大肠杆菌如何培养
(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
大肠杆菌培养教学课件ppt
将发酵罐放入恒温振荡器中培养，控制温度和湿度适宜，观察细菌的生长情况。
收获
当细菌生长到一定阶段时，进行收获，提取所需产物。
04
大肠杆菌培养过程中的问题与解决策略
杂菌污染及其防治
杂菌污染
大肠杆菌培养过程中经常出现 杂菌污染，导致培养失败。
污染来源
杂菌污染通常来自培养基、设 备、空气等。
防治策略
THANKS
感谢观看
肠道益生菌
大肠杆菌被认为是肠道益生菌之一，可促进肠道蠕动、增强免疫力、降低胆固醇等。
人类健康
大肠杆菌在肠道内的数量和种类对人类健康有着重要影响，可通过补充益生菌来维持肠道微生态平衡 。
06
大肠杆菌培养的教学实践建议
实验方案的设计与优化建议
确定实验目标
01
明确实验所要达到的目标，如分离、鉴定、纯化大肠杆菌等。
肠道微生物
大肠杆菌是肠道微生物群落中的一 种，对肠道健康和功能具有重要作 用。
促消化
大肠杆菌能够促进肠道蠕动和消化 ，有助于营养物质的吸收。
免疫刺激
大肠杆菌能够刺激肠道免疫系统的 发育和功能，增强机体对病原菌的 抵抗力。
生物拮抗
大肠杆菌具有生物拮抗作用，能够 抑制病原菌的生长和繁殖。
02
大肠杆菌培养的基本原理
将菌种接种到培养基中，放入恒温振荡器中 培养。
发酵罐的灭菌与清洗
准备所需材料
包括发酵罐、不锈钢筛网、清 洗剂等。
灭菌
将发酵罐用高压蒸汽灭菌法灭菌 ，确保无菌状态。
清洗
用清洗剂清洗发酵罐内外部，去除 污垢和残留物。
接种、发酵与收获
准备所需材料
包括发酵罐、接种器、恒温振荡器等。
大肠杆菌的培养和分离
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接 种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划 线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种 环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数 目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧 接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避 免细菌污染环境和感染操作者。
放线菌
单细胞分支状生物
一、基础知识： (一)微生物 原核类: 细菌、支原体、放线菌、蓝藻（蓝细菌）
真菌： 酵母菌、霉菌、食用菌
微 生 物
真核类
原生动物： 草履虫、变形虫等 显微藻类： 衣藻、小球藻
非细胞类： 病毒、类病毒、朊病毒 共性： 个体微小、结构简单
细菌的外形
球菌
杆菌
细菌的构造
弧菌
Hale Waihona Puke 细菌分类 细胞壁厚，无荚膜，多产生外 革兰氏阳性菌 毒素，对青霉素更为敏感。 细菌 （细胞壁结构不同）
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。
三、步骤与操作 1、将LB固体和液体培养基及培养皿灭菌； 2、将灭菌后冷却到600C的LB固体培养基倒入灭菌过的 培养皿中，制备培养基平板； 3、将大肠杆菌从斜面接种到LB液体培养基中，在370C 摇床中振荡培养12h； 4、用接种环取振荡培养后的菌液，在固体培养基平板 上划线，然后将划线后的培养皿置于370C恒温培养箱中 培养12~24h，观察菌落； 5、用接种环取单个菌落，划线接种于斜面上，370C恒温 培养箱中培养24h，再放入40C冰箱保存。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入 1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉 5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入 2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
大肠杆菌培养实验报告
一、实验目的1. 学习大肠杆菌的培养方法，掌握其生长规律。
2. 掌握无菌操作技术，培养纯化大肠杆菌。
3. 了解大肠杆菌在食品、环境及医学等领域中的应用。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在实验室条件下，大肠杆菌可以通过人工培养获得纯化菌株。
本实验采用LB培养基培养大肠杆菌，通过观察菌落形态、显微镜观察等方法，了解大肠杆菌的生长特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）大肠杆菌菌种；（2）LB培养基；（3）无菌水；（4）无菌试管、培养皿、移液管、镊子、酒精灯等。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）酒精灯；（4）高压蒸汽灭菌器。
四、实验步骤1. 菌种复苏（1）将大肠杆菌菌种接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）待菌液生长旺盛后，取适量菌液，用无菌水进行稀释。
2. 培养基制备（1）按照LB培养基配方，称取相应的成分，加入去离子水溶解。
（2）将溶液煮沸，去除其中的氧气。
（3）将溶液冷却至50-55℃，加入适量的无菌水。
（4）用无菌滤膜过滤除菌。
3. 接种与培养（1）将制备好的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌移液管吸取菌液，均匀涂布于培养基表面。
（2）将培养皿倒置，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
4. 观察与鉴定（1）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、边缘等特征。
（2）用无菌镊子挑取菌落，制成涂片。
（3）将涂片置于显微镜下观察，观察细菌的形态、排列等特征。
5. 结果与分析（1）菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
（2）显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
五、实验结果1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
2. 显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
六、实验讨论1. 在实验过程中，无菌操作非常重要，以免污染菌种。
大肠杆菌培养步骤方法
大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。
下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。
2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。
3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。
4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。
5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。
6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。
7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。
8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。
9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。
10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。
11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。
12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。
13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。
14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。
15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。
16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。
17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。
18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。
19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。
20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨10.0g酵母粉 5.0g氯化钠10.0g水1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
实验1,大肠杆菌的培养和分离
实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1. 培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2. 倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。
大肠杆菌的培养条件
连续培养法
总结词
高效、稳定、自动化
详细描述
连续培养法是通过连续不断地向培养基中添加新鲜培养基，同时排出旧培养基，使大肠 杆菌在恒定的条件下进行连续生长。该方法可以获得高密度的菌体，且培养条件稳定，
适合自动化生产。
05
大肠杆菌的培养注意事项
防止污染
严格控制实验室环境
灭菌处理
保持实验室的清洁和卫生，定期进行 消毒，减少微生物的滋生。
高温
超过45°C，大肠杆菌会死亡。
湿度
大肠杆菌对湿度的需求不高，在湿度 为60%-90%的环境中均能生长。
湿度过低可能会影响其生长，而湿度 过高则可能促进其他细菌的生长，从 而影响大肠杆菌的生长。
pH值
pH值：大肠杆菌生长的pH值范围是5.0-9.0，最适宜的pH值是7.0左右，接近中性。
pH值低于4.0或高于9.0时，大肠杆菌将无法生长。
氧气需求
大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，既能在 有氧环境下生长，也能在无氧环境下 生长。
VS
在有氧环境下，大肠杆菌会进行有氧 呼吸，而在无氧环境下，则会进行发 酵。
04
大肠杆菌的培养方法
液体培养法
总结词
简单、快速、常用
详细描述
液体培养法是将大肠杆菌接种在液体培养基中，通过摇床或旋转培养的方式进行培养。该方法操作简 单，培养周期短，是大肠杆菌常用的培养方法之一。
保证培养基的营养成分
选择适宜的培养基
01
根据大肠杆菌的生长需求，选择含有适量营养成分的培养基。
保证营养成分的浓度
02
确保培养基中营养成分的浓度适宜，以满足大肠杆菌的生长需
求。
注意营养成分的配比
03
不同营养成分的比例对大肠杆菌的生长也有影响，应合理配比。
大肠杆菌的培养和分离
培养基种类
物理状态
• 液体培养基 • 固体培养基 • 半固体培养基
工业生产、 工业生产、连续培养 菌种分离、鉴定、计数 菌种分离、鉴定、 菌种保存
培养基种类
化学成分
• 合成培养基 • 天然培养基
菌种分类、鉴定 菌种分类、 工业生产降低成本
培养基种类
添加某种指示剂后化学药剂用于菌种的鉴别
目的用途
•鉴别培养基 鉴别培养基 • 选择培养基
伊红—美蓝鉴别大肠杆菌 伊红 美蓝鉴别大肠杆菌
添加或缺少某种化学成分用于菌种的分离
1：加抗生素，用于分离真核生物和原核生物 ：加抗生素， 2：加高浓度的食盐获取金黄色葡萄球菌 ： 3：缺N源，分离固氮微生物 ： 源 4：缺少有机C源，分离自养型微生物 ：缺少有机 源
消毒方法
2、对一些不耐高温的液体，使用巴氏消毒法（80℃中15min 、对一些不耐高温的液体，使用巴氏消毒法（ ℃ 或70 ℃中30min，实际生产中常用于鲜奶的消毒） ，实际生产中常用于鲜奶的消毒） 3、对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒碳酸和煤酚皂等 、对接种室、 溶液以增强消毒效果， 溶液以增强消毒效果，然后用紫外线进行物理消毒 4、双手使用酒精进行消毒 、
划线分离法
由接种环以无菌操作沾 取少许待分离的材料， 取少许待分离的材料， 在无菌平板表面进行平 行划线或其他形式的连 续划线， 续划线，微生物细胞数 量将随着划线次数的增 加而减少， 加而减少，并逐步分散 开来， 开来，如果划线适宜的 话，微生物能一一分散 经培养后， ，经培养后，可在平板 表面得到单菌落。 表面得到单菌落。 连续划线法 交叉划线法
包器材
包器材
灭菌
条件： 条件： 121℃、 121℃、100kPa 2020-30min
实验一 大肠杆菌的培养和分离
细菌培养基需求中性偏碱，霉菌培养基需求中性偏酸。
LB液体培养基：
细菌在液体培养基中 扩大培养
LB固体培养基
倒入平板，用 于分离细菌
制成斜面，用于保存 细菌
（三)细菌的分离
划线分离
操作简单
涂布分离
单菌落更易分开
操作复杂
（三）无菌技术
泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 1、消毒： 是指杀灭大部分病原微生物的方法。 常用消毒方法： （1）100℃煮沸5-6min （2）巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min （3）用75%酒精等进行皮肤消毒 （4）紫外线消毒
进行操作时，注意瓶口、壁上等不能沾有培养基，否则易发生污染。
大肠杆菌的培养和分离实验操作步骤
• 实验器材
培养基（微生物生存的环境和营养物质）
LB液体培养基 大肠杆菌菌种斜面 空白斜面
（一）培养基的制备与灭菌
取两个250ml的三角瓶，分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，用牛皮 纸包装后放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。
（2） 划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端 开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个 细菌繁殖而来的菌落。
（3）为什么每次划线之前都要灼烧接种环？
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留 的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的 末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减 少，以便得到单菌落。
即时反馈
课堂小结与作业布置
大肠杆菌过夜培养操作流程
大肠杆菌过夜培养操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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1. 培养基的制备，根据大肠杆菌的生长需求，选择合适的培养基。
大肠杆菌扩大培养操作规程
大肠杆菌扩大培养操作规程一、实验目的本操作规程旨在指导实验人员进行大肠杆菌的扩大培养，以获取足够量的菌液用于后续实验。
二、实验材料和设备1.大肠杆菌菌株（可从实验室或商店购买）2.LB培养基（Luria-Bertani）3.营养琼脂（可从实验室或商店购买）4.实验室培养皿（含有适当孔径的培养皿）5.离心管（容量应能满足培养菌液的要求）6.培养箱7.培养炉8.离心机9.移液器和吸头三、实验步骤1.准备工作a.准备好所需的培养基（LB培养基），并按照说明配制。
b.准备好所需的培养皿，确保培养皿的洁净无菌。
2.菌种接种a.将大肠杆菌菌株从保存的冰冻物中取出，解冻后立即进行接种操作。
b.取一小部分菌落，用移液器吸取，并迅速加入培养基中。
3.培养菌液a.将接种好的培养基转移到离心管中，每支离心管装满约1.5ml培养基。
b.离心管盖紧，轻轻倒置数次，使菌液均匀分布。
c.将离心管放入培养箱中，设定适当的温度和时间进行培养。
4.培养基上菌液的涂布a.准备好干净的培养皿，并倒入约20ml的营养琼脂。
b.等菌液培养时间结束后，将培养液转移到干净的离心管中。
c.打开离心管盖，将菌液均匀涂布在培养皿上，用酒精灯或酒精棉球消毒铁环，按图案转移到培养皿上。
d.将培养皿盖紧，倒置放置，避免细菌污染。
5.培养皿的培养a.将培养皿放入培养炉中，设定适当温度进行培养。
b.培养温度一般为37°C，培养时间根据实验需要而定，一般为16-24小时。
6.菌落计数a.培养时间结束后，从培养箱中取出培养皿。
b.用目镜观察培养皿上的菌落，记录菌落的数量和特征。
c.如需进一步使用扩大菌液，可将菌落转移到离心管中进行保存。
四、注意事项1.操作过程需保持洁净无菌，避免细菌污染。
2.温度和时间的选择应根据实验需要和大肠杆菌的培养特性来确定。
3.使用离心机时要注意转速和离心时间的设置，避免菌液的氧化破坏。
4.涂布菌液时注意均匀和无气泡的涂布，以获得准确的菌落计数结果。
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大肠杆菌如何培养
一、大肠杆菌如何培养1. 大肠杆菌如何培养2. 大肠杆菌的保存方法 3. 大肠杆菌菌种的复苏二、大肠杆菌对人体益处和危害三、什么是大肠杆菌
大肠杆菌如何培养
1、大肠杆菌如何培养1.1、称药品按实际用量计算后,按配方称取各种药品放入大烧杯中。
牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量,用热水溶解后倒入大烧杯;也可放在称量纸上称量,随后放入热水中,牛肉膏使与称量纸分离,立即取出纸片。
蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
1.2、加热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量,然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒搅拌,待药品完全溶解后再补充水分至所需量。
若配制固体培养基,则将称好的琼脂放入己溶解的药品中,再加热融化,此过程中,需不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,最后补足所失的水分。
1.3、调pH 检测培养基的pH,若pH偏酸,可滴加lmol/L NaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸检测,直至达到所需pH范围。
若偏碱,则用lmol/L HCl进行调节。
pH的调节通常放在加琼脂之前。
应注意pH值不要调过头,以免回调而影响培养基内各离子的浓度。
1.4、过滤液体培养基可用滤纸过滤,固体培养基可用4层纱布趁热过滤,以利培养的观察。
但是供一般使用的培养基,这步可省略。
1.5、分装按实验要求,可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
2、大肠杆菌的保存方法
2.1、常用的长期保存法有:液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜(DMSD)等保护剂。