非无菌产品微生物限度标准
USP2022年版〈61〉非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法-中文版
USP43 <61>非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法介绍下文所述的试验将允许在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的定量计数。
这些测试主要用于确定一种物质或制剂是否符合既定的微生物质量标准。
当用于此类目的时，应按以下的规定进行，包括要样品取样量，和解释判断如下所述结果。
本方法不适用于含有活微生物作为活性成分的产品。
可采用包括自动化方法在内的替代微生物学方法，前提是已经证明与药典方法等效。
一般程序在避免待检产品的受到外来微生物污染的条件下进行测定。
防止污染的措施必须确保不会影响待检产品中微生物的检出。
如果待检产品具有抗菌活性，则应尽可能将其去除或中和。
如果灭活剂用于此目的，必须证明其微生物有效性和无毒性。
如果表面活性物质用于样品制备，应确认其对微生物无毒性，并且与所用的任何灭活剂相容性。
计数方法按照说明，使用薄膜过滤法或平板计数法之一。
最可能数(MPN)法通常用于微生物计数准确度较差；但是，对于某些生物负荷非常低的产品，这可能是最合适的方法。
方法的选择是基于产品的性质和微生物限度标准等因素。
所选方法必须允许测试足够的样本量，以判断是否符合质量标准。
所选方法的适用性必须经确认。
生长促进试验、计数方法和阴性对照的适用性一般要求必须建立检测待测产品中微生物的能力。
如果引入了可能影响测试结果的测试性能或产品变化，则必须确认其适用性。
试验菌株的制备使用试验菌株的标准化稳定悬浮液或按如下所述进行制备。
采用适宜的菌种保藏技术，以确保用于接种的微生物的传代次数不超过5代。
如表1所述，分别培养每种细菌和真菌测试菌株。
霉孢子悬浮，可将0.05%的聚山梨醇酯80加入该缓冲液中。
悬浮液在2h之内使用，或存放在2～8℃条件下24h内使用。
作为制备并稀释黑曲霉或枯草杆菌营养细胞的新鲜悬浮液的替代方法，可制备稳定的孢子悬浮液，然后将适量的孢子悬浮液用于试验接种。
稳定的孢子悬浮液可在2～8℃下保存，保存期需经过时间验证。
USP 62 非无菌产品微生物限度检查(控制菌) USP38
62 MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: TESTS FOR SPECIFIEDMICROORGANISMS非无菌产品微生物限度检查:控制菌（USP38）1.INTRODUCTION导言The tests described hereafter will allow determination of the absence of, or limited occurrence of, specified microorganisms that may be detected under the conditions described.控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检查供试品中是否存在特定的微生物。
The tests are designed primarily to determine whether a substance or preparation complies with an established specification for microbiological quality. When used for such purposes, follow the instructions given below, including the number of samples to be taken, and interpret the results as stated below.当本法用于检查非无菌制剂及其原辅料是否符合相应的微生物限度标准时,应按下列规定进行检验，,包括样品的取样量,结果的判断.Alternative microbiological procedures, including automated methods, may be used, provided that their equivalence to the Pharmacopeial method has been demonstrated.可以使用包括自动化法在内的方法,需确认与药典方法的等同性.2.GENERAL PROCEDURES通用规程The preparation of samples is carried out as described in Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests 61.供试品制备,同USP<61>If the product to be examined has antimicrobial activity, this is insofar as possible removed or neutralized as described in Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests 61.若供试品有抗菌活性,应尽可能中和或去除,中和或去除的方法同USP<61>If surface-active substances are used for sample preparation, their absence of toxicity for microorganisms and their compatibility with any inactivators used must be demonstrated as described in Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests 61.若供试品制备过程中使用了表面活性剂,应确认其对微生物的无毒性以及与所用的中和剂/灭活剂的相容性，同USP<61>3.GROWTH-PROMOTING AND INHIBITORY PROPERTIES OF THE MEDIA, SUITABILITYOF THE TEST AND NEGATIVE CONTROLS 培养基适用性检查，控制菌检查方法的适用性确认，阴性对照The ability of the test to detect microorganisms in the presence of the product to be tested must be established. Suitability must be confirmed if a change in testing performance or a change in the product that may affect the outcome of the test is introduced.在有供试品存在的情况下，所建立的方法应能检测微生物。
非无菌产品微生物限度检査指导原则
中国药典2015年版性项下的有关内容对准确度进行评价。
2.精密度微生物定量检验的精密度是指在检验范围内，对同一个均匀的样品多次重复取样测定，其检验结果的一致程度，通常采用标准偏差或相对标准偏差来表示，也可以采用其他适宜的方式。
精密度验证的方法是：制备试验菌的菌悬液，齒悬液的浓度应选择为能够准确读数的最高浓度，然后系列稀释至较低浓度（如小于l O cfu/m l)。
每个试验菌选择其中至少5个浓度的菌悬液进行检验。
每一个浓度至少应进行10次重复检验，以便能够采用统计分析方法得到标准偏差或相对标准偏差。
一般情况下，可以接受的相对标准偏差(R S D)应不大于35%。
不考虑特殊的检验结果，替代方法的相对标准偏差（R S D)应不大于药典方法。
例如，药典菌落计数平皿法其可接受的相对标准偏差（R S D)与含菌浓度的关系见表2。
表2不同含蔺浓度下预期的相对标准偏差cfu/皿预期RSD<10<35%10 〜30<25%30 〜300<15%3.专属性微生物定量检验的专属性是指通过检测适宜的试验菌，以证明检验方法与其设定目的相适应的能力。
例如，菌落计数平皿法其设定目的在于检出一定数量的微生物，则其专属性验证应证明当样品中存在一定数量的试验菌时，通过平皿法检验，能够检出试验菌，而样品的存在不会对结果造成影响。
专属性验证时，应能够设计出可能使替代方法出现假阳性的实验模型来挑战替代方法，从而确认替代方法的适用性。
当替代方法不依赖微生物生长出菌落或出现混浊就可以定量时(如不需要增菌或在1〜50cfu范围内就可直接测定菌数的定量方法），以上验证方式就显得更为重要。
4.定量限微生物定量检验的定量限是指样品中能被准确定量测定的微生物最低数量。
由于无法得到含有已知微生物数量的实验样品，因此，在定量限验证时，应选择在检验范围内至少5个菌浓度，每个浓度重复取样测定不少于5次，替代方法的定量限不得大于药典方法。
非无菌产品微生物限度标准修订
路漫漫其修远兮, 吾将上下而求索
2020年4月9日星期四
2015年版药典药品微生物度标准修订
我国药品微生物限度标准的历史沿革 2015版微生物限度标准增修订内容 非无菌药品微生物限度标准 微生物限度标准的表述 需氧菌总数、真菌数数值的表述 微生物限度标准的解释
路漫漫其修远兮, 吾将上下而求索
标准 2、品种正文项下：
【 无菌 】 受热不稳定、制剂不能进行最终灭菌的无菌工艺产品 用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂 应符合无菌检查法规定。 3、非无菌化学药品及生物制品制剂的微生物限度标准（见表1）
按10个给药途径，以固体、液体性状分别给出具体的限度标准要求。
路漫漫其修远兮, 吾将上下而求索
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《 2015版药典 》抑菌效力检查法修订内容
路漫漫其修远兮, 吾将上下而求索
抑菌剂 是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。 ⒈抑菌效力检查法系用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性，以评价最终产 品的抑菌效力， ⒉用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂浓度的确定。 以防止制剂在正常贮藏或使用过程中可能发生的微生物污染和繁殖使药物变 质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。
路漫漫其修远兮, 吾将上下而求索
微生物限度标准解释
⑷制剂通则项下微生物限度检查项目 必检项目 制剂通则项下有微生物限度要求的制剂为必检项目 原则性要求 化学药品丸剂、口服 片剂、胶囊剂、颗粒剂；应对其被微生 物污染的风险进行评估,在保证患者用药安全安全的前提下，通过历史回顾 分析可不进行批批检验。 ⑸如果上述制剂的性质及工艺的原因导致产品易受微生物污染，应在品 种项下列出微生物限度检查项及微生物限度标准，如 生化类制剂。
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020微生物限度检查摘要：1.2020 版《中国药典》微生物限度检查概述2.非无菌产品微生物限度的检查要点3.微生物限度计数及其应用4.药典委发布的相关国家标准草案5.中药饮片微生物限度检查法6.美国药典USP 微生物限度检查对比正文：2020 版《中国药典》微生物限度检查概述2020 版《中国药典》对微生物限度检查进行了详细的规定，涵盖了非无菌产品、生物制品以及中药饮片等多个领域。
微生物限度检查是评估药品在生产、储存和使用过程中微生物污染程度的重要手段，对保证药品质量和患者安全具有重要意义。
非无菌产品微生物限度的检查要点非无菌产品的微生物限度检查主要包括以下几个方面：1.菌种及菌液制备：需要对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌等菌种进行培养，制备成菌液。
2.培养条件：将菌液接种在胰酪大豆腺琼脂培养基上，在35℃条件下培养24 小时。
3.菌落计数：将培养后的琼脂平板按区域划分，对每个区域进行菌落计数，以评估样品中的微生物污染程度。
微生物限度计数及其应用微生物限度计数是评估非无菌产品微生物污染程度的重要方法，其主要包括以下几个方面：1.耐胆盐革兰阴性菌：此类菌对胆盐具有较强的耐受性，是药品中常见的微生物污染菌。
2.大肠埃希菌：作为肠道常见菌，大肠埃希菌可能导致肠道感染等疾病。
3.沙门菌：沙门菌是一种常见的食源性病原菌，可能导致食物中毒等疾病。
药典委发布的相关国家标准草案国家药典委员会发布了《凡例》、《微生物限度检查法》等5 份国家标准草案，以规范药品微生物限度检查的方法和要求。
其中，《生物制品》分包装及贮运管理、《鼠源性病毒检查法》等文件对药品微生物限度检查进行了详细规定。
中药饮片微生物限度检查法中药饮片微生物限度检查法用于检查中药材及中药饮片的微生物污染程度。
检查项目包括需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数、耐热菌总数、耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌。
中药饮片微生物限度检查的试验环境应符合微生物限度检查的要求，全过程必须严格遵守无菌操作。
1105非无菌产品微生物限
1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法中菌药典2015年版表3供试品的最少检验量供试品供试品装量每支供试品接人每种培养基的最少量液体制剂^I m llm l<C V^40m l40m K V< 100m lV>100m l全量半量，但不得少于l m l20m l10%但不少于20m l固体制剂M〈50m g50m g^M<C300m g300m g^M<C5g全量半量150m g500m g半量（生物制品）生物制品的原液及半成品半量医疗器具外科用敷料棉花及纱布缝合线、一次性医用材料带导管的一次性医疗器具(如输液袋）其他医疗器具取lOOmg 或lc m X 3cm整个材料①二分之一内表面积整个器具®(切碎或拆散开）①如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000m l以上，将其完全浸没。
1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检査。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检査时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
计数方法计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（M ost-P rob a b l e-Numb e r M e tho d,简称MP N法）。
MP N法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，M P N法可能是更适合的方法。
3、(孙老师)1107 非无菌药品微生物限度标准解析
标 准
非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准
制剂类型/给药途径 TAMC 104（丸剂 3×104） 105 TYMC 102 5×102 控制菌 不得检出大肠、沙门 （10g）；耐胆盐革兰 阴性菌应小于102 不得检出大肠、沙门 （10ml）；耐胆盐革兰 阴性菌应小于101 不得检出金葡、铜绿； 阴道&尿道给药制剂还 不得检出白念、梭菌。 不得检出金葡、铜绿、 阴道&尿道给药制剂还 不得检出白色念珠菌、 梭菌。
TSA 营养 琼脂
11600
90
4500
110
<10
5600
<10
110
10
<10
例：金葡计数比较 以同一金黄色葡萄球菌菌悬液分别在营养琼脂和 TSA上计数。
培养基 样品（cfu/ml）
TSA 营养 琼脂
127
121
103
101
四、国外药典标准收载情况
特点： 按照给药途径制定制剂微生物限度标准 药用原辅料限度标准 上述两个限度标准，USP、EP7.0、JP16标准一致
新药的微生物限度标准 基于数据分析和风险评估 原辅料、给药途径及对患者的潜在危害综合考虑控制 菌标准 -产品特性：是否适合微生物生长？是否有抑菌力 -用药对象：婴儿、体弱者、病患
原辅料、中药提取物、中药饮片 -参考制剂要求、生产工艺特点设置控制菌要求
４、标准限度放宽了？ –标准限度放宽，但是培养基的营养能力增加
齿龈皮肤给药制剂原辅料中药提取物中药饮片的控制呼吸道制剂对耐胆盐革兰阴性菌的控制按剂型给药途径确定微生物限度标准非无菌化学药品生物制品不含药材原粉的中药制剂微生物限度标准给药途径制剂类型tamctymc控制菌口服给药固液大肠含脏器提取物不得检出沙门菌10gml口腔黏膜齿龈大肠金葡铜绿耳用皮肤10金葡铜绿呼吸道吸入10大肠金葡铜绿耐胆盐革兰阴性菌阴道尿道10菌中药直肠给药固液金葡铜绿其他局部给药10非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准制剂类型给药途径tamctymc控制菌固体口服给药不含豆豉神曲等发酵原粉含豆豉神曲等发酵原粉10丸剂310不得检出大肠沙门10g
非无菌药品微生物限度检查指导原则
非无菌药品微生物限度检查指导原则微生物限度检查是药品质量控制中的重要环节，尤其对于非无菌药品而言更为重要。
本文将对非无菌药品微生物限度检查的指导原则进行详细介绍，旨在提高药品的质量安全性。
一、检验项目及标准非无菌药品微生物限度检查的主要检验项目包括总生菌数、大肠菌群、霉菌和酵母菌等。
每一项检验项目都有相应的标准来衡量合格与否。
以下是常用的标准：1. 总生菌数：根据药典要求，大部分非无菌药品每克不得超过1000 CFU（菌落形成单位）。
2. 大肠菌群：大肠菌群是肠道中的常见菌种，其存在可能暗示有肠源性污染。
检验结果一般要求不得检出大肠菌群。
3. 霉菌和酵母菌：霉菌和酵母菌是环境中广泛存在的微生物，在非无菌药品中的存在可能引发变质，甚至导致严重的药品质量问题。
一般情况下，每克药品中不得检出霉菌和酵母菌。
二、样品的选择和采集在进行微生物限度检查前，需选择合适的样品，并采取正确的样品采集方式。
以下是一些常用的样品选择和采集方法：1. 样品选择：根据药品的特性，选择代表性的样品进行检测。
选取多个批次的不同规格的样品进行检验更有利于全面评估该药品的微生物污染水平。
2. 样品采集：在采集样品前，先进行适当的表面消毒，以避免外源性污染。
采集时应遵循严格的无菌操作，确保样品的真实性和可靠性。
常用的样品采集方法包括划线法、切割法、稀释法等。
三、检验方法和操作流程微生物限度检查需要使用一系列严格的操作流程和检验方法，以保证结果的准确性和可比性。
以下是一般的操作流程：1. 样品预处理：根据药品的特性，选择适当的预处理方法，如溶解、稀释、震荡等，以提高微生物的检出率。
2. 培养基选择：根据不同的菌种需求，选择适宜的培养基进行菌落的培养。
常用的培养基有营养琼脂平板、大肠埃希菌选择平板、马铃薯葡萄糖琼脂平板等。
3. 培养条件：根据菌种的生长特性和检验项目的要求，设定适当的温度、时间和培养条件，以促进菌落的生长。
4. 菌落计数：通过目视或自动计数法，对培养基上的菌落进行计数。
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020微生物限度检查
中国药典2020中对微生物限度的检查要求如下：
1.总菌落数限度：需满足以下要求：
- 不应含有大肠埃希菌或粪链球菌。
- 对无菌制品，其总菌落数规定不应超过制定的标准。
- 必须符合产品特性和验证的任何特定需求。
2.酵母和霉菌限度规定：
- 对无菌制品，每克中不应含有可繁殖的酵母和霉菌。
- 对非无菌制品，每克中不应含有可繁殖的酵母和霉菌。
建议
进行采样和检测多数生物制品样品。
3.大肠菌群限度规定：
- 每克中不应含有大肠菌群。
对某些产品（如消毒剂指定的测定），可以采用其他方法或者规定了合适分析方法的产品例外。
4.针对特定微生物的检查：
- 对某些产品，药典可能要求进行特定微生物的检查，以确保
产品的安全性和质量。
需要注意的是，这只是中国药典2020中关于微生物限度检查
的一般要求，具体的规定可能因产品类型和特性而有所不同。
因此，在进行微生物检查时，需根据产品的特定需求和合适的分析方法进行操作。
在实际生产和质量控制过程中，还需严格按照相关法规和标准进行操作，确保产品质量和安全性。
非无菌药品微生物限度标准
或
cfu/10cm2）
霉菌和酵母菌总数 （cfu/g、cfu/ml 或 cfu/10cm2）
控制菌
口服给药★
固体制剂
103
液体制剂
102
不得检出大肠埃希菌（1g 或 1ml）；含脏器提取物的制剂 102 还不得检出沙门菌（10g 或 101 10ml）
口腔黏膜给药制剂
齿龈给药制剂
102
鼻用制剂
不得检出大肠埃希菌、金黄
或 cfu/10cm2）
或 cfu/10cm2）
固体口服给药制剂
不得检出大肠埃希菌（1g）；
不含豆豉、神曲 104（丸剂 3×104）
102
不得检出沙门菌（10g）；耐
等发酵原粉
胆盐革兰阴性菌应小于
含豆豉、神曲等
105
5×102不得检出大肠埃希菌（1ml）；
102
铜 绿 假 单 胞 菌 （ 1g 或
10cm2）；阴道、尿道给药制
102
剂还不得白色念珠菌、梭菌
（1g 或 10cm2）
不得检出金黄色葡萄球菌、
102
铜绿假单胞菌（1ml）；阴道、
尿道给药制剂还不得白色
102
念珠菌、梭菌（1ml）
5. 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准（见表 3）
表 3 非无菌药用原料及辅料微生物限度标准
10cm2）
化学药品制剂和生物制品制剂若含有未经提取的动植物来源的成份及矿物质还
不得检出沙门菌（10g 或 10ml）。
4. 非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准（见表 2）
表 2 非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准
给药途径
需氧菌总数 霉菌和酵母菌总数
控制菌
2015版中国药典微生物限度
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑵ 水不溶性非油脂类供试品
• 取供试品， 用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或 pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基制备成 1:10 供试液。 分散力较差的供试品，可在稀释液中加入 表面活性剂如 0.1%的聚山梨酯 80，使供 试品分散均匀。若需要，调节供试液 pH 值至 6～8。必要时，用同一稀释液将供 试液进一步 10倍系列稀释。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
或cm²）。
– 除另有规定外,一般供试品的检验量为10g 或
• 需氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的 总菌落数（包括真菌菌落数）；
• 霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上 生长的总菌落数（包括细菌菌落数）。
• 若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌 和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求，可 使用含抗生素（如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡 萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基（如玫瑰红 钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备
– ⑷需用特殊方法制备供试液的供试品
• 膜剂供试品 • 肠溶及结肠溶制剂供试品 • 气雾剂、喷雾剂供试品 • 贴膏剂供试品
1.4.2供试品检查
1. 平皿法
– 平皿法包括倾注法和涂布法。 – 除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性
试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每 稀释级每种培养基至少制备2个平皿。 – 培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养 基平板在30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂 培养基平板在20～25℃培养5 ~7天， 观察菌落 生长情况,点计平板上生长的所有菌落数，必要时 可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并报告 。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落 数后，计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌 数报告规则报告菌数。 – 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15， 则两个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。
2020年版《中国药典》通则 —“非无菌药品微生物限度标准”
2020年版《中国药典》通则“非无菌药品微生物限度标准”（蓝色字体表示新增内容，红色字体表示删减内容）非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。
药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及、中药提取物及中药饮片的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。
1.制剂通则、品种项下要求无菌的及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法规定。
2.用于手术、严重烧伤、严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。
3.非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准见表 1。
表 1 非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准给药途径需氧菌总数（cf u/g、cf u/m l或cf u/10c m2）霉菌和酵母菌总数（cf u/g、c fu/m l或cfu/10cm2）控制菌口服给药①固体制剂液体及半固体制剂103102102101不得检出大肠埃希菌（1g 或1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10g 或10ml）口腔黏膜给药制剂齿龈给药制剂鼻用制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或 10cm2）耳用制剂皮肤给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml 或10cm2）呼吸道吸入给药制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、或 10ml ） 阴道、尿道给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌（1g 、1ml 或 10cm 2）；中药制剂还不得检出梭菌（1g 、 1ml 或 10cm 2）直肠给药 固体制剂103102 不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 或 1ml ）其他局部给药制剂102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g 、1ml 或 10cm 2）注 ①化学药品制剂和生物制品制剂若含有未经提取的动植物来源的成份及矿物质还不得检出沙门菌（10g 或 10ml ）。
生物制品原液微生物限度标准
生物制品原液微生物限度标准
生物制品原液的微生物限度标准主要依据《中国药典》和《药品生产质量管理规范》进行制定。
以下是具体的标准：
1. 对于非无菌的生物制品，其微生物限度标准通常包括细菌、霉菌和酵母菌总数以及控制菌的检查。
2. 细菌、霉菌和酵母菌总数的标准：对于每1ml生物制品原液，细菌数不
得超过100cfu，霉菌和酵母菌数不得超过100cfu。
同时，对于每1g生物
制品原液，细菌数不得超过1000cfu，霉菌和酵母菌数不得超过1000cfu。
3. 控制菌检查的标准：对于生物制品原液，应按照《中国药典》和《药品生产质量管理规范》的规定进行控制菌检查，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
控制菌检查应为阴性。
4. 对于有特殊用途或规定的生物制品，如用于免疫治疗的制品、基因治疗制品等，其微生物限度标准应根据相关规定进行制定。
此外，在生物制品的生产过程中，应遵循无菌操作规程，采用经过验证的无菌工艺和设备，并进行严格的质量控制，确保产品的安全性和有效性。
药品微生物限度标准
药品微生物限度标准非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。
药品生产、贮存、销售过程中的检验，化学药品原料药、中药提取物及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。
非无菌制剂的总需氧菌数、总霉菌及酵母菌数测定照附录×××检查；非无菌制剂的控制菌检查照附录×××检查。
本限度标准解释如下：101CFU：最大可接受限值＝20；102CFU：最大可接受限值＝200；103CFU：最大可接受限值＝2000。
以此类推。
1.制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂应符合无菌检查法规定。
2.口服给药制剂2.1 不含药材原粉的口服给药制剂需氧菌总数每1g不得过103cfu。
每1ml不得过102cfu。
霉菌及酵母菌总数每1g不得过102cfu。
每1ml不得过101cfu。
大肠埃希菌每1g或1ml不得检出。
沙门菌含脏器提取物的口服给药制剂每10g或10ml不得检出。
2.2含药材原粉的口服制剂2.2.1不含豆豉、神曲等发酵原粉的口服给药制剂需氧菌总数每1g不得过10000cfu。
每1ml不得过100cfu。
霉菌及酵母菌总数每1g或1ml不得过100cfu。
大肠埃希菌每1g或1ml不得检出。
沙门菌每10g或10ml不得检出。
耐胆盐革兰阴性菌每1g应小于102个。
每1ml应小于101个。
2.2.2 含豆豉、神曲等发酵原粉的口服制剂需氧菌总数每1g不得过100000cfu。
每1ml不得过1000cfu。
霉菌和酵母菌总数每1g不得过500cfu。
每1ml不得过100cfu。
大肠埃希菌每1g或1ml不得检出。
沙门菌每10g或10ml不得检出。
耐胆盐革兰阴性菌每1g应小于102个。
每1ml应小于101个。
3.局部给药制剂3.1 用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。
EP 5.1.4 非无菌制剂和药用物质的微生物质量标准(中英文)
01/2011:50104 5.1.4. MICROBIOLOGICAL QUALITY OF NON-STERILE PHARMACEUTICAL PREPARATIONS AND SUBSTANCES FOR PHARMACEUTICAL USE (1) 非无菌制剂和药用物质的微生物质量The presence of certain micro-organisms in non-sterile preparations may have the potential to reduce or even inactivate the therapeutic activity of the product and has a potential to adversely affect the health of the patient.在非无菌制剂中如果存在某些微生物，可能会降低或抑制药物的治疗活性，可能会对病人健康有潜在不良影响。
Manufacturers therefore have to ensure a low bioburden of finished dosage forms by implementing current guidelines on Good Manufacturing Practice during the manufacture, storage and distribution of pharmaceutical preparations.因此，生产商应在药品生产、存贮和销售过程中遵守现行GMP指南，来保证制剂的微生物在一个较低的水平。
Microbial examination of non-sterile products is performed according to the methods given in general chapters 2.6.12 and 2.6.13. Acceptance criteria for non-sterile pharmaceutical products based upon the total aerobic microbial count (TAMC) and the total combined yeasts/moulds count (TYMC) are given in Tables 5.1.4-1 and 5.1.4-2. Acceptance criteria are based on individual results or on the average of replicate counts when replicate counts are performed (e.g. direct plating methods).非无菌产品微生物检查应依据通则2.6.12和2.6.13中指定的方法进行。
非无菌产品微生物限度标准修订课件
目录 CONTENTS
• 非无菌产品微生物限度标准概述 • 非无菌产品微生物限度标准修订背景 • 非无菌产品微生物限度标准修订内容 • 非无菌产品微生物限度标准修订的影响 • 非无菌产品微生物限度标准修订的实施与监
管 • 非无菌产品微生物限度标准修订的意义与展
望
01
修订微生物限度标准可以促使企业加强生产过程中的卫生 控制，提高产品质量和稳定性，减少产品投诉和退货的情 况，提升企业的市场竞争力。
促进产业升级和转型
修订非无菌产品微生物限度标准可以推动企业加强技术创新和研发，提高产品的 技术含量和附加值，促进产业的升级和转型。
微生物限度标准的提高可以促使企业加强生产设备的更新和改造，提高生产效率 和产品质量，同时也可以带动相关产业的发展，推动产业链的完善和升级。
• 对违反标准的行为进行处罚和纠正，维护标准的严肃性和 权威性。
监管措施和责任分工
01
责任分工
02
03
04
药品监管部门负责制定和发布 标准，并监督标准的实施和执
行。
企业应按照标准要求生产和质 量控制，确保产品符合标准要
求。
行业协会和社会组织应积极参 与标准的宣传和推广，促进标
准的广泛应用和实施。
后续评估和改进建议
微生物限度标准的制定依据
科学依据
根据科学研究和实验数据，评估 不同微生物对人体的危害程度和 传播途径，从而制定相应的限度
标准。
法规要求
各国政府和国际组织会制定相关法 规和标准，要求企业按照规定执行 ，以确保产品的卫生质量和安全性 。
实践经验
在生产实践中，企业会根据产品的 特性和生产环境等因素，制定符合 实际情况的微生物限度标准，并不 断优化和改进。
非无菌产品微生物限度标准
湖南湘大兽药有限公司工作标准文件题目非无菌产品微生物限度检查标准操作规程编号ZLJG F-048-00 修定质检部审核批准修定日期2016.12 审核日期批准日期颁发部门GMP办公室颁发数量 2 份生效日期分发部门质检部、档案室文件页数共13页一、目的：为规定非无菌产品微生物限度检查标准的检测方法和操作要求，特制定本操作规程。
二、引用标准：中华人民共和国兽药典（2015年版一部附录P195）。
三、适用范围：适用于本公司检品采用非无菌产品微生物限度检查标准的质量检测。
四、责任者：理化分析员对本标准的实施负责。
五、正文：1 简介非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。
药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料、辅料及中药提取物的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。
制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法规定。
用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。
非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生物限度标准（见表1）表1 非无菌兽药制剂的微生物限度标准给药途径需氧菌总数（cfu/g、cfu/ml 或cfu/10cm2）霉菌和酵母菌总数（cfu/g、cfu/ml或cfu/10cm2）控制菌口服给药①固体制剂液体制剂103102102101不得检出大肠埃希菌（1g或1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10g或10ml）耳用制剂皮肤给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cm2）尿道给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌（1g、1ml或10cm2）直肠给药固体制剂液体制剂103102102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g或1ml）其他局部给药制剂102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cm2）注：①兽药制剂若含有未经提取的动植物来源的成分及矿物质，还不得检出沙门菌（10g或10ml）。
非无菌产品微生物限度检查标准
附录ⅪJ 非无菌药品微生物限度标准非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的危害以及药品的特殊性而制订的。
药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原料及辅料的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。
1.制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法规定。
2.用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。
3.非无菌化学药品及生物制品制剂的微生物限度标准（见表1）表1 非无菌化学药品及生物制品制剂的微生物限度标准给药途径需氧菌总数（CFU/g、CFU/ml或CFU/10cm2）霉菌及和酵母菌总数（CFU/g、 CFU/ml或CFU/10cm2）控制菌口服固体给药制剂103102不得检出大肠埃希菌（1g）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10g）口服液体给药制剂102101不得检出大肠埃希菌（1ml）；含脏器提取物的制剂还不得检出沙门菌（10ml）口腔黏膜给药制剂齿龈给药制剂鼻用制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cm2）耳用制剂皮肤给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cm2）呼吸道吸入给药制剂102101不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、耐胆盐革兰阴性菌（1g或1ml）阴道、尿道给药制剂102101不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌（1g、1ml或10cm2）直肠给药固体制剂液体制剂103102102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g或1ml）其他局部给药制剂102102不得检出金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌（1g、1ml或10cm2）4. 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准（见表2）表2 非无菌药用原料及辅料微生物限度标准需氧菌总数（CFU/g 或 CFU/ml）霉菌和酵母菌总数（CFU/g或CFU/mL）控制菌药用原料及辅料103102* 注*：限度未做统一规定。
3、(孙老师)1107 非无菌药品微生物限度标准解析
2、标准执行的注意事项
哪些需要做微生物限度检查 –正文项下【微生物限度】有要求 –制剂通则项下该品种对【微生物限度】有要 求 –“微生物限度检查法”标准规定
新药的微生物限度标准 基于数据分析和风险评估 原辅料、给药途径及对患者的潜在危害综合考虑控制 菌标准 -产品特性：是否适合微生物生长？是否有抑菌力 -用药对象：婴儿、体弱者、病患
原辅料、中药提取物、中药饮片 -参考制剂要求、生产工艺特点设置控制菌要求
４、标准限度放宽了？ –标准限度放宽，但是培养基的营养能力增加
1107 非无菌药品微生物限度标准 解析
四川省食品药品检验检测院 孙雪奇 2016年6月
内
容
• 一、标准概况 • 二、修订依据 • 三、微生物限度标准 • 四、国外药典标准收载情况
一、标准概况
方 法 标 准
1995年Chp附录收载 微生物限度检查法
1986版《药品卫生标准》及 1989版《药品卫生补充规定》 2000版Chp收载限度标准 （按剂型划分限度标准，按 给药途径及制剂特点制定控 制菌标准。）
TSA 营养 琼脂
11600
90
4500
110
<10
5600
<10
110
10
<10
例：金葡计数比较 以同一金黄色葡萄球菌菌悬液分别在营养琼脂和 TSA上计数。
培养基 样品（cfu/ml）
TSA 营养 琼脂
127
121
103
101
四、国外药典标准收载情况
2015年版中国药典微生物限度检查法
1.1 总则：
• 环境： – 微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要 求。(在不低于GMP 现行版要求的D 级洁净环境 、局部洁净度不低于B 级的单向流空气区域内进 行)【10版：在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内】。 – 检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染 ，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。 – 单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监 测。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为 菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最 高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低 稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小 于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.4.2供试品检查
• 供试液制备 – ⑴ 水溶性供试品
• 取供试品，用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨 缓冲液，或pH7.2 磷酸盐缓冲液，或胰酪 大豆胨液体培养基溶解或稀释制成 1:10 供试液。若需要，调节供试液 pH 值至 6 ～8。必要时，用同一稀释液将供试液进 一步 10倍系列稀释。水溶性液体制剂也 可用混合的供试品原液作为供试液。
1.3.1菌液制备及使用
试验菌株 试验菌液的制备
金黄色葡萄球菌 〔CMCC(B) 26 003)〕
铜绿假单胞菌 〔CMCC（B)10 104〕 枯草芽孢杆菌 〔CMCC(B) 63 501〕 白色念珠菌 〔CMCC(F) 98 001〕
胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培 养基 【10版：营养肉汤或营养琼脂培养基】 30～35℃，18～24小时
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1107 非无菌药品微生物限度标准
非无菌药品的微生物限度标准是基于药品的给药途径和对患者健康潜在的 危害以及药品的特殊性而制订的。
药品生产、贮存、销售过程中的检验，药用原 料、辅料及中药提取物的检验，新药标准制订，进口药品标准复核，考察药品质 量及仲裁等，除另有规定外，其微生物限度均以本标准为依据。
1.制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅料 应符合 无菌检查法规定。
2.用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂 应符合无菌检查法规定。
3. 非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微生 物限度标准（见表 1） 表1 非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原粉的中药制剂的微
生物限度标准 给药途径 需 氧 菌 总 数 （ cfu/g 、 或
2
控制菌 霉菌和酵母菌总数 （cfu/g、cfu/ml 或 cfu/10cm2） 不得检出大肠埃希菌（1g 或
cfu/ml cfu/10cm ）
口服给药 固体制剂 液体制剂 10
3
1ml） ；含药材原粉的化学药 102 101 品制剂及含脏器提取物的制 剂还不得检出沙门菌 （10g 或 10ml）
102
口腔黏膜给药制剂 齿龈给药制剂 鼻用制剂 耳用制剂 皮肤给药制剂 102 101 102 101
不得检出大肠埃希菌、金黄 色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 （1g、1ml 或 10cm2） 不得检出金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌（1g、1ml 或 10cm ）
2
呼吸道吸入给药制 剂
102
101
不得检出大肠埃希菌、金黄 色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、
1
耐胆盐革兰阴性菌（1g 或 1ml） 阴道、尿道给药制 剂 102 101 不得检出金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、白色念珠菌 （1g、1ml 或 10cm2） ；中药 制剂还不得检出梭菌（1g、 1ml 或 10cm2） 直肠给药 固体制剂 液体制剂 其他局部给药制剂 103 102 102 10
2
不得检出金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌（1g 或 1ml）
102 102 不得检出金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌（1g、1ml 或 10cm2）
4. 非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准（见表 2） 表 2 非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准 给药途径 需氧菌总数 （cfu/g、 cfu/mL 或 cfu/10cm2） 固体口服给药制剂 不含豆豉、神曲 10 （丸剂 3×10 ） 等发酵原粉 含豆豉、神曲等 发酵原粉 液体口服给药制剂 不含豆豉、神曲 等发酵原粉 含豆豉、神曲等 发酵原粉 103 102 5×102 102 不得检出大肠埃希菌 （1ml） ； 不得检出沙门菌（10ml） ；耐 胆盐革兰阴性菌应小于 101 （1 ml） 105 5×102
4 4
霉菌和酵母菌总数 （cfu/g、cfu/mL 或 cfu/10cm ）
2
控制菌
不得检出大肠埃希菌（1g） ； 10
2
不得检出沙门菌（10g） ；耐 胆盐革兰阴性菌应小于 102 （1g） 。
2
固体局部给药制剂 用于表皮或黏膜 不完整 用于表皮或黏膜 完整 液体局部给药制剂 用于表皮或黏膜 不完整 用于表皮或黏膜 完整 102 102 102 10
2
不得检出金黄色葡萄球菌、 103 10
2
铜 绿 假 单 胞 菌 （ 1g 或 ；阴道、尿道给药制 10cm ）
2
104
102
剂还不得白色念珠菌、梭菌 （1g 或 10cm2） 不得检出金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌 （1ml） ； 阴道、 尿道给药制剂还不得白色 念珠菌、梭菌（1ml）
5. 非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准（见表 3） 表 3 非无菌药用原料及辅料微生物限度标准 需氧菌总数 cfu/g 或 cfu/ml） 霉菌和酵母菌总 数（cfu/g 或 cfu/mL） 药用原料及辅料 103 102 * 控制菌
注*：限度未做统一规定。
6. 中药提取物及中药饮片的微生物限度标准（见表 4） 表 4 中药提取物及中药饮片的微生物限度标准 需氧菌总数 cfu/g 或 cfu/ml） 霉菌和酵母菌总 数（cfu/g 或 cfu/mL） 中药提取物 103 102 * 不得检出沙门菌（10g） ； 中药饮片 * * 耐胆盐革兰阴性菌应小于 104（1 g）
3
控制菌
注*：限度未做统一规定。
7.有兼用途径的制剂 8.霉变、长螨者
应符合各给药途径的标准。
以不合格论。
非无菌药品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数照“非无菌产品微生物限度检 查：微生物计数法” （通则 1105）检查；非无菌药品的控制菌照“非无菌产品微 生物限度检查：控制菌检查法” （通则 1106）检查。
各品种项下规定的微生物限 度标准解释如下： 101cfu： 102cfu： 103cfu： 可接受的最大菌数为 20； 可接受的最大菌数为 200； 可接受的最大菌数为 2000：依此类推。
本限度标准所列的控制菌对于控制某些药品的微生物质量可能并不全面， 因 此，对于原料、辅料及某些特定的制剂，根据原辅料及其制剂的特性和用途、制 剂的生产工艺等因素，可能还需检查其他具有潜在危害的微生物。
除了本限度标准所列的控制菌外，药品中若检出其他可能具有潜在危害性 的微生物，应从以下方面进行评估: 药品的给药途径：给药途径不同，其危害不同（眼、鼻或呼吸道给药） ； 药品的特性：药品是否促进微生物生长，或者药品是否有足够的抑制微生 物生长能力； 药品的使用方法； 用药对象：用药对象不同，如新生儿、婴幼儿及体弱者，风险可能不同； 患者使用免疫抑制剂和甾体类固醇激素等药品的情况； 存在疾病、伤残和器官损伤，等等。
当进行上述相关因素的风险评估时，评估人员应经过微生物学和微生物数 据分析等方面的专业知识培训。
评估原辅料微生物质量时，应考虑相应制剂的生 产工艺、现有的检测技术及原辅料符合该标准的必要性。
说明： 1.微生物限度标准收载于《中国药典》一、二、三部附录中，内容不同。
2.本稿是 2010 年版微生物限度检查中“微生物限度标准”的内容修订稿，标 准内容除了包括中药、化药和生物制品的微生物限度标准外，还增订了原料、辅 料、中药提取物及饮片的微生物限度标准。
4
3.增加了标准应用的相关内容，这部分内容是参照 ICH 协调案“药品微生物 质量”进行修订。
5
。