果蔬中维生素含量的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)

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果蔬中维生素含量的测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）实验设计题目

年级 XXXX 组员 XXXX

一、实验背景及目的:

维生素C 又称为抗坏血酸，常存在于新鲜的蔬菜和某些水果中，尤其是在 橙子、枣、

辣椒、苦瓜中含量丰富。是维持机体正常生理功能的重要维生素

之一。维生素C 抗坏血酸在食品工业中常用做抗氧化剂，维生素 C 可促进胶原

蛋白抗体，具有抗癌的作用；它能参与神经介质、激素的生物合成；能将胆

固醇转化为胆汁酸，使高胆固醇血症患者的胆固醇下降；能将 Fe 抖还原为Fe, 使其易于吸收，有利于血红蛋白的形成；还具有解毒的作用。橙子中防治坏 血病的主要物质为维生素C ,本文以橙子为检测对象，对其营养成分——维生素

C 的含量进行测定，正确了解营养价值。

目前国内测定维生素C 的常见方法有：DPPH 法、碘滴定法、紫外分光光

度计法、高效液相色谱法、苯肼比色法等。这些方法各有特点，但操作过程 复杂，较

慢，仪器昂贵。Vc 易被热、碱、氧和光破坏，根据实验室的条件,

本次实验采用2，6—二氯靛酚滴定法进行实验研究及分析测定。

参考国标法GB6195-1986直接测定橙子中维生素c 的含量，其方法简便、

快速、结果准确。

、实验部分

1、实验原理

染料2 ,6 一二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原 状态，

氧化态为深蓝色，还原态变为无色，二是受其介质的酸度影响，在碱

性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性染料标准溶液， 对含维生素C 的酸性浸出液进行氧化还原滴定，染料被还原为无色，当到达滴

定终点时，多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色，由染料用量计算样品中

还原型抗坏血酸的含量。

2、实验设备及试剂 2.1仪器设备

高速组织捣碎机：8000—12000 r/min 。分析天平。滴定管:25 mL 、lOmL 。

容量瓶:100mL 。锥形瓶:100 mL 、50 mL 。吸管:10mL 、5mL 、2mL 、1mL 。

烧杯:250 mL 、50mL 。漏斗。

2.2试剂及材料

偏磷酸:2%溶液(W/V) 草酸:2%溶液(W/V) 白陶土 (或称高岭土 ):对维生素C 无吸附性。

抗坏血酸标准溶液(1 mg/mL):称取100m g(准确至0.lmg)抗坏血酸, 溶于浸提剂中并稀至100 mL,现配现用。

3、滴定度T 测定

2，6—二氯靛酚(2,6一二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液:称取碳酸氢钠52mg 溶解 在200ml 热蒸馏水中，然后称取2,6 —二氯靛酚50 mg 溶解在上述碳酸氢钠溶液

中。冷却定容至250mL ,过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标 准抗坏血酸标定其滴定度。即吸取1 mL 抗坏血酸标准溶液于50 mL 锥形瓶中,

加入l0mL 浸提剂，摇匀。同时，另取10mL 浸提剂做空白试验，用2,6 —二氯靛 酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s 不褪色为止。

滴定度按下式计算:

T 滴定度(mg/mL ) =C x V/(V1-V2)

式中:T —每毫升2,6 —二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数,

C —抗坏血酸的浓度，mg/mL;

V —吸取抗坏血酸的体积，mL;

V1 —滴定抗坏血酸溶液所用2,6一二氯靛酚溶液的体积，mL;

V2 —滴定空白所用2,6 —二氯靛酚溶液的体积，mL

2.2.1

柑橘、圣女果、红枣、胡萝卜。

浸提剂 2.2.3

2.2.4 2.2.5

3.测定步骤

3.1提取用水洗干净新鲜蔬菜或整个新鲜水果 （橙子），放人组织捣碎机中,

加20mL 浸提剂，迅速捣成匀浆。称取10 — 40g 浆状样品，加入10ml 二甲苯进行

萃取，用分液漏斗分离出下层溶液，吸取下层溶液

10mL,移入100 ml 容量瓶中。

并稀释至刻度，摇匀过滤。 3.2标准液滴定 吸取l0mL 滤液放人50mL 锥形瓶中，用已标定过的2,6— 氧靛酚溶液滴

定，直至溶液呈粉红色15s 不褪色为止。取浸提液10mL 作空白

对照，结果计算。

3.3维生素C 按以下公式计算：

(V-V0) X T X A

维生素 C ( mg/100 g)= ----------------- 2, 6—二氯靛酚染料滴定度，mg/mL 。 稀释倍数。

W —样品重量。

3.4平行测定的结果，用算术平均值表示，取三位有效数字，含量低的保留小 数点后两位数字。

3,5平行测定结果的相对相差，在维生素 C 含量大于20mg/l00g 时，不得超过 2%,小于20mg /100g 时，不得超过5%。

X 100%

式中：

V — 滴定样液时消耗染料溶液的体积,

mL 。 V0 — 滴定空白时消耗染料溶液的体积, mL 。

V0 (滴定空白时消

耗染料溶液的体

积)ml

V-V0

(体积改变量)ml

100g橙子中Vc含量

mg

四、注意事项

(1)某些水果、蔬菜(如橘子、西红柿等)浆状物定容时泡沫太多，可加

数滴丁醇或辛醇消泡。

(2)样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触,

以免抗坏血酸被破坏。

(3)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。

(4))干扰滴定因素有:

Fe可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe 不会很快与染料起作用。

样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。

(5)若样品绿叶颜色较深，影响滴定结果观察，可加入白陶土在过滤。白陶土使用前应测定回收率。

五、思考题

1.该法测定抗坏血酸有何不足?

2 .用2%盐酸提取样品的目的是什么?

3.为了测得准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤? 为什么？