉴定其属于里默氏杆菌。
三、药敏试验1. 抗生素选取常见供试的抗生素包括庆大霉素、环丙沙星、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢他啶、磺胺类药物等。
2. 药敏试验操作将分离的里默氏杆菌接种于固体培养基上，然后将不同抗生素的药片均匀涂布在培养基上，培养一段时间后观察对抗生素的敏感性。
3. 敏感性判定观察各药片周围是否有抑菌圈，并计算出抑菌圈直径，根据国家卫生部门颁发的药物抗菌圈直径标准来判断药敏性。
4. 结果判定根据药敏试验的结果，选择对里默氏杆菌具有良好疗效的抗生素进行治疗。
四、结语对幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验是鉴定病原体和确定治疗方案的重要手段。
合理的抗生素治疗可以有效控制鸭疫病的传播，保障畜禽养殖业的顺利进行。
希望通过不懈的努力，能够及时发现并有效治疗鸭疫病，保障水禽养殖业的健康发展。
细菌分离培养、接种技术及培养方法-精品医学课件
革兰染色法
Gram staining
临床微生物与免疫学检验教研室
一、实验目的
1.掌握细菌涂片制作方法； 2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态； 3.了解革兰染色法的临床意义。
二、革兰染色原理
原理
细胞壁学说 等电点学说 化学学说
革兰阳性菌 细胞壁肽聚糖形成网状 结构，乙醇处理时，脱水 引起网状结构孔径变小， 通透性降低，结晶紫-碘 复合物不易脱去
实验步骤和方法
1)连续划线分离法：①将接种环火焰灭菌，待冷后取标 本少许；②左手持平板，五指固定平皿盖边缘，向外反 转手掌，装有培养基的平板于手掌内用拇指、小指和 无名指固定，并将平板边缘稍微提高呈现30～45度角， 置酒精灯前上方5～6cm；③右手持已取材的接种环， 先在平板一端涂布，然后快速大幅度左右来回以密而 不重的曲线形式作连续划线接种，使整个平板布满曲 线④划线完毕，将平板作好标记，置35℃孵育18-
革兰阴性菌
细胞壁肽聚糖含量低， 脂类物质含量高，乙醇处 理时，脂类物质溶解，细 胞壁的通透性增加，结晶 紫-碘复合物易脱去
三、实验器材和试剂
1.标本 ：金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。 2.试剂 ：革兰染液。 3.其他 ：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。
四、操作步骤
1. 细菌涂片制备 ⑴涂片：取洁净载玻片一张，按无菌的方法取1~2环生 理盐水于载玻片上，按无菌的方法各取葡萄球菌和大肠埃 菌 培养物少许，在生理盐水中均匀研磨，涂好的菌膜直径 1cm左右。 ⑵干燥：室温下自然干燥或于酒精火焰半尺高处烘干。 ⑶固定：火焰加热法。目的是杀死细菌，并使菌体与载 玻片粘附牢固，染色时不致于被染液和水冲掉。
培养方法
2 二氧化碳培养法 (1)二氧化碳孵箱：能自动调节二氧化碳的含量和温度， 使用较为方便。 (2)烛缸法：取有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨 口处涂以凡士林。将接种细菌的培养基放入缸中，点燃 缸内蜡烛，加盖密封。当蜡烛燃烧时会消耗缸内氧气并 产生CO2，随着缸内氧气的逐渐减少，蜡烛会自行熄 灭，此时缸内CO2浓度约为5％左右。 (3)化学法(重碳酸钠一盐酸法)：（自学）
药敏测试 流程
药敏测试流程
药敏测试是一种用于检测病原体对药物的敏感性的试验，对于指导临床合理用药具有重要意义。
以下是药敏测试的流程：
1. 采集病原体：通过各种方法采集患者的病原体样本，如痰液、尿液、血液、分泌物等。
2. 分离培养：将采集的样本在适当的培养基上进行分离培养，以获得纯化的病原体。
3. 药物敏感试验：将纯化的病原体置于含有不同药物的平板上，观察病原体对药物的敏感性。
4. 结果分析：根据病原体对药物的敏感程度，分析结果并得出结论。
5. 报告发放：将测试结果报告发放给临床医生，以指导临床合理用药。
需要注意的是，药敏测试的具体流程可能因不同的病原体和药物而有所差异。
此外，为了保证测试结果的准确性，需要在实验过程中遵循严格的质量控制和标准化操作。
药敏试验的原理
药敏试验的原理药敏试验原理药敏试验是一种用于确定细菌的抗生素敏感性的检测方法，主要用于指导临床上的抗菌治疗，以提高治疗效果和避免抗生素的滥用。
药敏试验的原理是通过将不同种类的抗生素与细菌进行反应，观察细菌的生长情况，来确定其对抗生素的敏感性或耐药性。
具体步骤包括以下几个方面：1. 培养细菌药敏试验前需要先从患者的样本中分离出目标细菌，并在培养基上进行培养，使其生长到所需的数量。
通常使用的培养基包括莫乃基、大肠杆菌平板以及血琼脂等。
2. 制备药物药敏试验所使用的药物通常是常见的抗生素，如青霉素、头孢菌素、氨基糖苷类等。
这些药物需要提前配置好，以确保其浓度的准确性和稳定性。
3. 稀释药物将药物稀释成不同的浓度，这些浓度范围从最小浓度开始，逐渐递增至最大浓度，通常会制备8个不同的浓度。
4. 加入细菌将药物加入到已经培养好的细菌中，让其在固定时间内进行吸收。
可以采用不同的方案，如将药物加到固定体积的培养基中，或是通过切开莫米德瓶，在其中加入药物溶液来进行。
5. 观察细菌的生长情况将稀释好的药物加入细菌中后，将其分配到不同的培养基上，通常使用微量进针或是延伸半硬质琼脂板法进行。
然后，将培养基放到恒温箱中进行培养，观察细菌的生长情况和形态。
6. 解读结果并进行分析根据细菌的生长情况来判断其对抗生素的敏感性或耐药性。
根据不同的药物浓度、细菌生长情况和形态，可以简单地确定细菌对药物的敏感性或耐药性。
药敏试验不仅可以指导临床上的抗菌治疗，而且可以在重要疾病爆发时，对于了解不同城市/城镇之间的细菌耐药率变化有帮助。
在药敏试验中，测定细菌对某种药物的敏感性或耐药性的方法有许多种，目前中国临床上主要采用两种常规药敏试验：纸片扩散法和微量进针法。
纸片扩散法纸片扩散法是一种常见的药敏试验方法，主要用于检测各种抗生素对细菌的敏感性。
该方法将已经稀释好的药物加在一个标准莫莫尼格琼脂板上，然后在细菌感染区域中放置一张含有药物的纸片，在培养室中孵化。
细菌的分离、培养及细菌对抗生素的敏感性试验
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种: ③ 穿刺接种 ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
从固体培养基上挑取细菌，接种到 液体培养基中；或者从液体培养物中将 菌液接至液体培养基中，称为液体接种。
3、常用的接种方法
① 划线接种 ② 液体接种 ③ 穿刺接种： ④ 涂布接种 ⑤ 三点接种 ⑥ 浇混接种 ⑦ 注射接种
四、实验内容
1. 平板划线的练习
每人取普通平板1个: ① 练习如何打开平板； ② 练习接种棒的火焰灭菌； ③ 练习挑取单个菌落； ④ 练习分区平板划线。 再取普通平板1个, 4区划线后, 37℃培养, 作为考查内容.
接种环的火焰灭菌
平板分区划线示意图
把接种环上的材料涂在培养基的一侧，一般作3-5 次划线。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度： ④ 气体环境 ⑤ 培养时间 • 只有处于最适生长温度时，生 长速度才最快，代时最短。 • 病原微生物通常为37℃。
5、影响细菌生长的因素
① 营养 ② 水分、pH、渗透压 ③ 温度 ④ 气体环境： ⑤ 培养时间 有的细菌还需要一定浓度的CO2 • 需氧菌 • 兼性需氧菌 • 厌氧菌 化学去氧 生物去氧 隔绝阻氧 替代驱氧
1、四个概念
① 分离培养： ② 接种 ③ 菌落 ④ 菌苔
就是把病料中的病原微生物分离培 养出来，并获得分离物的单一生长材料, 以进行诊断及有关研究工作。
1、四个概念
① 分离培养 ② 接种: ③ 菌落 ④ 菌苔
将微生物接到适合于它生长繁殖的 人工培养基上或活的生物体内的过程叫 做接种。
1、四个概念
2 1 3 4
2. 琼脂斜面的接种
每人取琼脂斜面1支: ① 练习打开斜面； ② 练习斜面到斜面的接种。
药敏实验的操作规程
药敏实验的操作规程
《药敏实验操作规程》
一、实验目的
本实验旨在测试不同药物对细菌的药敏性，为临床用药提供参考。
二、实验材料
1. 不同种类的药物
2. 革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌培养基
3. 培养皿、消毒酒精、移液器、离心机等常规实验器材
三、实验步骤
1. 将革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌分别分装于培养皿中，均匀涂布于培养基表面。
2. 在分装有不同药物的培养皿上分别滴加一定量的药物液体，确保液体能够均匀覆盖培养基表面。
3. 将处理好的培养皿置于恒温培养箱中，设置合适的温度和时间，培养细菌。
4. 观察培养皿上不同区域的细菌生长情况，记录并比较各种药物对细菌的影响。
四、实验注意事项
1. 操作过程需注意无菌操作，避免外界污染。
2. 按照实验要求使用药物，注意用药量和涂布均匀性。
3. 实验完成后，将培养皿和实验用具进行正确处理，避免对环境造成污染。
五、实验结论
通过对培养皿上不同区域的细菌生长情况观察和分析比较，得出不同药物对细菌的药敏性，并据此提供临床用药建议。
六、实验意义
药敏实验的结果对临床治疗中的抗菌药物选择，以及对细菌感染病症的诊断和预防具有重要的指导意义。
以上为《药敏实验操作规程》，希望实验者严格按照规程操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
细菌培养实验报告分析
一、实验背景细菌培养是微生物学实验中一项基本且重要的技术，通过对细菌进行培养，可以观察其生长特性、分离纯化、鉴定以及进行各种生化实验等。
本实验旨在通过平板划线法分离培养细菌，并对所分离的菌落进行形态观察、生化实验和药敏试验，以分析细菌的种类和特性。
二、实验材料与方法1. 实验材料（1）菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等。
（2）培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养肉汤培养基、琼脂平板等。
（3）试剂：酚红指示剂、葡萄糖、乳糖、靛基质、甲基红、V-P试剂、革兰氏染色液等。
2. 实验方法（1）平板划线法分离细菌：将待分离的细菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，用无菌接种环进行划线操作，重复划线直至菌落分离。
（2）观察菌落特征：观察分离的菌落形态、大小、颜色、边缘、表面等特征。
（3）进行生化实验：对分离的菌落进行葡萄糖发酵、乳糖发酵、靛基质试验、甲基红试验、V-P试验等生化实验。
（4）药敏试验：采用纸片扩散法进行药敏试验，观察细菌对多种抗生素的敏感性。
三、实验结果与分析1. 菌落特征通过平板划线法分离，我们得到了形态各异的菌落。
大肠杆菌菌落呈白色、光滑、圆形、边缘整齐；金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色、光滑、圆形、边缘整齐；枯草芽孢杆菌菌落呈白色、粗糙、圆形、边缘不整齐。
2. 生化实验结果（1）葡萄糖发酵：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均能发酵葡萄糖，产生红色沉淀；枯草芽孢杆菌不发酵葡萄糖。
（2）乳糖发酵：金黄色葡萄球菌能发酵乳糖，产生红色沉淀；大肠杆菌、枯草芽孢杆菌不发酵乳糖。
（3）靛基质试验：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均产生靛基质，使培养基呈蓝绿色；大肠杆菌不产生靛基质。
（4）甲基红试验：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性反应；大肠杆菌呈阳性反应。
（5）V-P试验：金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性反应；大肠杆菌呈阳性反应。
3. 药敏试验结果大肠杆菌对氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松等抗生素敏感；金黄色葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺等抗生素敏感；枯草芽孢杆菌对青霉素、氨苄西林、头孢噻肟等抗生素耐药。
药敏试验的原理以及方法
药敏试验的原理以及方法药敏试验的原理以及方法概述药敏试验是一种常用的细菌学实验，用于检测细菌对不同抗生素的敏感性和耐药性。
药敏试验可以帮助医生选择最有效的治疗方案，防止治疗失败和耐药性产生。
本文将详细介绍药敏试验的原理和方法。
一、原理1. 细菌对抗生素的敏感性和耐药性抗生素是一类能够杀死或抑制细菌生长的化合物。
不同类型的细菌对不同种类的抗生素具有不同的敏感性和耐药性。
当使用抗生素治疗细菌感染时，如果选用了无效或低效的抗生素，会导致治疗失败或者使细菌产生耐药性。
2. 药敏试验原理药敏试验通过测定细菌对不同类型和浓度的抗生素的反应来确定其对该抗生素是否具有敏感性或耐药性。
根据这些结果，医生可以选择最合适的治疗方案。
二、方法1. 实验材料和设备（1）培养基：Muller-Hinton培养基、血琼脂培养基等。
（2）抗生素：根据需要选择不同种类和浓度的抗生素。
（3）试验菌株：采用已知菌株或临床分离细菌。
（4）无菌吸头、微量移液器、平板计数器、显微镜等。
2. 实验步骤（1）制备试验菌株将需检测的细菌接种于含有适宜营养物质的培养基中，在恰当的环境条件下进行培养，直至细菌生长到一定数量后可进行药敏试验。
（2）制备药敏板将已经制备好的Muller-Hinton培养基倒入消毒好的平板中，待其凝固后，按照需要在表面均匀涂布不同种类和浓度的抗生素。
每个药敏板上只能涂布一种抗生素。
（3）接种细菌将已经培养好的试验菌株用无菌吸头取出，均匀涂布于药敏板上。
注意避免重复接种和交叉污染。
（4）孵育将药敏板放入恰当的环境条件下进行孵育，一般为37℃，24小时。
（5）结果判定观察菌落生长情况，根据药敏试验的标准进行判定。
一般情况下，药敏试验结果分为以下几类：① 敏感（S）：菌落生长受到抑制，抑制直径大于等于抗生素标准值。
② 中介（I）：菌落生长受到轻度抑制，抑制直径在标准值范围内。
③ 耐药（R）：菌落生长不受影响或仅受到轻微影响，抑制直径小于标准值。
鸡场沙门氏菌分离鉴定及药敏试验
试验研究空鸡场沙门氏菌分离鉴定及药敏试验乜英青（青海省贵德县农畜产品质量检验检测中心811799）摘要：本文对青海省贵德县鸡沙门氏菌的流行及耐药情况、最佳治疗和预防效果进行分析。
试验对该地部分鸡场病死鸡只进行细菌分离，用革兰氏染色、三糖铁试验、尿素酶试验、靛基质（吲哚）试验和赖氨酸脱羧酶试验进行菌株鉴定，并进行14种药物敏感性试验。
结果：试验成功分离到6株禽沙门氏菌，革兰氏染色均为红色，三糖铁试验和赖氨酸脱羧酶试验结果均为阳性，尿素酶试验和靛基质（吲哚）试验结果均为阴性。
药敏性试验结果显示，该地区禽场沙门氏菌对头孢噻肟、阿米卡星和多西环素的敏感率超80%,属高度敏感，而对阿莫西林、恩诺沙星、卡那霉素、林可霉素和磷霉素具有不同程度的耐药性。
结论：禽沙门氏菌对鸡群的危害较大，鸡场需要定期进行沙门氏菌的药敏性试验才能更好地了解菌株耐药性，为合理选择抗菌药物和防治沙门氏菌感染提供参考依据遥关键词：禽沙门氏菌；分离鉴定；药敏试验沙门氏菌为肠杆菌科革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物肠道内，是一种人畜共患性致病菌，严重威胁食品安全，国际兽疫局将其定为B类传染病。
鸡群感染沙门氏菌后可引发鸡白痢、鸡伤寒和禽副伤寒等疾病，且可通过垂直感染影响产蛋率和雏鸡存活率。
随着我国养鸡业的现代化和规模化发展，鸡群免疫力逐步下降，依赖疫苗免疫或抗生素药物来防治，虽然抗生素能有效控制禽沙门氏菌，但由于药物使用不当造成菌株耐药性越来越严重。
本文对贵德县青源土鸡养殖场沙门氏菌进行分离鉴定，并对分离到的菌株进行多种药物的敏感性试验，为当地鸡场抗菌药物的合理使用提供依据。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1培养基营养琼脂培养基，SS琼脂培养基，三糖铁琼脂，尿素酶生化鉴定管，蛋白胨水培养基，赖氨酸脱羧酶肉汤和氨基酸脱羧酶对照生化鉴定管均购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。
1.1.2病料来源试验所用菌株来自贵德县青源土鸡养殖场所饲养的病死鸡，取其病料组织分离菌株共6株。
细菌培养与药敏试验解读
细菌培养
无菌体液
无菌体液是指除血液、骨髓和脑脊液外的羊膜液、 后穹隆穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑 膜液。
留取标本时，为防止无菌体液凝固，在无菌容器 内预先加入灭菌肝素0.5mg（可抗凝5ml标本），再 注入各种穿刺液，轻轻混合。
（非脓性的无菌体液、脑脊液，最好用血培养瓶增菌 培养）
细菌培养
2. 直肠拭子：无菌拭子插入肛门 2-4 cm，在肛门括约 肌处柔和地旋转拭子，可在拭子上明显见到粪便， 立即送到细菌室，患者不能自行采集；
除婴儿患者外，不推荐用拭子做常规性病原菌培 养。
细菌培养
眼、耳、鼻、喉标本 耳、鼻、咽部的细菌感染病原菌一般来源 于口腔。口腔中既有需氧菌也有厌氧菌，故其 周围组织器官的感染不仅考虑是需氧菌，也须 检查厌氧菌； 采集耳、鼻、咽拭子时易被正常菌群污染， 应在采集标本时注意。
但绝不可冷冻，宁可在室温中保存。 4. 采集足够量标本，标本不足可能产生假阴性结果。
细菌培养
标本的运送要求
1、常规性细菌学检验，要及时送到细菌室， 延 迟运送影响病原菌检出。
2、如疑似对低温敏感的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈 瑟菌、流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。 如：脑脊液、生殖道、眼睛、内耳标本，并
且绝不可以冷藏。
耐万古霉素肠球菌感染防治专家共识：*
几个问题的解读
1、涂片镜检结果与培养结果不吻合？
细菌培养
脑脊液 1、CSF采集后，置于无菌试管中，培养标本绝不能冷
藏，每种检验需要最小量：细菌培养≧1ml，真菌 ≧2ml，抗酸杆≧2ml。 2、CSF的收集：第一管做细菌培养，第二管做生化或 免疫学检查，第三管做常规检查。
细菌培养
尿液
1、最好留取早晨清洁中段尿 清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，女性用手分开
细菌分离培养及药敏试验方法及步骤-图文
细菌分离培养及药敏试验方法及步骤-图文无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24h，观察其生长特性。
目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。
平板划线接种法这是目前临床上最常用的分离接种方法。
它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。
具体操作：1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌；图1病料采集图2接种环灭菌2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。
大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。
（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。
）图3平板划线接种法4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。
注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。
在临床实际生产中具备重要意义。
1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
图4接种环划线2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
高中生物细菌分离实验教案
高中生物细菌分离实验教案实验目的：通过本实验，学生将学会如何从混合菌群中分离出单一种类的细菌，并学会使用无菌技术和培养基的制备方法。
实验材料：1. 不同种类的细菌混合溶液2. 琼脂培养基3. 火焰灼烧器4. 细菌培养皿5. 培养箱6. 培养基接种环7. 酒精灯实验步骤：1. 首先，准备好所有实验所需的材料和设备，确保所有器材都经过高温消毒处理。
2. 用火焰灼烧器将细菌培养皿的口部加热杀菌，使其无菌。
3. 用培养基接种环在混合细菌溶液中采集细菌样本，然后在无菌的琼脂培养基上均匀涂抹。
4. 将接种好的琼脂培养基培养皿放入培养箱中，设置适当的温度和湿度，在培养箱内培养一段时间。
5. 定期观察培养皿的生长情况，观察细菌的形态和颜色。
6. 当发现单一种类的细菌开始生长时，使用培养基接种环将其转移到新的琼脂培养基培养皿上，继续培养。
7. 最终得到单一种类的纯种菌落。
实验注意事项：1. 实验过程中要做到无菌操作，严格控制外部环境的污染。
2. 注意实验材料和设备的消毒和清洁工作。
3. 操作过程中要注意火焰灼烧器的使用安全。
4. 注意安全防护措施，避免细菌传播及误伤。
拓展实验：1. 利用不同培养基和培养条件，观察不同种类细菌的生长情况。
2. 进行抗生素敏感性测试，比较不同细菌对抗生素的敏感性。
3. 探究细菌对环境的适应性，如对不同pH值、温度和氧气浓度的适应能力等。
实验总结：通过本实验，学生将学会分离和鉴定不同细菌种类的方法和技术，加深对细菌的了解，培养实验操作技能和实验观察分析能力。
微生物药敏实验报告
微生物药敏实验报告本实验旨在检测微生物对不同抗菌药物的敏感性，以指导临床合理用药，提高治疗效果。
药敏实验是通过测量抗菌药物在体外对微生物的抑制作用，评估药物对病原菌的抗菌活性。
本实验采用纸片扩散法，将含有不同抗菌药物的药敏纸片放置在培养基上，观察细菌生长情况，计算抑菌圈直径，从而判断细菌对药物的敏感性。
细菌接种：将待测细菌接种于固体培养基上，用无菌棉签均匀涂抹。
药敏纸片放置：选择合适药敏纸片，用无菌镊子将其放置在培养基上，间距至少24mm。
培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
结果分析：根据抑菌圈直径判断细菌对药物的敏感性，如敏感、中介或耐药。
青霉素、阿莫西林、头孢拉定对细菌具有较好的抗菌活性，可作为首选药物。
环丙沙星具有较强的抗菌作用，可作为备选药物。
红霉素、四环素、庆大霉素和克林霉素的抗菌效果较弱，可作为辅助治疗药物。
克林霉素和复方磺胺甲噁唑对细菌不敏感，应避免使用。
根据药敏实验结果，建议使用青霉素、阿莫西林、头孢拉定和环丙沙星治疗该细菌感染。
在使用过程中，应注意观察患者反应情况，及时调整用药方案。
同时，应进行定期药敏实验复查，以避免耐药性的产生。
微生物在自然界中广泛存在，而临床微生物鉴定与药敏试验对于诊断和治疗感染性疾病具有重要意义。
本文将介绍临床微生物鉴定的方法和药敏试验的基本原理及其在感染性疾病治疗中的重要性。
临床微生物鉴定是指通过一系列实验方法对临床标本中分离出的微生物进行种类鉴别和抗菌药物敏感性的测定。
这有助于医生正确选择抗菌药物，提高感染性疾病的治疗效果。
细菌鉴定是通过对细菌的形态、染色特性、生化反应、血清学试验等进行测定，以确定细菌的种类。
例如，革兰染色可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，而血清学试验则可以用于鉴定链球菌、肺炎球菌等。
病毒鉴定是通过病毒的分离培养、抗原抗体检测、分子生物学等方法确定病毒的种类。
例如，分离培养可以用于检测水痘-带状疱疹病毒，而抗原抗体检测可以用于检测乙型肝炎病毒等。
外科送检伤口分泌物的细菌培养及药敏分析
外科送检伤口分泌物的细菌培养及药敏分析1. 研究背景外科手术是医院中最常见的治疗方式之一，在手术过程中，伤口是不可避免的存在。
随着现代医学技术的不断提高，外科手术并发症率逐渐降低，但是伤口感染仍然是术后并发症中十分常见的一种。
据统计，全球每年因伤口感染而导致死亡的病例数高达150万人次。
伤口感染的主要病原体为细菌，包括革兰阳性菌和革兰阴性菌。
在外科送检伤口分泌物时，对细菌的培养和药敏分析非常有必要，以便及时发现和治疗感染。
2. 实验步骤2.1 伤口分泌物采样从外科患者的危重病房中，随机选择20例患者的手术伤口分泌物进行采样。
采样前，用无菌消毒棉球擦拭采样部位，再用高锰酸钾消毒，避免采集到外界细菌。
随后，用无菌的医用采样棉签对病人伤口表面进行旋转采样，将采样棉签放入无菌的试管中，并立即送到实验室。
2.2 细菌培养将采集的伤口分泌物用无菌吸管移至无菌的培养基中，加入1%复方多元醇，在37℃恒温培养箱内培养24小时。
经过培养后，我们可以通过肉眼观察到培养基的变化和细菌的生成情况。
2.3 细菌分离和鉴定将培养基中的细菌通过细胞培养和单倍体培养等方式进行分离和鉴定，得到多个细菌种类样本。
2.4 药敏试验对于不同的细菌种类，我们采用不同的抗生素药物进行药敏试验，以确定选择哪种药物进行治疗。
3. 实验结果分析经过培养和分离，我们得到了多种不同种类的细菌样本，包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌等。
经过药敏试验，我们确定了不同细菌对不同药物的敏感性和抗药性，在治疗上起到了重要的指导作用。
4. 实验结论外科送检伤口分泌物的细菌培养及药敏分析是诊断和治疗伤口感染的重要手段。
通过对伤口分泌物的细菌培养和药敏分析，可以有效地确定病原菌类型和其对抗生素的敏感性，从而指导临床选择最佳的药物治疗。
猪大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验
猪大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪黄白痢和水肿病。
随着养猪业规模化发展，该病呈上升趋势，致使仔猪成活率和断乳窝重降低，严重影响了养猪业的发展。
由于致病性大肠杆菌存在广泛的耐药性，而且血清型多，抗原复杂，给防治带来了极大的困难。
针对某猪场提供的腹泻严重的仔猪黄白痢病料，我们进行了细菌分离鉴定和药敏试验，以期为仔猪大肠杆菌病的有效防治提供一些技术参考资料。
1、具体方法（1）病原菌的分离培养：无菌采集具有黄痢、白痢症状的仔猪粪便，接种于麦康凯培养基上，37℃温箱中培养24 小时。
挑取红色中等大小光滑菌落，接种于普通肉汤增菌，置37℃温箱培养16～18小时，然后将培养物分别划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板进行细菌培养，24 小时后挑取平板上可疑菌落抹片染色镜检，后将疑似菌落少许再接种于普通肉汤，供以后试验用。
（2）生化试验：糖发酵、M．R、硫化氢、V-P、吲哚试验等。
③药敏试验：利用庆大霉素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟、链霉素、环丙沙星、恩若沙星、红霉素等8种药物按常规纸片法进行。
2、观察结果（1）病原菌的形态：观察到6个疑似菌株在麦康凯琼脂培养16 小时后均为红色菌落，在伊红美蓝琼脂上培养16小时后均为紫黑色带金属光泽的中等大小圆形菌落，革兰氏染色镜检均为革兰氏阴性中等大小杆菌。
（2）生化鉴定：分离的6株细菌都能发酵葡萄糖、麦芽糖和乳糖，并产酸产气；部分菌株不分解蔗糖，不产生硫化氢，吲哚和甲基红试验(M．R)均为阳性，V-P试验为阴性，由此可判定分离菌株为大肠杆菌。
（3）药敏试验：所有分离菌均对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、恩若沙星敏感，而对其他药物产生了不同程度的耐药性。
3、结论分析从猪场分离的6株细菌，经培养特性、形态及生化试验试验鉴定，表明均为致病性大肠杆菌。
药敏试验结果表明6株大肠杆菌对丁胺卡那霉素、头孢噻肟、恩若沙星敏感，而对其他药物产生了不同程度的耐药性。
实训六细菌的分离、移植及培养
实训六细菌的分离、移植及培养性状的观察目的要求能利用不同的被检材料进行细菌的分离培养，观察细菌的培养特性，并会进一步移植培养。
仪器及材料温箱、病料、实验用菌种、营养琼脂培养基、肉渣汤（疱肉）培养基、接种环、酒精灯、烙刀、镊子、剪子等。
方法与步骤（一）细菌的分离培养1 ．平板划线分离法（视频四）平板划线是通过将被检材料连续划线而获得单个菌落，因而划线愈长，获得单个菌落的机会也愈多。
具体操作步骤如下：（1）右手持接种环于酒精灯上烧灼灭菌，待冷。
（2）无菌操作取病料若为液体病料，可直接用灭菌的接种环取病料一环；若为固体病料，首先将烙刀在酒精灯上灭菌，并立即用其将病料表面烧烙灭菌，然后用灭菌接种环从烧烙部位插入组织中缓缓转动接种环，取少量组织或液体。
（3）左手持平皿，用拇指、食指及中指将皿盖打开一侧（角度大小以能顺利划线为宜，但以角度小为佳，以免空气中细菌污染培养基）。
⑷将已取被检材料的接种环伸入平皿，并涂于培养基一侧，然后自涂抹处成30〜40°角，以腕力在平板表面轻轻地分区划线。
在细菌病诊断或药敏试验时，为了提高效率，常可将皿盖放于酒精灯附近，左手持培养基，使划线的平面与右侧台面的角度小于90°且在酒精灯附近，右手持接种环取病料连续划线。
（5）划线完毕，烧灼接种环，将培养皿盖好，用记号笔在培养皿底部注明被检材料及日期，倒置37C温箱中，培养18〜24h观察结果（实图6-1）。
凡是分离菌应在划线上生长，否则为污染菌。
2 •倾注分离法取3支融化后冷至50C左右的琼脂管，用灭菌的接种环取一环培养物（或被检材料）移至第一管中，随即用掌心搓转均匀，再由第一管取一环至第二管，搓转均匀后，再由第二管取一环至第三管经同样处理后，分别倒入三个灭菌培养皿中，待凝固后，倒置于37C 温箱中培养24h观察结果。
（实图6-2）（二）厌氧菌的分离培养厌氧菌的分离培养常用肉渣汤（疱肉培养基）培养法。
先将试管倾斜，使培养基表面露出一点，然后接种被检材料或菌种，接种后将试管直立，即封闭液面。
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验引言鸭疫是一种由鸭疫里默氏杆菌引起的严重传染病，主要感染家禽，尤其对幼鹅的影响更为严重。
鸭疫里默氏杆菌是一种革兰氏阴性菌，对许多抗生素都存在耐药性，因此对其分离鉴定及药敏试验的研究具有重要意义。
一、材料与方法1.样品采集：本次研究选取了农场中被怀疑感染鸭疫的幼鹅作为研究对象，分别从其鸡冠、肺部组织和粪便样品中采集细菌标本。
2.分离鉴定：将采集到的细菌样本分别进行细菌分离，采用大肠杆菌营养琼脂培养基，将分离得到的细菌涂布于琼脂培养基表面，培养于37℃下24小时。
观察菌落形态并进行革兰染色鉴定；进行氧化酶试验和卟啉试验鉴定。
3.药敏试验：选取敏感试验药片，利用纸盘法法测定鸭疫里默氏杆菌对各种抗生素的耐药性，结果采用直径（mm）为单位测定，抗生素的敏感代表环直径大于或等于21 mm，中度敏感代表环直径为16-20mm，耐受代表环直径小于或等于15mm。
二、结果1.分离鉴定：将细菌分离培养其后的结果显示，从疑似感染鸭疫的幼鹅鸡冠、肺部组织和粪便样品中分别分离出革兰氏阴性细菌，经过革兰染色鉴定，结果表明该细菌为鸭疫里默氏杆菌；氧化酶试验和卟啉试验的结果也进一步确认了该菌株的鉴定。
2.药敏试验：对鸭疫里默氏杆菌进行药敏试验，结果显示该细菌对多种抗生素具有耐药性。
其中对青霉素、红霉素、链霉素、庆大霉素、四环素等抗生素表现出耐药性，尤其对青霉素的耐药性较强，而对氨苄青霉素、氨基糖苷类抗生素、氨苄青霉素等抗生素表现出一定的敏感性。
三、讨论本研究通过分离鉴定及药敏试验分析了幼鹅感染鸭疫里默氏杆菌的相关情况。
结果显示，鸭疫里默氏杆菌在幼鹅的鸡冠、肺部组织和粪便样品中均有分离到，证实了该病原菌对幼鹅的影响。
药敏试验结果显示鸭疫里默氏杆菌对多种抗生素具有耐药性，这对治疗鸭疫造成了一定的困难。
研究表明，对于鸭疫里默氏杆菌的治疗需要选择敏感性较好的抗生素进行治疗，并且在日常养殖过程中需要严格控制环境卫生，提高幼鹅的抵抗力，减少鸭疫的发病率。
细菌的分离纯化生化试验以及保种
观察。
2、染色观察
• 固定的目的：
• 杀死细菌并使菌体粘附于坡片上。 • 增加细菌对染料的亲和力。
• 常用的方法有酒精灯火焰加热和化学固定二种。
染色观察
简单染色法 正染色 鉴别染色法 死菌 细菌染色法 革兰氏染色法 抗酸性染色法 芽孢染色法 姬姆萨染色法
负染色：荚膜染色法等 活菌: 用美蓝或TTC（氯化三苯基四氮唑）等 作活菌染色
项目总览
1、细菌的分离 2、生化试验 3、药敏试验 4、保存
制作: 宋云杰 指导: 薛永康
原理：在固体平板培养基上，用划线的方法或 用稀释涂布的方法将混杂菌群的微生物各个分 开，通过挑选单菌落而分离微生物。
特点： 快速、方便。 分区划线： 适用于浓度 较大的样品； 连续划线： 适用于浓度 较小的样品；
药敏片的制作
取定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸 片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中， 瓶口以单层牛皮纸包扎。经15-20分钟高压消毒后， 放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素 瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片 充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同 时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜， 干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮， 置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。 药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的 使用治疗量的比例配制药液。
生化试验指导方案
生化试验结果记录
• • • •
1、注意无菌操作 2、防止杂菌的污染 3、配试剂时要准确精准 4、注意留取空白对照
通过药敏试验可以得到所检测细菌敏感 的药物，用于疾病的准确治疗。在选择 合适的药物后，还要注意轮换用药，减 少同一种药物使用的频率，从而减少细 菌耐药性产生的机率。 注意事项： 1.药敏纸片的制作。 2.《药敏试验的操作执行标准》美国临 床试验协会。2008年版
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细菌分离培养方法及操作步骤
无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。
目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。
平板划线接种法
这是目前临床上最常用的分离接种方法。
它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。
具体操作：
1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌；
图1 病料采集图2 接种环灭菌
2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。
大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。
（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。
）
图3 平板划线接种法
4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。
注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤
药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。
在临床实际生产中具备重要意义。
1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。
然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
图4 接种环划线
2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
3、添加药物：按不同药液加样，样品加至满而不溢为止。
将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。
图5 添加药物
药敏试验结果：
图6 药敏试验结果
影响药敏结果的因素：
1、培养基:应根据试验菌的营养需要进行配制。
倾注平板时,厚度合适，约56mm，不可太薄,一般90mm直径的培养皿,倾注培养基1820m为宜。
培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质,如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性,胞腺密啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磷胺药和TMP的活性
2、细菌接种量:细菌接种量应恒定,如太多,抑菌圈变小,能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
3、药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果,需精硫配制。
商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
4、培养时间:一般培养温度和时间为37℃8-18小时,有些抗菌药扩散慢如多粘菌素,可将已放好抗菌药的平板培养基,先置4℃泳箱内2-4小时,使抗菌药预扩散,然后再放37℃温箱中培养,可以推迟细菌的生长,而得到较大的抑菌圈。
温培养箱中培养18-24h后备用。