人过氧化氢酶CAT定量检测试剂盒ELISA使用说明书
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制
过氧化物酶、过氧化氢酶活性测定方法及试剂配制过氧化物酶(POD)活性测定【实验原理】过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中，在有H0存在条件下，过氧化物酶能使愈创木22酚氧化，生成茶褐色的4-邻甲氧基苯酚，可用分光光度计测生成物的含量来测定活性。
【实验试剂】愈创木酚、30%过氧化氢、20mmol/LKH2PO4、100mmol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)、反应混合液[100mmol/L磷酸缓冲液(Ph6.0)50mL，加入愈创木酚28uL,加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液溶解冷却后，加入30%过氧化氢19uL，混合均匀保存在冰箱中]方法步骤】【(1)、粗酶液的提取称取小麦叶片0.25g，加20mmol/LKH2PO4 2.5mL，于研钵中研成匀浆，以4000r/min离心10分钟，收集上清液保存在冷处，所得残渣再用20mmol/LKH2PO4 2.5mL提取一次，全并两次上清液，所得的即为粗酶提取液(酶活性过高，稀释10倍)。
(2)、酶活性的测定取试管3只，于一只中加入反应混合液3mL，KH2PO41mL，作为校零对照，另外三只中加入反应混合液3mL，稀释后的酶液1mL(如表1)，立即开启秒表，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔1min读数一次(4min)。
以每分钟表示酶活性大小，将每分钟OD值增加0.01定义为一个活力单位。
表1 紫外吸收法测定POD酶活性配置表管号 S0(对照) S1(实验) S2(实验)反应混合液(ml) 3.0 3.0 3.0KH2PO4 (ml) 1.0 0.0 0.0酶液 (ml) 0.0 1.0 1.04.结果计算以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA 470 /[min ? g (鲜重) ]表示之。
也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位( u )表示。
, ， A V 470 T，，， 0 .0 1 V t FW 1POD总活性[u/g(FW)]=式中:POD总活性以酶单位每克鲜重表示。
碧云天生物技术过氧化氢酶检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号过氧化氢酶检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0051过氧化氢酶检测试剂盒100次产品简介：过氧化氢酶检测试剂盒(Catalase Assay Kit)是一种简单易行的通过显色反应来检测细胞、组织或其它样品中过氧化氢酶(Catalase)活性的试剂盒。
在过氧化氢相对比较充足的情况下，过氧化氢酶可以催化过氧化氢产生水和氧气。
残余的过氧化氢在过氧化物酶(Peroxidase)的催化下可以氧化生色底物，产生红色的产物(N-(4-antipyryl)-3-chloro-5-sulfonate-p- benzoquinonemonoimine)，最大吸收波长为520nm 。
用过氧化氢标准品，制作标准曲线，这样就可以计算出样品中的过氧化氢酶在单位时间单位体积内催化了多少量的过氧化氢转变为水和氧气，从而可以计算出样品中过氧化氢酶的酶活力。
过氧化氢酶分布非常广泛。
在肝脏、肾脏和红细胞中，过氧化氢酶的水平非常高，是清除能导致氧化损伤的过氧化氢的主要场所。
过氧化氢酶的活性也可以用紫外分光光度计测定A 240，但蛋白质或其它组份在A 240附近都有比较强的吸收，会对测定产生严重干扰。
因此，用紫外法测定过氧化氢酶的活性，比较适合纯化的过氧化氢酶。
本试剂盒通过检测A 520来测定过氧化物酶催化下由过氧化氢氧化生色底物产生的红色产物，受干扰的因素小，检测灵敏度高，可以检测出低达1U/ml 的过氧化氢酶。
本试剂盒可以检测全血、红细胞裂解产物、血清、组织匀浆产物、细胞裂解产物等生物样品中的过氧化氢酶的活性。
一个试剂盒共可以进行100次检测。
包装清单：产品编号 产品名称包装 S0051-1 过氧化氢酶检测缓冲液 60ml S0051-2 过氧化氢 (约1M) 5ml S0051-3 过氧化氢酶反应终止液50ml S0051-4 显色底物 20ml S0051-5 过氧化物酶 20µl —说明书1份保存条件：-20ºC 保存，一年有效。
简述使用elisa试剂盒的操作流程
简述使用elisa试剂盒的操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力。
试剂一(ml)二、试剂组成与配制：试剂一：液体100 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂二：底物液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存6个月。
加双蒸水至100 ml溶解，4℃保存1个月。
（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）试剂四：液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
天冷时会凝固，临用前37℃水浴至透明方可使用。
三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)。
2、操作表：混匀，波长405nm ，光径0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即可。
如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
3.组织中CAT 活力的计算：（1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。
（2）计算公式： )ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注：*271为斜率的倒数 （3）计算举例：取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测，测得对照管吸光度为0.605，测定管吸光度为0.332，同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。
则计算结果为：()/mgprotU 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)
过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)简介：过氧化氢酶(Catalase ，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD 。
CAT 能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px 共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。
Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比色法)其检测原理是血清或血浆等样本中在最佳酶反应条件下，反应后剩余的H 2O 2与钼酸铵形成稳定的黄色复合物，其黄色深浅与酶活性成反比，通过分光光度计或酶标仪检测405nm 处吸光度。
该酶的检测对于研究自由基代谢平衡，抗衰老和肿瘤发病机制具有一定的价值。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 配制65mM H 2O 2基液：本试剂盒提供的H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为1M 。
由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。
把浓度约为1M 的H 2O 2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer 稀释100倍，使H 2O 2基液中的H 2O 2浓度约为10mM 。
2、 准备样品：① 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行裂解，可以采用Leagene Western 及IP细胞裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-70℃冻存，用于CAT 的检测。
② 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水10倍稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-70℃冻存，用于CAT 的检测。
③ 全血样品：收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内，颠倒混匀。
取100μl 全血冻融一次，用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT 检测。
编号 名称T01071 50T T01071 100T Storage试剂(A): H 2O 2基液 2×1ml 3×1ml 4℃ 试剂(B): CAT Assay buffer 52ml 104ml 4℃ 避光 试剂(C): MO 显色液 50ml100ml4℃ 避光使用说明书1份④血液中的红细胞裂解液：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。
过氧化氢酶活性检测试剂盒解决方案
过氧化氢酶活性检测试剂盒解决方案过氧化氢酶（CAT）活性检测是研究生物体抗氧化能力的一种常用方法。
传统的CAT活性检测方法包括草酸染色法、荧光素法和光度法等。
这些方法虽然简单易行，但也存在一些问题，如操作步骤繁琐、检测结果不稳定等。
为了解决这些问题，可以使用过氧化氢酶活性检测试剂盒。
下面将介绍一种过氧化氢酶活性检测试剂盒的解决方案。
1.实验准备首先，准备所需试剂和设备，包括酶试剂盒、样品、加样枪、显微镜和分光光度计等。
保证试剂的使用期限未过期，并按照说明书的要求进行保存。
2.样品处理将待测样品进行处理，如细胞裂解或组织匀浆等。
处理后的样品可以直接用于测定，也可以冻存备用。
3.试剂准备按照试剂盒的说明书，将所有试剂按照要求进行准备。
包括稀释液、过氧化氢酶标准品和底物溶液等。
确保所有试剂的浓度和体积准确无误。
4.反应体系设置将试剂按照要求加入试管或酶标板孔中，组成完整的反应体系。
包括样品、底物溶液、酶标准品和稀释液等。
确保每个反应体系的组成均匀和准确。
5.反应时间控制根据试剂盒的说明书，控制反应时间。
一般来说，反应时间较短，一般为几分钟到十几分钟不等。
不同的试剂盒和样品对反应时间的要求可能有所不同，需要根据实际情况进行调整。
6.吸光度测定使用分光光度计测定反应体系中的吸光度值。
根据试剂盒的要求，选择适当的波长进行测定。
比较各组吸光度值的大小，并与标准曲线进行对照。
根据吸光度值的变化情况，可以推断出过氧化氢酶的活性。
7.数据分析将吸光度测定的结果导入相关的数据分析软件，进行数据处理和分析。
根据标准曲线和样品的吸光度值，计算出过氧化氢酶的活性。
根据实验的目的，可以对不同样品进行比较分析，研究其抗氧化能力的差异性。
8.实验结果解释根据数据分析的结果，解释实验结果。
比较不同样品的过氧化氢酶活性，讨论样品之间的差异，以及可能的影响因素。
结合其他实验数据和文献资料，对实验结果进行深入分析和解释，为后续的研究工作提供有力的依据。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测体内特定抗原或抗体的存在和浓度。
ELISA检测试剂盒是用于进行ELISA实验的组合套装，包括抗体或抗原、酶标记物、底物、缓冲液等。
本文将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，以帮助用户顺利进行ELISA实验。
1.准备实验材料：-ELISA检测试剂盒：根据实验需要选择适当的ELISA检测试剂盒，确保其在储存和运输过程中无损坏。
-样本：准备需要检测的样本，如血清、尿液、组织提取物等。
确保样本的质量和浓度满足实验要求。
-微孔板：根据试剂盒的要求选择合适的微孔板，同时注意其质量有无污染。
-基本实验设备：如计量器、洗板机、显微镜等。
2.实验步骤：-取出储存在4℃的试剂，确保其达到室温（一般为20-25℃），再根据实验步骤进行下一步操作。
-预处理样本：根据试剂盒的说明书，进行样本的预处理，包括稀释、纯化、稳定化等步骤。
-加样：将样本按照试剂盒要求的体积加入微孔板中，通常每个孔需要加入100-200μL的样品。
-洗板：使用洗板机或手工操作，将孔中的杂质洗净。
洗板时应注意洗涤缓冲液的使用浓度和洗涤次数。
-加入特异性抗体：根据试剂盒的说明书，将稀释好的特异性抗体加入各孔中，确保操作的准确性和每孔的稀释倍数。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的抗体洗净。
-加入酶标记物：根据试剂盒的说明书，将稀释好的酶标记物加入各孔中，确保加入的量准确无误。
-洗板：重复第4步的操作，将未结合的酶标记物洗净。
-加入底物：将稀释好的底物加入各孔中，使其与酶标记物反应，生成可视化的颜色。
-终止反应：根据试剂盒的要求，在一定的反应时间后，加入终止剂停止反应。
终止剂的选择需符合试剂盒的要求。
-检测结果：使用酶标仪或目视观察检测孔中的颜色变化，通过测量吸光度或颜色强度来确定样本中目标物的浓度。
3.数据分析：-计算样本的结果：根据试剂盒的说明书，根据吸光度或颜色强度测量结果，计算样本中目标物的浓度。
过氧化氢酶(CAT)酶活测定方法
过氧化氢酶酶活测定方法
一配溶液:
1. 1.5% NaBO3·4H2：
称取1.5g NaBO3·4H2O溶于100ml纯水
2. 0.067M 磷酸盐缓冲：
称取磷酸氢二钠 2.398g溶于100ml纯水，另称取磷酸二氢钠 1.05g 溶于100ml 纯水中，按配方配置成PH为6.8的PBS
3. 1M硫：
10.87ml浓硫酸加入200ml纯水中
4. 0.05M高锰：
0.79g高锰酸钾溶于100ml纯水中。
5. HCl溶液：调PH
二仪器：37°水浴箱，，滴定管，PH试纸，移液器，15ML的离心管，烧杯三步骤：
1.预先用HCL将pH调至6.8的1.5%NaBO3·4H2O 8mL加入含有1.5mL
0.067M ph6.8的磷酸盐缓冲液的烧杯中。
2.在37℃下保持20min后，实验组加入0.5ml酶，对照组加入等量的缓冲
液，混合摇匀。
3．5分钟后，加入到10ml1M硫酸中
4. 在烧瓶中用0.05M高锰酸钾滴定。
5. 结果表示为硼酸单位/每克酶
四计算公式：
酶活力=(V blank—V sample)×0.05×稀释倍数/(样品浓度×0.5) ×(1000/5min)×1000(U/g)。
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书
过氧化氢酶(CAT)试剂盒说明书一、测定原理：过氧化氢酶(CAT)分解H2O2的反应可通过加入钼酸铵而迅速中止，剩余的H2O2与钼酸铵作用产生一种淡黄色的络合物，在405nm处测定其变化量，可计算出CAT的活力。
试剂一(ml)二、试剂组成与配制：试剂一：液体100 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂二：底物液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
试剂三：显色粉剂×1瓶，4℃保存6个月。
加双蒸水至100 ml溶解，4℃保存1个月。
（如果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影响测定结果）试剂四：液体10 ml×1瓶，4℃保存6个月。
天冷时会凝固，临用前37℃水浴至透明方可使用。
三、组织样本的检测1、组织匀浆液的制备：准确称取组织重量，按重量(g)：体积(ml)=1：9的比例加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下，制备成10%的组织匀浆，2500转/分离心10分钟，取上清，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，待测(最佳取样浓度摸索减附录)。
2、操作表：混匀，波长405nm ，光径0.5cm ，双蒸水调零，测定各管吸光度值。
注：一般样本没有高脂等导致显著差异情况，对照管的样本更换成双蒸水，做1-2管对照即可。
如需做样本自身对照，则试剂盒所测定样本数量减至48样。
3.组织中CAT 活力的计算：（1）定义：每毫克组织蛋白每秒种分解1umol 的H2O2的量为一个活力单位。
（2）计算公式： )ml /mgprot (601271)OD -OD ()mgprot /U (CAT *待测样本蛋白浓度取样量值测定值对照活力组织匀浆中÷⨯⨯⨯=注：*271为斜率的倒数 （3）计算举例：取10%水稻叶片匀浆0.05ml 做CAT 检测，测得对照管吸光度为0.605，测定管吸光度为0.332，同时测得10%水稻叶片匀浆蛋白浓度为3.1303 mgprot/ml 。
则计算结果为：()/mgprotU 7351.101303.305.0601271332.0704.0)mgprot /U (CAT =÷⨯⨯⨯-=活力组织匀浆中注：1.测定血清和血浆时，如果样本不溶血，每批样本只需要随机挑2个样本做对照或者用双蒸水代替额样本做对照；如果样本溶血的话，必须每个样本都要做对照。
过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒说明书
过氧化氢酶（CAT ）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0200规格：50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体60 mL×1瓶4℃保存试剂一液体60 mL×1瓶4℃保存试剂二液体320 μL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP 管中，使用前需先离心。
2、检测工作液的配制：取100μL 试剂二加入20mL 试剂一，充分混匀（约20T ），作为工作液，现用现配；或者根据比例配制。
产品说明：CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H 2O 2清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
H 2O 2在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H 2O 2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备a 、细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL ）为500-1000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（功率200w ，超声3秒，间隔10秒，重复30次）；8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
b 、组织：按照组织质量（g ）：提取液体积（mL ）为1：5-10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
S0051-过氧化氢酶检测试剂盒说明书(碧云天)
3. He Z, Yu S, Mei G, Zheng M, Wang M, Dai Y, Tang B, Li N. Maternally transmitted milk containing recombinant human catalase provides protection against oxidation for mouse offspring during lactation. Free Radic Biol Med. 2008 Oct 15;45(8):1135-42.
A520 (空白对照－样品)
Blank
－
－
－
1.17 (空白对照实测值)
Human red blood cell lysate
0.2mg/ml
4μl
2min
0.46
Rat liver lysate
0.3mg/ml
7.5μl
1min
0.57
Rat kidney lysate
0.3mg/ml
7.5μl
3min
2. 样品的准备：
用适当的裂解液裂解细胞或组织(可以使用碧云天生产的Western及IP细胞裂解液(P0013)进行裂解)。用本试剂盒提供的过
氧化氢酶检测缓冲液稀释样品，裂解好的样品至少加入等体积的过氧化氢酶检测缓冲液进行稀释。具体的稀释倍数可
过氧化氢酶CAT活性测定
.过氧化氢酶活性测定 ------------ 紫外吸收法过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，故常加以测定。
一、原理】H2O2在 240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度 (A 240)随反应时间而降低。
根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与设备与试剂】1、材料小麦叶片等。
2、仪器设备研钵；离心机； 250ml 容量瓶；移液管（ 0.5ml 、 2ml 各 2支）；10ml 试管 3支；恒温水浴；紫外分光光度计；3、试剂0.2mol/L pH7.8 磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；0.1mol/L H 2O2（用 0.1mol/L 高锰酸钾标定）。
【方法】1.酶液提取：藻液接种后每隔 1d，取 40ml 藻液（取时需摇匀），于 4℃，于 8 500 r/min （10 000g）下离心 10min 收集藻体，用 0.1mol/L 、pH7.8 磷酸钠缓冲液 3mL重悬浮，然后用冰浴超声破碎细胞，破碎液在 4℃下 10200 r/min 离心 10min, 上清液即为SOD 和 CAT粗酶液。
2.酶活性测定取10ml 试管 3支，其中 2支为样品测定管， 1支为空白管，按表 2-14-1 顺序加入试剂。
表2-14-1紫外吸收法测定H 2O2样品液配置表管号S1S2S3管号S0S1S2粗酶液 (ml)0.20.20.2蒸馏水1.0 1.0 1.0 /mlpH7.8 磷酸 (ml) 1.5 1.5 1.5将 S0号管在沸水浴煮 1min以杀死酶液，冷却。
然后将所有试管在25℃预热后 ,逐管加入 0.3ml 0.1mol/L 的 H O，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm 下测定吸光度，22每隔 1min 读数 1次，共测 4min，待 3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测病原体、抗体或其他分子的存在和浓度。
它具有高灵敏度、高特异性、易操作和较低成本的优势，被广泛应用于生物医学研究、临床诊断和免疫学领域。
本篇文章将介绍ELISA检测试剂盒的使用指南，包括实验准备、试剂的使用步骤和结果解读。
一、实验准备1.阅读检测项目的说明书：在使用试剂盒前，仔细阅读说明书，了解试剂的使用方法、灵敏度和特异性等关键信息。
2.样本准备：根据实验要求，准备样本。
如果需要检测血清中的抗体水平，可以采集血液样本，离心分离血清；如果需要检测细胞培养上清中的分子，将上清收集，并使其清晰，避免细胞或杂质的污染。
3.样本预处理：根据实验需求，对样本进行必要的预处理。
例如，可以通过加热、稀释、酶解等方式来处理样本，以改变样本组分和浓度。
4.准备品质控制样品：制备阳性和阴性控制样品，用于评估试剂盒和实验操作的稳定性和准确性。
5.实验器材准备：准备所需实验器材，如酶标板、移液器、微孔板洗涤仪等。
确保器材的干净和完整，并按照说明书要求对其进行预处理。
二、试剂使用步骤1.试剂准备：根据说明书要求，将试剂从冰箱中取出，并在室温下放置一段时间使其恢复到室温。
确保试剂瓶盖紧闭，并避免暴露在直接阳光下。
2.实验操作：按照说明书的要求，将试剂加入到酶标板中，并根据实验设计进行标准曲线的设置。
标准曲线用于测量未知样品的数量，并计算出浓度。
3.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行孵育。
孵育温度和时间应根据实验要求进行调整。
4.洗涤：使用洗涤缓冲液对酶标板上的不特异性结合物进行洗涤。
洗涤过程应准确控制洗涤孔板次数和洗涤液的体积。
5.补液：在洗涤完成后，加入辣根过氧化物酶标况稀释液，促进酶标物与特异性结合物的反应。
6.孵育：根据试剂盒的要求，将酶标板放入孵育箱中进行二次孵育。
7.反应停止：根据试剂盒的要求，加入相应的停止液，停止酶反应。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
人超氧化物歧化酶SODELISA试剂盒使用方法
人超氧化物歧化酶（SOD）ELISA试剂盒使用方法操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
ELISA检测试剂盒使用指南
ELISA检测试剂盒使用指南ELISA检测试剂盒使用指南1.简介：1.1 本文档旨在提供ELISA检测试剂盒的详细使用指南，以帮助用户正确、高效地进行ELISA检测。
1.2 ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫测定方法，用于检测体液中特定抗原或抗体的存在与浓度。
1.3 本文档将涵盖ELISA检测试剂盒的准备、样本处理、试剂操作、结果读取等详细步骤。
2.准备：2.1 确保实验室环境整洁，无污染。
2.2 检查所需试剂、仪器和设备是否完整，并检查有效期和储存条件。
2.3 根据实验需要，准备所需样本和质控品，并储存于适当的条件下。
3.样本处理：3.1 根据实验目的选择合适的样本类型，如血清、血浆、尿液等。
3.2 根据试剂盒说明书的要求，对样本进行适当的稀释和预处理。
3.3 严格控制操作条件，避免样本污染和交叉污染。
4.试剂操作：4.1 根据试剂盒说明书，将所需试剂从冰箱中取出，并在室温下适当恢复。
4.2 严格按照说明书的要求，对试剂进行稀释和混合。
4.3 操作过程中注意洁净实验台面，避免试剂交叉污染。
5.检测步骤：5.1 将适量的稀释后的样本、质控品和标准品分别装入试管中。
5.2 添加适量的酶标记抗体或底物，并充分混匀。
5.3 按照试剂盒说明书的要求，进行孵育和洗涤步骤。
5.4 添加底物并进行反应，控制反应时间。
5.5 停止反应，并使用酶标仪测量吸光度。
6.结果读取：6.1 根据试剂盒说明书，根据吸光度值和标准曲线，计算样本中目标物质的浓度。
6.2 将测量结果记录，并进行统计和分析。
6.3 评估实验结果的可靠性，并进行结果的解释和报告。
7.注意事项：7.1 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，避免任何操作步骤的误差和误操作。
7.2 注意实验室安全，避免接触有害化学物质，正确使用防护设备。
7.3 在实验过程中遵循生物安全操作规范，避免潜在的感染风险。
此外，本文档涉及附件，请在附件部分查看相关详细信息。
过氧化氢酶(CAT)测定
实验器材：紫外分光光度计、冷冻离心机、水浴锅、天平、100微升枪2支、10ml容量瓶、10 mL试管、具塞试管、5 mL枪一支、研钵试剂：（1）0.05mo l·L-1磷酸缓冲液（PH7.0）。
pH 0.05mol/L NaH2PO4(ml) 0.05mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.56.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.9 7.0 93.08.0 5.3 94.7（2）200 mmo l·L-1H2O2溶液，30% H2O2 45.44 mL溶于磷酸缓冲液，定容至1 L。
（3）50 mmo l·L-1Tris-HCl缓冲液（PH7.0）(Tris三羟甲基氨基甲烷；氨基丁三醇；缓血酸胺，C4H11NO3):250ml 0.2mol/L的Tris（含三羟甲基氨基甲烷24.23g/L）+450mL 0.1mol/L的HCl(取83ml浓度为37.2%的盐酸定容至1L)，加水稀释至1L。
步骤：1、酶液提取：取0.5g新鲜植物样品，置于预冷研钵中，加2mL磷酸缓冲液及少量石英砂，在冰浴上研磨匀浆。
2、将研磨好的匀浆转移至10mL容量瓶中，用磷酸缓冲液冲洗研钵2-3次（每次1-2mL）,转移至容量瓶，定容至10 mL。
3、取提取液5 mL于离心管中，在4℃、15000g下离心15min，上清液即为酶提取液，4℃下保存备用。
CAT 测定方法
二、氧化氢酶的活性测定--高锰酸钾滴定法[原理]过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
据此，可根据H202的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。
在反应系统中加入一定量(反应过量)的H2O2溶液，经过酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4[仪器和用具]研钵；三角瓶50ml4个；10ml酸式滴定管；恒温水浴锅；容量瓶25ml1个。
[试剂]10％H2SO4；0．2mol?L-1磷酸缓冲液pH7.8; 0．1mol?L-1高锰酸钾标准液；称取KmnO4(AR)3.160克，用新煮沸泠却的蒸馏水配制成1000ml,用0.1moL.L-1草酸溶液标定；0.1mol.l-1H2O2：市售30％H202大约等于17．6m01?L-1，取30％H202溶液5．68ml,稀释至于1000ml,用标准0.1molKMnO4溶液（在酸性条件下）进行标定0.1mol.L-1 草酸：称取优级纯H2C2O4.2H2O12.607g,用蒸馏水溶解后，定容至1L。
[方法]1．酶液提取：取小麦叶片2．5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml 容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转入容量瓶中，用同一缓冲液定容，4000r?min-1离心15min,上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
2．取50ml三角瓶4个(2个测定，2个对照)，测定瓶中加入酶液2.5ml，对照瓶中加入煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml0.1mol01?L-1H202，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10％H2S042.5ml3．用0.1mol?L-1KMnO4标准溶液滴定H202，至出现粉红色(在30min内不消失)为终点。
过氧参考资料化氢酶(CAT)活性测定
过氧化氢酶(CAT)活性测定高锰酸钾滴定法(李合生．植物生理生化实验原理和技术[M]．北京：高等教育出版社．2000．165-167)一、原理过氧化氢酶(catalase，CAT)普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系，它属于血红蛋白酶，含有铁，能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
22R(Fe OH3+－) R(Fe2+2 2)2+2 H O2＋O2因此，可以根据H2O2的消耗量或者O2的生成量测定该酶活力的大小。
在该体系中加入一定量(反应过量)的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液(在酸性条件下)滴定多余的H2O2，即可求出消耗的H2O2的量。
5H2O2+2KMnO4+4H2SO45O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4二、材料、仪器设备及试剂(一)材料植物器官(花瓣、叶片等)(二)仪器设备冰箱、离心机、微量加样器(1ml、20μl、100μl)、移液管、精密电子天平、试管、研钵、剪刀、镊子、三角瓶、恒温水浴、容量瓶、酸式滴定管(三)试剂(1)10% H2SO4(2)0.2mol/L PH7.8磷酸缓冲液(3)0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4(AR)3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000mL，再用0.1mol/L草酸溶液标定(4) 0.1mol/L H2O2：取30% H2O2(大约等于17.6 mol/L)5.68mL，稀释至1000mL，用0.1mol/L高锰酸钾标准液(在酸性条件下)进行标定(5) 0.1mol/L草酸：称取优级纯，用蒸馏水溶解后，定溶1000mL。
三、试验步骤(一)酶液提取取植物材料2.5g，加入PH7.8的磷酸缓冲液少量，研磨成匀浆，转移至25mL容量瓶中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至容量瓶中，用同一缓冲液定溶，4000r/min离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。
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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。
人过氧化氢酶（CAT）定量检测试剂盒（ELISA）
使用说明书
【试剂盒名称】
人过氧化氢酶（CAT）定量检测试剂盒（ELISA）
【试剂盒用途】
定量检测人血清、血浆及相关液体样本中过氧化氢酶（CAT）的含量。
【检测原理】
本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。
将标准品、待测样本加入到预先包被人过氧化氢酶（CAT）多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。
依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人过氧化氢酶（CAT）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人过氧化氢酶（CAT）含量。
【试剂盒组成】
1酶标包被板12孔×8条7底物夜A6mL
2标准品：40ng/ml0.6mL8底物夜B6mL
320倍浓缩洗涤液20mL9终止液6mL
4标准品稀释液6mL10说明书1份
5样本稀释液6mL11封板膜2张
6酶标试剂6mL12密封袋1个
备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：40、20、10、5、2.5、1.25ng/ml
【需要而未提供的试剂和器材】
1、37℃恒温箱
2、标准规格酶标仪
3、精密移液器及一次性吸头
4、蒸馏水
5、一次性试管
6、吸水纸
【操作步骤】
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先
加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
7、温育：重复4的操作。
8、洗板：重复5的操作。
9、显色：每孔先加入显色剂A液50μL，再加入显色剂B液50μL，37℃避光显色15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。
最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
【样本要求】
1、样本不能含叠氮钠（NaN
3），因为叠氮钠（NaN
3
）是辣根过氧化物酶（HRP）的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。
【注意事项】
1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为1.0-40ng/ml，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果（1.0-40ng/ml范围内），乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。
6、若显色过浅，可适当延长底物温育时间。
7、为避免交叉污染，标准品、样本和空白对照每加一个就要更换一次吸头；酶标工作液、样本稀释液和底物等公共组分，要悬臂加样，不得碰到微孔；不得重复使用封板膜。
8、试剂盒保质期内使用，不同批号的试剂不得混用。
9、底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
【操作程序总结】
准备试剂，样品和标准品
【检测范围】
1.0-40ng/ml
【规格】
96T/盒
【贮藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6个月。