实验三 茎尖培养技术
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实验三 植物茎尖培养技术
2017年
一、概念和意义
▪1.概念
▪ 茎尖培养（shoot tip culture）的含义比较广，包 括小到10－100μm的茎尖分生组织的培养，大到几 十毫米的茎尖或更大的芽的培养。
▪ 一般培养材料体积小（茎尖分生组织），成苗较难， 成苗所需时间较长；而培养材料体积大，成苗速度 快，但污染率也较高。
五、实验步骤：
1. 外植体的准备：
大蒜：剥去蒜瓣的外皮。不结球白菜：去除老化叶片，保 留1-2片幼叶的叶柄；洗净后在流水中冲洗10-20分钟。
2. 表面灭菌：
在超净工作台上将外植体材料放到灭过菌的罐头瓶内，加 入75%的乙醇处理不超过30秒，然后倒出，加入1%的 次氯酸钠灭菌（小白菜10min，大蒜处理20min），处 理后用无菌水洗4-5次。
茎尖培养包括起始培养、增殖培养和生根培养及驯化移栽 等阶段，不同培养阶段要求不同的植物激素和生长调节剂条 件。
起始培养
增殖培养
生根培养
驯化移栽
四、实验材料：
1. 植物材料：大蒜和不结球白菜； 2. 培养基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 3%+ 琼脂6.5 g/L。 3. 试剂：75%的乙醇，1%有效氯次氯酸钠、无菌水。 4. 器材：酒精灯、培养皿、灭菌滤纸、镊子、解剖刀等。
2. 无菌操作过程中需注意哪些问题？
3. 茎尖分离及接种：用镊子和解剖刀在灭菌滤纸上分离 茎尖，用镊子将分离的茎尖组织接种到培养基上，盖 好瓶盖，贴好标签。
不结球白菜茎尖
4. 接种材料的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ养：接种后的材料放到培养室，25℃， 12h光照/12h黑暗条件下培养，3-4天可以观察到茎尖开 始萌发生长。
大蒜茎尖培养
不结球白菜茎尖培养
六、无菌操作注意事项：
1.保持接种室整洁卫生，穿上鞋套。
2.超净台的准备：
超净工作台使用前用75%的乙醇擦拭。打开紫外灯照射2030分钟，然后关闭紫外灯 ，打开鼓风机20分钟左右排出臭 氧等气体。
3. 接种前用75%乙醇擦拭手和手臂，以减少污染。待手上 酒精干后，点燃酒精灯，再开始操作。
4.接种未灭菌用品用酒精棉擦拭，用品摆放合理。
2. 意义
茎尖培养在园艺植物的组织培养中应用广泛，主要用于种苗快 速繁殖、脱毒苗的生产、品种改良和基础理论研究。
种苗离体快速繁殖
茎尖分生组织培养脱除病毒
二、实验目的：
1. 学习并掌握植物茎尖离体培养的原理和方法； 2. 学习并掌握无菌操作技术。
三、实验原理：
以茎尖为外植体,经过表面灭菌处理后，接种于诱导培养 基上，促进茎尖萌发成苗，获得无菌系，并可在适当浓度的 植物激素和生长调节剂的作用下进一步增殖和生根，获得完 整植株。
5.接种过程中工具应充分灼烧，镊子、解剖刀及瓶口要在 酒精灯上灼烧。每切完一个外植体，每接种完一瓶外植体， 镊子、解剖刀都在酒精灯上烧一次。
6.实验完成后，整理超净台，清洁实验用品。
七、思考题：
1. 以种苗快繁为目的的茎尖培养包括哪些阶段，各个 阶段对培养基条件有哪些要求，外植体选取要注意哪 些问题？
2017年
一、概念和意义
▪1.概念
▪ 茎尖培养（shoot tip culture）的含义比较广，包 括小到10－100μm的茎尖分生组织的培养，大到几 十毫米的茎尖或更大的芽的培养。
▪ 一般培养材料体积小（茎尖分生组织），成苗较难， 成苗所需时间较长；而培养材料体积大，成苗速度 快，但污染率也较高。
五、实验步骤：
1. 外植体的准备：
大蒜：剥去蒜瓣的外皮。不结球白菜：去除老化叶片，保 留1-2片幼叶的叶柄；洗净后在流水中冲洗10-20分钟。
2. 表面灭菌：
在超净工作台上将外植体材料放到灭过菌的罐头瓶内，加 入75%的乙醇处理不超过30秒，然后倒出，加入1%的 次氯酸钠灭菌（小白菜10min，大蒜处理20min），处 理后用无菌水洗4-5次。
茎尖培养包括起始培养、增殖培养和生根培养及驯化移栽 等阶段，不同培养阶段要求不同的植物激素和生长调节剂条 件。
起始培养
增殖培养
生根培养
驯化移栽
四、实验材料：
1. 植物材料：大蒜和不结球白菜； 2. 培养基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 3%+ 琼脂6.5 g/L。 3. 试剂：75%的乙醇，1%有效氯次氯酸钠、无菌水。 4. 器材：酒精灯、培养皿、灭菌滤纸、镊子、解剖刀等。
2. 无菌操作过程中需注意哪些问题？
3. 茎尖分离及接种：用镊子和解剖刀在灭菌滤纸上分离 茎尖，用镊子将分离的茎尖组织接种到培养基上，盖 好瓶盖，贴好标签。
不结球白菜茎尖
4. 接种材料的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ养：接种后的材料放到培养室，25℃， 12h光照/12h黑暗条件下培养，3-4天可以观察到茎尖开 始萌发生长。
大蒜茎尖培养
不结球白菜茎尖培养
六、无菌操作注意事项：
1.保持接种室整洁卫生，穿上鞋套。
2.超净台的准备：
超净工作台使用前用75%的乙醇擦拭。打开紫外灯照射2030分钟，然后关闭紫外灯 ，打开鼓风机20分钟左右排出臭 氧等气体。
3. 接种前用75%乙醇擦拭手和手臂，以减少污染。待手上 酒精干后，点燃酒精灯，再开始操作。
4.接种未灭菌用品用酒精棉擦拭，用品摆放合理。
2. 意义
茎尖培养在园艺植物的组织培养中应用广泛，主要用于种苗快 速繁殖、脱毒苗的生产、品种改良和基础理论研究。
种苗离体快速繁殖
茎尖分生组织培养脱除病毒
二、实验目的：
1. 学习并掌握植物茎尖离体培养的原理和方法； 2. 学习并掌握无菌操作技术。
三、实验原理：
以茎尖为外植体,经过表面灭菌处理后，接种于诱导培养 基上，促进茎尖萌发成苗，获得无菌系，并可在适当浓度的 植物激素和生长调节剂的作用下进一步增殖和生根，获得完 整植株。
5.接种过程中工具应充分灼烧，镊子、解剖刀及瓶口要在 酒精灯上灼烧。每切完一个外植体，每接种完一瓶外植体， 镊子、解剖刀都在酒精灯上烧一次。
6.实验完成后，整理超净台，清洁实验用品。
七、思考题：
1. 以种苗快繁为目的的茎尖培养包括哪些阶段，各个 阶段对培养基条件有哪些要求，外植体选取要注意哪 些问题？